耐药相关基因MDR1、MRP、LRP及其表达产物P-gp、MRP、LRP在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的：研究探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织和癌旁组织中多药耐药基因1（muhidrug resistance genel,MDR1）、多药耐药相关蛋白（multidrug resistance-related proteins,MRP）、肺耐药蛋白（lung resistance protein,LRP）mRNA及其相应蛋白P—gP、MRP、LRP的表达情况及临床意义。方法：运用聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫组织化学法（IHC）检测43例NSCLC组织及癌旁组织标本中耐药基因MDR1、MRP、LRPmRNA及其蛋白P-gP、MRP、LRP的表达水平。结果：MDR1、MRP和LRP mRNA3种基因在43例肿瘤组织中的表达率分别为79．06％（34／43）、65．17％（28／43）和86．05％（37／43）,癌旁组织中的表达率分别为20．00％（3／15）、13．33％（2／15）和13．33％（2／15）;P—gP、MRP和LRP3种耐药蛋白在肺癌组织中的表达率分别为74．42％（32／43）、67．44％（29／43）和88．37％（38／43）,癌旁组织中的表达率分别为13．33％（2／15）、20．00％（3／15）和6．67％（1／15）,上述3种基因及其蛋白在肺癌组织与癌旁组织的表达差异有显著性（P〈0．05）。肺癌组织中既存在耐药基因MDR1、MRP和LRP的共表达,也存在耐药蛋白P-gP、MRP和LRP的共表达,3种基因与其相应蛋白表达密切相关。肺腺癌组织中MDR1及其蛋白P-gP、LRP mRNA表达率较高,与其它病理类型相比差异有显著性（P〈0．05）,MRP mRNA及其蛋白MRP表达与肺癌病理类型、临床分期和组织学分级无关（P〉0．05）。结论：NSCLC存在着广泛的原发性多药耐药现象,耐药基因MDR1、MRP和LRPmRNA及其相应蛋白参与了肺癌多药耐药的形成,检测多药耐药基因可为指导临床用药提供一定的理论依据及策略。     

p53和c-myc异常表达与胃癌细胞多药耐药性的研究

目的：研究胃癌组织中p53和c-myc的表达与多药耐药性（MDR）的关系。方法：应用LSAB免疫组织化学方法研究67例胃癌标本中p53、c－myc和P-gp的表达。结果：胃癌中p53阳性32例（478％），c－myc阳性37例（55.2％），P－gp阳性39例（58．2％）。淋巴结转移阳性胃癌p53阳性率（56.9％）和c－myc阳性率（64．7％）显著高于淋巴结转移阴性的胃癌（P＜0．05）。p53的异常表达与mdr－1基因表达呈显著正相关（r=0．63，P＜005），而c－myc和mdr－1的表达无明显相关。结论：p53异常表达可增加mdr－l基因的表达，从而使胃癌细胞获得MDR表型。     

非小细胞肺癌多药耐药性病理学检测的临床意义

 目的 检测113例非小细胞肺癌（NSCLC）中谷胱甘肽巯基转移酶π（GST-π）、肺耐药相关蛋白（LRP）、DNA拓扑异构酶Ⅱa（TopoⅡa）、多药耐药相关蛋白（MRP）和多药耐药基因（MDRt）的表达，观察上述指标与肿瘤I临床病理因素的关系及各指标表达之间的相关性。方法 采用免疫组化SP法检测GST-π、LRP、TopoⅡa蛋白的表达；应用原位杂交技术检测MRP和MDR1 mRNA表达。结果 （1）GST-π、LRP、TopoⅡa蛋白及MRP、MDR1 mRNA在113例NSCLC中的阳性表达率分别为75.2％、80．5％、60．2％、79．6％、51．3％。其中LRP表达最高，MDR1表达最低。（2）LRP、TopoⅡa和MRP的表达分别与肿瘤组织学类型有关。（3）GST-π与MRP（P〈0．05）、LRP与MRP（P〈0．01）、MDR，与MRP（P〈0．01）的表达间具有相关性。结论 （1）多种耐药相关基因的过度表达及其相互作用可能是NSCLC产生原发MDR的重要原因。（2）LRP和MRP过度表达，TopoⅡa高表达和MRP低表达可能分别与肺腺癌、鳞癌的化疗敏感性有关。     

神经母细胞瘤P-gp和MRP的表达及预后因素分析

目的：探讨P－糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）和多药耐药相关蛋白（multidrug resistance-associated protein,MRP）在小儿神经母细胞癌（neuroblastoma,NB）中的表达及临床意义。方法：应用SP免疫组织化学法检测70例例NB组织中P－gp和MRP的表达。结果：P-gp和MRP的阳性率分别为61．4％（43／70）和38．6％（27／70）。P-gp与MRP共表达阳性率为32．9％（23／70）。P－gp与MRP具有相关性（r=0.387,P=0.001)。年龄＞1岁的NB P－gp和MRP的表达阳性率（72．3％，48．9％）均高于＜1岁者（39．1％，17．4％），（P＜0．05）。分化性NB P－gp和MRP表达（93．3％和86．7％），（P＜0．05）。P-gp和MRP表达与性别和分期无关。年龄＞1岁、有转移的NB、MRP阳性及P－gp与MRP共表达者中位生存期和2年累计生存率均降低，（P＜0．05）。P-gp表达与生存期无关。多变量COX回归分析，年龄有预后意义（相对危险度、95％可信区间和P值分别为4．949、1．079－22．694和0．040）。结论：NB原发性耐药与P-gp和MRP共同作用有关，年龄、转移、MRP表达及P－gp与MRP共表达与NB预后有关。     

癌基因K-ras、C-myc、erbB-2的激活与非小细胞肺癌组织学类型相关性研究

为探讨癌基因突变、扩增与非小细胞肺癌发生及类型间的关系，应用核酸杂交的方法检测了63伤1肺手术标本中（腺癌19例，鳞癌23例，腺鳞癌3例，大细胞癌3例，小细胞癌3例，其它12例）三种癌基因（c－myc、K－ras、erbB－2）的扩增及突变。实验结果显示：50％（24／48）的非小细胞癌分别出现三种癌基因的激活；31．6％（6／19）的腺癌出现K－ras12密码子突变及K－ras扩增；30．4％（7／23）的鳞癌有erbB－2扩增；10．4％（5／48）的非小细胞癌存在c－myc扩增。提示K－ras突变可能为肺腺癌所特有，而erbB－2扩增是肺鳞癌发生的重要因素。     

丹参酮诱导HL—60细胞分化及凋亡的流式细胞术分析

应用体外细胞培养及流式细胞仪技术，分析了丹参酮作用前后HL－60细胞的细胞周期分布、细胞增殖指数、p53、c－myc、c－fos及bc1－2基因产物的表达变化，并以全反式维甲酸为对照。结果表明：0．5μg．ml－1的丹参酮作用后，HL－60细胞趋向粒细胞系统分化，有部分细胞发生凋亡（11．8％），丹参酮通过阻止HL－60细胞进入S期而抑制其DNA合成，其作用的分子机制与c－fos基因的表达增高、c－myc基因及bc1－2基因的表达降低有关，诱导分化与细胞凋亡的关系尚有待进一步探讨。     

非小细胞肺癌血管生长因子与耐药相关基因关系的研究

目的：探讨血管生成因子（VEGF、bFGF）和耐药相关基因（MDR1、MRP、LRP）在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）中的表达及相互关系。方法：应用免疫组化技术检测96例NSCLC组织中VEGF、bFGF、MDR1、MRP、LRPmRNA表达率分别为69.5％（25/36）、52.8％（19/36）、33.3％（12/36）、52.8％（19/36）、50.0％（18/36）；蛋白表达率分别为51.0％（49/96）、58.3％（56/96）、45.8％（44/96）、59.4％（57/96）、64.6％（62/96），各基因mRNA表达与蛋白表达基本一致。统计分析表明：VEGF表达与MDR1、LRP表达相关（P=0.025，P=0.022），与MRP表达无关（P=0.428）；bFGF表达与MDR1、LRP表达相关（P=0.001，P=0.012），并与MRP LRP共表达相关（P=0.001）。结论：在非小细胞肺癌中血管生成因子与耐药相关基因具有一定的相关性。     

非小细胞肺癌MDR1—mRNA,MRP—mRNA及LRP—mRNA表达的研究

目的：观察肺癌组织及癌旁肺组织MDR1－mRNA,MRP-mRNA及LRP－mRNA的表达,方法：采用RT－PCR法检测30例肺癌患者组织和正常肺组织中MDR1－mRNA,MRP-mRNA和LRP－mRNA的表达情况。结果：MDR1－mRNA在肺癌组织及癌旁肺组织的表达阳性率分别为40％及16．67％（P＝0．045）,其表面与细胞分化程度,发期及病理类型无明显关系,MRP－mRNA在肺癌组织及癌旁肺组织的表达分别为43＝．44％及26．67％,低分化者MRP的表达率明显高于中高分化者（P＝0．0004）,其表达与肿瘤类型,临床分期及癌细胞的分化程度无明显关系。30例肺癌组织中MDR1－mRNA,MRP-mRNA,LRP-mRNA共同表达者7例（23．33％）,三者均无表达者10例（33．33％）,三者的一致性达56．67％,结论：MDR1－mRNA,MRP-mRNA,LRP-mRNA在肺癌的耐药中可能起重要作用。     

HP感染与c—myc,c—erbB—2蛋白在胃粘膜病变中的表达

为了探讨幽门螺旋杆菌（HeliclbacterPylori，HP）感染与胃癌发生间的关系，我们采用免疫组化法对158例胃粘膜标本进行癌基因c－myc、c－erbB－2蛋白检测、其中胃癌、不典型增生及肠上皮化生各40例，正常对照38例。结果发现，c－myc蛋白在正常胃组织中无表过，c－erbB－2蛋白阳性表达7／38例。两种基因蛋白在不典型增生、肠上皮化生及胃癌中的阳性表达显著高于对照组（P＜0．01～0．05）。应用Giemsa法对上述各组胃粘膜同步进行HP测定，发现正常对照组中的HP阳性检出显著低于不典型增生及肠上皮化生（P＜0．025），而与胃癌组无明显统计学差异（P＞0．05）。联合检测HP与癌基因蛋白发现HP感染与其表达呈正相关。提示HP感染与胃癌发生有一定关系。     

联合检测MDR1/P-gp、C-erbB-2在乳腺癌中的表达及临床意义

目的 :联合检测乳腺癌患者中MDR1/P gp、及C erbB 2的表达 ,并探讨MDR1/P gp与C erbB 2的相关性。方法 :采用荧光定量RT PCR(FQ RT PCR)法检测 5 7例乳腺癌、2 0例对照组 (包括 10例乳腺良性疾病、10例癌旁正常组织 )中MDR1基因的表达 ,同时采用免疫组化法检测上述标本中P gp及C erbB 2蛋白的表达。 结果 :乳腺癌患者中MDR1基因扩增率及P gp蛋白阳性率分别为 5 0 .88% (2 9/ 5 7)和 4 2 .11% (2 4 / 5 7) ,与正常对照组相比均具有显著性差异 (P <0 .0 1)。MDR1基因扩增率高于P gp蛋白表达 ,二者呈高度相关 ,但并不完全相符 ;乳腺癌中C erbB 2过表达率为 2 8.0 7% (16 / 5 7) ,正常对照组中无C erbB 2蛋白过表达。MDR1/P gp阳性率与C erbB 2过表达呈正相关。结论 :乳腺癌中存在多药耐药基因MDR1及原癌基因C erbB 2的共表达 ,且其表达呈正相关。上述二种基因的表达 ,与乳腺癌的多药耐药有关。     

肺癌组织端粒酶表达与耐药,凋亡相关基因关系及其临床意义

目的 探讨肺癌冰冻组织端粒酶催化亚单位（ｃａｔａｌｙｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓｕｂｕｎｉｔ，ｈＴＲＴ／ｈＥＳＴ２）编码基因ｍＲＮＡ表达与细胞凋亡，增殖，耐药及凋亡相关基因的关系及其预后意义方法 应用ＴＲＡＰ－ＰＣＲ，原位杂交检测端粒酶活性（ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ，ＴＡ）及ｈＴＲＴ／ｈＥＳＴ２表达，ＲＴ－ＰＣＲ，免疫组化检测耐药及凋亡相关基因ｍＲＮＡ及蛋白水平，原位杯端标记（ｉｎｓｉｔｕｅ     

根治术前后肿瘤细胞在骨髓中播散的自动显微图像研究

目的对比研究泌尿系肿瘤患者根治术前后骨髓中散在的微转移肿瘤细胞。方法术前及术后采集肾癌、前列腺癌和尿道膀胱癌共102例患者的骨髓标本,应用细胞角蛋白的免疫细胞化学方法及自动显微图像对比检测分析。结果根治术前后骨髓中微转移肿瘤细胞检出率密切相关（P＜0．005）,术前肿瘤细胞总检出率为31．4％,术后为34．3％,无显著性差别（P＝0．65）;三种泌尿肿瘤患者根治术前后检出率比较亦均无明显差别（P＝0．70P＝0．10P＝0．59）但术后检出的肿瘤细胞数多于术前者（总数分别为64和44）,3个以上阳性细胞仅在术后出现,两次阳性的细胞数均值分别为1．31±0．48和1．95±1．02（P＝0．0099）12例患者手术8天后检出细胞数（22）明显多于术前者（7）,P＝0．01。结论免疫细胞化学方法可作为检测骨髓中隐蔽的微转移肿瘤细胞的敏感标准方法,根治术前后检出率虽无明显改变,但术后及手术8天以后检出细胞数明显多于术前者,提示手术可能会促使肿瘤细胞在骨髓中的播散。     

人膀胱癌非经典型多药耐受性研究

目的：为了建立人膀胱癌耐阿霉素细胞系并研究它们的生物学特性及药物耐受性的机理。方法：采用人膀胱癌细胞系EJ,经递增阿霉素剂量的方法,历时1年,建立一株耐药亚株EJ／DOR,对其生物学特性及耐药机理进行了研究,并应用反转录PCR检测了MDR1、MRP和DNA TopoⅡ基因的表达。结果：EJ／DOR对阿霉素的相对耐受度较亲本细胞提高了14.3倍;对蒽环类、长春花属生物碱及DNA TopoⅡ靶刺剂足叶乙甙有明显的交叉耐药性,但对顺铂、丝裂霉素无明显的交叉耐受性;耐药细胞对柔红霉素的细胞内聚集量显著减少;EJ／DOR并不表达MDR1基因,而MRP基因过表达,但细胞内DNA TopoⅡ基因表达低于亲本细胞。结论：细胞内DNA TopoⅡ基因表达下降及MRP基因过表达是EJ／DOR表现为多药耐受性亚型的主要原因,这种非P-gp介导的非经典型多药耐受性细胞为寻求包括阿霉素在内的化疗方案提供了良好的实验模型。     

原发性非小细胞肺癌中K－ras基因突变的研究

目的探讨非小细胞肺癌（Non－smallcelllungcancer,NSCLC）组织中K－ras第12密码子点突变与NSCLC发生和发展的相关性。方法采用针对K－ras基因第12密码子特异点突变方式的引物进行PCR及银染法,分析175例新鲜NSCLC手术切除标本、43例癌旁组织及5例良性肺部疾患组织中K－ras基因第12密码子中CGT、GTT和GAT三种不同点突变方式。结果175例NSCLC组织中出现K－ras12密码子GGT→CGT突变率为34．86％（61／175）,GGT→GTT突变率40．57％（71／175）及GGT→GAT突变率37．71％（66／175）,总突变率为62．3％（109／175）。其中,同时出现CGT／GTT二个点突变为10．1％(11／109),CGT／GAT9．2％(10／109),GTT／GAT12．8％(14／109),而CGT／GTT／GAT均出现突变占23．9％(26／109)。其中Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期突变率分别为64．3％、56．8％及64．0％,另外腺癌突变率为63．8％、鳞癌为60．5％及腺鳞癌为64．5％,因此K－ras点突变与肺癌的分期及病理类型均无相关性（P＞0．05）。然而,37例腺癌突变组中出现GTT／GAT突变率为17．2％(10／58)明显高于鳞癌的3．5％(3／86),二者具有明显差异（P＜0．01）。43例癌旁组织与5例良性肺部疾患组织均未发现K－ras点突变。结论K－ras12密码子点突变及多点突变普遍存在于NSCLC中,其中肺腺癌出现GTT／GAT二个点突变明显高于鳞癌,结果提示K－ras基因点突变是肺癌发生和发展的一个重要因素。     

卡铂按AUC给药对小细胞肺癌疗效和毒性的影响

目的：探讨卡铂AUC给药的合理性。方法：对112例小细胞肺癌用卡铂和足叶乙甙联合方案治疗的疗效和毒性进行回顾性调查。卡铂按体表面积计算,范围为168～385mg/m^2,折合成卡铂AUC的范围为1.62～9．5。其中AUC 1.62～5．0为59例(A组),5．1～9．5为53例(B组)。结果：疗效的分析提示：小细胞肺癌局限期A组和B组的有效率分别为62．9％和71.4％;进展病例分别为5、7％和0;中位生存期分别为10和12个月。广泛期两组有效率分别为66．7％和68.8％;进展病例分别为12．5％和6.3％;中位生存期分别为9和11个月。在对血液学毒性的观察中：血红蛋白下降的16例中有12例为B组;Ⅲ／Ⅳ度白细胞下降的11例中有7例为B组;Ⅲ／Ⅳ度血小板下降的5例均为B组。结论：上述结果因病例数不够大未有显著统计学差异,但仍提示卡铂AUC与疗效有一定相关性;     

女性生殖系统非霍奇金淋巴瘤11例临床分析

要目的：探讨女性生殖系统非霍奇金淋巴瘤(NHL)的发病、诊断及治疗。方法：临床资料回顾性分析。结果：11例生殖系统非霍奇金淋巴瘤(NHL)中,发生于外阴1例、宫颈3例、宫体2例、卵巢5例。以宫颈与卵巢受累为主,占72．7％(8／11)。7例为原发,4例为继发。8例采用以根治性手术为主,辅以CHOP(COP)方案化疗的综合治疗方法,完全缓解6例,占75．0％。生存期最长已超过10年零8个月。结论：女性生殖系统非霍奇金淋巴瘤(NHL)有原发和继发。肿瘤标记物、细胞学检查、病理组织学及免疫组化技术均可作为诊断与鉴别诊断的手段。根治性手术 CHOP方案化疗的综合治疗方法可达根治目的。     

不同分期的成骨肉瘤患者免疫学的变化

目的评价成骨肉瘤患者临床分期与免疫学变化的关系及意义。方法利用流式细胞仪检测120例成骨肉瘤患者淋巴细胞亚群、利用MTT法检测NK细胞活性,应用放射免疫分析法检测IL－2、TNF－α、β     

SATB1、KISS1在胃腺癌组织芯片中的表达及其临床意义

目的 探讨特异性核基质结合区蛋白-1（SATB1）和亲水性蛋白-1（KISS1）在胃腺癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组织化学法检测76例胃腺癌组织及19例癌旁正常胃黏膜组织中SATB1、KISS1的表达情况,并分析其表达与临床病理特征和预后的关系。结果 SATB1、KISS1在胃腺癌组织中的阳性表达率分别为80.3％（61／76）和14.5％（11／76）,与正常胃黏膜组织的10.5％（2／19）、89.5％（17／19）比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。SATB1和KISS1的表达与胃癌淋巴结转移、远处转移、TNM分期有关（P＜0.05）,而与年龄、性别、肿瘤直径和组织分化程度无关（P＞0.05）;SATB1和KISS1的表达呈负相关（r=-0.736,P＜0。01）。SATB1阳性和阴性表达患者的中位总生存时间（OS）分别为16.8个月（95％CI：10.124～21.876个月）、42.2个月（95％CI：31.804～52.196个月）,差异有统计学意义（P＜0.05）;KISS1阳性和阴性表达患者的中位OS分别为45.1个月（95％ CI：36.736～53.264个月）、13.6个月（95％ CI：9.971～16.029个月）,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 胃腺癌组织中SATB1、KISS1的表达与胃腺癌发生、发展及侵袭性有关,二者均可作为评价胃腺癌生物学行为的指标。     

三氧化二砷诱导胃癌细胞凋亡及对相关基因表达的影响

目的 研究三氧化二砷（As2O3)诱导胃癌细胞的凋亡作用及对凋亡相关基因p53、c-myc、bcl-2、bcl-xl和bcl-xs表达的影响,探讨其诱导胃 癌凋亡的作用机制。方法 研究As2O3对胃癌细胞SGC－07901和MKN－45的诱导凋亡作用和对凋亡相关基因表达的影响。结果 As2O3作用于细胞可见典型的细胞凋亡。出现典型的亚二倍体“凋亡峰”。10μmol／LAs2O3的诱导胃癌细胞SGC－7901和MKN－45的凋亡率为13．8％和22．5％。细胞凋亡指数在1．42％－9．5％之间。As2O3作用后能明显下调SGC－7901细胞的bcl-2蛋白和mRNA的表达;对SGC－7901细胞的p53、c-myc、bcl-xl和bcl-xs蛋白的表达无影响。As2O3能促进MKN－45细胞的p53蛋白和mRNA的表达,对MKN－45细胞的bcl-2、c-myc、bcl-xl和bcl-xs基因表达无影响。结论 As2O3可通过不同途径诱导胃癌细胞凋亡,通过下调SGC－7901细胞的bcl-2的蛋白表达诱导其凋亡,通过上调p53表达诱导胃癌MKN－45细胞凋亡。     

人脑胶质瘤与SV40的关系及其p53、RB蛋白的表达

目的：探讨人脑胶质瘤与猴病毒４０（ＳＶ４０）的关系及其ｐ５３和ＲＢ蛋白的表达。方法：采用核酸原位杂交和免疫组织化学技术对２５６例人脑胶质瘤和１１例正常脑组织进行了ＳＶ４０ ＤＮＡ和抑癌基因产物ｐ５３、ＲＢ蛋白检测。结果：胶质瘤ＳＶ４０阳性１０４例,阳性率４０．６％,正常脑组织均未检测出ＳＶ４０ ＤＮＡ,未发现ＳＶ４０感染与胶质瘤病理分级存在明显相关（Ｐ〉０．０５）;ＳＶ４０阳性胶质瘤ｐ５３、ＲＢ蛋