声动力化学疗法促大鼠脑胶质瘤细胞凋亡及抗血管作用的实验研究

目的探讨声动力化学疗法(SDT)对大鼠脑胶质瘤细胞凋亡及微血管蛋白表达的关系。方法以大鼠颅内C6胶质瘤为实验模型,观察4组(SDT、US、HMME、对照)处理后脑胶质瘤原位细胞凋亡、Cyt-C蛋白、Caspase-3蛋白表达水平。结果原位凋亡检查见HMME组和对照组凋亡细胞极少,各时间点凋亡率无明显差别。处理后24h,US组凋亡率高于HMME组和对照组;处理后3d、7d,凋亡率与HMME组和对照组无明显差别。SDT组处理后24h,凋亡率明显高于其它3组。处理后3d、7d,凋亡率与其它3组无明显差别。HMME组和对照组各时间点MVD密度、VEGF蛋白表达无明显差别。US组处理后24h,MVD密度、VEGF蛋白表达与HMME组和对照组比较,略下降;处理后3d、7d,2项表达结果与HMME组和对照组无明显差别。SDT组处理后24h MVD密度、VEGF蛋白表达较其它3组明显下降;处理后3d,二者有所升高,但仍较其它3组低;处理后7d,VEGF表达结果与其它3组无明显差别。结论 SDT处理后早期可通过血管靶向作用促进体内胶质瘤细胞凋亡。     

槲皮素对大鼠脑胶质瘤抑瘤作用的体内实验研究

目的观察槲皮素及顺铂对大鼠脑胶质瘤生长的抑制作用,初步探讨其作用机制。方法将30只颅内接种C6胶质瘤细胞的SD大鼠随机分为3组:分别给予顺铂、槲皮素及对照治疗7 d,观察各组肿瘤生长情况,于接种后17 d处死各组大鼠,收集肿瘤标本进行肿瘤大小、HE染色及电镜观察,并通过免疫组化检测肿瘤组织增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。结果顺铂组[(66.2±5.9)mm3]、槲皮素组[(59.6±5.4)mm3]肿瘤体积低于对照组[(101.1±9.6)mm3]槲皮素组优于顺铂组(t=10.61,P<0.01),槲皮素组、顺铂组肿瘤抑制率分别为41.3%、34.8%。光镜观察槲皮素组、顺铂组肿瘤细胞密度降低,电镜显示有细胞凋亡。PCNA免疫组化结果显示槲皮素组(42.2%±5.1%)、顺铂组(50.0%±6.7%)肿瘤PCNA表达减少,与对照组(79.6%±8.6%)相比,具有统计学差异(F=416.12,P<0.01),两两比较,槲皮素组治疗效果优于顺铂组(q=55.25,P<0.01)。结论槲皮素和顺铂均可显著抑制大鼠颅内C6胶质瘤细胞生长,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞增殖有关。     

声动力化学疗法对体外C6胶质瘤细胞作用的研究

目的研究声动力化学疗法(SDT)对体外C6胶质瘤细胞作用效果,试图探索一种治疗脑胶质瘤的新方法。方法采用MTT法观察SDT后的各时段、加不同氧活性物质(ROS)后的抑瘤率;流式细胞学检测C6细胞的凋亡率及细胞周期百分比;透射电镜观察C6细胞亚细胞结构变化。结果SDT后抑瘤率显著增高;超声组也有一定的抑瘤率;血啉甲醚(HMME)组抑瘤率与对照组无明显差别。与SDT组比较,加NaN_3抑瘤率显著降低,加过氧化氢酶及SOD抑瘤率亦较SDT组低,加甘露醇抑瘤率无明显变化。SDT后凋亡率升高,G_0/G_1期、G_2/M期百分比降低,S期百分比升高、凋亡增殖比(APR)升高。透射电镜观察对照组C6细胞无明显变化,SDT组细胞呈现凋亡或坏死状态。结论SDT能显著杀伤体外C6胶质瘤细胞。     

X刀治疗胶质瘤的实验研究

目的胶质瘤的放射外科治疗作用存有争议,本研究采用大鼠C6胶质瘤模型,应用X刀系统对其进行了研究.方法经CT检查选出适于X刀5mm准直器治疗的3～5mm瘤直径的大鼠46只进行了分组实验.X刀治疗剂量围绕临床定为15、20、30及40Gy.结果治疗组动物平均生存期为40.4天,对照组则为23.5天,两组间有显著差异(P＜0.05).治疗组动物死后肿瘤直径平均在7.4±2.1mm,对照组则为9.6±0.6mm,两组间亦有显著差异(P＜0.05).组织病理学(光镜、电镜)研究显示各组均表现为明显的细胞凋亡及坏死.结论X刀治疗可使鼠脑胶质瘤有所缩小并可延长其生存期;其治疗效应系诱发细胞凋亡和致细胞坏死.     

声动力疗法对C6胶质瘤细胞的生物效应研究

目的探讨声动力化学疗法（SDT）治疗脑胶质瘤的可能性：方法采用四唑盐比色法，即MTT法测定C6胶质瘤细胞托SDT组、超声组、血啉甲醚（HMME）组、对照四组6h的抑瘤率，流式细胞学（FCM）检测四组6h的凋亡率，透射电镜观察四组6h亚细胞结构的变化。结果SDT组抑瘤率为77．61％、凋亡率为38．34％，显著增高；超声组也有一定的抑瘤率、凋亡率：HMME组抑瘤率、凋亡率与对照组无明显差别.透射电镜观察对照组、HMME组C6细胞无明显变化，超声组部分细胞呈早期凋亡表现，SDT组细胞呈现凋亡或坏死状态。结论SDT能显著杀伤体外C6胶质瘤细胞，并诱导其凋亡。     

放线菌素D和VM-26对大鼠胶质瘤细胞增殖的影响的体内实验研究

目的研究放线菌素D(ACTD)、替尼泊甙(VM-26)对大鼠胶质瘤细胞增殖的体内治疗效果。方法将C6大鼠胶质瘤细胞接种于鼠脑右侧尾状核,并对鼠脑内已形成的C6胶质瘤分别用ACTD及VM-26抗瘤缓释剂瘤区原位注射。观察大鼠的一般情况、生存期、肿瘤病理学和磁共振成像(MRI)动态改变,采用PCNA计数、TUNEL法检测肿瘤细胞增殖活性及凋亡。结果对照组及空载组大鼠平均生存期为19.3d,ACTD组6只及VM-26组3只大鼠生存期明显延长,存活期超过200d;除因病理检查人为处死各2只外,ACTD组治疗后4周内死亡2只,VM-26组5只。MRI检查对照组脑内有明显瘤灶,治疗组脑内瘤灶治疗后明显减少或消失,治疗组C6细胞增殖活性降低,大量细胞凋亡,ACTD组较VM-26组显著。结论ACTD可望成为体内局部应用治疗胶质瘤的优选化疗药物。     

冷冻治疗对C6大鼠脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨大鼠C6脑胶质瘤模型冷冻治疗后细胞凋亡水平和增殖活性的变化。方法借助于立体定位技术,建立大鼠C6皮层脑胶质瘤动物模型,待肿瘤生长至第15天、直径约6mm时,进行冷冻治疗。治疗后15d行细胞凋亡的末端标记法(TUNEL)和流式细胞仪(FCM)检测,以增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学及MRI检查了解肿瘤的增殖活性,测量肿瘤体积和抑瘤率。结果冷冻治疗后凋亡细胞密度及凋亡指数较对照组显著提高[前者分别为(36.73±9.54)/0.0625mm2和(4.87±2.80)/0.0625mm2;后者分别为(16.02±3.87)%和(1.70±1.74)%](P<0.01)。冷冻组肿瘤内PCNA阳性细胞数量较对照组显著下降[分别为(42.37±7.63)%和(73.93±9.60)%](P<0.01);肿瘤体积明显缩小[分别为(139.60±27.28)mm3和(414.40±69.01)mm3](P<0.01),增殖受抑制,抑瘤率为66.31%。结论大鼠C6脑胶质瘤冷冻治疗后除细胞坏死外,肿瘤细胞增殖水平下降和细胞凋亡增多也是冷冻治疗胶质瘤的机理之一。     

不同C6细胞种植量对大鼠生存期及脑干胶质瘤生长的影响

目的 观察不同C6细胞数量种植于大鼠脑干部位对大鼠生存期及肿瘤生长速度的影响.方法 30只Wistar大鼠随机分成三组,分别将2×104(A组)、1×106(B组)个C6胶质瘤细胞和等量生理盐水(C组)注射到大鼠桥脑,种植后1、2、3和4周分别通过行为学、生存期、MRI及病理HE染色观察各组之间的差异.结果 A组大鼠接种后16 d出现行为学异常,而B组大鼠则于第9天出现.A组大鼠平均生存期为(30.80±3.002)d,B组为(19.65±2.277)d.MRI检查显示,接种后2周B组大鼠脑干肿瘤的体积明显大于A组(P＜0.05).HE染色显示两组肿瘤特点无差异.结论 种植2×104和1×106个细胞量均可成瘤,但接种细胞数量越多成瘤越快,生存期越短.提示我们在制模过程中,应根据具体的实验要求选用不同的细胞数量.     

凋亡肿瘤细胞抗原致敏的树突状细胞瘤苗治疗大鼠颅内胶质瘤的实验研究

目的观察凋亡肿瘤细胞抗原致敏的树突状细胞(dendriticcell,DC)瘤苗对颅内胶质瘤免疫治疗的效果。方法通过立体定向接种建立Wistar大鼠C6胶质瘤动物模型;从大鼠骨髓分离DC前体细胞,经重组大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rrGM-CSF) 白细胞介素4(rrIL-4)诱导培养、扩增获得功能性DCs;DCs经采用热诱导凋亡的C6胶质瘤细胞体外致敏后皮下回输荷瘤大鼠体内,1次/周,共5次。观察荷瘤大鼠的存活期,MRI观察颅内肿瘤生长情况,循环血中CD8 T淋巴细胞水平及体外细胞毒反应、增殖反应均以流式细胞仪检测。结果经过治疗的荷瘤大鼠生存期明显延长,MRI显示实验组大鼠肿瘤被明显抑制,外周血中CD8 T淋巴细胞比例增加,体外细胞毒试验提示经凋亡肿瘤细胞抗原致敏的DC瘤苗可以诱导针对C6胶质瘤的特异性细胞毒性T淋巴细胞,并且未观察到自身免疫反应的发生。结论经凋亡肿瘤细胞抗原致敏的DC瘤苗对于颅内胶质瘤是一种安全有效的治疗方法。     

大鼠胶质瘤伽玛刀治疗后MRI和病理学对照研究

目的大鼠胶质瘤伽玛刀照射后,比较MRI增强扫描和病理学的对应关系。方法建立大鼠C6脑胶质瘤模型,行伽玛刀照射后,于不同时间点(2d、7d、14d、21d)观察肿瘤MRI、光镜变化,并与对照组(不接受伽玛刀照射)进行比较。结果伽玛刀照射后,MRI增强扫描显示肿瘤体积缩小,强化程度减轻,中心坏死,瘤周水肿信号范围扩大;光镜下见亦可见到肿瘤中心坏死,瘤周水肿;并且瘤内出现炎性细胞浸润,且水肿区内部分肿瘤细胞浸润。结论脑胶质瘤伽玛刀照射后,MRI增强扫描与病理学在观察肿瘤坏死和水肿方面基本一致;但MRI难以显示肿瘤细胞的活性以及浸润的散在瘤细胞。     

<Emphasis Type="Italic">In vitro</Emphasis> study of haematoporphyrin monomethyl ether-mediated sonodynamic effects on C6 glioma cells

OBJECTIVES: To study the cytotoxicity induced by haematoporphyrin monomethyl ether (HMME)-mediated sonodynamic therapy (SDT) on C6 glioma cells. METHODS: The potent photosensitizer HMME was used as the sensitizer. Rat C6 glioma cells were incubated with HMME (10 mug/mL) in the dark for 2 h and then subjected to ultrasound treatment at 1.0 MHz and 0.5 W/cm(2) for 2 min. The growth inhibition rate at different time points after SDT was determined by MTT assay. The apoptotic rate and cell circle profiles were examined with flow cytometry. Fine structures were observed with transmission electron microscope (TEM). The sonodynamic effect on the glioma cells was also studied in the absence or presence of various reactive oxygen species (ROS) scavengers. RESULTS: The growth inhibition rate of C6 glioma cells after SDT significantly increased. SDT also increased the apoptosis and proliferation rate (APR). TEM examination showed the morphological features of apoptosis or necrosis. The addition of NaN(3) showed a strong protective effect again SDT. CONCLUSIONS: Our data indicated that SDT could kill C6 glioma cells in vitro and possibility through induction of apoptosis and necrosis. Singlet oxygen ((1)O(2)) may play an important role in SDT.     

DAPI标记骨髓间充质干细胞在胶质瘤模型大鼠脑内的迁徙和定位

背景：骨髓间充质干细胞作为载体细胞行脑内移植治疗胶质瘤,如何证实其为最好的药物载体？ 目的：将DAPI标记的大鼠骨髓间充质干细胞移植入模型鼠脑内,观察骨髓间充质干细胞在肿瘤内的迁徙与定位。 方法: 体外培养骨髓间充质干细胞。利用立体定向仪将培养好的C6细胞注入大鼠脑内,建立大鼠脑内胶质瘤模型。将DAPI标记于培养好的骨髓间充质干细胞上,利用微量注射器注入模型鼠脑内;移植后第3,7天处死大鼠,利用共聚焦显微镜观察骨髓间充质干细胞在肿瘤内的分布及与肿瘤细胞的关系。 结果与结论:实验成功建立了大鼠脑内胶质瘤模型。以DAPI标记的骨髓间充质干细胞。在模型鼠脑内主动聚集于肿瘤血管周围,并能与肿瘤细胞发生融合。结果证实骨髓间充质干细胞可以作为肿瘤基因治疗的良好载体。     

大鼠C6脑胶质瘤模型的病理特征与MRI的观察

目的建立SD大鼠C6胶质瘤模型并对其病理特征及MRI进行观察。方法50只SD大鼠随机分成5组，每组10只，c6胶质瘤细胞悬液立体定向接种于大鼠的右侧尾状核，接种后观察大鼠的生活状态、生存期；分别于接种后不同时段进行MRI观察肿瘤生长特性及肿瘤体积的测量；取不同时段组大鼠脑标本行脑组织HE染色、透射电镜(transmission electron microscope，TEM)、脑组织含水量测量(与10只正常大鼠对照)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化检查。结果立体定向颅内接种成功率97．5％，未见远处及颅外转移，肿瘤在一定时期内牛长较快，脑水肿随肿瘤的生长明显加重，生存期观察组中7只荷瘤鼠死亡，3只肿瘤自发部分消退。结论立体定向建立大鼠C6胶质瘤模型成功率高，接种后颅内肿瘤呈浸润性生长，与人脑胶质瘤具有相似性，由于生存期观察组中有部分荷瘤鼠出现肿瘤自发部分消退，故应用该模型评价治疗效果时应慎重；TIWI增强扫描可清晰显示肿瘤影像，且能更早发现肿瘤；MRI联合病理可较好反映肿瘤生长方式及发展过程。     

TRAIL诱发人脑H4神经胶质瘤细胞凋亡的研究

目的研究TRAIL对H4神经胶质瘤细胞的凋亡诱导作用，并探讨其可能机制。方法利用显微镜、透射电镜、流式细胞仪，观察和检测TRAIL对传代培养的肿瘤细胞的凋亡诱导作用，用MTT法检测easpase-8抑制剂zIETD—fmk对TRAIL凋亡诱导作用的抑制情况。结果TRAIL作用后镜下可见到H4细胞凋亡的典型表现；在流式细胞仪检测PI荧光直方图上，出现典型的亚二倍体峰，随着作用时间的延长，H4细胞凋亡率明显增加；zIETD—fmk能显著抑制TRAIL对H4细胞的凋亡诱导作用。结论TRAIL可有效的诱导H4神经胶质瘤细胞凋亡；easpase-8在H4瘤细胞的凋亡过程发挥着重要作用，TRAIL可能是通过激活caspase系统而诱发H4瘤细胞凋亡的。     

白细胞介素24对大鼠脑胶质瘤细胞Survivin表达的影响

目的探讨白细胞介素24(IL-24)基因对荷瘤大鼠脑胶质瘤细胞Survivin表达的影响。方法 48只SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组24只,分别接种IL-24/C6细胞(转染IL-24基因的C6鼠脑胶质瘤细胞)和C6鼠脑胶质瘤细胞。接种21 d后,采用RT-PCR、Western blot和免疫组化方法检测两组大鼠脑肿瘤组织中Survivin mRNA和蛋白的表达,采用流式细胞学检测肿瘤细胞凋亡率。结果 RT-PCR检测显示:实验组大鼠脑肿瘤组织中Survivin mRNA表达水平明显低于对照组(P<0.01)。Western blot及免疫组化法检测显示:实验组大鼠脑肿瘤组织中Survivin的蛋白水平明显低于对照组(P<0.01)。流式细胞学结果显示:实验组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。结论 IL-24可抑制大鼠胶质瘤中Survivin mRNA和蛋白的表达,促进细胞凋亡,抑制肿瘤生长。     

p53基因联合伽玛刀放射外科治疗鼠C6胶质瘤的体内研究

目的探讨腺病毒介导的p53基因联合伽玛刀放射外科治疗胶质瘤的体内疗效。方法选用雄性SD大鼠58只,建立大鼠C6脑胶质瘤模型。6d后进行MRI检查,确定成瘤后随机分为对照组14只、伽玛刀治疗组14只,p53基因治疗组16只（随机选择2只行WesternBlot检测）、p53加伽玛刀联合治疗组14只。在动物模型建立后的第6、8天进行腺病毒介导的p53基因治疗,第10天行伽玛刀照射（15Gv）。伽玛刀治疗后48h,每组处死6只大鼠,检测增殖细胞核抗原（PCNA）及凋亡情况,其余8只在伽玛刀治疗后1、2、4及8周进行MRI检查。结果MRI显示p53加伽玛刀联合治疗组较单一治疗组动物肿瘤生长缓慢,且肿瘤细胞PCNA阳性率下降．凋亡率增加。结论p53联合伽玛刀可以明显控制C6胶质瘤大鼠肿瘤的生长。     

大鼠骨髓基质细胞移植治疗胶质瘤的实验研究

目的将Wistar大鼠骨髓基质细胞体外移植入C6胶质瘤大鼠模型,观察其生物学特性及大鼠存活状态。方法建立C6载瘤模型和骨髓基质细胞移植治疗模型;待术后生长至3w和4w时行MRI检测;不同时间段内大鼠脑标本行免疫组化染色。结果骨髓基质细胞移植组模型平均生存时间为4.03w;对照组平均生存时间为3.88w;且其平均肿瘤体积与对照组无明显差异。大鼠体内移植体外培养5月余的骨髓基质细胞未发现肿物生成。骨髓基质细胞包绕在胶质瘤周围,对胶质瘤细胞有定向靶向作用。结论骨髓基质细胞对胶质瘤有定向靶向作用,可以安全的作为生物载体转染目的基因治疗胶质瘤。     

脂膜微囊靶向性聚集于颅内C6胶质瘤的实验研究

目的研究脂膜微囊(LCM)靶向性聚集于大鼠颅内C6胶质瘤动物模型的机制。方法建立大鼠C6胶质瘤动物模型,成瘤大鼠分为两组:单次注射LCM组,多次连续注射LCM组,处死后获取大鼠脑组织标本,进行常规HE染色、油红O染色,荧光显微镜观察LCM在肿瘤位点分布的特点,取C6胶质瘤细胞研究LCM在细胞内的分布特点。结果油红O染色显示肿瘤细胞内有LCM的聚集,且多次注射LCM组其LCM浓度明显较单次注射组高。荧光显微镜观察发现,LCM主要聚集于肿瘤区,且主要分布于肿瘤细胞的胞浆中。对体外培养的C6胶质瘤细胞研究发现,LCM先结合于细胞表面,随后在细胞内再分布,其在细胞内的分布可能与细胞内的酸性成分有关。结论LCM可靶向性聚集于肿瘤位点,其在肿瘤位点浓度与注射次数成正相关。其靶向性机制与LCM的脂质构成有关,还与脑肿瘤引起的局部血脑屏障破坏有关。LCM在肿瘤细胞内的代谢与细胞内的酸性成分有关。