淫羊藿苷对大鼠间充质干细胞骨向分化过程中转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2表达的影响

背景：淫羊藿苷作为补肾中药淫羊藿的主要有效成分,能够有效促进间充质干细胞向成骨细胞分化。 目的：观察淫羊藿苷在诱导间充质干细胞骨向分化过程中对转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2表达的影响,阐释其可能的诱导机制。 方法：运用全骨髓贴壁法分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞;以20 mg/L淫羊藿苷作为间充质干细胞药物干预浓度,根据干预条件的不同将实验分为：空白组、经典组(加经典成骨诱导剂)、淫羊藿苷组、淫羊藿苷+经组;ELISA法检测各组转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2的表达。 结果与结论：经典组、淫羊藿苷组、淫羊藿苷+经组转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2值均高于空白组(P < 0.05);各组第7天的转化生长因子β1值高于14,21 d (P < 0.01),各组不同诱导时间骨形态发生蛋白2值之间相比差异无显著性意义(P > 0.05)。提示上调转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2的表达量可能是淫羊藿苷诱导各组促进间充质干细胞骨向分化的作用机制之一。     

骨形态发生蛋白2在骨质疏松症大鼠骨折愈合过程中的表达**☆

目的：骨折愈合过程中，间充质细胞向骨折部位迁徙并分化为软骨细胞及成骨细胞是其中的关键性环节，骨形态发生蛋白2在其中具有重要作用。观察骨形态发生蛋白2在绝经后骨质疏松症大鼠胫骨骨折早期愈合过程中表达的变化，探讨骨质疏松症骨折延迟愈合的原因。 方法：实验于2005-08/2006-10在教育部口腔生物医学工程重点实验室完成。①实验材料及分组：64只6个月龄雌性SD大鼠随机分为去势组和对照组，每组32只。②实验过程：去势组行双侧卵巢切除建立Ⅰ型骨质疏松动物模型，对照组切除少量脂肪组织。3个月后造成胫骨骨折。③实验评估：两组于术后7，14，21，28 d麻醉状态下各取大鼠8只，取胫骨周围少量软组织和外骨痂的骨折断端、骨痂、骨皮质及骨髓腔的全层标本，分别进行组织学、免疫组织化学，半定量反转录-聚合酶链反应方法检测。 结果：①组织学观察结果：显示骨折处膜内成骨和软骨成骨两种方式，术后第21天及28天时去势组骨痂中仍可见大量软骨细胞。②免疫组织化学结果：术后第7天及14天对照组骨形态发生蛋白2平均吸光度值大(阳性细胞计数高)于去势组，而在术后第21天低于去势组。③反转录－聚合酶链反应结果：术后第7天对照组骨形态发生蛋白2条带强度高于去势组，而在第14天弱于去势组。 结论：骨形态发生蛋白2在骨折早期骨痂形成中具有重要作用，骨质疏松症骨折愈合早期骨形态发生蛋白2的表达量减少且延迟，可能是其愈合延迟的重要影响因素。     

自制人骨形态发生蛋白2复合骨修复材料诱导骨再生***

摘要 背景：骨形态发生蛋白是目前发现的一类惟一可独立诱导骨再生的细胞因子,临床应用前景广阔。但它们价格昂贵,限制了在中国的应用。 目的：探讨自主生产的重组人骨形态发生蛋白2的骨诱导活性及对骨缺损的修复作用。 方法：通过电泳及质谱的方法检测其复性后重组人骨形态发生蛋白2的纯度,通过C2C12细胞在重组人骨形态发生蛋白2诱导下向成骨细胞分化检测其骨诱导活性。将重组人骨形态发生蛋白2与以动物骨为原料加工制成的新型骨修复材料复合,植入新西兰兔桡骨缺损实验模型观察其对骨缺损的修复作用。 结果与结论：自主生产的重组人骨形态发生蛋白2纯度≥95%,能明显诱导C2C12细胞向成骨细胞分化,分化早期大量表达碱性磷酸酶,分化末期形成大量的矿化小节,诱骨活性良好。在兔桡骨修复试验中,X射线影像学及苏木精-伊红染色组织学检查结果表明,重组人骨形态发生蛋白2复合材料组在2个月时形成大量骨痂,4~6个月时载体与自体骨融合,材料大量降解,修复效果良好;单纯骨填充材料组4~6个月时只有少量新生骨桥与自体骨连接,降解量极少;空白对照组损伤部位为纤维化组织所填充。结果提示自主生产的重组人骨形态发生蛋白2促进骨修复作用明显,适合应用于临床。 关键词：自主生产;人骨形态发生蛋白;生物型骨填充材料;桡骨缺损;骨修复 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.21.002     

中药接骨Ⅰ号治疗超声透入桡骨骨折愈合过程中骨形态发生蛋白7的表达*

背景：将低强度脉冲超声波与中药相结合,即中药超声透入疗法,在动物实验和临床中用于骨折的治疗并取得了确切的疗效,然而其促进骨折愈合机制的研究却少有报道。 目的：观察中药超声透入对新西兰大白兔桡骨中段骨缺损愈合过程中骨形态发生蛋白7表达的影响。 方法：84只兔构建双侧桡骨中段骨缺损的骨折模型,建模成功后随机分成3组：中药组给予以接骨Ⅰ号为耦合剂的低强度脉冲超声透入治疗,超声组每日于骨折部位予以普通超声耦合剂的低强度脉冲超声治疗,对照组行假刺激。分别于术后第3,6,9,12,15天取骨痂行采用RT-PCR和免疫组织化学染色法检测骨形态发生7 mRNA表达和平均吸光度值变化,第4和6周行X射线片检查以观察不同治疗方法对骨缺损愈合的疗效。 结果与结论：X射线检测结果显示中药组骨折愈合效果最好。中药组骨形态发生蛋白7 mRNA表达和平均吸光度值均高于超声组和对照组(P < 0.05),在术后第9和12天最较明显(P < 0.01)。结果证实,中药低强度脉冲超声透入疗法能促进兔桡骨骨折的修复、缩短骨折修复时间,其修复作用与促进骨形态发生蛋白7表达有关。     

淫羊藿苷促进羊骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化

背景：寻找一种简单有效、安全价廉且可替代生长因子的生物活性物质,是骨组织工程的客观要求,中药来源的植物黄酮淫羊藿苷可通过提高成骨细胞功能促进成骨,但是对骨髓间充质干细胞的作用尚未明确。 目的：探讨淫羊藿苷对羊骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-09/2009-02在南方医院创伤骨科实验室完成。 材料：清洁级成年雄性中国青山羊3只,由南方医院实验动物中心提供。淫羊藿苷标准品由中国药品生物制品检定所提供,批号110737-200312,纯度98.3%。 方法：体外分离培养羊骨髓间充质干细胞,传至第3代后,按2×103/孔接种至96孔板,分别加入100,10,1,0.1 μmol/L淫羊藿苷培养基150 μL进行培养;设立对照组,仅加入等量普通DMSO培养基。 主要观察指标：采用MTT法检测细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,通过碱性磷酸酶试剂盒测定细胞碱性磷酸酶活性,放免法检测细胞骨钙素表达,茜素红染色观察钙化结节形成能力。 结果：0.1 μmol/L淫羊藿苷可明显促进羊骨髓间充质干细胞增殖,增加S期和G2/M期细胞数量;随着淫羊藿苷浓度的增加,促细胞增殖活性降低,100 μmol/L淫羊藿苷表现为明显的抑制细胞增殖作用。淫羊藿苷呈剂量依赖性促进羊骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素表达。10,100 μmol/L淫羊藿苷诱导钙化结节形成能力优于0.1和1 μmol/L淫羊藿苷,对照组羊骨髓间充质干细胞未形成钙化结节。 结论：淫羊藿苷对羊骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化具有促进作用,可被视为一种良好的骨诱导活性因子。     

骨形态发生蛋白7在骨科的应用*

背景：骨形态发生蛋白家族因具有独特的异位骨诱导活性而被发现并被命名为骨形态发生蛋白,与胚胎组织的发育、功能维持及组织的修复均密切相关,是诱导骨发生的主要活性因子。骨形态发生蛋白7是骨形态发生蛋白家族中的一员,主要在骨、肾组织中表达,与胚胎组织的发育、功能维持及组织的修复均密切相关。目的：全面了解骨形态发生蛋白7在骨发育和骨折愈合过程中的表达及作用。方法：电子检索和计算机Medline数据库1990/2010收录的骨形态发生蛋白相关综述和论文报告,并分析生物学作用及调控途径的研究进展。结果与结论：随着研究的深入,骨形态发生蛋白7可望在骨折愈合、退行性骨关节炎、相关骨病的防治中发挥重要的作用。骨形态发生蛋白7的生物学活性使其对骨折、骨缺损、延迟愈合,骨不连、骨质疏松等多种骨科疾病的治疗具有巨大的临床应用价值。已有证据表明骨形态发生蛋白局部应用或骨形态发生蛋白涂层有利于假体-骨界面的骨整合,包括假体周围骨缺损的治疗。关键词：骨形态发生蛋白;骨形态发生蛋白7;应用;进展;骨科     

淫羊藿对去势雄性大鼠骨密度及骨结构性能的影响

背景：男性骨质疏松的研究起步较晚，治疗上缺乏公认有效的方法。中药淫羊藿具有补肾壮阳的功效，对免疫系统、骨骼以及生殖系统均有明显的调节作用，用于治疗骨质疏松。 目的：观察淫羊藿对去势雄性大鼠骨密度及骨结构性能的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-01/2008-04在华中科技大学同济医学院附属同济医院老年病实验室完成。 材料：鼠龄15周健康雄性SD大鼠50只，体质量(340±10)g，用于制备骨质疏松模型。 方法：50只大鼠随机数字表法分为对照组、模型组以及低、中、高剂量淫羊藿治疗组，每组10只；淫羊藿治疗组大鼠自造模后第2周开始用淫羊藿治疗12周，淫羊藿治疗剂量分别为：1.0，5.0，10.0 g/(kg?d)，对照组和模型组采用等量生理盐水。 主要观察指标：12周后，行血尿生化、骨密度检查。对第4腰椎离体椎骨应用自制的SL22000骨疲劳损伤实验机进行疲劳损伤，行骨组织形态计量学检测。 结果：50只大鼠均进入结果分析。①对照组、中、高剂量淫羊藿治疗组全身骨密度均高于模型组(P < 0.05)；模型组尿钙/肌酐、尿磷/肌酐、血核因子κB受体激活因子配体、尿羟脯氨酸/肌酐均高于其他各组(P < 0.05)，而血清碱性磷酸酶均低于其他各组(P < 0.05)；治疗组护骨素高于模型组(P < 0.05)。②模型组骨小梁单位面积百分率均低于其他各组(P < 0.05)，其中对照组最高；而单位骨小梁面积百分率的微破裂长度均高于其他各组(P < 0.05)；对照组、中、高剂量淫羊藿治疗组单位骨小梁面积百分率的微破裂数目和椎体体积均高于模型组(P < 0.05)。 结论：去势后雄性大鼠应用淫羊藿可以防止骨量丢失并提高骨结构性能。     

重组人骨形态发生蛋白2腺病毒载体的构建与鉴定*

背景：目前报道的重组腺病毒构建方法较复杂,构建周期长,导致重组腺病毒构建的成功率较低。GatewayTM技术是基于λ噬菌体的位点特异性高效重组系统,其构建重组病毒载体具有快捷高效的特点。 目的：构建含人骨形态发生蛋白2 基因的重组腺病毒载体,为应用骨形态发生蛋白2 基因治疗的研究奠定基础。 设计、时间及地点：单一样本观察,实验于2008-02/06在深圳市第二人民医院中心实验室完成。 材料：pOTB7-BMP-2 质粒、HEK293为ATTC产品;BLOCK-iTTM Adenovirus Expression System为Invitrogen产品;大肠杆菌DH5α为Biontex产品。 方法：用聚合酶链反应方法扩增骨形态发生蛋白2 目的基因,并插入载体pMD19-T Simple Vector中进行测序分析。将骨形态发生蛋白2 基因亚克隆到穿梭载体pEC3.1(+)中,构建pEC3.1-BMP-2 穿梭质粒,再将其中的表达盒通过重组克隆到pAd/BLOCK-iT™-DEST腺病毒载体中,线性化后转293 细胞进行包装获得重组腺病毒rAd-BMP2。 主要观察指标：①目的基因骨形态发生蛋白2 的聚合酶链反应扩增。②重组质粒TS-BMP2 的构建。③重组pEC3.1-BMP2 的构建。④重组pAd-BMP2 的构建。⑤重组腺病毒的制备与鉴定。 结果：正确扩增长约1.2 kb的骨形态发生蛋白2 cDNA,并成功地构建其腺病毒载体,经线性化的pAd-BMP2 DNA转染HEK293细胞,包装、扩增后得到人骨形态发生蛋白2 重组腺病毒(rAd-BMP2),其滴度约为1×1010 PFU/mL,该滴度可满足进一步的骨形态发生蛋白2 成骨作用的研究。 结论：成功地构建重组人骨形态发生蛋白2 腺病毒载体。     

骨形态发生蛋白与骨缺损的修复

骨缺损发生后，骨的生理连续遭严重破坏，在利用外源性骨形态发生蛋白治疗时，必须有适合的载体，通过该载体将外源性骨形态发生蛋白及其它生长因子释放到骨质缺损部位，诱导新骨形成从而达到治疗目的。骨形态发生蛋白的载体材料很多，主要包括无机材料、高分子聚合材料、生物性材料以及这些材料的复合物，但各有不足之处。许多学者对其加以改进，使其更有利于发挥骨形态发生蛋白的诱骨活性。载体或局部基因释放的骨形态发生蛋白可有效修复骨缺损，为治疗骨缺损提供了新途径。     

骨形态发生蛋白与骨质疏松症

背景：骨形态发生蛋白能够诱导骨髓间质充质细胞分化为成骨细胞或成软骨细胞,并能够抑制破骨细胞活性,为治疗骨质疏松症开辟了一条新的途径。 目的：综述骨形态发生蛋白与骨质疏松症的研究进展,以便寻求有效控制手段,指导临床合理用药和新药开发。 方法：应用计算机检索CNKI和PubMed数据库中1995-01/2010-06关于骨形态发生蛋白及骨质疏松症的相关文章,检索词分别为“骨形态发生蛋白;细胞因子;骨;骨质疏松症”和“bone morphogenetic protein;cytokines;bone;osteoporosis”,语言分别设定为中文和英文。选择内容与骨形态发生蛋白和骨质疏松症相关的文章,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章,排除重复研究或Meta分析类文章。 结果与结论：收集到287篇相关文献,排除不符合标准的文献,共纳入30篇符合标准的文献。经分析得出以下结论：骨形态发生蛋白促进骨髓间质细胞向成骨细胞方向转化,有利于更合理选择临床用药,有效地预防骨质疏松的进展。骨形态发生蛋白能够明显促进成骨活性,但其作用机制尚未完全清楚,有可能是多因素共同的协同作用,通过该方面的机制研究可指导临床用药和新药开发     

骨形态发生蛋白2和成纤维细胞生长因子2在骨组织工程中的应用

背景：1995年Crane GM系统提出了骨组织工程的概念、研究方法、研究现状及发展前景后,骨组织工程日益成为学者们研究的重点。目的：通过对1995年以来骨组织工程研究的进展的检索,探寻BMP-2和FGF-2在骨组织工程研究中的应用价值。方法：以“bone tissue engineering,BMP,FGF, cytokine”为检索词,应用计算机检索中国知网和pubmed数据库相关文章,排除重复性研究,保留36篇文章做进一步分析。结果与结论：骨组织工程的研究主要包括3个方面的内容：①种子细胞。②能引导组织再生的生物活性因子。③能够支持细胞黏附、增殖和分化以及释放生物活性因子的支架材料。细胞因子在骨组织工程中也拥有着不容忽视的重要地位,主要有有骨形态发生蛋白、骨转化生长因子、血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子,胰岛素样生长因子、血小板衍生生长因子等。其中骨形态发生蛋白2和成纤维细胞生长因子2在骨组织工程领域中应用最为广泛。     

跌创散促进兔实验性骨折愈合的作用

跌创散有活血祛瘀,消肿止痛之功,对软组织损伤疗效显著。骨折与软组织损伤同属中医“筋伤”的范畴。目的：观察跌创散对实验性骨折愈合作用的影响。方法：取兔龄为6个月左右的雄性新西兰大耳白兔36只,造成双侧桡骨中段约3 mm骨缺损模型,造模成功后随机分为模型组和跌创散组。模型组仅给予绷带包扎,跌创散组给予跌创散外敷,每2 d更换1次包扎物,分别于造模后2,4,6周观察新西兰大耳白兔桡骨骨折愈合过程中血清碱性磷酸酶、钙、磷浓度变化,骨痂病理组织学改变及不同时期X射线的变化。结果与结论：跌创散组骨缺损填充快,骨折愈合早,前4周血清碱性磷酸酶、钙、磷浓度较高(P < 0.05,P < 0.01),可以促进钙盐在骨折断端的沉积,对骨折愈合有明显的促进作用,血管较模型组数量多且内径大,骨化中心出现早。因此,推测跌创散可能通过影响血清碱性磷酸酶、钙、磷的浓度变化及促进骨折区域血液循环改善等方面而促进骨痂生长,进而达到促进骨折愈合的目的。     

Brg1调控重组人骨形态发生蛋白2诱导成骨细胞分化*

背景：Brg1是依赖ATP的染色质改变复合物的核心催化亚基,该亚基在基因的转录调控、复制、重组,骨骼肌的分化、抑制肿瘤的发生等活动中起着重要的作用。 目的：探索Brg1基因在骨形态发生蛋白2诱导成骨细胞分化过程中的调控机制。 方法：采用胶原酶消化法进行小鼠颅骨成骨细胞的原代培养;分别用0,50,200 μg/L的重组人骨形态发生蛋白2诱导原代培养的成骨细胞的分化,摸索骨形态发生蛋白2的最佳作用剂量;实时荧光定量PCR和Western blot进行骨形态发生蛋白2对Brg1的作用时间的动力学分析;实时荧光定量PCR和钙钴染色法检测敲除Brg1对骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化的影响;构建Dlx5腺病毒重组表达载体,实时荧光定量PCR和钙钴染色法检测Brg1在骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化过程中对Dlx5的调控作用。 结果与结论：用自行合成的重组人骨形态发生蛋白2可诱导原代培养小鼠成骨细胞分化,200 μg/L剂量有着较好的诱导分化效果;重组人骨形态发生蛋白2可诱导Brg1基因转录水平和翻译水平表达水平上调;敲除Brg1可抑制重组人骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化;Brg1能够调控Dlx5的表达水平。说明Brg1通过调控Dlx5的表达水平调控重组人骨形态发生蛋白2诱导的小鼠成骨细胞的分化。 2     

聚乳酸-乙醇酸共聚物-磷酸三钙-骨形态发生蛋白2人工骨结合肌肉移植修复骨缺损

背景：大段骨缺损修复多以植骨为主,如果能将带血运的组织与人工骨同时植入,理论上更有利于新生组织血运建立及人工骨的爬行替代重建。 目的：观察聚乳酸-乙醇酸共聚物-磷酸三钙-骨形态发生蛋白2人工骨结合自体带血供自体肌肉移植修复大段骨缺损的效果。 方法：手术造成30 mm绵羊大段桡骨缺损,抽签随机分为3组：实验组植入聚乳酸-乙醇酸共聚物-磷酸三钙-骨形态发生蛋白2人工骨及自体带血运的屈指长肌,对照组仅植入聚乳酸-乙醇酸共聚物-磷酸三钙-骨形态发生蛋白2人工骨,空白对照组未植入任何材料。3组均以钢板固定骨缺损区,术后24周进行X射线检测及组织学观察。 结果与结论：实验组桡骨缺损处完全成骨修复,皮质骨与髓腔轮廓清晰,骨痂为较成熟板层骨;对照组骨缺损基本完全修复,但新生骨密度及髓腔轮廓清晰度及骨痂成熟度均不如实验组;空白对照组无有效骨痂形成,缺损区被大量纤维组织填充。说明聚乳酸-乙醇酸共聚物-磷酸三钙-骨形态发生蛋白2人工骨结合自体带血供肌肉移植能够很好修复绵羊桡骨30 mm的大段骨缺损。     

骨形态发生蛋白-2在大鼠脑内嘴侧迁移流中的发育学表达

目的了解骨形态发生蛋白2（BMP-2）在大鼠脑的不同发育阶段，嘴侧神经干细胞迁移流中的表达模式。方法用RT—PCR和免疫荧光染色的方法观察大鼠SVZa、RMS、OB三个区域在不同发育阶段BMP-2的表达情况。结果在不同的发育时期，大鼠脑内SVZa、RMS、OB这三个不同的区域BMP-2 mRNA都有不同程度的表达，但是显然表达量均不是很高。其时空变化趋势为：（1）在大鼠SVZa、RMS和OB三个部位，BMP-2的表达水平在胚胎14d都明显高于出生后0d和7d两个时间点，在出生7d这个时相点上，BMP-2的表达水平最低。（2）在三个时相点上，BMP-2在嗅球的表达水平都相对较高，在SVZa区的表达也较高，而在RMS表达量相对较低。结论在大鼠脑发育过程中，BMP-2在SVZa、RMS、OB三个区域的具有时空表达模式的差异性，提示BMP-2可能对SVZa神经干细胞（NSCs）的增殖、迁移和分化起重要的调控作用。     

降钙素基因相关肽神经生长因子与失神经支配兔骨折愈合

背景：骨折不愈合严重影响患者生活质量,神经生长因子用于骨不连的防治是重建外科领域研究的重点和方向。 目的：观察神经生长因子降钙素基因相关肽对失神经支配兔骨折愈合的影响。 方法：构建大白兔失神经支配腓骨骨折模型后,实验组骨折端局部注射降钙素基因相关肽10 μg,每2 d一次;对照组骨折端局部注射等量生理盐水。术后2,4,6周分别测定静脉血中肾上腺素和去甲肾上腺素的水平,并进行生物力学和组织学分析。 结果与结论：术后两组血清肾上腺素和去甲肾上腺素水平均有显著增高,在术后第4周达到最高峰,比术前高出1倍以上,第6周时出现下降,但仍然显著高于术前;术后2,4,6周,实验组肾上腺素和去甲肾上腺素血清水平较对照组显著增高,差异具有显著性意义(P < 0.05~0.01)。在三点弯曲实验中,实验组骨痂的抗弯强度明显高于对照组(P < 0.05~0.001);术后第6周时苏木精-伊红染色可见实验组骨痂中的透明软骨细胞已被成骨细胞替代,对照组骨痂中的软骨细胞仍没有完全成骨细胞化。提示神经生长因子降钙素基因相关肽对失神经支配兔骨折愈合具有明显的促进作用。 关键词：神经生长因子;降钙素基因相关肽;骨折愈合;生物力学;生物化学     

重组人骨形态发生蛋白2及制动因素对兔肌腱端重建的影响*

背景：骨-肌腱结合结构的重建可能类似于软骨内成骨,只有形成坚固的止点,重建的韧带才能够真正发挥其生理功能。重组人骨形态发生蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)可使未分化间质细胞、成纤维细胞、成肌细胞及骨髓的基质细胞逆转分化为骨系细胞。 目的：观察rhBMP-2和制动因素对肌腱止点结构重建的影响。 方法：新西兰白兔建立肌腱止点结构重建模型后,随机分成3组。向rhBMP-2短期制动组和rhBMP-2长期制动组实验兔靠近胫骨隧道入口的屈趾总腱内注入重组人骨形态发生蛋白2溶液20 µL,模型组不予注射。术后rhBMP-2短期制动组术肢石膏固定1周后拆除;rhBMP-2长期制动组和模型组兔术肢全程石膏固定。各组分别于手术后2,4,8周通过免疫组化法和RT-PCR测定隧道入口部肌腱中的Ⅰ,Ⅱ型胶原、骨碱性磷酸酶和骨钙素的表达。 结果与结论：rhBMP-2可使肌腱止点结构重建兔Ⅰ型胶原、骨碱性磷酸酶和骨钙素表达水平随时间的延长而增加,而Ⅱ型胶原在术后增加至4周时表达至峰值,8周表达有所下降。注射rhBMP-2未对腱重建兔Ⅰ型胶原mRNA表达产生明显变化;而注射rhBMP-2可使Ⅱ型胶原、骨碱性磷酸酶和骨钙素mRNA表达显著增加(P < 0.05),减少制动时间也能使Ⅱ型胶原、骨碱性磷酸酶和骨钙素mRNA表达显著增加(P < 0.05)。rhBMP-2能促进Ⅰ,Ⅱ型胶原、骨碱性磷酸酶和骨钙素的表达,并具有诱导肌腱内异位软骨成骨的作用,使肌腱端结构重建成为可能;长时间制动阻碍肌腱附着点的重建。 关键词：肌腱止点;重组人骨形态发生蛋白2;胶原;碱性磷酸酶;骨钙素;肌肉肌腱;组织工程     

透明质酸钠复合重组人骨形态发生蛋白2凝胶对自体半腱肌重建兔前交叉韧带腱-骨愈合的生物力学分析

背景：在前交叉韧带重建的早期，腱-骨连接处是整个移植物-骨隧道复合体的薄弱环节，所以腱-骨愈合的情况是关系韧带移植重建成败的关键。 目的：观察透明质酸钠复合重组人骨形态发生蛋白2凝胶对自体半腱肌重建兔前交叉韧带后腱-骨愈合的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-09/2008-06在潍坊医学院动物实验中心实验室完成。 材料：将重组人骨形态发生蛋白2和透明质酸钠混合制成混悬凝胶注射剂。48只兔随机分成2组，每组24只48膝。 方法：实验组随机选取一侧于胫骨隧道入口处注入重组人骨形态发生蛋白2与透明质酸钠凝胶（透明质酸钠-重组人骨形态发生蛋白2亚组），另一侧仅做重建后骨道不予处理（未处理亚组）；对照组随机选取一侧于胫骨骨道入口处仅注入重组人骨形态发生蛋白2（重组人骨形态发生蛋白2亚组），另一侧仅注入透明质酸钠（透明质酸钠亚组）。 主要观察指标：术后2，4，8，12周大体观察肌腱移植物生长情况及在胫骨隧道内的愈合情况，生物力学拉伸试验测定其生物力学的性能。 结果：透明质酸钠-重组人骨形态发生蛋白2亚组在术后2周隧道内见稀疏软骨样组织，4~8周时隧道内见沿骨隧道排列的软骨样组织，双股肌腱之间形成稳定组织连接。l2周时出现部分骨样组织包裹肌腱。其他亚组术后2周时隧道内仅为瘢痕组织，到术后12周隧道内肌腱与骨道壁之间仍充满瘢痕组织，未见稳定组织连接形成。4，8和12周透明质酸钠-重组人骨形态发生蛋白2亚组和重组人骨形态发生蛋白2亚组肌腱移植物部分断裂和完全断裂平均载荷高于未处理亚组与透明质酸钠亚组(P < 0.05)，同时，透明质酸钠-重组人骨形态发生蛋白2亚组高于重组人骨形态发生蛋白2亚组 (P < 0.05)。 结论：注入透明质酸钠-重组人骨形态发生蛋白2的肌腱移植物有良好的生物力学特性，能促进肌腱移植物在骨隧道内的早期腱-骨愈合。     

骨形态发生蛋白2对移植肌腱在骨隧道内愈合的影响：界面组织学特点★

目的: 前交叉韧带重建移植肌腱在骨隧道内多为间接愈合，即在肌腱与骨之间没有纤维软骨带而直接由Sharpey’s纤维固定。观察人重组骨形态发生蛋白2对移植肌腱在骨隧道内愈合的影响。 方法：实验于2004-06/09在上海市第六人民医院动物实验室完成，动物实验方法符合动物伦理学要求。①实验材料及分组：选用新西兰大白兔36只，按随机数字表法分为3组，即空白对照组、胶原海绵组及骨形态发生蛋白2组，每组12只。②实验方法：采用兔膝关节自体半腱肌重建前交叉韧带悬吊固定模型，骨形态发生蛋白2组在骨隧道内加入人重组骨形态发生蛋白2和胶原海绵，胶原海绵组仅在骨隧道内加入胶原海绵。③实验评估：术后4，8，12周在移植物周围取材进行苏木精-伊红、天狼猩红和Masson染色，观察骨隧道和肌腱移植物间的界面组织学变化，采用Yamakado分类评价界面形态愈合类型，并对Masson染色切片作肌腱周围新骨形成的形态学定量评估。 结果：空白对照组2只白兔于术后第10周脱失。①术后4周空白对照组腱骨间有腱-骨分离，骨形态发生蛋白2组腱-骨间充满结缔组织；术后8周骨形态发生蛋白2组形成Sharpey’s纤维，而空白对照组术后12周时开始出现Sharpey’s纤维。②术后4，8，12周骨形态发生蛋白2组白兔新骨形成面积均显著大于空白对照组、胶原海绵组（P < 0.01）。 结论：人重组骨形态发生蛋白2可促进移植肌腱在骨隧道内的愈合，促进腱-骨之间形成间接连接。