流感病毒在MDCK细胞上的培养条件优化

目的探索流感病毒在MDCK细胞中培养的最适条件。方法将流感病毒分别以直接接种法和吸附接种法接种于MDCK细胞,比较其接种效果;选择其中更合理的方法,对其培养条件（培养时间、血清浓度、胰酶浓度、接种量和传代次数）进行比较和优化。结果直接接种法相对于吸附接种法更具优势。最佳收获病毒时间为72 h;胎牛血清对病毒的增殖有明显抑制作用;终浓度为2.5μg/ml的胰酶可明显提高细胞增殖病毒的血凝效价。结论通过对MDCK细胞培养流感病毒条件的优化,可以明显提高流感病毒培养效率。     

甲型流感病毒在MDCK细胞上培养条件的优化

目的优化甲型流感病毒在MDCK细胞上的培养条件,提高甲型流感病毒的分离率和监测效果。方法将三种甲型流感病毒液(甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2)分别接种于MDCK细胞,通过比较不同的病毒接种量(25、50、75、100、125和150μl/cm2)、不同的TPCK-胰酶添加浓度(1.0、1.5、2.0、2.5、3.0和3.5μg/ml)以及不同的MDCK细胞增毒代次(连续盲传四代),对三种甲型流感病毒易感性的影响,确定其最佳分离效果。结果三种甲型流感病毒:甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2的最佳病毒接种量分别为:100、75和75μl/cm2;胰酶最佳使用浓度分别为2.5、2.0和2.0μg/ml;最适宜的细胞增毒传代次数为:一代、二代、二代;低代次的MDCK细胞对甲型H1N1流感病毒的易感性高于季节性H1N1和季节性H3N2;甲型H1N1流感在培养后病毒的HA滴度低于季节性H1N1与季节性H3N2。结论甲型H1N1流感病毒在MDCK细胞上的分离效果低于季节性H1N1与季节性H3N2;季节性H1N1流感病毒和季节性H3N2流感病毒的分离条件基本相同。     

国产与进口胎牛血清培养MDCK细胞及分离流感病毒的效果比较

目的比较某品牌国产与进口胎牛血清用于培养MDCK细胞及分离流感病毒的效果。方法除胎牛血清外,在其它条件相同的情况下培养同批MDCK细胞,比较贴壁情况和细胞形态。选择在两种培养条件下形态良好的细胞,接种流感阳性标本,比较二者的阳性分离率差异及病毒效价。结果在细胞贴壁情况、形态（χ2=22.76,P〈0.05）及标本阳性分离率、病毒效价方面（χ2=7.52,P〈0.05）,进口胎牛血清优于国产试剂,试验结果差异有统计学意义。结论为提高流感监测的阳性分离率,提倡使用进口试剂。     

流感病毒在MDCK细胞上培养条件的优化分析

摘要:目的　优化甲、乙型流感病毒在MDCK细胞上的培养条件,提高流感病毒的分离效果。方法　将5种流感病毒液（甲型流感病毒:甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2和乙型流感病毒:Victoria、Yamagata）分别接种于MDCK细胞,通过比较不同的病毒接种量（30 μl/cm2、60 μl/cm2、90 μl/cm2、120 μl/cm2、150 μl/cm2）、不同的病毒孵育时间（0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h）、不同的TPCK-胰酶添加浓度（1.0 μg/ml、2.0 μg/ml、3.0 μg/ml、4.0 μg/ml、5/0 μg/ml）以及不同的MDCK细胞增毒代次（连续盲传5代）对5种流感病毒易感性的影响,确定其最佳分离效果;对分离后的病毒以红细胞凝集（HA）方法检测病毒滴度,结果　通过对比病毒HA滴度结果,5种流感病毒（甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2、Victoria和Yamagata）的最佳病毒接种量分别为:90 μl/cm2、90 μl/cm2、60 μl/cm2、120 μl/cm2、120 μl/cm2;最佳病毒孵育时间:甲型流感病毒为1.0～1.5 h,乙型流感病毒为2.0～2.5 h;胰酶最佳使用浓度分别是:2.0 μg/ml、2.0 μg/ml、2.0 μg/ml、3.0 μg/ml、3.0 μg/ml;最适宜的细胞增毒传代次数为:1代、3代、2代、2代、2代;甲型流感病毒经培养后病毒的HA滴度低于乙型流感,甲型H1N1流感病毒经培养后HA滴度较低。结论　甲型流感病毒对MDCK细胞的易感性低于乙型流感病毒;甲型H1N1流感病毒的分离效果低于季节性H1N1和季节性H3N2;Victoria与Yamagata的分离条件基本相同。     

流感病毒不同分离方法的比较

[目的]比较MDCK细胞和鸡胚对流感病毒的敏感性。[方法]对1998年采集的上呼吸道标本分别接种MDCK细胞及鸡胚进行比较。[结果]两种方法从433份标本中共分离流感病毒31株。其中甲3型25株、乙型6株。MDCK细胞分离甲3型25株、乙型5株;鸡胚分离甲3型9株、乙型5株。[结论]MDCK细胞分离甲3亚型流感病毒比鸡胚敏感,乙型无显著差别,因此,要提高分离率,最好用两种方法同时进行分离。     

Vero-E6、MDCK、293细胞对SARS冠状病毒敏感性的研究

目的 研究Vero—E6、MDCK、293细胞对SARS冠状病毒的敏感性，为该病的病原学研究、诊断和疫苗制备奠定基础。方法 用Vero—E6、MDCK及293细胞对广东省部分SARS病人的咽拭子标本进行分离培养，并对分离物使用电镜、间接免疫荧光(IFA)及荧光定量聚合酶链反应(FQ—PCR)的方法分别检测细胞和(或)培养上清波中的病毒含量。结果 感染SARS病人的咽拭子标本后，Vero—E6细胞出现病变(CPE)最早，电镜中可观察到Vero—E6细胞中大量的病毒颗粒，IFA试验感染病毒的Vero—E6细胞与SAPS病人的恢复期血清呈强阳性反应，FQ—PCR结果显示Vero—E6感染细胞内的病毒含量10^8拷贝／ml，高于293细胞(10^6拷贝／ml)及：MDCK(104拷贝／ml)。结论 三种细胞对SARS相关病毒的敏感性不同，Vero—E6是SARS相关病毒最敏感的宿主细胞。     

攀枝花市首次用MDCK细胞分离出流感病毒

流行性感冒(流感)是由甲、乙、丙三型流感病毒引起的急性呼吸道传染病,临床表现为起病急、高热、肌痛、头痛,伴有严重不适、干咳、咽痛或鼻塞,多数患者可在一到两周内恢复.流感潜伏期短,经呼吸道飞沫传播,传播迅速,抗原易变异,人群对变异株普遍易感,控制难度大.     

流感病毒咽拭子处理方式对其病毒分离率影响的研究

目的 通过采用咽拭子中加入青链霉素混合液或使用过滤器直接过滤标本的方式,对比两种处理方法对流感病毒分离率的影响。 方法 选择2017年10月1日至12月31日贵阳市哨点医院及各区、市、县疾控中心采集的流感样病例(ILI)咽拭子中PCR核酸检测阳性的标本200份,将同一份标本分为两份,一份加入青链霉素混合液（双抗）4℃过夜,另一份使用0.22μm的过滤器直接过滤标本,采用 MDCK 细胞进行流感病毒的分离培养,通过观察CPE（细胞病变效应）确定病毒收获时间进行HA（血凝）试验,并对病毒液进行无菌试验。 结果 （1）200份标本经两种方法分别处理后,双抗组病毒液受细菌污染数为37瓶,病毒液污染率为18.5%;过滤膜处理组病毒液受细菌污染数为4瓶,病毒液污染率为2%,双抗处理组污染率高于过滤膜处理组,差异有统计学意义（〖XC小五号.EPS;P〗=29.594, P=0.000<0.05）;（2）去除污染的毒株后,双抗处理组分离流感病毒97株,分离率为48.5%;过滤膜处理组成功分离流感病毒102株,则病毒分离率为51.0%,滤膜处理组病毒分离率与双抗处理组比较,差异无统计学意义（〖XC小五号.EPS;P〗=0.250,P=0.617>0.05）。 结论 两种方法处理流感病毒咽拭子标本后,病毒分离率无明显差异,但使用过滤器直接过滤标本的方式可显著降低病毒分离期间被细菌污染的风险。     

大蒜提取物抑制流感病毒在MDCK细胞上的增殖作用

目的 探讨大蒜提取物G、G1、G2抑制流感病毒在MDCK细胞上的增殖作用.方法 以利巴韦林为阳性对照药物,用不同方法获得的不同浓度大蒜提取物作用于流感病毒感染的MDCK细胞,以MTT法检测细胞存活率,判断大蒜抗流感病毒的效果.结果 G1对MDCK细胞的半数毒性浓度(CC50)为(60.39±7.00)mg/mL,抑制流感病毒增殖的半数有效浓度(EC50)为(15.00±4.36)mg/mL,选择性指数(S1=CC50/EC50)为4.03;G2的CC50为(50.93±10.17)mg/mL,但其抑制流感病毒的效果未超过50%;G无抑制效果.结论 G1在MDCK细胞上对流感病毒有明显的抑制作用,G2抑制作用并不明显,而G无抑制作用.结果 证明,不同提取方法其抑制作用有所差别.

Abstract：

Objective To study the effects of garlic extracts G,G1,G2 against influenza virus in MDCK cell.Methods By using ribavirin as a positive control drug,the different concentration garlic extracts collected by different methods acted on MDCK cell which infected influenza virus before,and by MTT method to detect cell viability to assess the effects of garlic.Results The median cytotoxic concentration(CC50) of G1 was(60.39±7.00 ) mg/mL,the median effective concentration(EC50) against influenza virus in MDCK cell was(15.00 ± 4.36) mg/mL and the selectivity index was 4.03.The CC50 of G2 was(50.93±10.17) mg/mL,the effects of inhibiting influenza virus did not exceed 50%.There was no inhibiting effects in CC5o of G.Conclusions The study suggests that the G1 has obviously inhibited effects on influenza virus in MDCK cell,while the G2 is not obvious,and the G has no inhibited effects.This result shows that the inhibitory effects of garlic in the different extraction methods are different.     

用鸡胚和MDCK细胞分离流感病毒的实验研究

目的 通过两种分离流感病毒方法的比较,提高流感病毒分离率和流感监测效果.方法 对50.0份咽拭子标本同时采用MDCK细胞培养法和鸡胚双腔培养法分离.结果 细胞培养法分离流感病毒35株,分离率为7%:鸡胚双腔培养法分离流感病毒12株,分离率为2.4%.共35株病毒株,其中A₃型15株,S型20株.结论 流感病毒分离中,细胞培养法比鸡胚培养法敏感,同时用两种方法培养,可明显提高流感病毒分病率.     

The immune modulation of Bacillus cereus var. Toyoi in mice immunized with experimental inactivated Bovine Herpesvirus Type 5 vaccine

In recent years, there been significant progress toward develop more efficient vaccines. Different compounds with adjuvant capacity have been tested; however, no compound has emerged that suitable for universal use. Several efforts have been made to produce effective vaccines against Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5), an important cattle pathogen. In this study we examine the use the probiotic Bacillus cereus var. Toyoi as a potential adjuvant to improve BoHV-5 vaccine efficacy. We observed in the supplemented animals a systemic enhanced IgG antibody response toward Th1, and increased IFN-γ, IL-12 and IL-10 cytokines mRNA levels. These results suggest that this probiotic could provide a promising means of improving vaccine efficacy, particularly those vaccines that rely on a cell-mediated immune response.     

社区医护人员对甲型H1N1流感的态度及行为调查

目的了解社区卫生服务机构医护人员对甲型H1N1流感的态度及行为状况。方法采用自行设计的调查问卷,对广州市69家社区卫生服务机构的1000名医护人员进行现场自填式问卷调查。结果有55.1%的医护人员对甲型H1N1流感的态度表现为＂很积极＂或＂较积极＂,有19.1%的医护人员表现为＂较消极＂或＂很消极＂。甲型H1N1流感流行前后医生和护理人员戴口罩、洗手情况的差异都具有显著性意义（P〈0.01）;医生和护士参加过甲型H1N1流感相关技术指南培训的比例分别为47.2%和29.9%,医护之间的差异具有显著性（P〈0.01）;74.4%的医生和74.7%的护理人员都能向病人提供最新的有关甲型H1N1流感防控的相关信息。结论社区医护人员对甲型H1N1流感的态度总体比较积极,疫情发生后个人防护行为有所改善,政府和社区卫生服务机构应加强对医护人员的培训,并对其防护行为进行指导和监督。     

实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒病毒的比较

目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒(流感)病毒的灵敏度与特异性.方法采用建立的实时荧光定量RT-PCR、RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离等3种方法,同时对流感监测点送检的60份疑似流感标本检测甲3型流感病毒.结果细胞病毒分离的阳性数为10份,RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR的阳性数分别为12份和15份.实时荧光定量RT-PCR的灵敏度达0.01TCID50且对甲1型流感病毒、乙型流感病毒、禽流感病毒H5、严重急性呼吸道综合征冠状病毒及其它呼吸道病毒均无交叉反应,从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右.结论实时荧光定量RT-PCR由于检测在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染,且是3种方法中最为快速敏感的方法,适用于公共卫生应急疫情的实验室快速诊断.     

三种方法检测人乳头瘤病毒的比较

目的比较基因芯片分型法、PCR荧光定量法、免疫组织化学法检测人乳头瘤病毒（humanpa pillomavirus,HPV）的敏感性,为临床人乳头瘤病毒检测提供适用的方法。方法收集2002至2007年在本院就诊的宫颈癌病例200例,采用新鲜宫颈癌组织进行人乳头瘤病毒基因芯片分型检测;在上述200例患者中进取自愿接受荧光定量PCR检测的患者134例,收取宫颈癌灶分泌物,采用荧光定量PCR检测方法检测人乳头瘤病毒;对在上述134例宫颈癌患者中,选取自愿接受免疫组织化学检测的患者利用石蜡包埋宫颈癌组织,采用免疫组织化学法检测人乳头瘤病毒。结果基因芯片分型法检测人乳头瘤病毒呈阳性为188例,阳性率为94．0％（188／200）,其中HPV-16／-18阳性率为95．74％（180／188）。荧光定量PCR法检测HPV-16／18阳性率为36．57％（49／134）;免疫组化法检测HPV-16／18阳性率为46．51％（60／129）。荧光定量PCR检测和免疫组化法检测人乳头瘤病毒呈阳性者,在基因芯片分型法检测中均呈阳性。基因芯片分型法人乳头瘤病毒检出率与荧光定量PCR检测和免疫组化法比较,差异有显著意义（P〈O．05）,而后两种方法比较,差异无显著意义（P〉0．05）。结论基因芯片分型技术检测人乳头瘤病毒具有敏感性好,且同时可以分型的明显优势,适用于临床人乳头瘤病毒感染的诊断和研究。     

Mutations of Novel Influenza A(H10N8) Virus in Chicken Eggs and MDCK Cells

The recent emergence of human infection with influenza A(H10N8) virus is an urgent public health concern. Genomic analysis showed that the virus was conserved in chicken eggs but presented substantial adaptive mutations in MDCK cells. Our results provide additional evidence for the avian origin of this influenza virus.     

Immunomodulatory Activity of Red Ginseng against Influenza A Virus Infection

Ginseng herbal medicine has been known to have beneficial effects on improving human health. We investigated whether red ginseng extract (RGE) has preventive effects on influenza A virus infection in vivo and in vitro. RGE was found to improve survival of human lung epithelial cells upon influenza virus infection. Also, RGE treatment reduced the expression of pro-inflammatory genes (IL-6, IL-8) probably in part through interference with the formation of reactive oxygen species by influenza A virus infection. Long-term oral administration of mice with RGE showed multiple immunomodulatory effects such as stimulating antiviral cytokine IFN-γ production after influenza A virus infection. In addition, RGE administration in mice inhibited the infiltration of inflammatory cells into the bronchial lumens. Therefore, RGE might have the potential beneficial effects on preventing influenza A virus infections via its multiple immunomodulatory functions.     

牙龈卟啉单胞菌对感染流感病毒肺上皮细胞一氧化氮合酶的影响

目的观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)对感染流感病毒(H1N1)肺上皮细胞一氧化氮合酶的影响,以期为探讨牙周病在肺疾病发病机制中的作用提供临床依据。方法利用不同MOI值P.gingivalis与MOI值为2的H1N1共同感染于肺上皮细胞,未感染的细胞作为阴性对照。利用硝酸还原酶法测定上清液中NO的浓度;Westernblot检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)表达水平。结果各组细胞在4 h、8 h、12 h、24 h内NO生成均有增加。4 h、8 h、12 h、24 h后E组NO的量分别为41.404±3.079、78.945±3.001、592.983±1.690、2360.660±4.199μmol/L,8 h、12 h、24 h与对照组比较差异有显著性(P0.05)。12 h、24 h P.gingivalis促进H1N1感染的肺上皮细胞i NOS蛋白水平的表达,与对照组相比差异有显著性(P0.05)。结论 P.gingivalis与H1N1共同作用于肺上皮细胞能够促进i NOS的表达,最终促进NO的生成。