表达高水平IL-10及低水平IL-12的粘附性树突状细胞诱导EAE的抗原转异性耐受

以往研究表明,用MBP68-86肽加完全弗氏佐剂(CFA)免疫动物前,给Lewis大鼠皮下注射体外用致脑炎的MBP68-86肽处理过的髓源性树突细胞(DC)可诱导出对急性EAE的耐受。为进一步了解引起耐受DC的特性,比较了来自健康Lewis大鼠髓源性的粘附DC和漂浮DC的表型、特性和功能。观察了IL-     

NF-κB圈套性寡核苷酸诱导骨髓DC疫苗的实验研究

目的 体外诱导、培养大鼠(Lewis大鼠)骨髓来源改良树突状细胞(DC),为进一步研究核苷酸圈套技术抗移植排斥反应作准备.方法 Lewis大鼠骨髓造血干细胞,体外经重组大鼠细胞因子GM-CSF、IL-4诱导成DC;核因子-κB(NF-κB)圈套寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)用于阻止DC的成熟,降低细胞表面分子的表达,制备改良的DC;LPS用于刺激DC的成熟.流式细胞仪检测DC表面分子CD11c、CD80、CD86等的表达情况,分析DC的细胞特性.结果 体外GM-CSF和IL-4诱导的大鼠骨髓来源DC纯度高、数量丰富.NF-κB decoy ODN能明显降低DC表面分子(CD11c、CD80、CD86等)的表达,表现为非成熟状态;经LPS刺激仍能保持非成熟状态.结论 经NF-κB decoy ODN处理的大鼠骨髓来源DC,其状态稳定,低表达表面分子和共刺激分子,可作为进一步研究的DC疫苗.     

合成病毒多肽诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎的行为学,免疫学和病理学研究

目的研究与髓鞘碱性蛋白（MBP）有相似氨基酸序列的4条病毒多肽免疫大鼠后能否诱导出实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型,并探讨其可能的发生机制。方法66只Lewis雌性大鼠,随机分为6组,每组11只。A组用完全弗氏佐剂（cFA）免疫;B组用豚鼠MBP68-86免疫;C组-F组分别用乙型肝炎病毒、JC病毒、EB病毒和HHV-6病毒肽段免疫。EAE评分按国际标准。免疫后第15天处死大鼠,制备淋巴结细胞悬液和腰段脊髓冰冻切片。用MBP68-86和PBS分别刺激6组的淋巴结细胞,测定各组T淋巴细胞对MBP68-86的增殖反应,MBP68-86刺激下的IFN-Y分泌及每条病毒肽与MBP68-86诱导抗体间的交叉反应性。对脊髓切片进行细胞浸润的评级,并用免疫组化法对浸润细胞分类。结果B组（MBP68-86免疫组）和D组（JC病毒肽免疫组）分别有10只鼠和6只鼠出现EAE表现;MBP68-86显著刺激B组和D组大鼠的T淋巴细胞增殖,与cFA组比较有统计学差异（P〈0．05）;B组和D组的淋巴细胞在MBP68-86刺激下释放的IFN-γ量上升,明显高于CFA组（P％0．（）5）;MBP68-86免疫大鼠的血清与4条病毒肽之间无明显的交叉反应性;发病鼠脊髓内有大量浸润细胞,免疫组化显示为T细胞和巨噬细胞浸润并有小胶质细胞激活。结论JC病毒肽具有与MBP68-86相似、但较弱的致病原性;其可能具有与MBP68-86相似的T细胞表位,而缺乏相似的B细胞表位;提示病毒的分子模拟学说在多发性硬化（MS）发病中可能有一定的作用。     

MBP_(68-86)与MBP_(87-99)诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的轴突损伤修复及其机制研究

目的观察髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)68-86及MBP87-99诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠模型中淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)及生长相关蛋白(growth-associatedprotein,GAP)-43mRNA表达及其环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)-蛋白激酶(protein kinase,PKA)的变化,探讨EAE大鼠发病过程中轴突损伤修复及其可能的分子机制。方法应用不同肽段的MBP68-86或MBP87-99与不完全福氏佐剂及结核杆菌混合制成抗原,皮下注射于大鼠双后足垫,建立大鼠EAE模型。观察其神经功能评分、脑组织病理变化,酶联免疫测定大鼠脑组织cAMP含量,实时荧光定量RT-PCR法测定大鼠脑组织APP、GAP-43及PKA mRNA表达。结果与MBP87-99组大鼠比较,MBP68-86所致EAE病情进展快,神经功能评分较高,炎细胞浸润重并形成袖套状改变。中剂量MBP68-86免疫大鼠第14天,脑组织GAP-43 mRNA表达较正常组明显降低(P<0.05);第28天,APP mRNA表达明显升高(P<0.05)。MBP87-99免疫大鼠第28天,APP mRNA表达较正常组和小剂量MBP68-86明显上升(P<0.05);GAP-43 mRNA表达较大、小剂量MBP68-86明显升高(P<0.05)。大、小剂量MBP68-86与MBP87-99免疫大鼠第28天,脑组织cAMP水平均较正常组明显增高(P<0.01或P<0.05),中剂量MBP68-86与MBP87-99组大鼠脑组织PKA mRNA表达明显升高(P<0.01)。结论 MBP68-86或MBP87-99均可诱导Lewis大鼠产生EAE。可引起脑组织的炎性细胞浸润、脱髓鞘及轴突损伤等,且损伤有一定的自我修复功能,其机制可能与调节cAMP-PKA信号途径有关。综合分析研究结果发现,MBP68-86中剂量(每只50μg)可作为探索EAE发病特点及药物观察的实验模型。     

NF-KB圈套性寡核苷酸诱导骨髓DC疫苗的实验研究

目的体外诱导、培养大鼠（Lewis大鼠）骨髓来源改良树突状细胞（DC），为进一步研究核苷酸圈套技术抗移植排斥反应作准备。方法Lewis大鼠骨髓造血于细胞，体外经重组大鼠细胞因子GM-CSF、IL-4诱导成DC；核因子-kB（NF-kB）圈套寡核苷酸（NF-kB decoy ODN）用于阻止DC的成熟，降低细胞表面分子的表达，制备改良的DC；LPS用于刺激DC的成熟。流式细胞仪检测DC表面分子CD11c、CD80、CD86等的表达情况，分析DC的细胞特性。结果体外GM-CSF和IL-4诱导的大鼠骨髓来源DC纯度高、数量丰富。NF-kB decoy ODN能明显降低DC表面分子（CD11c、CD80、CD86等）的表达，表现为非成熟状态；经LPS刺激仍能保持非成熟状态。结论经NF-kB decoy ODN处理的大鼠骨髓来源DC,其状态稳定,低表达表面分子和其刺激分子,可作为进一步研究的DC疫苗。     

IL-12p35 siRNA干涉对大鼠髓源性树突状细胞表面分子表达的影响

目的：研究IL-12p35 siRNA干涉对大鼠髓源性树突状细胞（DC）免疫功能的影响.方法：通过粒细胞-巨噬细胞型集落刺激因子（GM-CSF）、IL-4和脂多糖（LPS）体外培养体系,从大鼠骨髓中获得DC,化学合成小型干扰RNA（siRNA）,体外转染DC.检测IL-12p35转录采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）技术.DC细胞表面分子CD80、CD40和MHCⅡ表达采用流式细胞仪分析.结果：IL-12p35 siRNA转染后的DC表面分子CD80和MHCⅡ表达无明显改变,而CD40表达明显下降.结论：IL-12p35 siRNA的转染不能干扰DC的成熟,但可以抑制其免疫应答功能.     

IL-6抑制LPS诱导的小鼠髓源性DCs成熟的实验研究

目的观察白细胞介素-6(IL-6)对于内毒素(LPS)诱导的小鼠髓源性树突状细胞(DC)成熟效应的抑制作用。方法分离小鼠骨髓细胞,采用黏附法结合GM-CSF和IL-4刺激法在体外培养髓源性DCs(BMDCs)。用相差倒置显微镜观察BM-DCs的形态特点。用LPS诱导DC成熟。采用FACS结合混合淋巴细胞反应,观察IL-6处理与否,LPS诱导的BMDCs在表型和刺激同种淋巴细胞增殖功能上的变化。结果形态观察和FACS分析的结果表明:体外成功培养了纯度较高的高表达CD11c的BMDCs,LPS能明显诱导BMDCs表面MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD40的表达上调;而经过IL-6处理后,LPS诱导BMDCs表面CD80、CD86、CD40表达上调的能力被显著削弱(P0.05)。混合淋巴细胞反应显示,与单独用LPS处理的BMDCs相比,经IL-6处理后的BMDCs刺激同种淋巴细胞增殖的能力明显减弱,并呈剂量依赖关系(P0.05)。结论IL-6能明显抑制LPS诱导的BMDCs成熟,可能是肿瘤免疫逃逸的重要机制之一。     

黄芪多糖对小鼠树突状细胞分化及成熟的影响

目的探讨黄芪多糖(APS)是否具有诱导小鼠髓源性树突状细胞(DC)分化和成熟的作用,以阐释APS药理作用的机制。方法APS分别取25(APS25组)、50(APS50组)、75(APS75组)、100 mg／L(APS100组)4种浓度,分别体外诱导小鼠髓源性DC前体和未成熟DC,采用倒置显微镜观察细胞生长状态,电子显微镜检测细胞形态,流式细胞仪检测CD11C、主要组织相容性复合物(MHC)-Ⅱ类分子及协同刺激分子CD80、CD86表达水平。结果APS、APS 白介素(IL)-4及空白对照组诱导的DC前体细胞,培养结束时大部分细胞已经死亡。粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-csF) IL-4诱导小鼠髓源性DC,在APS刺激36 h后,流式细胞检测结果显示APS100、APS75、APS50组的CD80、CD86、CD11c、MHC-Ⅱ类分子表达水平均明显高于空白对照组(P值均< 0．05),与内毒素(LPS)组类似;空白对照组与APS25组的差异无显著性(P>0．05)。结论APS不能诱导小鼠髓源性DC前体分化为DC,但可能有促进DC成熟的作用。     

切除肾上腺对大鼠自身免疫性脑脊髓炎敏感性的影响

目的 研究肾上腺切除导致下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能缺陷对Wistar大鼠诱发的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的敏感性的影响.方法 Wistar大鼠单、双侧肾上腺切除后,用GPSCH-CFA诱导各组大鼠产生EAE,并观察临床评分、MBP抗体、皮质醇、Th1细胞因子和脑组织Bc1-2/Bax蛋白表达的变化,并与Lewis大鼠的EAE模型进行比较.结果 GPSCH-CFA诱导后,双侧切除肾上腺的Wistar大鼠平均神经症状评分最高为4.60分,发病率为100%,血清中皮质醇水平明显降低和MBP抗体水平明显升高,IFN-γ、TNF-α和IL-2水平均明显升高,大脑皮层和下丘脑中Bcl-2蛋白表达均明显降低和Bax蛋白表达均明显升高.结论 双侧肾上腺切除导致HPA功能缺陷能显著增加Wistar大鼠诱发EAE的敏感性.     

左归丸和右归丸对自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织中凋亡蛋白Fas、Bax表达的影响

目的：观察左、右归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）大鼠脑组织中凋亡蛋白Fas、Bax表达的影响。方法：用髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein68-86,MBP68-86）免疫Lewis大鼠建立EAE模型。观察各组大鼠体重体温变化,饮食和饮水变化,神经功能评分,发病率、死亡率、潜伏期及病程变化。取脑和脊髓,HE染色后进行病理观察;用免疫组化法检测大鼠脑组织中Fas、Bax的表达情况。结果：左归丸组和右归丸组明显减轻病灶区域的炎性细胞浸润,对Fas、Bax的表达均有一定的抑制作用,与激素组类似。结论：左、右归丸均有防治小鼠EAE的作用,其作用机制可能与调节细胞凋亡蛋白Fas、Bax的表达有关。     

大鼠脾脏树突状细胞的体外分离培养

目的 建立大鼠脾脏树突状细胞(DCs)的体外分离和培养方法,并进行相关鉴定.方法 根据DC低密度和短暂黏附的特点,用梯度密度离心方法分离出大鼠脾脏DC前体和单核细胞,在加入30 ng/mL粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-4(IL-4)的DMEM培养基中,分别培养7 d和14 d后收集细胞,流式细胞仪检测DCs表面抗原OX62、CD80、CD86和主要组织相容性复合物-Ⅱ类(MHC-Ⅱ)分子的表达情况.结果 新鲜分离的大鼠脾脏DCs细胞呈圆形, 胞体小,在培养液中悬浮生长;表面抗原表达很低.诱导分化7 d时,部分细胞体积增大且形态不规则,表面呈毛刺样,细胞核大而不规则; MHC-Ⅱ分子呈较高水平表达,CD80、CD86表达较低.诱导分化14 d时,大部分细胞呈现典型的树突状细胞的形态; MHC-Ⅱ分子呈高表达,CD80、CD86表达增加,OX62表达阳性率为25.0% ～86.2%.结论 密度梯度离心结合较低浓度GM-CSF+IL-4培养,是大鼠脾脏DCs体外分离和培养的简单、经济且有效的方法.     

JAK2/STAT3途径在IL-6抑制LPS诱导的树突状细胞分化成熟中的作用

目的 观察JAK2/STAT3信号途径在IL-6抑制LPS诱导的小鼠髓源性树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)分化成熟中的作用.方法 分离小鼠骨髓细胞,采用黏附法结合GM-CSF和IL-4刺激法在体外培养BMDCs;用相差倒置显微镜观察BMDCs的形态特点;用LPS诱导DCs成熟;采用流式细胞术观察IL-6处理与否,LPS诱导的BMDCs在表型上的变化;Western blot检测BMDCs细胞质p-JAK2、总STAT3和P-STAT3的表达水平.结果 形态观察和FCM分析的结果表明:体外成功培养了纯度较高的高表达CD11c的BMDCs,LPS能明显诱导BMDCs表面MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达上调;而经过IL-6处理后,LPS诱导BMDCs表面MHC-Ⅱ类分子、CD80、CD86、CD40表达上调的能力被显著削弱(P＜0.01).Western blot结果显示,与单独用LPS处理的BMDCs相比,经IL-6处理后的BMDC中p-JAK2、P-STAT3表达随作用时间增加而明显上调,提示IL-6促进JAK2/STAT3信号途径活化.结论 JAK2/STAT3信号途径参与了IL-6抑制LPS诱导的BMDCs成熟过程.     

大鼠脾脏树突状细胞的体外分离培养

目的建立大鼠脾脏树突状细胞(DCs)的体外分离和培养方法,并进行相关鉴定。方法根据DC低密度和短暂黏附的特点,用梯度密度离心方法分离出大鼠脾脏DC前体和单核细胞,在加入30ng/mL粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-4(IL-4)的DMEM培养基中,分别培养7d和14d后收集细胞,流式细胞仪检测DCs表面抗原OX62、CD80、CD86和主要组织相容性复合物-Ⅱ类(MHC-Ⅱ)分子的表达情况。结果新鲜分离的大鼠脾脏DCs细胞呈圆形,胞体小,在培养液中悬浮生长;表面抗原表达很低。诱导分化7d时,部分细胞体积增大且形态不规则,表面呈毛刺样,细胞核大而不规则;MHC-Ⅱ分子呈较高水平表达,CD80、CD86表达较低。诱导分化14d时,大部分细胞呈现典型的树突状细胞的形态;MHC-Ⅱ分子呈高表达,CD80、CD86表达增加,OX62表达阳性率为25.0%~86.2%。结论密度梯度离心结合较低浓度GM-CSF IL-4培养,是大鼠脾脏DCs体外分离和培养的简单、经济且有效的方法。     

IL-6和IL-10对小鼠肺泡巨噬细胞CD14清道夫受体mRNA表达的影响

目的：探讨感染过程中内毒素促使肺泡巨噬细胞由免疫防御细胞转化为致炎效应细胞的分子机制。方法：通过体外培养肺泡巨噬细胞，施加IL-6和IL-10刺激，应用RT-PCR方法观察肺泡巨噬细胞CD14和清道夫受体（SR）mRNA的表达变化。结果：在基因转录水平，IL-6对CD14表达呈时间-剂量依赖性上调，对SR的表达呈进行性下调；IL-10对SR表达呈时间-剂量依赖性上调，下调CD14表达。结论：促炎因子IL-6对肺泡巨噬细胞SR表达下调及CD14表达上调可能是感染过程中内毒素促使肺泡巨噬细胞由免疫防御转化为致炎效应细胞的机制之一，抗炎因子IL-10可能对这一转化过程起到一定的抑制作用。     

不同浓度粒巨噬细胞集落刺激因子在未成熟树突状细胞培养中的效果研究

目的:探讨不同浓度细胞因子在培养小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞(Dendritic cells,DC)中的作用,寻找培养所需最佳细胞因子浓度.方法:分别用低、中、高剂量粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulatingfactor,GM-CSF)联合或不联合白细胞介素4(Interlenkin-4,IL-4)培养小鼠骨髓源性未成熟DC,对其进行形态学观察和细胞表型检测.结果:培养第7 d,低剂量组DC数量最少、突起细小,CD80、CD86及主要组织相容(Major histocompatibility complex,MHC Ⅱ)类分子表达低,如联合IL-4培养口1提高DC数量;中等剂量组与高剂量组DC较低剂量组为多,CD80、CD86及MHCⅡ类分子表达亦较前者提高,但二组无明显差异,有无联合IL-H4培养的差异亦不显著.结论:GM-CSF低剂量时,可诱导出纯度较高的末成熟DC,而GM-CSF中等剂量和高剂量时,无论是否联合诱导IL-4培养,诱导未成熟DC的产量及纯度无明显差异.     

自身免疫性脑脊髓炎大鼠CD4+CD25+T细胞、CD86分子的变化及意义

目的:探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠CD4 CD25 T细胞、CD86分子的变化及意义。方法:模型组用豚鼠脊髓和完全弗式佐剂混匀乳剂诱发大鼠EAE,观察两组的发病情况;HE染色和髓鞘染色观察病理改变;流式细胞仪检测外周血CD4 CD25 T细胞、CD86分子。结果:模型组大脑、脑干、脊髓炎性细胞浸润明显,髓鞘改变明显;模型组CD4 T细胞、CD86分子显著增多,CD4 CD25 T细胞显著减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的CD86分子阳性率增高,与EAE的发病相关,CD4 CD25 T细胞对其有一定的保护作用。     

NF-κB寡核苷酸诱骗剂构建大鼠特异性耐受性树突状细胞

目的:运用NF-κB寡核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN Decoy)构建大鼠耐受性树突状细胞(dendritic cell,DC),并将其负载牛Ⅱ型胶原(BⅡC),对其成熟状态进行评价.方法:取SD大鼠脾脏单核细胞,用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4诱导其转化为DC后分成5组:单纯DC组、脂多糖(LPS) DC组、Decoy-DC组、LPS刺激Decoy-DC组、负载BⅡC-Decoy-DC组,对终细胞进行形态观察、评价活力、表型鉴定.结果:大多数大鼠脾脏来源DC呈CD80+和CD86-的表型特征,各组大鼠DC特异性标志OX-62表达率＞70％,差异无统计学意义(P＜0.05);与单纯DC组比较,Decoy-DC组细胞表面共刺激分子CD80和CD86阳性表达率和表达强度均呈明显降低(P＜0.05),经LPS刺激后DC细胞CD80及CD86阳性表达率和表达强度上调均不明显(P＞0.05);BⅡC-Decoy-DC组DC细胞形态学与Decoy-DC组无明显差别,也同样呈CD80和CD86低表达.结论:用NF-κB ODN Decoy成功构建耐受性DC,此耐受性DC负载了特异性抗原BⅡC后表型稳定.     

大鼠髓系来源的树突状细胞的体外诱导及功能鉴定

目的探讨建立合适的大鼠骨髓源性未成熟树突状细胞(imDC)的培养方法,并对其生物学特性进行评价。方法分别以不同剂量的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素(IL)-4诱导分化获得大鼠骨髓源性树突状细胞(DC),比较收获率及特异性标记蛋白(OX62)阳性的DC数量,获得最佳细胞因子浓度。并用流式细胞仪分析DC表型,混合淋巴细胞反应(MLR)检测其刺激同种T细胞增殖能力,ELISA法测定MLR上清IL-12、γ-免疫反应性纤维结合素(IFN-γ)水平。结果 GM-CSF 5 ng/ml可诱导出更高的收获率及OX62的阳性率。GM-CSF 5 ng/ml培养7 d的DC,表达中等水平的主要组织相容性(抗原)复合物Ⅱ类(MHC II)和低水平的CD86;其分泌少量IL-12;刺激同种T细胞增殖能力极低。脂多糖(LPS)刺激后MHCⅡ、CD86表达明显增加;分泌IL-12和IFN-γ增加;刺激同种T细胞增殖能力增强。结论 GM-CSF 5 ng/ml为诱导大鼠骨髓源性imDC的最佳剂量,培养7～9 d可以获得足够数量和纯度的imDC。     

核转录因子RelB抑制途径对骨髓树突状细胞表面分子表达的影响研究

目的 探讨核转录因子RelB抑制途径对小鼠骨髓树突状细胞(bone marrow dendritic cells)的表面分子表达的影响,为致耐受树突状细胞的研究提供新方法.方法 rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导培养体系培养小鼠骨髓树突状细胞,免疫磁珠方法纯化;用慢病毒载体制备RelB shRNA慢病毒,与小鼠骨髓树突状细胞共培养,流式细胞术观察树突状细胞表面分子MHC-II、CD86和CD40的表达,设LPS-DC对照组、未处理组和LPSRNAi RelB DC组.结果 核转录因子RelB抑制的树突状细胞表面分子MHC-II、CD86和CD40均低水平表达,显著低于成熟Dc表面分子的表达(P<0.05),且经LPs刺激后(LPS RNAi RelB DC)DC表面上述三类分子的表达水平仍显著低于LPS-DC组(P<0.05),与未处理组(immature DC)表面分子表达水平相当.结论 核转录因子RelB抑制的骨髓树突状细胞表面分子表达水平低,呈现出致耐受的树突状细胞的特点,是致耐受树突状细胞研究的一种新方法.     

Gm-CSF、IL-4联合诱导树突细胞对大鼠肝癌微环境Treg细胞表达的影响

目的研究和探讨粒/巨噬细胞集落刺激因子(Gm-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)联合诱导制造的树突细胞(DC)疫苗对大鼠肝癌微环境下Treg细胞表达的影响,为将来临床制备高效的肿瘤疫苗提供理论依据。方法从健康志愿者血液中提取单核细胞,利用Gm-CSF、IL-4联合诱导分化为DC,在第3、5、8天时测细胞,成功诱导成熟DC后与T淋巴细胞共培养7 d,分别在第0、3、5、7天时检测CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例,同时将DC负载肿瘤抗原,制备DC疫苗。采用饮用二乙基亚硝水溶液的方法制造肝癌荷瘤大鼠模型30例,分为模型对照组与DC疫苗组。每组各15只,DC疫苗组分别于造模后第2、5、8周的周一、三、五、七皮下多点注射DC疫苗,模型组皮下注射等量生理盐水,最后一次注射的3周后处死大鼠,对比两组大鼠肝癌结节数以及肝癌组织中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的表达情况。结果诱导第8天,CD1a、CD80、CD83、CD86及HLA-DR免疫表型达到表达高峰;诱导后DC细胞与T淋巴细胞共培养后,CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例显著下降,差异有统计学意义(P0.05);注射DC疫苗后,荷瘤大鼠肝内癌结节数显著降低(P0.05),肝癌组织中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达显著增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论采用Gm-CSF联合IL-4可以成功诱导DC细胞,体外培养能降低CD4+CD25+Foxp3+Treg表达量,制备成DC疫苗可以降低大鼠肝癌微环境中Treg表达量,对癌结节有显著治疗作用。