重组人铜锌超氧化物歧化酶对小鼠骨髓造血粒─巨系祖细胞的辐射防护作用

目的：探讨重组人铜锌超氧化物歧化酶（ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ）的辐射防护作用及其机理。方法：通过γ线辐射损伤小鼠的体内和体外实验，观察了ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ和聚乙二醇修饰的ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ（ＰＥＧ－ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ）对小鼠骨髓造血粒－巨系祖细胞克隆产生率（ＣＦＵ－ＧＭ）的影响。结果：体内实验，小鼠整体照射，静脉给药，以上两种酶（２５`０～３００ｍｇ／ｋｇ）均能非常显著地提高ＣＦＵ－ＧＭ的数量。其中以照射前后联合给药效果最好。而单纯照射前给药，ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ仅在照前１小时给药效果较好；ＰＥＧ－ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ则在照前３小时或照前１小时给药都有较好的效果。体外实验，小鼠离体细胞照射并给药，未见ｒｈＣｕＺｎ－ＳＯＤ对ＣＦＵ－ＧＭ的影响。结论：以上两种酶对小鼠骨髓ＣＦＵ－ＧＭ有良好的辐射防护作用，其机理可能是通过机体防御系统作用的间接途径实现的。ＰＥＧ－ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ的生物半衰期较长，可增加给药时机，因而具有更大的实用价值。     

重组人粒细胞集落刺激因子对照射小鼠造血功能的影响

为研究重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）对急性放射病的治疗作用，观察了不同剂量的ｒｈＧ－ＣＳＦ对６．５Ｇｙ照射小鼠造血恢复的影响，结果表明，予受照小鼠每日ｒｈＧ－ＣＳＦ１．２５、２．５０及５．００μｇ治疗后，外周血白细胞，红细胞及血小板的恢复明显加快，以５．００μｇ剂量组效果为最佳，照射后１０ｄ骨髓及脾脏ＣＦＵ－ＧＭ，暴增型红系祖细胞集落（ＢＦＵ－Ｅ）及混合型祖细胞集落（ＣＦＵ－Ｍｉｘ）含     

体外培养扩增的人脐血CD34+/细胞形成HPP-CFC的能力

目的：评价ＣＤ３４＾＋细胞体外扩增时高增殖潜能集落形成细胞（ＨＰＰ－ＣＦＣ）的变化。方法：利用ｍｉｎｉ－ＭＡＣＳ分离脐血ＣＤ３４＾＋细胞,流式细胞仪（ＦＡＣＳ）测定细胞纯度（８６％～９５％）。应用含ｒｈＳＣＦ、ｒｈＩＬ－３、ｒｈＩＬ－６和ｒｌＧＭ－ＣＳＦ的培养体系扩增ＣＤ３４＾＋细胞。分别于培养的第１,２和４周收取细胞进行ＨＨＰ－ＣＦＣ测定,测试体系为含重组人ＳＣＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、ＥＰＯ等细胞因子的半固体甲基纤维素。结果：测试体系中加入单个细胞因子不能产生ＨＰＰ－ＣＦＣ,含ｒｈＩＬ－３和ｒｈＧＭ－ＣＳＦ体系产生的集落小且主要为巨噬细胞集落,由所有因子组成的体系产生的集落大而致密,包含粒系３种类型。此外,尽管细胞总数量显著增加,扩增的ＣＤ３４＾＋细胞ＨＰＰ－ＣＦＣ形成率随培养时间的延长而减少。结论：本方     

人基因工程重组超氧化物歧化酶对小鼠骨髓造血干细胞的辐射防护作用

目的：骨髓造血干细胞（ｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ，ＨＳＣ）损伤所致的造血抑制是急性骨髓型放射病死亡的重要原因之一，本实验旨在观察人基因工程重组超氧化物歧化酶（ｒｈＳＯＤ）对ＨＳＣ有无辐射防护作用以及化学修饰对ｒｈＳＯＤ抗辐射作用的影响。方法：实验用照射小鼠的外源性脾结节（ＣＦＵ－Ｓ）形成法。组间比较用ｔ检验。结果：ｒｈＳＯＤ和ＰＥＧ－ＳＯＤ均能明显提高ＣＦＵ－Ｓ形成数，其中ｒｈＳＯＤ在照射前１小时给药效果好，而ＰＥＧ－ＳＯＤ在照射前２～３小时给药作用更为明显。结论：ｒｈＳＯＤ具有对骨髓造血于细胞的辐射防护作用，化学修饰后ＳＯＤ的血浆半衰期延长而使药物作用持续时间延长。     

基因重组干扰素γ对骨髓增生异常综合征病人治疗作用的体外…

用基因重组干扰素γ（ＩＦＮ－γ）对４１例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）病人造血祖细胞的作用进行了体外观察，结果：（１）ＩＦＮ－γ体外对非血液病对照病人的红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ）和粒系祖母细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）无明显促增殖作用，而对ＭＤＳ病人的ＣＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ有明显促增殖作用，其作用呈剂量依赖型，在１Ｕ／ｍｌ时作用最小，１００Ｕ／ｍｌ时作用最强，（２）ＩＦＮ－γ对ＭＤＳ原ＣＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ     

基因重组干扰素γ对骨髓增生异常综合征

用基因重组干扰素（ＩＦＮ－γ）对４１例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）病人造血祖细胞的作用进行了体外观察，结果：①ＩＦＮ－γ体外对非血液病对照组病人的红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ）和粒系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）无明显促增殖作用，而对ＭＤＳ病人的ＣＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ有明显促增殖作用。其作用呈剂量依赖型，在ＩＵ／ｍｌ时作用最小，１００Ｕ／ｍｌ时作用最强；②ＩＦＮ－γ对ＭＤＳ原ＣＦＵＥ和ＣＦＵ－ＧＭ增殖正常组加入ＩＦＮ－γ后集落数增加最明显，而对增殖明显减低组集落数无明显增加；③ＩＦＮ－γ对ＭＤＳ不同亚型病人ＣＦＵＥ和ＣＦＵ－ＧＭ作用不同，其中对转化中原始细胞增多的难治性贫血（ＲＡＥＢ－Ｔ）型病人有效率较高。     

吉林放射事故病人血浆造血活性观察

目的观察病人血浆造血活性，了解其与照后造血功能变化的可能关系。方法以ＭＴＴ法测病人血浆对ＮＦＳ－６０、ＴＦ－１和ＢＥＴ－２细胞因子依赖细胞株在有或无相应细胞因子存在时的吸光度（４９２ｎｍ）。结果患者血清有类似ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３和ＥＰＯ的刺激活性。血浆加入含ｒｈＧ－ＣＳＦ和ＥＰＯ的培养体系中可使ＮＦＳ－６０和ＢＥＴ－２细胞增殖受抑。上述变化与病人外周血白细胞、红细胞及血红蛋白的变化有相关之处。结论吉林辐射事故病人血浆中有粒系和红系造血抑制活性。     

重组人粒－巨噬细胞集落刺激因子对6．5Gy不均匀照射犬造血功能的影响

重组人粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）在白血病及肿瘤病人大剂量放化疗白细胞减少性疾病的治疗中显示出了良好的前景。ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可明显改善屏蔽全骨盆后６．５Ｇｙ６０Ｃｏｒ线照射犬的临床症状，加速外周血白细胞的恢复，提高白细胞的最低值，缩短白细胞减少的持续时间。可明显增加照射犬骨髓有核细胞数及骨髓细胞数，促进骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的增殖，提高骨髓细胞的粒／红比值。可应用于事故性骨髓型急性放射病病人的临床治疗。     

人正常骨髓CD34＋造血细胞体外扩增形成红系及混合系造血祖…

根据阳性选择策略，彩ＣＩＭＳ－１００免疫磁性无菌分离系统富集人正常骨髓ＣＤ３４＋造血细胞，然后将在含Ｅｐｏ＋ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＳＣＦ组合造血生长因子的无基质液培体系中扩增４周，定期进行单个核细胞计数、ＢＦＵ－Ｅ及ＣＦＵ－Ｍｉｘ的培养。     

重组人粒—巨噬细胞集落刺激因子对6.5Gy不均匀照射犬造血功…

重组人粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）在白血病及肿瘤病人大剂量放化疗白细胞减少性疾病的治疗中显示出了良好的前景。ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可明显改善屏蔽全骨盆后６．５Ｇｙ＾６０Ｃｏγ线照射犬的临床症状，加速外周血白细胞的恢复，提高白细胞的最低值，缩短白细胞减少的持续时间。可明显增加照射犬骨髓有核细胞数及骨髓细胞数，促进骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的增殖，提高骨髓细胞的粒／红比值。可应用于事故性骨髓型急性放射     

rhIL-11联合rhG-CSF和CTX动员小鼠外周造血干/祖细胞的实验研究

为研究rhIL 11联合rhG CSF和CTX对C5 7BL/ 6小鼠外周造血干细胞的动员作用 ,将 48只C5 7BL/ 6小鼠随机分为 4组 ,3组d0给予一次腹腔注射 2 0 0mg/kg的CTX ,其中 2组d1d15分别皮下注射rhIL 11、rhIL 11加rhG CSF ,观察不同时间外周血白细胞、血小板计数、CD34 细胞比例、CFU GM、CFU MK及CFU E的数量变化。结果发现 ,rhIL 11或联合rhG CSF可明显促进CTX骨髓抑制小鼠外周血血小板和白细胞的恢复、提高外周血CD34 细胞比例及三系造血细胞集落数量。证明rhIL 11具有外周血造血干细胞动员作用 ,而与rhG CSF和CTX联合动员效果更佳。     

rhIL-11不同时间给药对急性放射病猕猴造血系统的影响

目的 观察rhIL-11不同时间约药对^60Coγ射线照射猕猴造血系统的影响。方法 正常成年猕猴用^60Coγ射线一次全身照射3．0Gy ,吸引剂量率154．96cGy/min,分照射对照、早期给药和后给药3组,后两组分别在照射后当天和第13天开始皮下注射rhIL-1160μg.kg^-1.d^-1(μKD),每日1次,连续14d。结果 照射后应用rhIL-11可明显短照射猴外周血小板数和白细胞数量低值的持续时间,早期给药还可明显升高照射猴外周血小板数的最低值。给药后1周内,早期给药组外周血红细胞数较照射对照组有一定程度的降低,从给药后第19天开始则明显高于照射对照组。照射后45d骨髓细胞培养结果表明,rhIL-11可明显刺激照射猴骨髓有核细胞体外形成CFU－MK和CFU－Mix的能力。病理组织学观察结果同样表明 IL-11治疗组骨髓粒系和巨核系细胞明显增殖。结论 rhIL-11可明显促进急性放射病猴骨髓造血功能的恢复,照射后早期给药的效果优于第13天开始给药。     

造血因子与急性放射病

近十余年来,应用细胞因子来改善辐射造血损伤获得了良好的疗效,积累了不少经验。然而,细胞因子治疗急性辐射损伤的用药对象、剂量、时机及合理的配伍应用等问题尚未解决,疗效并非尽善尽美,短效、无效者绝非罕见,甚至出现滥用现象。本文作者实验治疗研究结果表明,造血因子对急性辐射损伤有明显的治疗作用,但宜尽早给药,极期给药的疗效不如早期给药好。使用细胞因子治疗的时间应有一个时限,而不是越长越好。单纯应用rhTPO不能促进粒系造血恢复。单纯应用rhG-CSF不能促进巨核系造血的恢复,未见增加肿瘤细胞染色体畸变率,重复给药和二次照射的结果未促进造血干／祖细胞库耗竭。rhGM-CSF促进粒细胞恢复的作用不如rhG-CSF。rhIL-11可促进辐射损伤三系造血的恢复,以巨核系的恢复更为明显。在骨髓型急性放射病的治疗中联合使用造血细胞因子,rhG-CSF rhIL-11不失为较理想的方案,可作为骨髓型急性放射病患者临床治疗的首选药物。     

褪黑素对照射后小鼠血小板造血的保护作用

目的探讨褪黑素(melatonin,Mel)对照射后小鼠血小板和巨核细胞造血功能的影响。方法18只雌性BALB/c小白鼠随机分为3组正常组(N组),对照组(C组)和Mel组(M组),每组6只。其中N组不接受照射和药物注射,C组和M组小鼠予4Gy的60Coγ射线全身照射,照射后M组每天腹腔注射Mel10mg.kg-1.d-1,连续注射21d,C组注射生理盐水。于照射前及照射后的第7、14和21天采尾血,观察白细胞和血小板计数变化,在第21天采血后取骨髓行巨核细胞集落形成单位(CFU-MK)和骨髓基质细胞集落形成单位(CFU-F)培养。另外观察正常小鼠体外骨髓CFU-MK在不同浓度的Mel(0～500nmol/L)作用下的生长情况。结果M组血小板计数回升明显高于C组(P<0.05),M组的CFU-MK和CFU-F集落生长明显优于C组(P<0.001)。体外小鼠骨髓CFU-MK的生长对Mel有浓度依赖性,Mel浓度为200nmol/L时,CFU-MK集落数目最多,且集落大小和MK成熟度较对照均有明显提高。结论Mel对照射后小鼠骨髓的血小板造血功能有保护作用,Mel可促进骨髓基质细胞和MK增殖分化,从而提升外周血血小板数量。     

rhIL-11和rhG-CSF对中子照射致小鼠骨髓损伤的治疗作用

目的 探讨rhIL-11和rhG-CSF对中子照射致小鼠骨髓损伤的治疗作用。方法 将BALB/c小鼠130只用随机数字表法分为对照组(30只)、照射组(40只)、rhIL-11治疗组(30只)、rhIL-11+rhG-CSF治疗组(30只),用3.0 Gy中子照射,并于照射后给予600 μg·kg^－1·d^－1 的rhIL-11和50 μg·kg^－1·d^－1的rhG-CSF,1次/d,共3 d;用血细胞自动分析仪、HE染色、AgNOR染色、流式细胞术、免疫组织化学染色和图像分析等,检测小鼠外周血细胞、骨髓病理形态变化、有核细胞计数、AgNOR含量、凋亡与坏死率和Bax蛋白含量的变化。结果 照射组和rhIL-11治疗组于照射后6 h～3 d,小鼠外周血白细胞、骨髓有核细胞计数和AgNOR含量进行性下降,Bax蛋白于造血细胞胞质内呈阳性至强阳性表达,含量进行性增加(F=0.003,P＜0.01);照射后6 h,照射组小鼠造血细胞凋亡与坏死率增加,以坏死为显著;照射后3 d,rhIL-11+rhG-CSF治疗组小鼠的骨髓有核细胞计数和AgNOR含量均增加(F=0.037、0.026,P＜0.05),Bax蛋白含量减少(F=0.018,P＜0.05);rhIL-11治疗组各指标较照射组差异无统计学意义。结论 3.0 Gy中子照射可使小鼠骨髓造血功能严重受损,rhIL-11和rhG-CSF对照射后小鼠的造血功能恢复有一定改善作用,联合使用效果优于单独使用。     

rhGM—CSF、shEPO在3例急性射病患者救治中的应用

目的：观察rhGM-SCF,rhEPO在3例急性放射病（ARS）救治中的疗效,方法：一例重度ARS患者使用了rhGM-CSF和rhEPO,另两种例中度ARS患者又仅用rhGM-CSF.3例患者均在照后10d,79d检测血清GM－CSF,EPO浓度,结果：使用rhGM-CSF后,外周血白细胞下降速度慢,低值持续时间短,回升速度快,骨髓恢复时间提前,使用rhEPO的患者,外周血网织红细胞为0的持续时间明时间短,回升速度快,骨髓恢复时间提前,使用rhEPO的患者,外周血网织红细胞为0的持续时间明显缩短,骨髓红系增殖池比例增加,3位患者照后10d血清GM－CSF,EPO浓度明显升高,并与受照剂量及骨髓损伤程度相关,结论：rhGM-CSF,rhEPO的应用促进了3例ARS患者造血功能恢复。     

脂多糖刺激树突状细胞前后TLR2、3、4基因表达的检测

目的 检测脂多糖作用于树突状细胞前后TLR2、3、4基因的表达情况。方法 从外周血分离单核细胞，加入rhGM-CSF及rhIL-4，培养的第6天，实验组加入脂多糖刺激24h，对照组不加。分别提取细胞总RNA，行半定量RT-PCR，产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。结果 单核细胞经GM-CSF及IL-4诱导7d后的DC表达较高水平TLR2、3、4。脂多糖刺激24h后，TLR2、3、4表达下降，TLR4几乎测不到。结论 树突状细胞在受脂多糖刺激前后TLRs的表达有显著变化，推测和它的功能成熟有关。     

IL-3和IL-6单独和联合IL-1, G-CSF, GM-CSF对小鼠异基因骨髓移植后血小板计数的影响

我们在一个小鼠异基因骨髓移植模型中检测ＩＬ－３和ＩＬ－６单独和联合ＩＬ－１，Ｇ－ＣＳＦ，ＧＭ－ＣＳＦ对血小板恢复的影响。当单独给予时，与正常对照小鼠比较（２１６×１０９／Ｌ），ＩＬ－６和Ｇ－ＣＳＦ分别显著增加移植后６天血小板计数（３１２×１０９／Ｌ，Ｐ＜０．０５；３０９×１０９／Ｌ，Ｐ＜０．０１）。ＩＬ－３单独给予血小板计数为３０３×１０９／Ｌ，（Ｐ＜０．０５）。在联合给予中，只有ＩＬ－３＋Ｇ－ＣＳＦ显著增加移植后６天血小板计数（３２８×１０９／Ｌ，Ｐ＜０．０５）。     

rhGM-CSF、rhEPO在3例急性放射病患者救治中的应用

目的 观察rhGM-CSF、rhEPO在3例急性放射病(ARS)救治中的疗效。方法 一例重度ARS患者使用了rhGM-CSF和rhEPO,另两例中度ARS患者仅用rhGMCSF.3例患者均在照后10d、79d检测血清GM-CSF、EPO浓度。结果 使用rhGMCSF后,外周血白细胞下降速度慢,低值持续时间短,回升速度快,骨髓恢复时间提前。使用rhEPO的患者,外周血网织红细胞为0的持续时间明显缩短,骨髓红系增殖池比例增加。3位患者照后10d血清GM-CSF、EPO浓度明显升高,并与受照剂量及骨髓损伤程度相关。结论 rhGM-CSF、rhEPO的应用促进了3例ARS患者造血功能恢复。     

细胞因子联合对4.5Gyγ射线照射比格犬造血损伤的治疗作用

目的 观察细胞因子组合对4.5 Gy γ射线照射比格犬造血系统损伤的治疗效果,为极重度骨髓型急性放射病的临床救治提供实验依据。方法 16只比格犬均给予4.5 Gy ⁶⁰Co γ射线全身照射,随机分为照射对照、综合对症和细胞因子3组。细胞因子组动物在综合对症支持治疗的基础上应用rhG-CSF、rhIL-11和rhIL-2联合治疗。2 d检测1次外周血象,分别于照射前4 d,照射后1和45 d收集骨髓和外周血进行造血细胞集落培养,制备胸骨病理切片观察组织形态学改变。结果 照射后各组动物外周血各类细胞数急剧下降,细胞因子联合治疗可提高白细胞最低值(1.04×10⁹/L,而照射对照组和综合对症组分别为0.28×10⁹/L和0.68×10⁹/L),缩短血小板减少持续时间(细胞因子组24 d,综合对症组33 d),使红细胞维持在正常值范围;照射后1 d骨髓及外周血中造血干细胞集落形成率明显下降,照射后45 d 2个治疗组造血干细胞集落数均恢复为照射前水平;照射对照组动物骨髓造血细胞完全消失,细胞因子治疗使得骨髓造血功能完全恢复,与照射前水平比较差异无统计学意义。结论 rhG-CSF、rhIL-11和rhIL-2联合应用可提高极期时外周血白细胞最低值,加速白细胞、血小板和红细胞恢复,促进4.5 Gy γ射线照射犬体内残留造血干/祖细胞的增殖、分化和成熟,从而加速造血功能的重建。rhG-CSF、 rhIL-11和rhIL-2不失为治疗极重度骨髓型急性放射病的有效措施。