TNF-α诱导血管内皮细胞凋亡的研究

血管内皮细胞对维持心血管系统的正常功能有着重要的作用,它的凋亡引起的血管萎缩衰退,不仅在临床上造成很多人类疾病而且会促进感染性休克的发生、发展。肿瘤坏死因子α有着强大的细胞毒性,可以造成血管内皮细胞凋亡。本文对肿瘤坏死因子α造成血管内皮细胞凋亡的机制进行综述。     

肿瘤坏死因子-α致体外肝细胞凋亡效应的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对HepG2细胞的致凋亡作用.方法 利用HepG2细胞作为体外肝细胞模型,HepG2细胞经TNF-α(400U/ml)作用12、24、48 h后,分别测定培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量.选择TNF-α作用24 h的细胞,电镜观察细胞形态,检测DNA 梯形条带,采用原位末端标记技术(TUNEL)、流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 TNF-α作用24 h后,培养上清中LDH轻度增高;电镜观察发现部分细胞出现典型的细胞凋亡形态改变;细胞内片段化DNA经琼脂糖凝胶电泳后出现了典型的DNA 梯形条带;TUNEL法绝大多数细胞核呈棕褐色阳性染色,而对照组无阳性染色;用Apo2.7抗体标记凋亡细胞后经流式细胞仪检测,阳性比例达98.37%,而对照组阳性比例为16.52%.结论 TNF-α可引起HepG2细胞凋亡.     

肿瘤坏死因子α诱导早孕原代培养细胞滋养细胞的凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）对早孕细胞滋养细胞凋亡的影响.方法 选取正常妊娠早孕（7～9周）绒毛,采用Percoll梯度离心法提取细胞滋养细胞进行原代培养.A组6孔培养皿分别加入10 μL PBS,10 μg/mL,100 μg/mL TNF-a,B组双孔对照.24 h后分别收集细胞使用RT-PCR方法测定Bax和Bcl-2的表达.并使用TUNEL方法测定细胞凋亡数目.结果 A组与B组相比,TNF-α可以明显增加Bax的表达（P〈0.05）,并呈剂量相关性.TUNEL方法测定显示：与B组相比,A组凋亡细胞数明显增加（P〈0.05）.结论 TNF-α可以诱导早孕细胞滋养细胞的凋亡.     

重组人肿瘤坏死因子-α诱导黏液表皮样癌细胞凋亡

目的: 探讨重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)作用于人黏液表皮样癌细胞(MEC-1)的效应与机制. 方法: 应用细胞记数、DNA降解片段琼脂糖凝胶电泳观察、电镜观察和细胞周期测定rhTNF-α作用后MEC-1细胞的凋亡状况. 结果: rhTNF-α作用于MEC-1细胞后,导致细胞存活数目减少,大量细胞发生凋亡;基因组DNA分解成寡聚核苷酸片段,DNA琼脂糖凝胶电泳有梯形条带;细胞周期发生改变,形态学观察细胞核皱缩,染色质边集. 结论: rhTNF-α是通过MEC-1细胞发生凋亡而发挥细胞毒作用.     

脓毒症模型大鼠肿瘤坏死因子-α和肝细胞凋亡的关系

目的:探讨脓毒症大鼠肿瘤坏死因子a(TNF a)与肝细胞凋亡的关系以及对肝功能的影响。方法:大鼠随机分为正常对照组和实验组,实验组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症大鼠模型,分别于术后30、60、120、180min(CLP术后30、60、120、180 min组)处死动物,测定肝组织和血浆TNF a水平,并检测肝细胞凋亡的情况,同时测定丙氨酸氨基转移酶(ACL)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。正常对照组麻醉后不行CLP术,其余同实验组。结果: 与正常对照组相比,CLP术后30、60、120、180 min组肝细胞凋亡数、血清TNF-α、ALT水平均明显升高(P<0.01),有随着时间的延长增加的趋势;与正常对照组相比,CLP术后120、180 min组血清AST含量明显升高(P<0.01);CLP术后大鼠肝组织、TNF-α表达强度随时间延长而有增强的趋势。结论: CLP后大鼠肝脏产生大量TNF-α,与肝细胞凋亡有密切关系,肝功能受到损伤。     

α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α诱导的人内皮细胞活性氧产生及其激活信号通路的影响

目的 探讨α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激的人脐静脉内皮细胞中活性氧(ROS)产生及其对激活信号通路的影响.方法 用小分子RNA干扰(siRNA)技术消除人脐静脉内皮细胞的NADPH氧化酶p47phox亚基;用分子探针2,7-DCF测定细胞内ROS的产生量;用RT-PCR测定p47phoxmRNA的表达以及用细胞免疫组化方法测定p47phox蛋白的表达;用Western印迹测定ERK<,2>及核因子(NF)-кB、应激蛋白(SP-1)和活化因子蛋白的表达.结果 TNF-α刺激使细胞内ROS的产生量较对照组高155.4%;α-玉米赤霉醇预处理能够剂量依赖地抑制TNF-α对ROS的诱导效应.TNF-α作用细胞24 h后,p47phox的mRNA表达水平较对照组高212.8%,蛋白的表达也明显高;α-玉米赤霉醇预处理使TNF-α诱导的p47phox mRNA表达水平低63.0%,蛋白表达水平也明显下降.p47phox的siRNA完全阻断TNF-α诱导ROS的产生.α-玉米赤霉醇预处理和p47phox的siRNA均阻断TNF-α对细胞外信号调控激酶的激活和转录因子SP-1的核转位,明显地抑制了NF-кB的核转位.结论 α-玉米赤霉醇能够抑制内皮细胞中TNF-α诱导的ROS的产生及由ROS激活的信号转导通路,主要机制是通过抑制NADPH氧化酶p47phox亚基的表达.     

肿瘤坏死因子-α与脑缺血

肿瘤坏死因子-α(TNF—α)是一种具有广泛生物学活性的细胞因子,在脑缺血及脑缺血再灌注损伤中的作用日益受到重视,在机体内,单核巨嗜细胞可产生TNF—α,神经系统的神经元、星性胶质细胞和小胶质细胞也能产生TNF—α,并且在脑缺血中的作用极为复杂。现就近几年国内外有关此方面的作用做一简要综述。     

促红细胞生成素对TNF-α诱导的血管内皮细胞凋亡的影响

目的:观察重组人促红细胞生成素(Recombinant human erythropoietin,rhEPO)对肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)诱导的人脐静脉血内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)凋亡的...     

肿瘤坏死因子-α与银屑病的研究进展

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)除了有杀伤或抑制肿瘤细胞的生物学活性外,还具有促炎症作用和免疫调节作用.在银屑病患者的皮肤损伤中发现高表达的TNF-α,且具有高于正常人的免疫反应性和生物学活性.TNF-α与银屑病的发病有关,其单克隆抗体在治疗银屑病中具有广阔的前景.     

大蒜素对人脐静脉细胞抗氧化损伤保护作用

目的：研究大蒜素（Allicin）对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡的保护作用及其作用机理。方法建立H2O2诱导HUVEC细胞的氧化应激凋亡模型;采用MTT、RT-PCR、Western-blot等方法检测来探究大蒜素对其保护作用与可能作用机制。结果大蒜素能够减少H2O2诱导HUVEC的凋亡;使基因eNOS的表达显著增加;使凋亡相关PARP蛋白切割减弱、前体Caspase-3蛋白表达增加,Bax蛋白表达减弱。结论大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡具有较好的保护作用,对氧化应激状态下的HUVEC细胞起保护作用。     

三七皂苷Fc对高糖损伤血管内皮细胞保护作用

目的 探讨三七皂苷Fc对体外高糖诱导大鼠血管内皮细胞损伤的保护作用。方法 体外培养大鼠血管内皮细胞（RAOEC）,加入30mmol/L D-葡萄糖造成细胞损伤。加入不同浓度三七皂苷Fc进行干预,采用CCK-8法测定细胞活性,筛选出最适用药浓度。将细胞均匀接种于6孔板内,分为4组,即正常对照组、高糖组、正常对照+Fc组、高糖+Fc组,用Hochest33342荧光染色法对各实验组进行细胞凋亡的检测;采用细胞划痕实验检测各组细胞的伤口修复情况;采用Western blot法观察各组过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）的蛋白表达。结果 高糖+Fc组内皮细胞凋亡率明显低于高糖组,而修复率却明显高于高糖组,差异均有统计学意义（P<0.05）;高糖+Fc组PPAR-γ蛋白表达量明显高于高糖组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 三七皂苷Fc可抑制高糖引起的血管内皮细胞凋亡,并促进高糖状态下血管内皮细胞的增殖修复。其作用机制可能与三七皂苷Fc促进高糖状态下血管内皮细胞的PPAR-γ蛋白表达有关。     

BDNF对H2O2诱导人成纤维细胞凋亡的实验研究

目的研究脑源性神经营养因子(BDNF)对H2O2诱导人成纤维细胞(hFB)凋亡的作用.方法将含人Ⅰ型胶原a1链(COLIA1)基因启动子和增强子元件并在其3'端接BDNFcDNA的微基因pSVCEPBFCAT,经脂质体介导转染hFB并驱动BDNF异位表达,采用四唑盐(MTT)显色法检测细胞增殖,吖啶橙荧光染色显微镜观察细胞形态的改变,琼脂糖凝胶电泳检测染色质DNA断裂.结果经200μmol/L H2O2作用24 h后,pSVCEPBFCAT转染组和对照组包括未转染hFB、空载体pSVCEPCAT转染hFB的细胞生长抑制率分别为35%和≥84%,p＜0.001;对照组hFB普遍可见凋亡细胞特有的形态学及生物化学改变,如胞浆和核固缩、染色质断裂、DNA电泳呈阶梯状条带,而pSVCEPBFCAT转染hFB未发现上述凋亡特征.结论BDNF促进hFB增殖和拮抗H2O2诱导凋亡,明显抑制H2O2对hFB的细胞毒性.     

加减清营汤对H2O2损伤的血管内皮细胞保护作用研究

目的：观察加减清营汤对H2O2损伤的血管内皮细胞的保护作用。方法：体外培养内皮细胞ECV304,用380μmol／LH2O2损伤细胞,大鼠随机分成正常组、模型组、加减清营汤组和阳性药物对照组,用血清药理学方法给药,检测各项指标。结果：与模型组比较,加减清营汤含药血清组的NOS活性、T-AOC显著提高,MDA含量、LDH活力显著降低（P〈0．05）。结论：加减清营汤可降低H202对ECV304的损伤程度,具有明显的保护作用,其机理可能与维持细胞膜结构的完整性、提高抗氧化能力以及提高NOS活性等途径有关。     

H2O2诱导PC12细胞凋亡中MicroRNA表达及bcl-w调控机制

[目的]构建体外H2O2诱导PC12细胞模拟神经细胞凋亡模型[1],研究microRNA(miRNA或微小RNA)在凋亡中表达和bcl-W调控机制,从microRNA角度探讨颅脑损伤后(如缺血再灌注损伤、脑挫伤)凋亡的机制.[方法]体外H2O2诱导PC12细胞凋亡模型,用基因芯片技术筛选变化显著的microRNA,并对其实验验证后,根据现有microRNA数据库提供的靶标的预测分析结果,搜寻其相关的靶标,通过检测细胞凋亡、Western blot、实时荧光定量PCR技术来验证相关microRNA的作用靶点.[结果]成功构建了体外模拟体内神经细胞凋亡模型,通过基因芯片技术筛选出6个显著下调microRNA[2],其中mi-422a与bcl-w蛋白表达量呈负相关.[结论]通过miR-422a可以调控bcl-w蛋白的表达,且存在负性相关关系.通过调节mi-422a的表达可调控bcl-W蛋白的表达量,证实bcl-w上的基因位点有mi-422a的作用位点存在.     

牛蒡苷元及牛蒡苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究牛蒡苷元及牛蒡苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用。方法：体外培养人多巴胺神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,加入不同浓度的牛蒡苷元及牛蒡苷预保护细胞SH-SY5Y 24 h后,加入H2O2继续共同培养24 h,采用MTT法检测细胞存活率。结果：与模型组相比,5 μmol·L-1和10 μmol·L-1的牛蒡苷元和20 μmol·L-1的牛蒡苷可提高细胞的存活率。结论：牛蒡苷及其苷元均能保护H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤,且牛蒡苷元对SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用强于牛蒡苷。     

赤藓糖醇对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护机制

目的 探讨赤藓糖醇对PC12细胞氧化损伤的保护机制.方法 用H202造成PC12细胞氧化损伤模型,采用Western-blot的方法检测赤藓糖醇对Caspase-9、Caspase-12、Hsp70、TXNIP蛋白表达的影响.结果 赤藓糖醇可抑制H2O2损伤PC12细胞的Caspase-9表达(P＜0.05),对Caspase-12、Hsp70、TXNIP的表达没有明显影响.结论 赤藓糖醇可通过抑制线粒体途径的细胞凋亡发挥其抗氧化作用.     

过氧化氢液对SARS病房空气的消毒效果

1　临床资料　对我院SARS病区 84个病房连续进行了室内消毒前后细菌培养 6 0 0次 .H2 O2 ,QPX - 1 2 8型电动气溶胶喷雾机均由北京鑫四环消毒技术开发中心提供 ;细菌总数采样纸片 (美国 3M)由北京安普生化科技有限公司提供 .病房空气采样 :在无菌净化台内 ,用无菌方法将 1mL无菌生理盐水滴入 3mol·L-1 细菌总数测试制片中 ,盖上上层膜 ,轻轻用压样器压好 ,装入塑料袋中放入 4℃冰箱内 (一袋内最多不能超过 2 0张测试纸片 )备用 .采用自然沉降法 ,将细菌总数测试纸片上层膜轻轻打开 ,此时注意无菌 ,防止污染 ,用消毒后的专用夹子固定 ,…     

棓丙酯对缺氧性血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的　研究丙酯对缺氧性血管内皮细胞凋亡的影响。　方法　用氰化钠(NaCN)合并低糖DMEM培养液构建培养的人脐静脉血管内皮细胞株(ECV30 4 )缺氧模型;四唑盐法、丫啶橙/溴乙啶荧光染色、末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记等观察细胞受损和凋亡情况。　结果　NaCN合并低糖培养液可引起血管内皮细胞凋亡。4 μg/mL丙酯可显著减少由于NaCN引起的缺氧性内皮细胞凋亡(P <0 .0 5 )。　结论　丙酯对缺氧条件下的ECV30 4细胞具有保护作用。     

热休克蛋白70对H2O2损伤心肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)对损伤大鼠心肌细胞凋亡的保护作用.方法体外培养大鼠心肌细胞,免疫组化、DNA Ladder、流式细胞仪、细胞色素C氧化酶比活力的测定、电镜观察等作为检测指标,观察过氧化氢(H2O2)造成心肌细胞损伤,以及HSP70的保护作用.结果温度诱导后HSP70在胞浆中大量表达,损伤组与保护组凋亡率、细胞色素C氧化酶比活力有显著性差异(P<0.01).电镜观察损伤组细胞膜、细胞器损伤明显,并出现凋亡小体.结论 HSP70可延迟细胞凋亡,对心肌细胞具有保护作用.