柴胡皂苷A通过Wnt/β-catenin通路改变A549/DDP细胞耐药性

目的 探讨柴胡皂苷A（SSA）逆转人肺癌顺铂（DDP）耐药株A549/DDP的作用及机制。方法 细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测A549和A549/DDP对DDP的耐药性及SSA对A549和A549/DDP细胞活力的影响；流式细胞术检测A549/DDP凋亡率和细胞中活性氧（ROS）的变化；实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测C-myc，B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3） mRNA的表达情况；TopFish双荧光素酶报告基因检测β-连环蛋白（β-catenin）的转录活性；蛋白免疫印迹法（Western blot）法检测A549/DDP细胞中β-catenin蛋白的变化。结果 CCK-8检测结果显示，A549/DDP的耐药性是A549的12.82倍，差异具有统计学意义（P<0.05），SSA能够抑制A549的细胞活力，其半数抑制浓度（IC₅₀）为34.9 μmol·L^-1。SSA抑制 A549/DDP细胞的活力并具有浓度依赖性，在20 μmol·L^-1浓度时，对A549/DDP的抑制率<10%，选择20 μmol·L^-1作为逆转浓度；流式结果显示，与空白组比较，DDP组A549/DDP的凋亡比例明显升高，细胞内活性氧的累积明显增加（P<0.05），与DDP组比较，SSA+DDP组A549/DDP的凋亡比例明显升高，细胞内活性氧的累积明显增加；与空白组比较，DDP组A549/DDP细胞中C-myc，Bcl-2 mRNA表达明显降低，Caspase-3 mRNA表达明显升高（P<0.05），与DDP组比较，SSA+DDP组C-myc，Bcl-2 mRNA表达明显降低，Caspase-3 mRNA表达明显升高（P<0.05）；与空白组比较，DDP组β-catenin的转录活性明显降低（P<0.05），与DDP组比较，SSA+DDP组β-catenin的转录活性明显降低（P<0.05）；与空白组和DDP组比较，SSA+DDP组β-catenin蛋白表达明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 柴胡皂苷A可以提高A549/DDP细胞对DDP的敏感性，其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路激活有关。     

人参皂苷Rg3诱导膀胱癌细胞系EJ的凋亡作用

目的：探讨Rg3抑制膀胱癌细胞的作用及其诱导凋亡的机制。方法：用一定质量浓度的Rg3 处理膀胱癌细胞系EJ细胞,MTT法检测细胞增殖活力和抑制率50%的时候药物的浓度(IC₅₀)；Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞的形态；流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率；免疫细胞化学观察caspase-3的表达变化；琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯状带。结果：Rg3抑制EJ细胞生长,呈浓度依赖关系,Rg3处理细胞48 h的IC₅₀为125.5 mg·L^-1；经150 mg·L^-1Rg3处理细胞24 h和48 h后,观察到典型的凋亡细胞形态,即染色质凝集、核片段化、凋亡小体、核内致密的颗粒状荧光及caspase-3的表达增加；并呈时效依赖关系；用75 mg·L^-1Rg3处理细胞24,48,150 mg·L^-1的Rg3处理细胞48 h后,Rg3诱导了细胞凋亡和调节细胞周期,S期和G₂/M期的细胞比率增加,G₀/G₁的细胞比率下降；凋亡率从对照组的(1.05±0.17)%分别上升到(8.41±0.98)%,(18.57±2.20)% 和(33.98±1.64)%,琼脂糖凝胶电泳检测出典型的DNA梯形条带,其效应随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强。结论：Rg3可通过诱导EJ细胞凋亡而发挥其抑制细胞增殖的作用。     

黄芪-白花蛇舌草抑制肺癌A549细胞增殖机制

目的 从细胞水平观察黄芪-白花蛇舌草对人肺腺癌A549细胞增殖及白细胞介素-6（IL-6）,磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）,蛋白激酶B（Akt）,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）,雷帕霉素靶蛋白（mTOR）,缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）,细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁）表达量的影响,并探讨其作用的分子机制。方法 设立空白组（完全培养基）,黄芪-白花蛇舌草低、中、高质量浓度组（20,40,60 mg·L^-1）,顺铂低、中、高质量浓度组（5,10,20 mg·L^-1）,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测黄芪-白花蛇舌草（0,20,40,60 mg·L^-1）和顺铂（0,5,10,20 mg·L^-1）干预A549细胞24,48,72 h后的细胞活性,计算各组细胞增殖能力,筛选出各药物组最佳浓度;分别用完全培养基,黄芪-白花蛇舌草（40 mg·L^-1）,顺铂（10 mg·L^-1）,联合药物（40 mg·L^-1+10 mg·L^-1）干预肺腺癌A549细胞,设置为空白组、黄芪-白花蛇舌草组、顺铂组、联合组,计算各组在24,48,72 h后对A549细胞增殖抑制影响;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测各组72 h后细胞培养上清中IL-6的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测HIF-1α,Cyclin D₁ mRNA水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组蛋白PI3K,Akt,p-Akt,mTOR,HIF-1α,Cyclin D₁表达的变化情况。结果 在作用细胞24 h后,各黄芪-白花蛇舌草组对细胞增殖未表现出明显抑制,作用48 h,与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草组对肿瘤细胞有明显增殖抑制作用（P<0.05）,表现出时间依赖性,在作用细胞72 h,黄芪-白花蛇舌草各浓度组未表现出明显差异,故选用40 mg·L^-1为中药最佳浓度组,用于后续实验。与空白组比较,经过不同浓度顺铂干预后,细胞增殖均受到不同程度抑制（P<0.05）,表现出明显的时间依赖性,基于细胞存活率考虑,选用顺铂10 mg·L^-1为最佳浓度。与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草与顺铂联合应用明显抑制肺腺癌A549细胞增殖,增殖抑制率表现出明显的时间依赖性（P<0.05）,且药物作用72 h,联合组与其他两组比较差异更加显著（P<0.01）;与空白组比较,各用药组细胞培养液IL-6分泌显著降低（P<0.01）,以联合组下降更加突出。与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草、顺铂均能降低HIF-1α,Cyclin D₁ mRNA水平（P<0.05,P<0.01）,且联合用药降低幅度更加明显;各用药组PI3K,p-Akt,mTOR,HIF-1α,Cyclin D₁蛋白均明显降低（P<0.05,P<0.01）,且联合组各蛋白表达量明显低于顺铂组（P<0.01）。结论 黄芪-白花蛇舌草对肺癌A549细胞增殖具有抑制作用,潜在机制可能与其抑制IL-6/PI3K/Akt/mTOR-HIF-1α轴的表达与分泌有关。     

红车轴草总黄酮体外抗氧化作用的研究

 目的 探讨红车轴草总黄酮体外抗氧化作用。 方法 采用分光光度法测定 H₂O₂ 诱导红细胞溶血作用,用 2- 硫代巴比妥酸法测定小鼠红细胞膜脂质及肝组织匀浆脂质过氧化产物丙二醛（ MDA ）含量。 结果 红车轴草总黄酮在 0.2~1.6 mg·L^-1 内能抑制 H₂O₂ 诱导红细胞溶血和红细胞膜脂质过氧化作用, IC₅₀ 分别为 0.93 及 0.92 mg·L^-1 ,均呈较好的量效关系;红车轴草总黄酮在 4~32 mg·L^-1 内能抑制肝组织脂质过氧化产物的形成, IC₅₀ 为 17.5 mg·L^-1 。 结论 在一定浓度范围内红车轴草总黄酮体外具有明显的抗氧化作用。     

粗吻海龙蛋白质组分体外抗肿瘤活性的研究

 目的探讨粗吻海龙水溶性蛋白质组分的抗肿瘤活性。方法应用四甲基偶氮唑盐法检测药物细胞毒效应,应用流式细胞术分析药物对A549细胞周期和凋亡率的变化,琼脂糖凝胶电泳、荧光显微镜观察药物对A549细胞凋亡和细胞周期相关性质改变。结果粗吻海龙蛋白对L1210、CCRF-CEM、A549、LOVO细胞的IC₅₀分为1.86,1.56,0.88,1.74 g·L^-1。粗吻海龙蛋白质组分对A549细胞作用表现出凋亡细胞特征性的改变,并能增强甲氨蝶呤、丝裂霉素对A549的细胞毒作用。结果粗吻海龙蛋白质组分对肿瘤细胞增生有明显的抑制作用,可引起肿瘤细胞凋亡。     

基于UHPLC-QqQ-MS和网络药理学的二冬汤潜在活性成分含量测定及作用机制分析

目的 建立二冬汤中活性成分含量测定的超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱法（UHPLC-QqQ-MS），并对该方进行抗胰岛素抵抗作用靶点和通路的预测。方法 采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流动相0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱（0~3 min，90%~87%A；3~6 min，87%~86%A；6~9 min，86%~83%A；9~11 min，83%~75%A；11~18 min，75%~70%A；18~19 min，70%~52%A；19~22 min，52%A；22~25 min，52%~5%A；25~27 min，5%~90%A；27~30 min，90%A）；利用电喷雾离子源（ESI），多反应监测（MRM）模式，正、负离子模式检测其含量。在此基础上，运用网络药理学方法预测二冬汤发挥抗胰岛素抵抗作用的靶点和通路。结果 二冬汤中20个活性成分在一定质量浓度范围内线性关系良好，精密度、稳定性、重复性及加样回收率良好。含量测定结果显示，15批样品中高质量浓度的成分为黄芩素（1 259.39~1 635.78 mg·L^-1）、黄芩苷（1 078.37~1 411.52 mg·L^-1）；中质量浓度的成分为知母皂苷BⅡ（245.10~604.89 mg·L^-1）、芒果苷（148.59~217.04 mg·L^-1）、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷（89.30~423.26 mg·L^-1）、芦丁（46.91~1 553.61 mg·L^-1）、甘草酸（55.97~391.47 mg·L^-1）、新芒果苷（37.45~127.03 mg·L^-1）、荷叶碱（0.89~63.48 mg·L^-1）、金丝桃苷（6.96~136.78 mg·L^-1）、甘草苷（30.89~122.78 mg·L^-1）、甘草素（26.64~110.67 mg·L^-1）、原薯蓣皂苷（58.57~284.26 mg·L^-1）；低质量浓度的成分为伪原薯蓣皂苷（5.49~22.96 mg·L^-1）、汉黄芩素（7.16~20.74 mg·L^-1）、人参皂苷Rb₁（7.31~23.87 mg·L^-1）、人参皂苷Rg₁（10.78~28.33 mg·L^-1）、甲基麦冬黄烷酮A（0.74~1.67 mg·L^-1）、人参皂苷Re（7.78~24.76 mg·L^-1）、麦冬皂苷D（2.08~4.29 mg·L^-1）。网络药理学结果表明，二冬汤发挥抗胰岛素抵抗作用机制可能与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路有关。结论 建立的UHPLC-QqQ-MS可为二冬汤复方制剂的开发奠定基础。网络药理学研究结果可为二冬汤治疗2型糖尿病的作用机制研究提供参考。     

3种中药体外抗巨细胞病毒效应的比较

目的 :探讨中药金叶败毒注射液、板蓝根注射液、路边青注射液抗人巨细胞病毒 (HCMVAD16 9)作用的差异。方法 :采用细胞病变 (CPE)抑制法观察这 3种中药对HCMVAD169毒株的抑制作用。使用MTT法检测细胞的损伤程度 ,并利用A值评价 3种中药的抗HCMV的效应。结果 :金叶败毒注射液的半数中毒浓度 (TD₅₀ )为 20g·L^-1,半数有效浓度 (IC₅₀ )为 5.65g·L^-1,治疗指数 (TI)为 3.54 ;板蓝根注射液的TD₅₀ 为 10.23g·L^-1,ICsub>50 为 3g·L^-1,TI为 3.41;路边青注射液TD₅₀ 为 20 .23g·L^-1,IC₅₀ 为 5 .71g·L^-1,TI为 3.54。 3种中药均具有抗HCMV的作用 ,且随药物浓度的增高其作用也增强。但这 3种中药抗HCMV作用的差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :在 1∶2 0 0 ,金叶败毒注射液、板蓝根注射液、路边青注射液均具有较强的抗病毒作用 ,都是理想的抗HCMV中药。     

启膈散对人食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及miR-133a/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 观察启膈散对EC9706细胞增殖、凋亡的影响和对微RNA-133a（miR-133a）/蛋白激酶B（Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。方法 采用乙酸乙酯法提取启膈散有效部位；噻唑蓝（MTT）比色法筛选启膈散细胞用药剂量及检测启膈散对EC9706细胞增殖的影响；流式细胞仪检测启膈散对EC9706细胞凋亡的影响；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测启膈散对miR-133a及胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）mRNA表达的影响；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测启膈散对miR-133a/Akt/mTOR通路靶蛋白Akt，mTOR的表达。结果 与空白组比较，启膈散可抑制EC9706细胞的增殖（P<0.01），并呈剂量依赖性，筛选30%抑制浓度（IC₃₀）40 mg·L^-1和半抑制浓度（IC₅₀）80 mg·L^-1进行后续实验；与空白组比较，抑制剂组、抑制剂+启膈散组均可抑制EC9706细胞增殖（P<0.01），筛选抑制剂0.25 μmol·L^-1进行后续实验；与空白组比较，启膈散80 mg·L^-1组可明显促进EC9706细胞晚期凋亡率及总凋亡率（P<0.05），启膈散40 mg·L^-1组可促进EC9706细胞晚期凋亡率（P<0.05），与Akt/mTOR抑制剂联合用药后，可协同增效。与空白组比较，各组均能提高miR-133a表达（P<0.05），其中抑制剂与中药抑制剂+启膈散组促进作用明显。与空白组比较，各组均能够均可明显降低Akt，mTOR蛋白表达（P<0.05），与单独用药比较，抑制剂与中药联合应用组Akt，mTOR的蛋白表达有所降低。结论 启膈散能够抑制食管癌EC9706细胞的生长，促进EC9706细胞的凋亡，其抑制机制可能与调控miR-133a的表达，影响其下游Akt/mTOR信号通路有关。     

雷公藤甲素对体外培养大鼠气道平滑肌细胞增殖及原癌基因的影响

 目的探讨雷公藤甲素(triptolide,TL)对培养的大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增生及原癌基因c-fos与c-jun表达的影响。方法按不同药物分为6组，TL组(浓度分别为5，20，80，320，1 280 μg·L_-1)及地塞米松1 mg·L_-1组，采用MTT法检测不同浓度药物对ASMC增殖的影响，同时进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组c-fos，c-jun 的 mRNA表达水平。结果MTT方法显示TL对ASMC增殖有明显抑制作用，并呈剂量依赖性，TL的IC₅₀为51.52 mg·L_-1；RT-PCR方法显示TL浓度分别为80，320，1 280 μg·L_-1和地塞米松1 mg·L_-1能显著抑制c-fos，c-jun mRNA表达。结论TL有抑制ASMC增生的作用，其机制可能与下调c-fos和c-jun表达有关。     

小槐花提取物对α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

目的: 评价小槐花Desmodium caudatum (Thunb.)DC.提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。方法: 通过建立体外α-葡萄糖苷酶抑制模型,对小槐花提取物进行活性筛选。结果: 小槐花提取物均有较好的α-葡萄糖酶抑制作用,其中以乙酸乙酯部位(DCEA) 和石油醚部位(DCPE) 活性较好(IC₅₀=9.79,39.2 mg·L^-1),其次为正丁醇部位 (DCBU) (IC₅₀=625.1 mg·L^-1),抑制活性均远远大于阳性对照阿卡波糖 (IC₅₀=1 103.01 mg·L^-1)。DCBU对α-葡萄糖苷酶抑制活性呈显浓度依赖性;DCPE和DCEA对α-葡萄糖苷酶抑制活性对浓度的变化较灵敏,随浓度的增加而急剧上升。结论: 小槐花石油醚部位和乙酸乙酯部位对α-葡萄糖苷酶活性抑制非常显著,具有开发治疗糖尿病降血糖药物的价值。     

健脾解毒方对人结肠癌多药耐药细胞的逆转作用

目的:探讨健脾解毒方对人结肠癌多药耐药细胞HCT8/V的逆转作用及其可能机制.方法:人结肠癌HCT8/V多药耐药细胞常规培养,5％健脾解毒方药物血清作用48 h后,MTT法检测HCT8/V细胞对化疗药敏感性的影响,高效液相色谱法( HPLC)检测耐药细胞内长春新碱(VCR)药物浓度,流式细胞仪分析健脾解毒方对5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导的HCT8/V细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:健脾解毒方能增加HCT8/V细胞对VCR、顺铂(DDP)、5-Fu、吡柔比星(THP)4种化疗药物的敏感性,4种化疗药的IC50分别从( 191.08±18.18 )mg·L-1下降到(90.13±6.33 )mg·L-1;(290.79±28.38) mg·L-1下降到(22.16±1.82) mg·L-1;(23.12±1.99) mg·L-1下降到(9.88±0.86 )mg·L-1;(26.40±2.92) mg·L-1下降到(19.41±1.48) mg·L-1;健脾解毒方药物血清作用HCT8/V细胞48 h后细胞内VCR浓度明显增高(P＜0.01),且呈剂量依赖性.健脾解毒方能提高5-Fu诱导的HCT8/V细胞的凋亡率,使细胞阻滞于G1期.结论:健脾解毒方通过增加结肠癌多药耐药细胞内化疗药物浓度,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,逆转HCT8/V细胞株的多药耐药性.     

明党参根皮中5种呋喃香豆素类成分的体外抗肿瘤活性

目的:研究明党参根皮中异欧前胡素、欧前胡素、花椒毒酚、珊瑚菜内酯、5-羟基-8-甲氧基补骨脂素5种呋喃香豆素类成分的体外活性.方法:选取人肝癌细胞株SMMC-7721,HepG2,人肺癌细胞株A-549,人胃癌细胞株MKN-45,人官颈癌细胞株Hela,人乳腺癌细胞株MCF-7,MDA-MB-2317种肿瘤细胞.以5×104个/mL的细胞密度接种于96孔板,给予不同浓度的药物后培养72 h,采用MTT法观察5种成分对各细胞活性的影响.结果:5种呋喃香豆素对7种肿瘤细胞均表现出不同程度的增殖抑制作用,IC50在0.30～17.23 mg·L-1之间,其中异欧前胡素效果最显著,IC50从0.39 mg·L-1到4.11 mg·L-1.结论:明党参根皮中5种呋喃香豆素类成分具有明显的抗肿瘤活性.     

仙慈丹有效部位对人肺癌细胞A549增殖的抑制作用

目的:探讨仙慈丹(XCD)有效部位对肺癌细胞A549增殖抑制作用及其作用机制.方法:XCD有效部位为XCD水提滤液通过AB-8型大孔树脂柱收集80％乙醇洗脱液所得,得率为0.90％.体外培养A549细胞至对数期,分别以质量浓度为5,10,15,25,50,100,200 mg·L-1的仙慈丹有效部位作用,应用MTT法测定其对A549细胞的抑制率,进而求出半数抑制浓度(IC50).运用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术及PI单染流式细胞术测定XCD有效部位对A549细胞凋亡及周期的影响.结果:通过MTT实验,经过统计计算得出XCD有效部位在对A549作用24,48,72 h后的IC50分别为136.550,56.671,55.322 mg·L-1;通过流式细胞仪测定XCD作用下A549在24,48,72 h的凋亡率分别为(17.98 ±0.11)％,(23.34 ±0.23)％,(29.54±0.78)％;XCD作用A549细胞24 h后,细胞周期被阻滞在S期,在48 h后细胞周期被阻滞在G0/G1期.结论:XCD有效部位对A549细胞增殖抑制作用明显,通过诱导肿瘤细胞凋亡,同时调节细胞周期抑制A549细胞生长.     

苦豆子多糖及其衍生物的体外抗氧化活性

目的:对苦豆子多糖及其衍生物的体外抗氧化活性进行了研究.方法:将苦豆子多糖硫酸化、磷酸化修饰后,以维生素C(VC)为对照,分别测定苦豆子多糖(SAP)、硫酸化苦豆子多糖(SAPS)和磷酸化苦豆子多糖(SAPP)3种多糖对二苯代苦味酰自由基(DPPH)、羟自由基(·OH)、超氧自由基(O2-·)的体外抗氧化活性及还原力.结果:SAPS和SAPP表现出不同程度抗氧化活性,并随浓度增加,活性增强,其中SAPS和SAPP清除DPPH能力(IC50分别是4.573,6.542 mg·L-1)与SAP(IC5010.233 mg·L-1)相比,有显著提高;SAPP清除羟自由基(IC504.368 mg·L-1)和SAPS清除超氧自由基(IC502.651 mg·L-1)能力显著提高.结论:硫酸化和磷酸化修饰能提高苦豆子多糖的体外抗氧化活性.     

穿心莲内酯磺化物体外抗腺病毒药效学研究

目的:研究穿心莲内酯磺化物(ADS)体外抗腺病毒-3(AdV3)活性及细胞毒性。方法:采用细胞病变法(CPE)、四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测ADS的最大无毒浓度(TC0)和半数中毒浓度(TC50),以AdV3100倍半数组织细胞感染量(100TCID50)攻击体外培养的人喉癌上皮细胞(Hep-2)造成AdV3感染模型,以利巴韦林注射液为对照药,以最小有效浓度(MEC)、半数有效浓度(EC50)及治疗指数(TI)为指标,测定了ADS在6.10,12.21,24.41,48.23,97.66,195.31,390.63,871.25 mg.L-1的体外抑制腺病毒活性。结果:ADS、利巴韦林注射液TC0分别为781.25,6.25 mg.L-1;MEC分别为97.66,0.390 6 mg.L-1;TI分别为8,16。结论:ADS97.66～781.25 mg.L-1可有效抑制细胞内AdV3体外增殖,并呈明显的量效关系。     

三七总皂苷保护PC12细胞对抗过氧化氢损伤的作用

目的:考察三七总皂苷在PC12细胞中对过氧化氢引起损伤的细胞保护作用.方法:采用MTT法考察0.01～100mg·L-1三七总皂苷对正常PC12细胞活力的影响,并在H2O2刺激的PC12细胞中考察0.1～10 mg·L-1的三七总皂苷对细胞活力的影响,通过对细胞活力的考察选择三七总皂苷合适的实验剂量,测定三七总皂苷0.1,1 mg·L-1对H2O2刺激的PC12细胞中活性氧水平、过氧化氢酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力的影响以及对丙二醛(MDA)含量的影响.结果:三七总皂苷在0.1～10 mg·L-1浓度能提高正常PC12细胞活力,并能显著提高H202刺激的PC12细胞活力(P＜0.01).0.1,1mg·L-12个剂量的三七总皂苷均能显著减少H2O2刺激的PC12细胞中活性氧水平,提高SOD活力(P ＜0.001)和GSH-Px活力(P ＜0.001),并减少MDA生成(P ＜0.001).结论:三七总皂苷能通过增强细胞内抗氧化酶活力,保护PC12细胞对抗氧化损伤.     

黄连解毒汤中黄酮成分逆转 K562/ADM多药耐药的实验观察

目的:观察黄连解毒汤中黄酮成分逆转肿瘤多药耐药的作用,探讨本方逆转肿瘤多药耐药的物质基础。方法:以人慢性粒细胞白血病红白血病细胞株K562的耐阿霉素(adriamycin,ADM)细胞株(K562/ADM)为细胞系,通过MTT实验观察黄芩苷、京尼平苷对K562/ADM细胞ADM的敏感性的影响,计算细胞增殖抑制率、半数抑制浓度(IC50)及耐药逆转倍数,并对细胞内ADM浓度变化进行测定。结果:黄芩苷、京尼平苷均能部分逆转K562/ADM细胞。黄芩苷、京尼平苷的IC50值分别为5.06,6.74 mg.L-1。黄芩苷、京尼平苷的耐药逆转倍数分别为1.95,1.46倍。与相应的对照组相比,K562/ADM细胞经黄芩苷(50 mg.L-1)、京尼平苷(100 mg.L-1)作用后,细胞内ADM的荧光强度高于对照组,其中黄芩苷组提高到3.6%,京尼平苷组提高到1.7%。结论:黄连解毒汤逆转肿瘤多药耐药的物质基础可能与其含有的黄芩苷、京尼平苷有关。     

大黄素对兔主动脉平滑肌细胞CatK,CatDmRNA表达的影响

目的:探讨大黄素对兔主动脉平滑肌细胞(CCC-SMC-1)组织中蛋白酶K(Cat K),组织蛋白酶D(Cat D)mRNA表达的影响。方法:以2×104/m L密度接种细胞,实验分5个实验组,大黄素0.01,0.05,0.1,0.15,0.2,0.25 mmol·L-1组,对照组为培养基空白组,培养24 h,每组设5个复孔。MTT法观察大黄素对兔主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用,PCR法检测大黄素对兔主动脉平滑肌细胞Cat K,Cat D mRNA的表达。结果:MTT法显示大黄素在0.05~0.25 mmol·L-1浓度对CCCSMC-1细胞增殖有抑制作用,作用24 h后的半数抑制浓度(IC50)为0.10 mmol·L-1,且IC50随作用时间的延长显著前移。PCR法显示,不同浓度的大黄素作用于兔主动脉平滑肌细胞24 h后,与正常组细胞相比,Cat K,Cat D mRNA表达上调(P0.05)。结论:大黄素能抑制CCC-SMC-1细胞的增殖,其机制可能与上调Cat K,Cat D mRNA表达有关。     

甘草查尔酮B诱导小鼠黑色素瘤细胞凋亡作用

目的:研究甘草查尔酮B(licochalcone B)诱导小鼠黑色素瘤细胞(B16F0)凋亡作用并初步探讨其机制.方法:取对数生长期B16F0细胞按5 000个/孔接种于96孔板中,MTT染色法检测甘草查尔酮B(5,7.5,10,12.5,15 mg·L-1)作用24 h后,对B16F0细胞的增殖抑制作用;取对数生长期B16F0细胞按1×105个/孔接种于6孔板中,甘草查尔酮B(7.5,15mg·L-1)作用24 h后,Hoeehst 33258染色法观察细胞凋亡形态;取对数生长期B16F0细胞按5×105个/瓶接种于细胞培养瓶中,甘草查尔酮B(5,7.5,10,12.5 mg·L-1)作用24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测与凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白(Bax),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2) mRNA表达;荧光法检测半胱氨酸蛋白酶蛋白9(Caspase-9)和半胱胺酸蛋白酶蛋白3(Caspase-3)相对活性.结果:甘草查尔酮B能有效抑制B16F0细胞增殖,作用24 h后对细胞的生长有明显的抑制作用,IC.011.3 mg·L-1,在5～15 mg·L-1表现出明显的剂量依赖,细胞出现明显凋亡特征,随甘草查尔酮B浓度的增加凋亡率逐渐升高;甘草查尔酮B(10,12.5 mg·L-1)能明显下调Bcl-2/Bax,上调Caspase-3,Caspase-9的表达,其中7.5 mg·L-1甘草查尔酮B引起Caspase-9,Caspase-3的活化程度较12.5 mg·L-1高.结论:甘草查尔酮B可能通过激活线粒体调控的凋亡通路诱导B16F0细胞凋亡.     

补中益气汤含药血清对A549/DDP中p-Akt和P-gp表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)耐顺铂(DDP)作用及其对磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)和P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法:采用血清药理学方法制备含药血清,随机对照法将24只SD大鼠分为空白对照组(给生理盐水10 mL·kg-1),补中益气汤高、中、低剂量组(11.34,5.67,2.84 g·kg-1,10 mL·kg-1),每日ig给药1次,连续7d后提取血清.将A549/DDP分为空白血清组,补中益气汤高、中、低剂量含药血清组,阻滞剂组,高剂量含药血清联合阻滞剂(LY294002)组,MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,并计算耐药逆转倍数.免疫细胞化学法检测各组细胞中p-Akt和P-gp蛋白的表达;逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组细胞中Akt和P-gp的mRNA表达.结果:与空白血清组比较,补中益气汤中剂量以上的含药血清可明显降低A549/DDP对DDP的IC50(P＜0.05),并呈浓度依赖效应,与阻滞剂联合效果最佳(P＜0.05);与A549/DDP空白血清组相比,补中益气汤中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的p-Akt和P-gp的表达显著下降(P ＜0.01,P＜0.05),其中以高剂量联合阻滞剂组下降最多(P＜0.01);与A549/DDP空白血清组相比,中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的P-gp的mRNA表达量都显著减少(P＜0.01,P＜0.05),中、高剂量含药血清组,高剂量联合阻滞剂组的p-Akt的mRNA表达量也显著减少(P＜0.05).结论:补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,与LY294002联合应用效果更佳,其逆转机制可能与减少细胞内p-Akt和P-gp的表达,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关.