缺氧诱导丝裂原因子对胎肺形态发育及表面活性蛋白表达的影响

目的 探讨缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)对胎肺形态发育及表面活性蛋白B(surfactant protein B,SP-B)、表面活性蛋白C(snrfactant protein C,SP-C)表达的调控作用.方法 体外分离、培养小鼠第13.5天胎肺组织,分为HIMF处理组:在培养基中添加重组HIMF蛋白,终浓度为100 nmol/L;对照组培养基中不加任何处理.分别在培养0、48、72 h后,每组每时间点选取20例胎肺采用倒置显微镜和HE染色观察胎肺形态学和组织学的改变,采用Western印迹、免疫组化、实时逆转录-聚合酶链反应技术检测胎肺组织中SP-B和SP-C的蛋白、mRNA表达水平变化.结果 HIMF处理组培养48、72 h后,肺泡数目分别为(14.37±0.85)和(18.41±1.24)个/高倍视野,肺泡分支的数目分别为(2.51±0.35)和(3.28±0.51)个/高倍视野,均较对照组相应时间点[分别为(8.09±0.92)、(9.54±0.78)、(1.45±0.32)和(1.69±O.43)个/高倍视野]增加,差异有统计学意义(P<0.05).对照组胎肺体外培养72 h后,SP-B、SP-C蛋白表达较少,染色强度弱,主要定位于Ⅱ肺泡上皮细胞;HIMF处理组可见Ⅱ型肺泡上皮细胞内SP-B、SP-C弥漫表达,以靠近肺组织边缘为甚.HIMF处理组培养48和72 h后,胎肺组织中SP-B、SP-C蛋白和mRNA水平均较对照组相应时间点增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 HIMF可能通过上调胚胎组织中SP-B和SP-C的表达,促进胎肺形态发育,为进一步研究HIMF在胚胎肺泡发育和成熟中的作用奠定了基础.     

血管内皮生长因子及地塞米松对肺泡Ⅱ型上皮细胞表面活性蛋白B和转化生长因子-β1表达的影响及意义

目的 探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及地塞米松对肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cell,AECⅡ)表面活性蛋白-B(surfactant protein B,SP-B)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响及意义. 方法 原代培养早产鼠AECⅡ,采用实时荧光定量聚合酶链反应技术(real-time quantitative polymerasechain reaction,real-time PCR)、免疫细胞化学染色等方法,观察不同剂量的VEGF(25 ng/ml组、50 ng/ml组和100 ng/ml组)和不同剂量的地塞米松(25 nmol/ml组、50 nmol/ml组、100 nmol/ml组、200 nmol/ml组)对AECⅡSP-B mRNA及TGF-β1 mRNA表达的影响.同时设一对照组.采用方差分析或q检验进行统计学分析. 结果 与对照组相比,25 ng/ml VEGF组及25 nmol/ml、50 nmol/ml、100 nmol/ml和200 nmol/ml地塞米松各组SP-B mRNA表达水平明显上升(13.500±3.172、3.547±0.690、5.219±0.782、3.493±0.335和3.981±1.133与1.001±0.059,q分别为-5.286、-4.943、-7.228、-9.906、-3.525,P均＜0.05).25 ng/ml VEGF组及50、100、200 nmol/ml地塞米松组TGF-β1 mRNA表达明显下降(0.451±0.078、0.579±0.019、0.422±0.020和0.769±0.025与1.019±0.226,q分别为4.110、3.356、4.551、1.901,P均＜0.05),其他各组与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).免疫细胞化学结果显示,25 ng/ml VEGF组及50、100、200 nmol/ml地塞米松组AECⅡ染色阳性率分别为23％、26％、22％和29％;对照组AECⅡ染色阳性率为80％.结论 VEGF及地塞米松均有促进SP-B表达的作用,TGF-β1可能对SP-B的表达有负调控作用,VEGF和地塞米松可能是通过调控与TGF-β1有关的调控通路发挥促进SP-B表达的作用.     

子痫前期孕妇胎盘组织中生长阻滞和DNA损伤45α基因的表达变化及其临床意义

目的 通过检测子痫前期孕妇胎盘组织中生长阻滞和DNA损伤45α(Gadd45α)基因的定位及表达变化,探讨其与子痫前期发病的关系.方法 选择2009年9月至2010年3月在重庆医科大学附属第一医院住院分娩的36例子痫前期孕妇为研究对象,按病情分为子痫前期轻度组(20例),子痫前期重度组(16例),另以同期择期行足月剖宫产术的18例健康孕妇为对照组.3组孕妇分娩后取胎盘组织标本,采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测各组孕妇胎盘组织中Gadd45α蛋白的定位及分布,采用逆转录(RT)-PCR技术检测各组孕妇胎盘组织中Gadd45α mRNA表达水平,采用蛋白印迹(western blot)技术检测各组孕妇胎盘组织中Gadd45α蛋白的表达水平.结果 (1)子痫前期轻度组及重度组胎盘组织中均有Gadd45α蛋白表达,主要定位于胎盘滋养层细胞的胞质及胞核中,血管内皮细胞及少量间质细胞胞核也可见阳性染色;对照组胎盘组织中阳性染色较弱,且仅见于胎盘滋养层细胞中,血管内皮细胞中未见阳性染色.(2)子痫前期重度组及轻度组胎盘组织中Gadd45αmRNA表达水平分别为0.75±0.07及0.44±0.13,明显高于对照组的0.18±0.04,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);子痫前期重度组Gadd45α mRNA表达水平与子痫前期轻度组比较,差异也有统计学意义(P＜0.05).(3)子痫前期重度组及轻度组胎盘组织中Gadd45α蛋白表达水平分别为1.34±0.17及0.65±0.15,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);两组也明显高于对照组的0.22±0.11,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 子痫前期患者胎盘组织中Gadd45α mRNA和蛋白表达水平均明显高于健康孕妇,并且随子痫前期患者病情加重其表达上调;Gadd45α定位在与子痫前期发生密切相关的胎盘滋养层细胞中,Gadd45α基因可能参与了子痫前期的发生与发展.     

17α-羟基孕酮己酸酯和醋酸甲羟孕酮预防孕鼠感染性早产的机制

目的 通过研究17α-羟基孕酮己酸酯(17α-hydroxyprogesterone caproate,17P)和醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesterone acetate,MPA)对早产小鼠子宫肌层及胎盘组织环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响,探讨孕激素预防感染性早产的作用机制.方法 选择清洁级雌性CD-1小鼠30只,于妊娠第15天,随机分为对照组、内毒素脂多糖( lipopolysaccharides,LPS)组、17P 1 mg+LPS组、17P 2 mg+LPS组、MPA 1 mg+ LPS组、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)+ LPS组,每组5只.治疗组均于皮下注射相应剂量的孕激素1h后腹腔注射LPS,6h后取小鼠子宫肌层及胎盘组织,用实时荧光定量聚合酶链反应技术和免疫组织化学方法检测子宫肌层及胎盘组织COX-2和TNF-α mRNA及蛋白的表达.采用ANOVA进行统计学分析,两两比较用LSD法.结果 1.各组小鼠子宫肌层及胎盘组织中COX-2 mRNA和TNF-α mRNA的相对表达量的比较:(1)各给药组孕鼠子宫肌层及胎盘组织COX-2mRNA和TNF-α mRNA表达均显著高于对照组(P＜0.05).(2)17P 1 mg+LPS组、17P 2 mg+LPS组和MPA 1 mg+LPS组小鼠子宫肌层COX-2 mRNA表达分别为11.410±3.931、8.352±3.209和11.920±2.905,均显著低于LPS组(20.540±4.147)和DMSO组+LPS组(18.620±4.156) (P＜0.05),而TNF-α mRNA也低于LPS组和DMSO组+LPS组,但差异无统计学意义(P＞0.05).(3)17P 1 mg+LPS组、17P 2 mg+LPS组、MPA 1 mg+LPS组胎盘组织COX-2 mRNA表达分别为10.864±3.777、7.084±1.667和11.830±3.652,均显著低于LPS组(18.920±4.106)和DMSO组+LPS组(23.820±7.554) (P＜0.05).(4)17P 1 mg+LPS组、17P 2 mg+LPS组、MPA1 mg+ LPS组胎盘组织TNF-α mRNA表达分别为14.340±1.618、11.488±2.910和13.040±2.982,均显著低于LPS组(24.240±7.059)和DMSO组+LPS组(23.040±5.896)(P＜0.05).2.各组小鼠胎盘组织COX-2和TNF-α蛋白表达的比较:(1)各给药组胎盘组织中COX-2蛋白的表达和TNF-α蛋白的表达明显高于对照组(P＜0.05).(2)17P 1 mg+LPS组、17P 2 mg+LPS组和MPA1 mg+ LPS组COX-2蛋白的表达分别为14360.92±1766.01、13340.18±965.35、12870.81±1521.97,明显低于LPS组(16426.64±1823.87)和DMSO组+LPS组(16761.23±2388.17)(P＜0.05);但3个治疗组之间差异无统计学意义(P＞0.05).(3) 17P 1 mg+LPS组、17P 2 mg+LPS组、MPA 1 mg+ LPS组TNF-α蛋白的表达分别为22 750.96±4656.68、22 766.24±3500.34和20 770.01±3318.48,显著低于LPS组(26204.49±5090.34)和DMSO组+LPS组(27 346.18±3269.30)(P＜0.05),而3组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 17P和MPA对感染性早产小鼠子宫和胎盘组织COX-2及胎盘中TNF-α的表达有抑制作用,可能是其预防早产的机制之一.     

原因不明复发性流产患者蜕膜组织中转录因子GATA-3及T-bet mRNA表达的研究

目的 探讨转录因子GATA-3、T-bet在原因不明复发性流产发病中的作用.方法 采用原位杂交方法,检测20例原因不明复发性流产患者(流产组)和20例正常妊娠妇女(正常妊娠组)蜕膜组织中1型辅助性T细胞(Th1)特异性转录因子T-bet和2型辅助性T细胞(Th2)特异性转录因子GATA-3的mRNA表达水平.结果 (1)GATA-3:蜕膜组织中每高倍视野平均GATA-3阳性细胞数流产组为(25±16)个,正常妊娠组为(38±16)个,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)T-bet:蜕膜组织中每高倍视野平均T-bet阳性细胞数流产组为(59±17)个,正常妊娠组为(46±18)个,两组比较,差异也有统计学意义(P＜0.05).(3)两组妇女蜕膜组织中GATA-3 mRNA与T-betmRNA的表达水平呈负相关关系(r=-0.55,P＜0.01).结论 原因不明复发性流产患者蜕膜组织中T-bet表达占优势,GATA-3的表达受抑制,可能诱导了母胎界面Th1/Th2平衡向Th1偏移,从而使胚胎遭受免疫攻击而发生流产.     

子痫前期患者胎盘和脐动脉组织Rho相关蛋白激酶Ⅱ的表达及意义

目的 探讨子痫前期患者胎盘和脐动脉组织中Rho相关蛋白激酶Ⅱ(RockⅡ)的表达变化及其意义.方法 采用RT-PCR、蛋白印迹法分别检测35例轻度子痫前期患者(轻度子痫前期组)、38例重度子痫前期患者(重度子痫前期组)及45例正常晚期妊娠妇女(对照组)胎盘及脐动脉组织中RockⅡmRNA及其蛋白表达水平;采用免疫组化方法 对RockⅡ在胎盘组织中的表达进行定位,B超检测脐动脉收缩期最大血流速度(S)与舒张末期血流速度(D)的比值.结果 (1)RockⅡ主要表达于胎盘合体滋养细胞的细胞质.(2)轻度子痫前期组、重度子痫前期组及对照组胎盘组织RockⅡmRNA表达水平分别为0.82±0.14、0.93±0.13及0.70 4-0.12,分别比较,差异也均有统计学意义(P＜0.01);轻度子痫前期组、重度子痫前期组及对照组胎盘组织RockⅡ蛋白表达水平分别为0.79±O.15、0.92±0.12及0.68±0.11,分别比较,差异也均有统计学意义(P＜0.01).(3)轻度子痫前期组、重度子痫前期组及对照组脐动脉组织RockⅡmRNA表达水平分别为0.69±0.13、0.55±0.12及0.76±0.10,分别比较,差异也均有统计学意义(P＜0.01);轻度子痫前期组、重度子痫前期组及对照组脐动脉组织RockⅡ蛋白表达水平分别为0.68±0.10、0.51±0.12及0.75±0.13,分别比较,差异也均有统计学意义(P＜0.01).(4)脐动脉组织RockⅡmRNA及蛋白表达水平与脐动脉S/D值均无相关性(P＞0.05).结论 RockⅡ在子痫前期患者胎盘组织中的表达水平升高,在脐动脉组织中的表达水平降低,可能参与了子痫前期的病理、生理过程.     

子宫主韧带弹性蛋白、赖氨酰氧化酶和弹性蛋白酶抑制剂基因表达与盆腔器官脱垂发生的关系

目的 探讨子宫主韧带中弹性蛋白、赖氨酰氧化酶和弹性蛋白酶抑制剂基因表达变化与盆腔器官脱垂(POP)发生、发展的关系.方法 选择因子宫脱垂而行子宫全切除术的患者60例(POP组),其中绝经前27例,绝经后33例;选择同期因妇科良性疾病、无压力性尿失禁或POP而行子宫全切除术的患者60例为对照组,其中绝经前42例,绝经后18例.于手术中取子宫主韧带,采用RT-PCR技术检测弹性蛋白、赖氨酰氧化酶和弹性蛋白酶抑制剂mRNA的表达,免疫组化蛋白印迹法检测3种基因的蛋白表达.结果 (1)弹性蛋白mRNA及蛋白表达:POP组患者绝经前、后子宫主韧带弹性蛋白mRNA的表达分别为0.42±0.22、0.26±0.20,子宫主韧带弹性蛋白的蛋白表达分别为0.44±0.32、0.20±0.19;对照组患者绝经前、后子宫主韧带弹性蛋白mRNA的表达分别为0.79±0.30、0.63±0.23,子宫主韧带弹性蛋白的蛋白表达分别为0.89±0.27、0.78±0.25,两组绝经前及绝经后患者子宫主韧带弹性蛋白mRNA及蛋白表达分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)赖氨酰氧化酶mRNA及蛋白表达:POP组患者绝经前、后赖氨酰氧化酶mRI~A的表达分别为0.37±0.18、0.20±0.14,赖氨酰氧化酶的蛋白表达分别为0.45±0.27、0.26±0.21,对照组患者绝经前、后子宫主韧带赖氨酰氧化酶mRNA表达分别为0.65±0.22、0.53±0.20,子宫主韧带赖氨酰氧化酶的蛋白表达分别为0.85±0.39、0.69±0.31,两组绝经前及绝经后患者子宫主韧带赖氨酰氧化酶mRNA及蛋白表达分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).POP组患者绝经后子宫主韧带弹性蛋白、赖氨酰氧化酶mRNA及蛋白表达均明显低于绝经前患者(P＜0.05).(3)弹性蛋白酶抑制剂mRNA及蛋白表达:POP组患者绝经前、后子宫主韧带弹性蛋白酶抑制剂mRNA表达分别为1.33±0.35、1.47±0.37,子宫主韧带弹性蛋白酶抑制剂的蛋白表达分别为0.85±0.30、0.76±0.35,对照组患者绝经前、后子宫主韧带弹性蛋白酶抑制剂mRNA表达分别为0.62±0.25、0.55±0.24,子宫主韧带弹性蛋白酶抑制剂的蛋白表达分别为0.21±0.15、0.29±0.22,两组绝经前及绝经后患者子宫主韧带弹性蛋白酶抑制剂mRNA及蛋白表达分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);POP组患者绝经前、后弹性蛋白酶抑制剂mRNA及蛋白表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05).POP患者子宫主韧带弹性蛋白与赖氨酰氧化酶mRNA及蛋白表达量呈明显的直线正相关关系(r=0.9959、0.9708,P＜0.05),而弹性蛋白与弹性蛋白酶抑制剂mRNA及蛋白表达量无直线相关性(r=-0.0402、-0.0365,P＞0.05).结论 POP患者子宫主韧带弹性蛋白、赖氨酰氧化酶表达下调及弹性蛋白酶抑制剂表达上调,可能与POP发生有关.     

脂联素在子痫前期患者胎盘组织中的表达与其发病的关系

目的 探讨脂联素在子痫前期患者胎盘组织中的表达与其发病的关系.方法 采用免疫组化链霉菌抗生物蛋白-过氧化物连接(SP)法及RT-PCR技术,检测20例正常足月妊娠孕妇(正常妊娠组)、12例轻度子痫前期(轻度子痫前期组)及22例重度子痫前期(重度子痫前期组)患者胎盘组织中脂联素蛋白及其mRNA的表达,并分析其与子痫前期发病的关系.结果 (1)3组孕妇胎盘绒毛合体滋养细胞及细胞滋养细胞胞质内脂联素蛋白均呈阳性表达,且各组内胎盘母面及子面脂联素蛋白的表达水平相互比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(2)重度子痫前期组胎盘组织中脂联素蛋白的表达水平(30 984±14 604)低于轻度子痫前期组(58 360±8910)及正常妊娠组(53 246±17 554),差异均有统计学意义(P＜0.01).重度子痫前期组中妊娠足月者胎盘组织中脂联素蛋白的表达水平(38 890±20 386)与未足月者(29 319±8997)比较,差异无统计学意义(P＞0.05);但与正常妊娠组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)3组孕妇胎盘组织中均有脂联素mRNA的表达.其中重度子痫前期组胎盘组织中脂联素mRNA表达水平(1.0±0.2)低于轻度子痫前期组(2.9±0.8)及正常妊娠组(3.3±1.1),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 重度子痫前期患者胎盘组织中脂联素mRNA表达水平下降导致其蛋白表达水平也下降,提示脂联素的异常表达参与了子痫前期的发病.     

产前应用地塞米松和沐舒坦对胎鼠及仔鼠肺组织Toll样受体4表达影响的比较

目的 比较产前单次应用小剂量地塞米松与联合应用地塞米松加盐酸氨溴索(沐舒坦)对胎鼠及仔鼠肺Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)基因及蛋白表达的影响. 方法 54只SD孕鼠随机分为3组:地塞米松组(干预组1)、地塞米松加沐舒坦组(干预组2)和生理盐水对照组.妊娠17 d,腹腔注射给药,干预组1予地塞米松0.2 mg/kg,干预组2予地塞米松0.2 mg/kg加沐舒坦100 mg/kg,对照组予等体积生理盐水.分别在妊娠19d及生后3、7d取胎(仔)鼠肺组织,通过逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学和蛋白质免疫印迹技术检测各组胎(仔)肺组织中TLR4基因转录水平及蛋白表达差异.统计学方法 采用方差分析和独立样本t检验. 结果 (1)孕19 d,2个干预组分别与对照组相比,TLR4 mRNA在胎鼠肺组织中的表达均明显增加(对照组:0.26±0.18,干预组1:0.39±0.21,t=5.866,P＜0.05;对照组:0.27±0.22,干预组2:0.46±0.13,t=9.572,P＜0.01).生后3d和7d干预组2与对照组相比,TLR4 mRNA在仔鼠肺组织中的表达均明显增加(生后3 d:0.59±0.23与0.47±0.24,t=2.295,P＜0.05;生后7 d:0.52±0.12与0.35±0.17,t=4.219,P＜0.05),但干预组1与对照组比较,差异无统计学意义(生后3 d:0.45±0.22与0.44±0.14,t=0.128,P＞0.05;生后7 d:0.40±0.16与0.36±0.12,t=1.365,P＞0.05).(2)免疫组织化学:孕19 d,2个干预组分别与对照组相比,TLR4蛋白表达量在胎鼠肺组织中的表达均明显增加(对照组:0.20±0.29,干预组1:0.35±0.32,t=7.179,P＜0.05;对照组:0.20±0.29,干预组2:0.39±0.25,t=10.764,P＜0.01).生后3d和7d干预组2与对照组相比,TLR4蛋白表达量在仔鼠肺组织中的表达均明显增加(生后3 d:0.55±0.32与0.37±0.18,t=7.121,P＜0.05;生后7d:0.41±0.29与0.25±0.24,t=6.355,P＜0.05),但干预组1与对照组比较,差异无统计学意义(生后3 d:0.40±0.21与0.37±0.18,t=0.683,P＞0.05;生后7 d:0.28±0.31与0.25±0.24,t=0.462,P＞0.05).免疫印迹法:孕19 d,2个干预组分别与对照组相比,TLR4蛋白表达量在胎鼠肺组织中的表达均明显增加(对照组:0.15±0.12,干预组1:0.27±0.20,t=7.835,P＜0.05;对照组:0.16±0.18,干预组2:0.34±0.16,t=10.470,P＜0.01).生后3d和7d干预组2与对照组相比,TLR4蛋白表达量在仔鼠肺组织中的表达均明显增加(生后3 d:0.37±0.20与0.25±0.22,t=6.379,P＜0.05;生后7 d:0.35±0.15与0.24±0.13,t=5.152,P＜0.05),但干预组1与对照组比较,差异无统计学意义(生后3 d:0.32±0.26与0.25±0.16,t=1.167,P＞0.05;生后7 d:0.29±0.19与0.24±0.10,t=1.248,P＞0.05). 结论 小剂量地塞米松可能参与调控大鼠胎肺中TLR4表达的上调,这可能是糖皮质激素促胎肺成熟的重要机制之一;小剂量地塞米松联合沐舒坦产前应用可能不仅参与调控大鼠胎肺组织中TLR4表达的上调,也上调生后大鼠肺中TLR4的表达.     

自然流产胚胎组织中人类纺锤体有丝分裂俘获缺陷基因的表达及意义

目的 探讨自然流产胚胎组织中人类纺锤体有丝分裂俘获缺陷(hsMAD)2基因的表达,以及hsMAD2基因表达降低与染色体数目异常的相关性.方法 采集2006年3月至2007年3月重庆医科大学附属第一、第二医院妇产科自然流产患者的胚胎组织标本33份,其中流产1次者23份,流产2次及以上者10份;同时采集人工流产患者的胚胎组织标本35份.采用FQ-PCR和蛋白印迹法检测自然流产和人工流产胚胎组织中hsMAD2基因的mRNA和蛋白表达水平;原代培养人工流产胚胎组织并经染色体分析筛选出5例具有正常核型的胚胎细胞,构建hsMAD2基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,转染筛选出来的胚胎细胞以抑制其内源性hsMAD2基因的表达,将细胞分为实验1组(转染重组干扰质粒pshRNA-hsMAD2-1)、实验2组(转染pshRNA-hsMAD2-2)、实验3组(转染pshRNA-hsMAD2-3)、对照1组(未做任何处理)、对照2组(转染pTZU6+1干扰质粒空载体)、无关对照组(转染pshRNA-N1).用蛋白印迹法和定量PCR技术评价shRNA的干扰效果,四甲基偶氮唑蓝比色法测定胚胎细胞增殖抑制率,流式细胞技术检测胚胎细胞周期的分布,并计算染色体数目的 变化.结果 (1)自然流产1次者、自然流产2次及以上者、人工流产者的胚胎组织中hsMAD2基因mRNA的表达量分别为0.00879±0.00035、0.00901±0.00033、0.00941±0.00026,3者分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);hsMAD2蛋白的表达量分别为0.2791±0.0311、0.0431±0.0020、0.5790±0.0331,3者分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制胚胎细胞中hsMAD2基因的表达,转染有效干扰质粒后,实验1组胚胎细胞的增殖抑制率为54%,分别与对照1组(4%)、对照2组(3%)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);G2/M期细胞比例实验1组为17.9%,与对照1组(8.2%)、对照2组(8.0%)比较均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);实验1组染色体异常率平均值为30.0%,与对照1组(4.8%)比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 hsMAD2基因的表达下调可能是导致患者染色体数目异常、胚胎发育异常乃至自然流产发生的重要原因之一.     

子痫前期胎盘中生长阻滞和DNA损伤45α基因及p38丝裂原活化蛋白激酶的表达

目的 探讨子痫前期胎盘组织中生长阻滞和DNA损伤45α(growth arrest and DNA damage-inducible 45 alpha,Gadd45α)基因和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号分子的表达,及其与血清中可溶性血管内皮生长因子受体-1(soluble vascular endothelial growth factor receptor-1,sFlt-1)和可溶性endoglin(soluble endoglin,sEng)的相关性分析.方法 选择2009年9月至2010年3月在重庆医科大学附属第一医院住院分娩的孕妇54例为研究对象,按病情分为子痫前期轻度组20例、子痫前期重度组16例,以足月择期剖宫产孕妇18例为对照组.采用免疫组织化学SP法检测Gadd45α及磷酸化p38 MAPK(phospho-p38 MAPK,p-p38 MAPK)蛋白在各组胎盘组织中的定位;实时荧光定量PCR检测各组胎盘组织中Gadd45α mRNA水平;Western印迹法检测各组胎盘组织中Gadd45α蛋白的表达水平、p38 MAPK及p-p38 MAPK的蛋白表达差异;双抗体夹心酶联免疫吸附法检测各组孕妇血清样本中sFlt-1及sEng的含量,并进行单因素方差及LSD-t检验分析.结果 (1)免疫组织化学检测Gadd45α与p-p38 MAPK蛋白均定位于胎盘滋养层细胞胞质及胞核、血管内皮细胞胞核及少量间质细胞胞核.(2)子痫前期重度及轻度组Gadd45α mRNA相对表达水平(3.33±0.13和2.10±0.11)较正常对照组(1.01±0.18)明显上调,且子痫前期重度组高于轻度组,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)Western 印迹法检测正常对照组、子痫前期轻度组及重度组患者胎盘组织中Gadd45α蛋白表达水平分别为0.22±0.11、0.65±0.15、1.34±0.17;p-p38 MAPK蛋白的表达水平分别为0.32±0.08、0.72±0.12、1.45±0.21,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05);p38 MAPK蛋白水平组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).(4)子痫前期轻度组、重度组孕妇血清sFlt-1、sEng水平明显高于正常对照组,且子痫前期重度组高于轻度组,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).(5)各组Gadd45α蛋白水平与孕妇血清中的sFlt-1、sEng含量呈正相关(r分别为0.88和0.87,P均＜0.05).结论 Gadd45α在子痫前期患者胎盘组织中的表达明显升高,其可能通过调控p38 MAPK信号转导通路,诱使循环中的sFlt-1、sEng释放增加,从而加重胎盘血管重铸障碍和抑制滋养细胞浸润,参与子痫前期的发病.

Abstract：

Objective To evaluate the expression of Gadd45α and p38 MAPK in placentas and the correlations of Gadd45α protein and serum soluble vascular endothelial growth factor receptor-1 (sFlt-1) and soluble endoglin (sEng) in preeclampsia(PE). Methods Fifty-four pregnant women who delivered from September 2009 to March 2010 in the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University were chosen as the subjects. They were classified into mild preeclampsia group (n=20),severe preeclampsia group (n=16) and the control group (normal pregnant women underwent elective cesarean sections at term without labor and perinatal complications, n=18). Western blot and immunohistochemistry were employed to determine the expression and localization of Gadd45α and p-p38 MAPK protein respectively. Gadd45α mRNA level was determined by quantitative real-time PCR. The levels of seum sFlt-1 and sEng were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). One-way ANOVA and LSD-t test were applied for statistical analysis. Results (1)Immunohistochemistry identified that the positive stained cells were mostly located in trophoblast cells in normotensive placentas, whereas in preeclamptic placentas Gadd45α protein and p-p38 MAPK protein were detected in trophoblast and endothelial cells, as well as a few stromal cells at increased levels.(2)The mRNA levels of Gadd45α was significantly elevated in mild and severe preeclampsia groups compared to the control group (2.10±0.11 and 3.33±0.13 vs 1.01±0.18, P＜0.05), and Gadd45α mRNA level in severe group was significantly higher than in mild group (P＜0.05).(3)The data of Western blot revealed that the Gadd45α protein levels in each group were 0.22±0.11, 0.65±0.15 and 1.34±0.17, respectively, with significant differences between each group(P＜0.05). The p-p38 MAPK protein levels in each group were 0.32±0.08, 0.72±0.12 and 1.45±0.21, respectively, with significant differences between each group (P＜0.05). p38 MAPK protein levels in the total groups showed no difference(P＞0.05).(4)Compared with the control group, sFlt-1 and sEng concentrations in maternal circulation were significantly increasing in mild and severe preeclampsia groups, and concentrations in severe group were significantly higher than those in mild group (P＜0.05).(5) There were positive correlations between Gadd45α protein levels and the concentrations of serum sFlt-1 and sEng in each group( r=0.88 and 0.87, respectively all P＜0.05). Conclusions Upregulation of Gadd45α in preeclampsia placentas may play an important role in the pathogenesis of preeclampsia. It may induce the increased maternal serum levels of sFlt-l and sEng by activating p38 MAPK signaling pathway, leading to deficient cytotrophoblastic invasion and abnormal placental vascular reconstruction during pregnancy.     

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ与肿瘤坏死因子-α在重度子(癎)前期发病中相互作用的探讨

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptorgamma,PPAR-γ)与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)在重度子(癎)前期发病中的作用及相互关系.方法 采用免疫组织化学SP法,检测68例不同发病时间的重度子(癎)前期伴或不伴肝损害者胎盘组织PPAR-γ与TNF-α的表达,并与54例早、中、晚孕期正常妊娠绒毛或胎盘组织比较.结果 两组孕妇胎盘组织均有PPAR-γ与TNF-α的表达.正常妊娠中期和妊娠28～32周胎盘PPAR-γ表达明显低于妊娠早期(12.03±6.38,11.17±3.57和18.46±5.27,P＜0.05);TNF-α在正常妊娠早期胎盘表达强度高于中期和晚期各组(P＜0.05).PPAR-γ/TNF-α比值在正常妊娠各不同孕期组间差异无统计学意义.不同发病孕周的重度子(癎)前期组与正常妊娠组比较,TNF-α表达明显升高(P均＜0.05);发病孕周＜32周的重度子(癎)前期组与正常妊娠组比较,PPAR-γ/TNF-α比值差异无统计学意义(P＜0.05),发病孕周为32一周和＞34周两组中,伴或不伴肝损害者PPAR-γ/TNF-α比值均明显低于正常妊娠者(P＜0.05).正常妊娠和重度子(癎)前期组内PPAR-7与TNF-a之间未见直线相关性(正常妊娠组r=0.227,P=0.125;重度子(癎)前期组r=0.142,P=0.267).结论 晚发型重度子(癎)前期孕妇胎盘PPAR-γ/TNF-α比值下降可能与较晚发生的子(癎)前期病理变化有关,其在重度子(癎)前期发生发展中复杂的相互作用及调节机制还有待深入研究.     

自噬基因beclin1对子宫颈癌HeLa细胞生长的作用及其机制

目的 研究自噬基因beclin 1对宫颈癌细胞株HeLa细胞生长的抑制作用,并探讨其可能的机制.方法 实验分为5组:(1)pcDNA3.1(+)-beclin 1组:转染重组载体pcDNA3.1(+)-beclin 1质粒(过度表达beclin 1基因)的HeLa细胞;(2)pSUPER-beclin 1组:转染重组载体pSUPER-beclin 1质粒的HeLa细胞(抑制Beclin 1基因表达);(3)pcDNA3.1(+)组:转染空载体pcDNA3.1(+)质粒的HeLa细胞;(4)pSUPER组:转染空载体pSUPER质粒的HeLa细胞;(5)空白对照组:未转染质粒的HeLa细胞.采用逆转录(RT)PCR技术和蛋白印迹法检测各组细胞中beclin 1 mRNA和蛋白的表达以及凋亡因子--半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(caspase-9)mRNA及蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞的生长情况;流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率;电镜观察和流式细胞仪检测各组细胞的自噬情况.将各组细胞分别接种于裸鼠皮下,观察各组裸鼠体内的成瘤性及肿瘤生长情况.结果 (1)各组细胞中beclin 1、caspase-9 mRNA和蛋白的表达:pcDNA3.1(+)-beclin 1组beclin 1和caspase-9 mRNA的表达水平分别为994.72±468.76和12.88±2.71,pSUPER-beclin 1组分别为0.18±0.63和0.11±0.08,pcDNA3.1(+)组分别为0.57±0.12和4.28±3.25,pSUPER组分别为0.67±0.29和2.77±1.27,空白对照组分别为0.74±0.25和3.67±3.78,pcDNA3.1(+)-beclin 1组均明显高于pcDNA3.1(+)组、pSUPER组和空白对照组,pSUPER-beclin 1组均明显低于pcDNA3.1(+)组、pSUPER组和空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).各组细胞中beclin 1和caspase-9蛋白的表达情况与mRNA相似.(2)各组细胞的生长情况:pcDNA3.1(+)-beclin 1组细胞的生长明显慢于空白对照组及pcDNA3.1(+)组,而pSUPER-beclin 1组细胞的生长明显快于空白对照组及pSUPER组,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)各组细胞的凋亡率:pcDNA3.1(+)-beclin 1组为(28.2±2.3)%,pcDNA3.1(+)组为(14.6±4.6)%,pSUPER-beclin 1组为(5.7±2.0)%,pSUPER组为(16.2±3.1)%,空白对照组为(11.2±3.0)%,pcDNA3.1(+)-beclin 1组和pSUPER-beclin 1组分别与另外3组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(4)各组细胞的自噬情况:pcDNA3.1(+)-beclin 1组细胞内可见自噬体的形成,而其余各组自噬体形成不明显.pcDNA3.1(+)-beclin 1组自噬率为(10.3±1.5)%,pcDNA3.1(+)组为(3.6±0.8)%,pSUPER-beclin 1组为(1.2±0.3)%,pSUPER组为(3.2±1.2)%,空白对照组为(2.2±1.1)%,pcDNA3.1(+)-beclin 1组和pSUPER-beclin 1组分别与另外3组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(5)各组裸鼠的成瘤情况:pcDNA3.1(+)-beclin 1组裸鼠成瘤时间长于空白对照组、pcDNA3.1(+)组和pSUPER组.pSUPER-beclin 1组裸鼠肿瘤体积第7天开始明显大于空白对照组、pcDNA3.1(+)组和pSUPER组(P＜0.05);pcDNA3.1(+)-beclin 1组第21天开始明显小于空白对照组、pcDNA3.1(+)组和pSUPER组(P＜0.05).接种第28天,pSUPER-beclin 1组肿瘤质量为(0.52±0.08)g,明显高于空白对照组的(0.37±0.12)g和pSUPER组的(0.34±0.24)g(P＜0.05);pcDNA3.1(+)-beclin 1组肿瘤质量为(0.18±0.12)g,明显低于空白对照组和pcDNA3.1(+)组的(0.34±0.18)g(P＜0.05).结论 自噬基因beclin 1可以抑制宫颈癌HeLa细胞体内、外的生长,这种作用不仅与自噬调控通路有关,而且可能通过调控caspse-9基因的表达参与内源性细胞凋亡通路的调节,为宫颈癌基因治疗提供了新途径.

Abstract：

Objective To investigate the inhibitory effects and the mechanism of autophagy gene beclin 1 on cervical cancer HeLa cells. Methods The eukaryotic expression vector and short hairpin RNA (shRNA) expression vector of beclin 1 were transfected via lipofectamine into HeLa cells. Experimental cells were classified into 5 groups: pcDNA3. 1 ( + )-beclin 1 group, pSUPER-beclin 1 group, pcDNA3.1 ( + )group, pSUPER group and HeLa group. Real time-PCR and western blot were used for detecting expression of mRNA and protein of beclin 1 and caspase-9 in transfected cells. Flow cytometry was employed to observe the effect of transfection on the apoptosis, and autophagy of HeLa, while proliferation was analyzed by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay. The ultrastructural analysis of autophagic vacuoles was under the electron microscope. Five groups cells were seeded subcutaneously on nude mice. The carcinogenic and growth activities of cancer cells in vivo were observed, and immunohistochemistry was used to detect the protein expression of beclin 1 in tumor tissue. Results ( 1 ) The mRNA expression of beclin 1 and caspase-9: pcDNA3. 1 ( + )-beclin 1 group were 994.72 ±468.76 and 12. 88 ±2. 71, pSUPER-beclin 1 group were 0. 18 ± 0. 63 and 0. 11 ± 0. 08, pcDNA3. 1 ( + ) group were 0. 57 ± 0. 12 and 4. 28 ± 3. 25,pSUPER group were 0. 67 ± 0. 29 and 2. 77 ± 1.27, and HeLa group were 0. 74 ± 0. 25 and 3.67 ± 3.78,respectively. The eukaryotic expression vector pcDNA3. 1 ( + ) -beclin 1 significantly improved the expression of mRNA of beclin 1 and caspase-9 in HeLa cells( P ＜0. 05 ), and the shRNA expression vector inhibited the expression of mRNA of beclin 1 and caspase-9 ( P ＜ 0.05 ). (2) The cell proliferations: pcDNA3.1 ( + ) -beclin 1 vector significantly inhibited the growth of HeLa cells, while pSUPER-beclin 1 vector significantly improved the growth of HeLa cells(P ＜0. 05). (3) The rate of apoptosis: pcDNA3.1 ( + )-beclin 1 group was (28.2 ±2.3)%, pcDNA3. 1( + ) group was(14.6 ±4.6)%,pSUPER-beclin 1 group was(5.7 ±2. 0) %, pSUPER group was( 16. 2 ± 3.1 ) %, and HeLa group was( 11.2 ± 3. 0) %. The pcDNA3. 1 ( + ) -beclin 1 vector significantly increased the apoptosis rate, while the pSUPER-beclin 1 vector significantly decreased the apoptosis rate(P ＜0. 05 ). (4)The activity of autophagy: more autophagy cells were identified in pcDNA3.1( + )-beclin 1 group; the rate of autophagy of five group were( 10. 3 ± 1.5)% in pcDNA3. 1 ( + ) -beclin 1 group, ( 3.6 ± 0. 8 ) % in pcDNA3. 1 ( + ) group, ( 1.2 ± 0. 3 ) % in pSUPER-beclin 1 group, (3.2 ± 1.2)% in pSUPER group and (2.2 ± 1. 1)% in HeLa group, there was statistical significances between test groups and control groups( P ＜ . 05 ). (5)Carcinogenic activity of HeLa cells in nude mice: the duration of tumorigenesis was the longest in pcDNA3.1 ( + )-beclin 1 group and the shortest in pSUPER-beclin 1 group among all groups. The tumor size began to grow larger from 7th day after injection in pSUPER-beclin 1 group than in control groups( P ＜ 0. 05 ). The tumor size was smaller from 21st day after injection in pcDNA3.1( + )-beclin 1 group than in control groups(P ＜0. 05). From 28th day after injection,the tumor weigh was (0. 52 ± 0. 08 )g in pSUPER-beclin 1 group, apparently more than HeLa group (0. 37 ±0. 12) g and pSUPER group (0. 34 ± 0. 24 ) g ( P ＜ 0. 05 ). While in pcDNA3. 1 ( + )-beclin 1 group the tumor weighed (0. 18 ±0. 12) g, which was lower than HeLa group and pcDNA3. 1 ( + ) group (0. 34 ± 0. 18 ) g ( P ＜ 0. 05 ) . Conclusions Autophagy gene beclin 1 overexpression can inhibit proliferation and growth of HeLa cells in vitro and in vivo. Beclin 1 not noly participate in the regulation of autophagy signaling, but also play an important role in the regulation of endogenous apoptosis signaling through caspase-9. So it might be one of the new strategies for gene therapy of cervical carcinoma.     

缺氧诱导因子1α及其靶基因在子痫前期患者胎盘组织中的表达

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及其靶基因血管内皮细胞生长因子(VEGF)、可溶性血管内皮细胞生长因子受体1(sFlt-1)基因在子痫前期患者胎盘组织中的表达。方法采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法对20例重度子痫前期患者(子痫前期组)和15例正常妊娠妇女(对照组)的胎盘组织中的HIF-1α、VEGF、sFlt-1蛋白表达进行检测;同时应用RT- PCR技术对两组孕妇胎盘组织中HIF-1α、VEGF、sFlt-1 mRNA水平进行检测,并进行相关性分析。结果(1)子痫前期组HIF-1α蛋白表达(+++)者9例(45%,9/20),sFlt-1蛋白表达(+++)者11例(55%,11/20),对照组分别为2例(13%,2/15)和3例(20%,3/15),两组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0．05);子痫前期组VEGF蛋白表达(+++)者3例(15%,3/20),明显低于对照组的7例(47%,7/15),两组比较,差异有统计学意义(P＜0．01)。(2)子痫前期组HIF-1αmRNA、sFlt-1 mRNA水平分别为0．604±0．013、0．898±0．041,对照组分别为0．208±0．007、0．559±0．244,两组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0．05);子痫前期组VEGF mRNA表达水平虽高于对照组,但差异无统计学意义(P＞0．05)。子痫前期组VEGF mRNA/sFlt-1 mRNA比值(0．439±0．009)低于对照组(0．824±0．011),两组比较,差异有统计学意义(P＜0．05)。(3)子痫前期组HIF-1αmRNA的表达与sFlt-1 mRNA表达呈正相关(r=0．577,P＜0．05),与VEGF mRNA/sFlt-1 mRNA比值呈负相关(r= -0．376,P＜0．05)。结论HIF-1α在子痫前期患者胎盘组织中表达水平明显升高,主要是通过调节VEGF、sFlt-1基因的转录,而影响滋养细胞的浸润和胎盘血管重铸,参与子痫前期的发病。     

肝脏组织磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路参与降低胎儿生长受限大鼠的胰岛素敏感性

目的 探讨肝脏组织磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinosital 3-kinase/protein kinase B,PI3-K/AKT)信号通路在胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)大鼠胰岛素敏感性降低中的作用. 方法 母鼠受孕后第1天始随机分为对照组和低蛋白组,各10只.低蛋白组孕鼠采用低蛋白饮食法(粗蛋白含量为8.00％)建立FGR仔鼠模型.测定对照组和低蛋白组FGR仔鼠生后3、7、14、30、60及90 d(每组每个时间点取雄性仔鼠8只)空腹血浆葡萄糖和血清胰岛素,计算胰岛素抵抗指数及胰岛素敏感指数.实时荧光定量聚合酶链反应技术检测雄性仔鼠生后7、14、30、60及90 d肝脏组织胰岛素受体底物1、2和葡萄糖转运蛋白4 mRNA表达水平,采用Western印迹技术测定胰岛素受体底物1、PI3-K(p110β亚基)、AKT、磷酸化AKT蛋白表达水平.采用简单相关及多重线性回归分析肝脏组织中PI3-K/AKT信号通路关键分子表达改变与胰岛素敏感性变化间的关系. 结果 (1)低蛋白组新生仔鼠平均出生体重为(4.92±0.36)g,低于对照组的(6.43±0.59)g,差异有统计学意义(t=14.73,P＜0.05).低蛋白组仔鼠中FGR发生率为88.2％(97/110),其中雄性仔鼠FGR发生率为94.1％ (48/51).(2)生后60 d时FGR仔鼠空腹血浆葡萄糖开始高于对照组,直至90 d.FGR仔鼠空腹血清胰岛素和胰岛素抵抗指数30 d时显著高于对照组,持续至90 d.FGR仔鼠胰岛素敏感指数自30 d始即显著低于对照组,直至90 d,差异均有统计学意义(P均＜0.05).(3)与对照组相比,FGR仔鼠7d时胰岛素受体底物1、2 mRNA表达均显著降低(0.45±0.02与0.68±0.03,t=16.633,P＜0.05;0.34±0.10与0.70±0.19,t=4.864,P＜0.05),并持续至生后90 d(0.48±0.03与0.59±0.05,t=5.237,P＜0.05;0.49±0.20与0.70±0.11,t=2.253,P＜0.05);胰岛素受体底物1、PI3-K及磷酸化AKT蛋白表达自14d时出现降低(0.22±0.05与0.52±0.11,t=7.024,P＜0.05;0.46±0.03与0.97±0.08,t=17.508,P＜0.05;0.62±0.10与0.89±0.08,t=6.100,P＜0.05),持续至生后90 d(1.11±0.08与1.32±0.14,t=3.714,P＜0.05;0.63±0.07与1.00±0.19,t=5.206,P＜0.05;0.28±0.03与0.45±0.10,t=4.880,P＜0.05).(4)FGR仔鼠磷酸化AKT蛋白表达量与胰岛素敏感指数呈正相关(r=0.704,P＜0.05);磷酸化AKT蛋白表达量分别与空腹血浆葡萄糖、空腹血清胰岛素和胰岛素抵抗指数变化呈负相关(r分别为-0.609、-0.561和-0.577,P均＜0.05). 结论 FGR仔鼠肝脏组织中PI3-K/AKT信号通路中某些关键分子表达发生变化,可能参与了胰岛素抵抗的发生.     

紫杉醇化疗后卵巢上皮性癌组织中COP9、JAK2、HSP、NADH基因表达的变化及其意义

目的 探讨卵巢上皮性癌(卵巢癌)紫杉醇化疗后癌组织中COP9、JAK2、HSP、NADH基因表达的变化及其意义.方法 采用RT-PCR技术及实时定量PCR技术检测54份卵巢癌组织中JAK2、HSP、NADH和COP9基因的表达,并分析其临床意义.其中,接受紫杉醇化疗者33份(接受2～4、6～10个疗程化疗者分别为15、18份),未接受化疗者21份;病理分级:G1～G2 24份,G330份;病理类型:浆液性囊腺癌26份,黏液性囊腺癌21份,子宫内膜样腺癌7份;手术病理分期:Ⅲ期49份,Ⅳ期5份.结果 RT-PCR技术检测显示,COP9基因过度表达率化疗者为39%,明显低于未化疗者的95%(P<0.01);而JAK2、HSP、NADH基因过度表达率化疗者分别为91%、97%及94%,明显高于未化疗者的29%、48%及43%(P<0.05).除JAK2基因过度表达率在不同病理分级的癌组织中比较,差异有统计学意义(P<0.01)外,其他基因在不同病理分级、病理类型、手术病理分期及不同疗程化疗者间比较,差异均无统计学意义(P>0.05).进一步行实时定量PCR技术检测显示,化疗者COP9、JAK2、HSP和NADH基因的拷贝数分别为568、7653、5766和3200,未化疗者分别为1886、3094、3341和1522,两者分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).除COP9基因的拷贝数在不同疗程化疗患者的癌组织中比较,差异无统计学意义(P>0.05)外,其他基因在不同疗程化疗、病理分级的癌组织中比较,差异均有统计学意义(P<0.05);上述4个基因拷贝数在不同病理类型间比较,差异均无统计学意义(P>0.05).Ⅳ期患者癌组织中HSP、NADH基因拷贝数明显高于Ⅲ期(P值分别为<0.01、<0.05);但COP9及JAK2基因拷贝数在两者间比较,差异无统计学意义(P>0.05).JAK2、HSP、NADH基因表达3者间均呈明显正相关关系(r=0.56、0.44、0.57,P均<0.01);COP9与JAK2基因表达呈明显负相关关系(r=-0.48,P<0.01),但与HSP、NADH基因表达无明显相关性(r=-0.18、-0.06,P均>0.05).结论 COP9基因表达的下调和JAK2、HSP、NADH基因表达的上调可能与卵巢癌紫杉醇化疗耐药有一定的关系.     

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白与子痫前期及妊娠期糖尿病孕妇糖代谢和脂代谢指标的相关性

目的 通过测定正常妊娠孕妇、子痫前期糖代谢正常患者、妊娠期糖尿病( gestational diabetes mellitus,GDM)患者及子痫前期合并GDM患者血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)水平,探讨NGAL与子痫前期、GDM孕妇糖代谢和脂代谢的相关性. 方法 选取2009年12月至2010年11月在广州医学院附属广东省妇女儿童医院定期产前检查并分娩的单胎正常妊娠孕妇、子痫前期糖代谢正常患者及GDM患者各77例,子痫前期合并GDM患者32例.测定所有研究对象血清NGAL、空腹血精、空腹胰岛素、脂代谢参数、尿酸、肌酐、乳酸脱氢酶及24 h尿蛋白等指标,测量血压,计算体重指数(body mass index,BMI),用稳态模型评估法计算胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment for insulin resistance,HOMA-IR)评价胰岛索敏感性.正态分布资料用单因素方差分析及Student's t检验进行比较,非正态分布资料用Kruskal-Wallis H检验和Mann-Whitney U检验进行比较.采用Spearman相关分析和多元逐步回归法进一步分析. 结果 子痫前期合并GDM组孕妇血清NGAL水平高于子痫前期糖代谢正常组[(70.82±20.02) ng/ml与(56.17±18.22)ng/ml,t=3.65,P＜0.01]、GDM组[(43.99±14.82) ng/ml,t=5.97,P＜0.01]及正常妊娠组[(17.80±5.78) ng/ml,t=14.76,P＜0.01);子痫前期糖代谢正常组血清NGAL水平高于GDM组(t=5.90,P＜0.01);子痫前期合并GDM组和子痫前期糖代谢正常组中,子痫前期重度组血清NGAL水平均高于子痫前期轻度组[(76.44±28.06)ng/ml与(60.15±25.86) ng/ml,t=2.82,P＜0.05; (61.61±37.14) ng/ml与(46.30±13.97) ng/ml,t=4.74,P＜0.01].校正孕周、孕妇年龄后血清NGAL水平与孕前BMI(r=0.335,P＜0.01)、入组BMI(r=0.427,P＜0.01)、入组收缩压(r=0.648,P＜0.01),入组舒张压(r=0.664,P＜0.01)、空腹血糖(r=0.320,P＜0.01)、空腹胰岛素(r=0.381,P＜0.01)、HOMA-IR(r=0.399,P＜0.01)、甘油三酯(r=0.405,P＜0.01)、总胆固醇(r=0.145,P＜0.05)、游离脂肪酸(r=0.335,P＜0.01)、尿酸(r=0.292,P＜0.01)、肌酐(r=0.226,P＜0.01)及24 h尿蛋白(r=0.436,P＜0.001)呈正相关,与高密度脂蛋白胆固醇(r=-0.189,P=0.008)呈负相关.多元逐步回归分析显示,入组收缩压(β=0.251,P＜0.01),入组舒张压(β=0.351,P＜0.01)、HOMA-IR(β=0.265,P＜0.01)、24 h尿蛋白(β=0.140,P＜0.05)是血清NGAL的独立相关因素. 结论 子痫前期及GDM患者血清NGAL水平显著升高,与糖脂代谢及血管内皮功能失调相关,提示NGAL可能在子痫前期及GDM的病理生理过程中发挥作用.     

重度子痫前期患者胎盘组织中缺氧适应相关基因的表达及其临床意义

目的 探讨胎盘组织中缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶1(HPH1)和因子抑制缺氧诱导因子1(FIH-1)在重度子痫前期发病和疾病进展中的作用.方法 选择2006年7月至2007年7月在中国医科大学附属盛京医院妇产科住院选择剖宫产终止妊娠的重度子痫前期孕妇34例(重度子痫前期组)及正常晚期妊娠孕妇24例(对照组),采用RT-PCR和蛋白印迹法检测两组孕妇胎盘组织中的HPH1和FIH-1 mRNA及蛋白的表达,并与临床指标进行相关性分析.结果 (1)重度子痫前期组孕妇胎盘组织巾HPH1 mRNA及蛋白表达水平分别为0.40±0.04和59.5 ±3.4,显著低于对照组的0.84±0.12和71.6±1.7(P均<0.01);重度子痫前期组孕妇FIH-1 mRNA及蛋白表达水平分别为0.31±0.05和45.6±2.4,也显著低于对照组的0.43±0.04和54.9±2.1(P均<0.01).(2)重度子痫前期组孕妇胎盘组织中HPH1和FIH-1 mRNA及其蛋白表达水平与平均动脉压(MAP)均呈显著负相关关系,r均为-0.854(P均<0.01);与24 h尿蛋白定量均呈显著负相关关系,r均为-0.936(P均<0.01);与有无眼底动脉痉挛均呈显著负相关关系,r均为-0.854(P均<0.01).(3)两组58例孕妇胎盘组织中的HPH1 mRNA表达水平高于FIH-1 mRNA的表达,分别为0.58±0.27和0.39 ±0.10,两者呈正相关关系,,为0.686(P<0.01);HPH1蛋白表达水平高于FIH-1蛋白的表达水平,分别为64.5±6.7和49.4±5.2,两者也呈正相关关系,r为0.947(P<0.01).结论 HPHl和FIH-1的表达变化可能与蕈度子痫前期的发病及疾病进展相关.     

青少年多囊卵巢综合征患者血清转移抑制素水平与其发病的相关性

目的 探讨青少年多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清转移抑制素水平与其发病的相关性.方法 收集2006年1-6月于中山大学附属第二医院妇科内分泌门诊就诊的PCOS患者42例,按年龄分为青少年组(17～19岁)19例、成年组(20～38岁)23例;同期选择16～19岁、月经正常的青春期女性20例为对照组.于月经周期第1～5天或孕激素治疗撤退性出血第1～5天(闭经者日期不限)测定3组妇女血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮、游离睾酮(FT)、硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)、性激素结合球蛋白(SHBG)和转移抑制素水平,并计算游离雄激素指数(FAI).次日对3组妇女行75 g口服葡萄糖耐量试验和胰岛素释放试验,分别测定空腹、服糖后1 h、服糖后2 h的血糖及胰岛素水平,并分别计算曲线下面积(AUC)、空腹血糖与宅腹胰岛素比值(GIR)和稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).结果 (1)内分泌激素水平比较:各组妇女的LH水平,青少年组[(12±8)U/L]和成年组[(12±7)U/L]均高于对照组[(6±4)U/L],差异均有统计学意义(P＜0.05);成年组的FT水平[(2.3±1.2)pmol/L]高于青少年组[(1.3±0.8)pmol/L]和对照组[(1.1±0.5)pmol/L],青少年组的FT水平也高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);青少年组的DHEAS水平[(3.1±2.7)μmol/L]低于对照组[(6.3±2.7)μmol/L],差异有统计学意义(P＜0.05);成年组的FAI(5.6±4.1)高于对照组(3.0±1.3),差异也有统计学意义(P＜0.05).FSH、睾酮和SHBG水平在3组间两两比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(2)代谢水平及转移抑制素水平比较:青少年组的空腹、服糖后2 h胰岛素水平及胰岛素AUC分别为(13±7)mU/L、(88±59)mU/L和(133±80)mU·L~(-1)·min~(-1),均高于对照组[分别为(7±3)mU/L、(57±29)mU/L和(82±34)mU·L~(-1)·min~(-1)],且空腹胰岛素水平高于成年组[(9±5)mU/L],差异均有统计学意义(P＜0.05).成年组空腹、服糖后2 h血糖水平分别为(5.01±0.44)mmol/L和(6.48±1.16)mmol/L,均分别高于对照组[分别为(4.68±0.29)mmol/L和(5.44±0.83)mmol/L]和青少年组[分别为(4.67±0.30)mmol/L和(5.93±1.44)mmol/L],成年组血糖AUC[(9.99±1.85)mmol·L~(-1)·min~(-1)]高于对照组[(8.42±1.53)mmol·L~(-1)·min~(-1)],差均有统计学意义(P＜0.05).青少年组HOMA-IR为2.6±2.0,高于对照组(1.4±0.7);GIR为10±8,低于对照组(16±10),差异均有统计学意义(P＜0.05).青少年组和成年组的转移抑制素水平分别为(0.25±0.19)、(0.29±0.29)pmol/L,均高于对照组[(0.18±0.23)pmol/L],差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)转移抑制素水平与各项指标的相关性:血清转移抑制素水平与LH、睾酮及服糖后2 h血糖水平呈正相关关系(r分别为0.256、0.286、0.267,P分别为0.044,0.025、0.043).结论 青少年PCOS患者血清转移抑制素水平显著高于正常青春期女性,转移抑制素高表达所致的青春期发育亢进与青少年PCOS患者的发病可能存在一定关系.