猴B病毒抗体ELISA检测方法的建立和应用研究

目的　建立猴B病毒抗体ELISA检测方法。方法　采用方阵滴定法 ,比较不同血清稀释度、3种酶结合物、2种抗原对检测结果的影响 ,与国外同类参比实验室进行检测结果的比较 ,确定ELISA法的最佳实验条件。结果　HSV抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为 1∶2 0 0 0时 ;或B病毒抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为1∶4 0 0 0时 ,阴性血清和阳性血清的A值差距最大。与国外B病毒检测专业实验室的检测结果符合率分别为98 0 2 %和 97 5 2 %。结论　建立了猴B病毒抗体的ELISA检测方法 ,提高了检测方法的准确性。     

B细胞恶性肿瘤患者外周血浆B细胞刺激因子水平测定及临床意义

目的 研究B细胞恶性肿瘤(多发性骨髓瘤、B细胞非何杰金淋巴瘤)患者外周血浆B细胞刺激因子(Blys)水平,探讨Blys的血浆水平与多发性骨髓瘤(MM)、B细胞非何杰金淋巴瘤(B-NHL)的关系,分析Blys在MM、B-NHL发病中的作用.方法 应用酶联免疫吸附法(EUSA)检测MM(12例)、B-NHL(31例)患者外周血浆Blys水平,以健康献血员(30例)作为对照,并对B-NHL不同分型及化疗前、后患者血浆Blys水平进行比较.结果 MM、Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期B-NHL化疗前血浆Blys水平显著高于正常对照组(P＜0.01);Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期B-NHL化疗前均显著高于化疗后(P＜0.01),Ⅲ～Ⅳ期B-NHL化疗前显著高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05).且B-NHL的不同组织类型化疗前血浆BlyS水平各不相同,均显著高于正常对照组(P＜0.01),且显著高于化疗后(P＜0.01);其中弥漫性大B细胞淋巴瘤显著高于B-慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(P＜0.01).结论 外周血浆Blys水平在MM、B-NHL患者外周血中明显升高,且在B-NHL中与组织类型、分期和治疗有关,提示Blys可能参与B细胞恶性肿瘤发病过程,有望成为B细胞恶性肿瘤诊断、判断分期和评价疗效的新指标.     

B病毒糖蛋白的原核表达及ELISA检测方法的建立

目的表达B病毒糖蛋白,筛选出具有较好检测敏感性和特异性的抗原或抗原组合,用以检测猴血清中的抗体。方法原核表达B病毒糖蛋白C,D和G,经纯化、复性后用蛋白印记验证其抗原性,建立ELISA法,对方法进行评价。结果3个表达抗原反应特异性较好;以BV-ELISA为标准,各抗原的检测敏感性分别是：BVgC-ELISA84.6％,BVgD-ELISA88.5％,BVgC＋gD-ELISA96.2％,检测特异性分别是：BVgC-ELISA93％,BVgD-ELISA85.7％,BVgC＋gD-ELISA64.3％。结论表达的3个BV重组抗原都具备作为替代抗原检测BV抗体的潜力。     

人血清脂联素定量ELISA检测方法的建立及初步临床应用

目的:建立一种检测人血清中脂联素(APN)的酶联免疫吸附方法(ELISA),并初步探讨其在冠心病诊断中的应用。方法:构建表达质粒pET22b(+)/gAPN,在原核表达系统大肠杆菌中表达并纯化重组脂联素球状区(gAPN)蛋白。用抗APN单克隆抗体MAB10651包被微孔板,10%小牛血清作为封闭液,针对APN不同抗原表位的单克隆抗体MAB1065生物素化后作为标记抗体,联合生物素-亲和素信号放大系统,以gAPN重组蛋白为标准品绘制标准曲线,以准确性、特异性、重复性、回收率试验和方法对比试验评价ELISA方法。检测161例冠心病患者血清APN水平并结合冠状动脉造影结果和Gensini积分系统,探讨血清APN水平与冠心病的关系。结果:利用基因克隆技术成功构建了pET22b(+)/gAPN质粒,获得了相对分子质量约15 000的重组gAPN蛋白,产量较高(1.57 mg),纯度>90%,并以此为标准品初步建立了检测人血清APN的定量ELISA方法。该法具有良好的准确性和重复性,灵敏度达150 pg/ml,回收率为91.0%~108.0%,与深圳依诺金生物科技有限公司进口分装的ELISA试剂盒对照比较有良好的相关性(r=0.935,P<0.001)。临床检测表明冠心病组血清APN水平明显低于非冠心病组(P<0.01),且血清APN水平随冠状动脉狭窄程度的加重呈进行性下降趋势。结论:本实验成功建立了一种简便快速检测人血清APN的ELISA方法,对诊断冠心病有临床应用价值,为国内APN诊断试剂盒的研制和开发提供了科学实验依据。     

氧氟沙星ELISA检测方法的建立

目的:建立氧氟沙星(OFL)的ELISA快速检测方法。方法:在制备抗OFL单克隆抗体基础上,采用间接竞争酶联免疫吸附方法(ciELISA)检测OFL的含量。结果:筛选得到特异性分泌抗OFL的单克隆抗体细胞株3G3和3D9,应用3G3所制备腹水建立的ciELISA工作曲线的线性范围为0.5-128 ng/mL(r2=0.985 8),最低检出浓度为0.5 ng/mL,半数抑制浓度IC50为7.0 ng/mL,样品加样回收率为84%~120%,批内变异系数和批间变异系数均小于15%。结论:本文建立的氧氟沙星ELISA检测法可满足OFL残留检测的需要。     

MLCK定量检测的双抗体夹心ELISA方法建立

目的:建立定量检测人肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的双抗夹心ELISA法.方法:用抗MLCK兔多克隆抗体包被酶标板,1％小牛血清白蛋白(1％BSA)作为封闭液,抗MLCK羊多克隆抗体和HRP-兔抗羊抗体分别为包被抗体和检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,并进行了实验条件的优化;同时对新建立方法的灵敏度、精密度进行了评价...     

反向间接夹心ELISA法检测柯萨奇B组病毒的方法

建立反向间接夹心ＥＬＩＳＡ法，检测可疑为柯萨奇Ｂ组病毒性心肌炎患者血清中病毒特异性ＩｇＭ抗体，在对临床诊断为病毒性心肌炎的患者中，柯萨奇病毒ＩｇＭ抗体阳性率为２７％，结果说明该法在早期诊断病毒性心肌炎方面具有一定的价值。     

ELISA检测颅脑损伤患者血清S100B蛋白变化及其意义

目的 :探讨颅脑损伤患者血清S10 0B蛋白动态变化及其临床意义。　方法 :用双抗体夹心ELISA法检测10 0名健康人和 12例颅脑损伤患者血清S10 0B蛋白水平 ,同时观察血清S10 0B蛋白动态变化。　结果 :12例颅脑损伤并发脑挫裂伤患者在伤后 12h血清S10 0B水平开始升高 (P <0 .0 0 1) ,2 4h即达高峰。轻、中型患者治疗后S10 0B蛋白可降至正常水平 ,而重型患者仍维持高水平 ,而且病程迁延。　结论 :血清S10 0B蛋白检测可作为诊断早期脑损伤的新指标     

冠心病病人血浆细胞黏附分子-1水平的变化

目的观察冠心病（CHD）病人血浆细胞间黏附分子1水平的变化,并探讨其与冠心病活动性之间的关系。方法采用酶联免疫吸附（ELISA）法,检测了60例CHI）病人血浆可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）的水平,并与健康对照组进行比较。结果CHD病人血浆sICAM-1水平高于对照组（t=7．136,P〈0．01）;且急性心肌梗死（AMI）病人显著高于陈旧性心肌梗死病人及稳定型心绞痛（SA）病人（t=4．329、5．635,P〈0．01）,不稳定型心绞痛（UAP）病人高于SA病人（t=3．666,P〈0．01）。结论CHD病人sICAM-1水平明显高于正常对照组,且在一定程度上反映了病情的严重程度。     

竞争性ELISA方法检测小鼠血清中的P53蛋白

目的建立动物组织内P53蛋白的免疫检测分析方法,为P53生物药物的代谢分布研究提供检测手段.方法辣根过氧化物酶(HRP)标记抗P53蛋白单克隆抗体3P40,应用标记后的抗体及重组P53蛋白的检测,建立竞争性ELISA检测方法;应用此方法建立血清样品中P53蛋白标准曲线,测定腹腔注射P53后不同时间小鼠血清中P53浓度....     

胆汁泡蛋白酶联免疫吸附检测法的建立与初步临床应用

目的　建立胆汁泡蛋白快速检测法 ,作为防治胆石症临床研究的指标。方法　提取 3 3 .5kd胆汁泡蛋白 ,建立酶联免疫吸附检测法 (ELISA)标准曲线 ,并应用ELISA药盒测定正常人、胆石症患者胆汁和血清中泡蛋白含量 ,同时观察利胆冲剂、胆通胶囊等对泡蛋白的影响。结果　ELISA曲线方程为Y =0 .0 3 5X(r=0 .99) ;胆固醇性结石组胆囊胆汁和血清 3 3 .5kd泡蛋白含量分别为 (2 13 .4± 70 .1)mg/L、(179.8± 97.9)mg/L ,明显高于胆色素性结石症、非胆石症胆道疾病组以及正常人组 (P <0 .0 5) ,而后三者之间没有显著差异 (P >0 .0 5) ;利胆冲剂治疗两周后 ,胆汁和血清泡蛋白含量显著降低 ,而对照组和胆通胶囊治疗组未见明显变化。结论　胆汁泡蛋白的含量在不同人群差异显著 ;利胆冲剂等药物能降低胆汁和血清 3 3 .5kd泡蛋白含量 ,改变胆汁致石性     

自身免疫性肝病患者IL-12和IL-17水平变化及临床意义

目的研究IL-12与IL-17在自身免疫性肝病(AILD)患者血清及肝组织中的表达及意义。方法收集21例自身免疫性肝炎(AIH组)、21例原发性胆汁性肝硬化(PBC组)、9例自身免疫性肝炎-原发性胆汁性肝硬化重叠综合征(AIH-PBC OS组)患者外周血和肝组织,采用ELISA法和免疫组织化学法分别检测患者血清及肝组织中IL-12与IL-17的表达,采用常规自动生化分析仪测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)和γ-谷氨酰转肽酶(GGT)水平,并分析血清IL-12、IL-17表达与ALT和GGT水平的相关性。选择10例健康体检者和10例正常肝组织作为对照。结果 AIH组、PBC组及AIH-PBC OS组患者血清中IL-12表达水平均低于对照组(P<0.01),IL-17表达水平均高于对照组(P<0.01)。AIH组和PBC组患者血清IL-12与IL-17表达之间呈负相关(AIH:r=-0.752,P<0.05;PBC:r=-0.436,P<0.05);AIH组和PBC组患者血清IL-17表达与ALT和GGT均呈正相关(AIH:r=0.825,P<0.05;PBC:r=0.571,P<0.05)。各组患者肝组织IL-12主要表达在肝内胆管上皮细胞及枯否细胞胞质中,各组阳性表达率均低于对照组[AIH:19.05%(4/21),PBC:9.52%(2/21),AIHPBCOS:11.11%(1/9),对照:90.00%(9/10);P<0.01];IL-17主要表达在淋巴细胞和单核细胞胞质中,各组阳性表达率均高于对照组[AIH:71.43%(15/21),PBC:76.19%(16/21),AIH-PBC OS:77.78%(7/9),对照:10.00%(1/10);P<0.01];AIH组和PBC组患者肝组织IL-12与IL-17表达之间呈负相关(AIH:r=-0.499,P=0.021;PBC:r=-0.580,P=0.006)。结论在AILD中,IL-12表达降低,对Th17细胞分化的抑制作用减弱,进而产生过多的IL-17,介导了炎症损伤,IL-12/IL-17炎症通路可能参与了AILD的发生发展。     

ELISA法检测可溶性人类白细胞抗原-Ⅰ及广东人参考值的测定

目的探讨可溶性人类白细胞抗原-Ⅰ(sHLA-Ⅰ)的定量检测技术,并用于检测广东地区人群的参考值。方法以W6/32包被酶标板,捕捉样品中sHLA-Ⅰ,β2微球蛋白抗体为一抗,再加酶标二抗及底物显色。根据不同浓度标准sHLA-Ⅰ显色后Dλ值的标准曲线,检测60 例正常广东人的sHLA-Ⅰ含量。结果sHLA-Ⅰ最低检测限为2.84 ng/ml,批内变异系数为5.80%,批间变异系数为9.00%,回收率为98.57%~100.15%。广东人sHLA-Ⅰ正常值为(699.54±360.10)ng/ml。结论ELISA法检测sHLA-Ⅰ具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点。     

间接酶联免疫吸附试验测定恶性肿瘤血清中核糖核酸酶抑制因子表达的研究

目的:探讨间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测核糖核酸酶抑制因子(RI)在恶性肿瘤患者血清中的表达。方法:建立检测血清RI含量的间接ELISA法,检测和比较正常人、恶性肿瘤患者(乳腺癌、胃癌、肺癌、肝癌)、乳腺良性肿瘤患者血清中RI的表达水平。结果:所建立的间接ELISA法特异性高;恶性肿瘤患者血清中RI表达均明显低于正常人(P<0.05),乳腺癌亦明显低于乳腺良性肿瘤(P<0.05)。结论:RI表达的降低可以作为肿瘤良、恶性鉴别的指标之一。     

血清抗心磷脂抗体的测定及其临床意义

对272例各种疾病患者及81例正常人以ELISA方法测定了ACA水平。结果表明,活动期SLE、RF阳性的RA、SS、PSS以及各种感染性疾病患者血清IgG-ACA阳性率分别为66％、38％、100％、50％及44%;IgM-ACA阳性率分别为53％、46％、20％、50％及42％。而非活动期SLE、RF阴性的RA及其它疾病患者的ACA均值及阳性率与正常人无显著差异,提示ACA与SLE等疾病病情的严重性及活动性有关,并可作为提示感染及监督疗效的一个参考指标。     

高灵敏血清HER2蛋白检测方法的建立及临床应用

本研究采用双抗体夹心ELISA法,以前期研制的抗人表皮生长因子受体2 (HER2)单克隆抗体HuA21与生物素标记HerA分别为包被抗体与检测抗体,培养CHO细胞进行转染HER2胞外区(HER2-ECD)基因的表达载体,选择抗性克隆进行培养,并分离、纯化抗原作为标准抗原,建立可定量检测人血清中HER2含量的技术,为肿瘤患者的治疗及预后评估提供参考.建立的ELISA法检测灵敏度为7.8 pg/ml,检测范围为0 ～ 500 pg/ml,其批内变异系数为0.2％～10.9％,批间变异系数为1.4％ ～12.4％,在人血清中的抗原回收率为86.84％ ～ 116.40％.使用本方法检测临床标本,结果显示HER2阳性的转移性乳腺癌患者血清HER2含量明显高于早期乳腺癌患者及健康人的平均水平(P＜0.05).因此本研究成功建立了双抗体夹心ELISA法检测人血清HER2技术,其检测结果特异、稳定、可靠,可定量检测肿瘤患者血清HER2水平.     

甲胎蛋白定量测定试剂盒的临床应用

目的:通过新试剂(酶联免疫法)与已上市的试剂1(酶联免疫法)和试剂2(化学发光法)定量测定甲胎蛋白的比较,重点评价新试剂(酶联免疫法)测定甲胎蛋白的临床应用价值.方法:将发光法测定的AFP高、中、低值300份血清分别用上述三种方法进行检测,进行回归分析及相关分析.将低、中、高值质控品分别用上述三种方法每天测定一次,连续...     

检测血清ATG浓度ELISA方法的建立

目的建立检测人血清中兔抗人胸腺免疫球蛋白(ATG)的检查方法并进行初步临床应用。方法用鼠抗兔IgG单克隆抗体做固相,辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG多克隆抗体做二抗,建立双抗体夹心ELISA方法。并检测使用ATG的异基因造血干细胞移植患者血中ATG的浓度。结果ATG浓度最低检测值为31.25ng/ml,在40～1000ng/ml范围内呈线性关系,组内和组间的变异系数分别为7.91%和5.22%。用该法测定7例干细胞移植预处理方案中使用ATG患者的浓度,ATG随时间在体内浓度逐渐下降,但预处理后90天仍能测得ATG,表明ATG在体内作用时间比较久,可能会影响移植后免疫功能重建。结论双抗体夹心法具有灵敏性高、特异性强的特点,可用于人血清中ATG水平的定量测定。干细胞移植预处理方案中使用ATG后体内浓度进行性降低,ATG将会比较长时间在体内起作用。     

ELISA测定抗结核菌素纯蛋白衍生物LgG诊断小儿结核病

为了探讨小儿结核病的血清学诊断方法,作者用ELISA法检测了216例健康儿童及63例结核病患儿微量耳垂血中抗结核菌素纯蛋白衍生物抗体(抗PPDIgG)水平.结果:健康儿童抗PPDIgG随着年龄增长而增高.学龄前儿童及学龄儿童抗PPDIgG水平与PPD皮试反应状态无明显关系.患儿组的抗PPDIgG水平显著高于同年龄对照组.如果以健康儿童95％位数的OD值为正常值上限,本试验检查患儿的特异性为95％,敏感性在结核感染儿、3月至7岁及至12岁结核病患儿分别为50％,72.5％和72.7％.作者认为本法可以做为小儿结核病的辅助诊断方法.