TC21/R-Ras 2在肝癌中的表达、亚细胞定位及意义

目的:探讨TC21基因在肝癌细胞、肝癌及癌旁组织中的表达、亚细胞定位及意义。方法:用RT-PCR检测TC 21在肝癌细胞系及人肝癌及癌旁组织中mRNA水平的表达,用免疫组化及Western印迹检测TC21蛋白在肝癌相关组织中的表达差异,用组织芯片技术结合免疫组化检测TC21蛋白的亚细胞定位。结果:RT-PCR检测结果表明TC21 mRNA在SMMC-7721、BEL-7402、Huh-7、Hep3B、HepG2、MHCC-97L、MHCC-LM3 7个肝癌细胞系及L-02和Chang liver 2株永生化人肝细胞系、7对肝癌及对应癌旁肝组织中均有较高表达;Western印迹结果表明上述细胞系中TC21蛋白表达与mRNA表达一致,TC21在4对肝癌及癌旁组织中均呈较高水平的表达;免疫组化检测结果表明TC21在人原发性肝癌、癌旁组织、硬化肝组织与正常肝组织中的表达阳性率分别为84.2%、77.2%、41.7%、0%,肝癌与肝硬化、正常肝相比显著高表达(P<0.05,P<0.01),与癌旁组织比无统计学意义(P>0.05);统计学分析结果表明TC21蛋白表达与肿瘤大小呈正相关(P<0.05),与是否肝硬化呈负相关(P<0.05);肝癌组织中TC21主要定位于肝癌细胞核,部分定位于胞质,膜定位不明显,TC21蛋白在肝癌细胞中的核定位显著高于癌旁肝细胞(P<0.001)。结论:本研究首次揭示TC21蛋白在肝癌组织中的高表达及核定位预示其在肝细胞恶性转化及肝癌发生发展中发挥重要作用。     

新基因pp3774的亚细胞定位以及在肝癌细胞系和组织中的表达谱研究

目的探讨新基因pp3774在肝癌细胞系、人肝癌及癌旁肝、肝硬化以及正常肝组织中的表达差异及其生物学功能.方法脂质体转染-荧光观察pp3774-GFP融合蛋白的亚细胞定位;合成新基因pp3774特异性多肽,制备兔源性多克隆抗体;用RT-PCR、蛋白印迹、免疫细胞化学及免疫组化方法检测pp3774基因在7个肝癌细胞系及214例肝细胞癌、18例肝硬化及10例正常肝组织中的表达差异.流式细胞术检测转染pp3774基因的SMMC-7721细胞的凋亡率.结果 pp3774蛋白主要定位于细胞质(内质网为主);RT-PCR检测结果表明pp3774 mRNA在肝癌细胞系BEL-7402、Huh-7、MHCC-97L及HepG2中高表达,SMMC-7721、MHCC-LM3及人永生化肝细胞系L-02中度表达,而在Hep3B中低表达;肝癌及癌旁组织中pp3774 mRNA的表达表现为癌旁高于癌(P<0.05);免疫组化结果显示pp3774蛋白表达程度依次为正常肝≥肝硬化≥癌旁肝组织>肝癌.转染pp3774基因的SMMC-7721细胞的凋亡发生率高于对照组约10%.结论 pp3774基因是一个具有抑制肝癌细胞生长功能的新基因.     

DFF45在肝细胞肝癌中的低表达及其临床意义

背景与目的:研究表明DNA裂解因子45(the DNA fragmentation factor 45,DFF45)在肿瘤细胞中表达异常与肿瘤细胞凋亡、分化、恶性表型密切相关.本研究探讨DFF45在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织、癌旁肝组织、正常肝组织、3种不同的肝癌细胞株、永生化的肝细胞株L02中的表达,并分析其与肝癌患者临床参数的相关性.方法:采用免疫组化、Western blot及RT-PCR检测35例HCC组织及相应癌旁组织、10例正常肝组织中DFF45蛋白及mRNA表达;Western blot、RT-PCR检测肝癌细胞株QGY-7701、SMMC-7721、HepG2及永生化的肝细胞株L02中DFF45蛋白及mRNA表达.结果:免疫组化显示DFF45在HCC组织、癌旁组织、正常肝组织阳性率分别为48.6％ (17/35)、77.1％(27/35)和90％ (9/10),HCC组织中DFF45蛋白表达明显低于癌旁及正常组织(P＜0.05).DFF45蛋白的表达与肿瘤大小、病理分级相关.Western blot检测进一步验证了该免疫组化结果.RT-PCR结果显示,DFF45 mRNA在HCC组织中表达(0.453±0.111)同样低于癌旁组织(0.518±0.094)及正常肝组织(0.535±0.112),差异有统计学意义(P＜0.05).DFF45蛋白及mRNA在3种肝癌细胞株中表达均低于永生化的细胞株.结论:DFF45在HCC组织及肝癌细胞系中呈低表达,可能参与了肝癌的发生发展,并有可能成为肝癌治疗的新靶点.     

S100A4蛋白在肝癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨SIOOA4蛋白在肝细胞癌、肝硬化、癌旁组织及正常肝组织中的表达及临床意义.方法:用组织芯片技术结合免疫组织化学法检测S100A4蛋白在肝癌相关组织中的表达差异,采用统计学方法分析其表达差异的临床意义.结果:免疫组织化学检测发现,S100A4蛋白在人原发性肝细胞癌、硬化肝组织、癌旁肝组织中表达较高,在正常肝组织中表达则很低,表达阳性率分别为70.2%、54.4%、41.7%和0.0%;统计学分析结果表明,S100A4蛋白表达影响肝癌患者的术后生存期,低表达患者的生存期比高表达患者延长.结论:S100A4蛋白在肝癌及相关组织中的表达率依次为,肝细胞癌＞癌旁肝＞肝硬化＞正常肝,在非微血管侵袭肝癌患者中S100A4阳性表达可明显降低其术后生存率.     

凋亡抑制基因 Survivin在肝癌细胞中的表达及其与PTEN、cyclin D1蛋白表达的关系

目的:探讨Survivin基因的表达在肝癌发生、发展中的作用及其与PTEN、cyclin D1蛋白表达的相互关系.方法:采用流式细胞术对肝细胞癌(48例)、癌旁肝硬化(32例)、肝硬化(6例)、正常肝组织(6例)Survivin、PTEN、cyclin D1基因蛋白的表达进行定量检测.结果:Survivin和cyclin D1蛋白表达的FI值明显高于癌旁组织、肝硬化和正常肝组织,而肝细胞癌的PTEN蛋白的FI值明显低于癌旁组织、肝硬化和正常肝组织.Survivin和PTEN蛋白的表达量与分化程度、预后有关,与肿瘤大小、门静脉癌栓、肝内转移无关.随着肿瘤恶性程度加重,Survivin与PTEN蛋白表达呈显著负相关;Survivin蛋白与cyclin D1蛋白表达之间呈显著正相关.结论:Survivin、PTEN及cyclin D1基因在肝细胞癌的发生、发展中起着不同的作用,联合检测Survivin和PTEN对判定肝细胞癌预后可提供一定的依据.     

hAph2β和c-abl在肝细胞癌中的表达及其相互作用

目的:探讨hAph2β蛋白与c-abl蛋白在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的相互作用.方法:RT-PCR和Western 印迹法分析c-abl基因和hAph2基因在肝癌细胞株及永生化人肝细胞株中的表达.脂质体转染、免疫共沉淀和Western印迹法检测hAph2β与c-abl在SMMC-7721细胞中的相互作用.激光共聚焦-荧光显微镜观察hAph2β和c-abl在SMMC-7721细胞中的定位.用组织芯片结合免疫组织化学法检测hAph2β和c-abl蛋白在肝癌和相应癌旁组织中的表达差异,统计学分析其表达差异的临床意义.结果:RT-PCR检测结果表明,c-abl mRNA在HepG2、L-02及MHCC-LM3细胞中高表达,在SMMC-7721、BEL-7402、Hep3B和Chang's liver细胞中中度表达,而在Huh-7、MHCC-97L细胞中低表达.Western印迹法检测结果发现,hAph2总蛋白在HepG2、Huh-7、MHCC-LM3和MHCC-97L细胞中高表达,在BEL-7402、L-02细胞中低表达;c-abl蛋白在Huh-7细胞中低表达.免疫共沉淀观察发现SMMC-7721细胞中过表达的hAph2β-GFP和内源性c-abl相互作用.荧光免疫细胞化学检测发现hAph2β和c-abl在SMMC-7721细胞中部分共定位.免疫组织化学检测结果表明,hAph2β/c-abl蛋白在人正常肝组织、硬化肝组织、癌旁肝及原发性HCC癌组织中的强阳性率分别为:100%/50%、91.7%/100%、100%/89.5%和50.9%/19.3%,其中hAph2β和c-abl在癌旁肝组织中的表达均明显高于肝癌组织(均P<0.001),2者在56.1%(32/57)的肝癌组织中同时高或低表达.结论:hAph2β和c-abl在SMMC-7721细胞中相互作用,在原发性HCC及相关组织中共表达.     

OCT4在肝细胞癌中的表达及其临床意义

背景与目的:近年关于肝癌干细胞问题备受关注,已发现部分干细胞标志物在肝细胞癌中表达并与预后有关,其中OCT4基因是POU转录因子的重要组员,是维持胚胎干细胞自我更新能力和分化潜能的关键因子。本研究旨在检测OCT4A在肝细胞癌中的表达情况,并探讨其与病理因素和预后的关系。方法:用半定量RT-PCR检测5株人肝癌细胞系和1株永生化肝细胞系,以及107例肝细胞癌组织、相应的癌旁肝组织和20例正常无肝硬化肝组织中OCT4A mRNA的表达,并结合肝癌临床病理因素及预后进行分析。结果:OCT4A mRNA在人肝癌细胞系SMMC-7721、BEL-7402、Hep-G2、MHCC-97L、MHCC-97H中均表达,而在永生化肝细胞系L-02中无表达。OCT4A mRNA在肝癌组织中表达率为72.0%,明显高于癌旁肝组织的30.8%(P<0.001),在正常无肝硬化肝组织中无表达。肝癌组织中OCT4A mRNA的表达与肿瘤大小、血管侵犯及TNM分期有关(P<0.05)。OCT4A mRNA阳性肝癌患者及阴性患者的3年总生存率分别为48.0%和83.7%,3年无瘤生存率分别为34.1%和58.0%,差异均有统计学意义(P<0...     

肝癌组织中Raf激酶抑制蛋白和磷酸化Raf 激酶抑制蛋白的表达及其意义

 目的探讨Raf激酶抑制蛋白（Raf kinase inhibitor protein,RKIP）和磷酸化Raf激酶抑制蛋白（Phosphorylated raf kinase inhibitor protein,P-RKIP）在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法应用组织芯片和免疫组织化学方法检测RKIP蛋白和磷酸化的RKIP蛋白在72例肝细胞癌组织、50例癌旁肝组织及16例正常肝组织中的表达,并分析RKIP的表达与肝细胞癌临床病理学特征的关系。采用Western blot方法检测36例肝细胞癌、36例癌旁组织及12例正常肝组织中RKIP蛋白和磷酸化的RKIP蛋白的表达。结果免疫组化结果显示肝细胞癌、癌旁及正常肝组织中RKIP的阳性率分别为22.2％、86％、93.8％,P-RKIP为29.2％、84％、93.8％;肝癌组织中RKIP和P-RKIP的表达显著低于癌旁及正常肝组织,差异有统计学意义（P<0.05）,而且肝癌组织和癌旁肝组织中两者蛋白的表达均呈显著正相关（P=0.000,P=0.005）;RKIP和P-RKIP的表达均与肝癌有无肝内或淋巴结转移及分化程度有关（P<0.05）。Western blot结果显示肝癌组织中RKIP和P-RKIP的表达显著低于癌旁及正常肝组织。结论RKIP和 P-RKIP表达的减少或缺失与肝癌的发生发展、侵袭转移密切相关。     

环氧化酶-2在肝细胞癌及癌旁肝硬化中表达及意义

[ 目的]探讨环氧化酶2（COX-2）在肝细胞癌（HCC）、癌旁肝硬化和正常肝组织中的表达及其意义。[方法]应用免疫组织化学法检测30例HCC石蜡包埋组织、25例癌旁肝硬化组织及10例正常肝组织标本中COX-2的表达情况，分析其与肝细胞癌临床病理特征间的联系。[结果]COX-2蛋白在HCC、癌旁肝硬化中表达阳性率分别为70．0％和92．O％，显著高于在正常肝组织中的20．0％（P〈0．05）．而COX-2在癌旁肝硬化组织中的表达高于HCC组织。COX-2蛋白在分化好HCC中的表达显著高于分化差的HCC（P〈0．05），转移组中COX-2蛋白表达显著高于无转移组（P〈0．01）；而COX-2蛋白的表达与肿瘤大小、有无包膜及AFP水平无关。[结论]COX-2蛋白在肝细胞癌、癌旁肝硬化组织中高表达，表明COX-2可能在肝细胞癌的发生、发展过程中起着重要作用。     

肝细胞肝癌组织MCM2和FAP-1表达及其与癌细胞增殖和凋亡的相关性研究

目的:研究微型染色体维持蛋白2(MCM2)和Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)在肝细胞肝癌组织中的表达及其与肝细胞肝癌增殖和凋亡的关系。方法:免疫组化SP法检测40例肝细胞肝癌、15例癌旁肝硬化和10例正常肝组织中MCM2和FAP-1蛋白的表达水平并进行分析。结果:40例肝细胞肝癌组织中29例MCM2表达阳性,28例FAP-1表达阳性,而在癌旁肝硬化和正常肝组织中两者均未见表达。肝细胞肝癌组织中MCM2的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小和转移差异无统计学意义,P>0.05;而与分化程度有关,肿瘤分化越低,MCM2阳性率越高,P<0.05。MCM2与FAP-1两者呈正相关,P<0.05。结论:MCM2和FAP-1可能均参与了肝细胞肝癌的发生发展,两者可能相互协同共同促进了癌细胞异常增殖。