严重烧伤患者CD14基因多态性对高迁移率族蛋白B1表达的影响

目的 了解LPS受体CD14C-159T基因多态性对严重烧伤患者伤后高迁移率族蛋白B1(HMGB1)合成、释放的影响以及与脓毒症的关系.方法 采集35例烧伤总面积大于或等于30%TBSA患者伤后1、3、5、7、14、21、28 d静脉血.另设11名志愿者作为健康对照组.采用PCR-限制性片段长度多态性方法检测CD14-159C/T基因多态性,ELISA法检测血浆HMGB1水平,RT-PCR法检测HMGB1 tuRNA表达.对数据行χ~2检验、方差分析和t检验.结果 35例患者的CD14基因C-159T基因型中,CC纯合子型7例占20.0%、TC杂合子型16例占45.7%、TT等位基因纯合子型12例占34.3%.T等位基因和C等位基因分布的频率为57.2%和42.8%.验证表明,此研究群体达到了Hard-Weinberg平衡.在CD14C-159T基因型中,CC纯合子型患者发生脓毒症的概率较TC杂合子型、TT等位基因纯合子型低.3例CC纯合子型脓毒症患者中,仅1例死亡;9例TC杂合子型脓毒症患者中4例死亡;7例TT等位基因纯合子型脓毒症患者中4例死亡.与健康对照组比较伤后1 d患者血浆HMGB1水平即迅速升高,伤后14、21、28 d TC杂合子型、TT等位基因纯合子型患者血浆HMGB1水平均显著高于CC纯合子型(F值为3.5671、4.2035、3.8529,P<0.05或P<0.01).伤后14 d脓毒症组患者外周血白细胞HMGB1 mRNA表达量为1.5±0.5,显著高于非脓毒症组患者(1.2±0.4,t=-2.205,P<0.05).伤后7、21 d脓毒症组患者血浆HMGB1水平分别为(44±29)、(25±15)ng/mL,均高于非脓毒症组患者的(26±12)、(10±6)ng/mL(t值分别为-2.355、-3.872,P<0.05或P<0.01).结论 CD14C-159T基因多态性可显著影响严重烧伤后HMGB1的合成与释放,并与烧伤患者脓毒症易感性有关.     

CD14-159C/T基因多态性对全血培养CD14表达的影响

目的探讨CD14基因启动子-159C/T基因多态性对全血培养CD14mRNA表达及可溶性CD14(sCD14)浓度的影响。方法采集118例健康献血员血标本,用全血细胞培养模型检测内毒素刺激前后CD14mRNA表达及sCD14浓度的变化。采用聚合酶链反应(PCR)及限制性内切酶HaeⅢ对PCR产物的消化作用检测CD14基因多态性。同时,对内毒素刺激后肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱生水平进行了分析。结果118例健康献血员中,等位基因T和C的频率分别为60.2%和39.8%;40例是T等位基因纯合子(TT),62例为杂合子(TC),还有16例基因型为CC。基因型TT与TC白细胞中CD14mRNA的表达及上清液sCD14浓度均明显高于CC纯合子(P<0.05或0.01)。并且TT纯合子TNF-α诱生水平为(352±215)pg/ml,显著高于基因型TC及CC[(261±163)pg/ml及(198±122)pg/ml,P<0.05]。结论内毒素受体CD14-159C/T基因多态性对全血培养CD14的表达及释放产生显著影响,并与内毒素诱导TNF-α的反应性相关。     

CD14基因多态性与严重烧伤患者T淋巴细胞免疫功能的相关性研究

目的 探讨严重烧伤患者CD14基因多态性与T淋巴细胞免疫功能的关系.方法 采集77例烧伤体表总面积大于30%患者血标本,通过聚合酶链反应.限制性片段长度多态性方法检测CD14-159C/T基因多态性,观察其外周血T淋巴细胞增殖反应和白细胞介素-2(IL-2)的产生能力,并通过流式细胞仪检测T淋巴细胞CD4+/CD8+的比值、CD4+细胞的凋亡率.结果 严重烧伤后患者T淋巴细胞增殖能力明显下降,与CC纯合子患者比较,TT、TC基因型患者伤后第5、21、28天T淋巴细胞对丝裂原刺激增殖反应显著受抑(P<0.05或P<0.01).烧伤后携带TC、TT型患者IL-2产生一直处于较低水平,而CC型在伤后14 d分泌IL-2逐渐上升.与CC型患者比较,携带TT、TC型患者T淋巴细胞比值均降低,尤其在伤后第1、3、14、21、28天差异明显(P<0.05或P<0.01).三型CD3+CD4+T淋巴细胞凋亡率比较,TT型患者伤后第5、7、21天凋亡率显著高于CC型患者(P<0.05),TC型患者伤后7、14 d其凋亡率高于CC型患者(P<0.05),而,TT、TC型之间上述免疫功能指标比较均无显著差异(P>0.05).结论 CD14-159C/T多态性可影响大面积烧伤患者T淋巴细胞免疫功能状态,进而参与了严重感染并发症的发生与发展过程.     

CD14基因启动子区-159位点多态性在重度烧伤患者中的分布及意义

目的 了解CD14基因启动子-159C/T基因多态性与严重烧伤患者CD14 mRNA表达及血浆可溶性CD14(sCD14)水平的关系.方法 2004年6月-2006年6月,选择2个笔者单位收治的烧伤总面积大于或等于30%TBSA的患者77例,分别于伤后1、3、5、7、14、21、28 d抽取患者静脉血,采用PCR-限制性片段长度多态性法检测血浆CD14-159C/T基因多态性,酶联免疫吸附测定法、RT-PCR法检测患者血浆sCD14的含量及白细胞CD14 mRNA表达.结果 77例患者的CD14基因C-159T基因型中,CC纯合子型7例占9.1%、TC杂合子型49例占63.6%、TT等位基因纯合子型21例占27.3%,T等位基因和C等位基因分布频率分别为59.1%和40.9%.经检验表明,此研究群体达到了Hard-Weinberg平衡.7例CC纯合子型患者中并发脓毒症3例占42.9%,49例TC杂合子型并发该症38例占77.6%,21例TT等位基因纯合子型并发该症15例占71.4%.3例CC纯合子型脓毒症患者中,1例出现MODS;38例TC杂合子型脓毒症患者19例出现MODS占50.0%;15例TT等位基因纯合子型脓毒症患者10例出现MODS占66.7%.伤后7～21 d TC杂合子型、TT等位基因纯合子型患者外周血CD14 mRNA表达明显高于CC纯合子型患者(P＜0.05或P＜0.01).伤后7d TC杂合子型、TT等位基因纯合子型患者CD14 mRNA表达达高峰,分别为1.18±0.25、1.15±0.35.烧伤后TC杂合子型、TT等位基因纯合子型患者血浆中sCD14含量较高,伤后5 d CC纯合子型患者血浆sCD14含量(85±46)μg/L显著低于TC杂合子型患者[(134±43)μg/L,P＜0.01];伤后21、28 d TC杂合子型、TT等位基因纯合子型患者sCD14含量明显高于CC纯合子型患者(P＜0.01).结论 大面积烧伤后CD14基因启动子-159位点多态性TT基因型可能是烧伤感染患者发生MODS的主要基因标志物之一.携带TT基因型的烧伤脓毒症患者并发MODS概率高于其他基因型.     

CD14基因-260A/G位点多态性与前列腺癌易感性的研究

目的研究CD14基因-260A/G位点多态性与前列腺癌易感性的关系。方法提取168例前列腺癌患者和208例对照组的外周血DNA标本,应用聚合酶链反应-连接酶特异检测技术（polymerase chain reaction-ligase detection reaction,PCR-LDR）分析前列腺癌患者CD14-260A/G位点多态性,比较不同基因型和前列腺癌易感性的关系,并探讨不同基因型与前列腺癌患者年龄、体重指数（body mass index,BMI）、吸烟、饮酒及肿瘤家族史的关系。结果总体来说CD14基因-260A/G多态性与前列腺癌易感性之间无显著相关性（P=0.284,OR=1.27,95%CI=0.82～1.94）;饮酒（P=0.003）和肿瘤家族史（P〈0.001）与前列腺癌的发生密切相关;在分层分析中,年龄〈70岁的男性携带CD14-260G（AG＋GG）等位基因者能增加前列腺癌的易感性（P=0.011,OR=2.93,95%CI=1.28～6.70）。结论 CD14基因-260A/G位点多态性在总体上与前列腺癌易感性无显著相关性,但在年龄小于70岁男性中,携带有CD14-260G等位基因者患前列腺癌的危险性却明显增高。     

严重烧伤后小鼠腹腔巨噬细胞（Mφ）CD14表达的变化

目的 探讨烧伤后早期腹腔Mφ CD14分子的动态变化。方法 采用小鼠20％TB-SAⅢ度烧伤模型，分离和培养小鼠腹腔Mφ，用免疫组织化学、RT—PCR和ELISA方法，观察了烧伤复苏组和延迟复苏组伤后24h内不同时间腹腔Mφ表达CD14和CD14 mRNA、分泌肿瘤坏死因子(TNF)和白介素-6(IL-6)的变化。结果 烧伤复苏组和延迟复苏组在伤后1h腹腔Mφ表达CD14和分泌TNFα、IL-6明显增加，这种改变在伤后24h内持续。结论烧伤能增加Mφ CD14 mRNA的表达，从而使Mφ易于被很低浓度内毒素(LPS)激活，Mφ的致敏和激活使其在伤后过度炎症反应的发生发展中起重要作用。     

严重烧伤患者人白细胞抗原DR定量表达的临床意义

目的探讨严重烧伤患者人白细胞抗原DR（HLA—DR）定量表达的变化规律及其临床意义。方法采集77例烧伤大于体表总面积30％的患者的血样,通过流式细胞技术对患者烧伤后不同时段CD14^＋单核细胞表面HLA—DR结合量进行动态的定量分析。结果严重烧伤患者伤后第1天开始CD14^＋单核细胞表面HLA—DR结合量明显低于正常对照组（P〈0．05）,其表达均值与烧伤面积呈显著负相关（r=-0．7232,P〈0．05）。并发多脏器功能障碍综合征（MODS）者其CD14^＋单核细胞表面的HLA—DR表达量持续下降,其中伤后第3、14、21、28天显著低于非MODS组（P〈0．05）。随着CD14^＋单核细胞HLA—DR表达水平的下降,MODS发生频率增加,患者预后不良。结论大面积烧伤可导致机体CD14^＋单核细胞HLA—DR表达严重受损和免疫功能障碍,动态观察其表达水平有助于烧伤后MODS的病程监测及患者预后判断。     

烧伤延迟复苏对CD14+单核细胞HLA-DR表达率和外周血淋巴细胞凋亡率的影响

目的:探讨烧伤延迟复苏对CD14 单核细胞人类白细胞组织相容性抗原-DR(HLA-DR)表达率和外周血淋巴细胞凋亡率的影响及其机制。方法:50例烧伤面积大于30%的烧伤患者,按伤后是否及时有效复苏分为延迟复苏组和非延迟复苏组,于伤后1、3、7、14、28d取外周血。流式细胞术检测CD14 单核细胞HLA-DR表达率和外周血淋巴细胞凋亡率。20例健康体检者外周血检测上述指标作为对照。结果:烧伤患者外周血CD14 单核细胞HLA-DR表达率明显低于正常对照组(P均<0.01),延迟复苏患者明显低于非延迟复苏患者(P<0.05或P<0.01)。烧伤患者外周血淋巴细胞凋亡率明显高于正常对照组(P<0.05),延迟复苏患者明显高于非延迟复苏患者,伤后7和28d差异有显著性(P<0.05)。结论:烧伤患者免疫功能低下,动态检测患者的免疫功能状态对患者预后具有指导意义。     

CD24在胃癌中的表达及其临床意义

目的检测CD24mRNA和蛋白在胃癌原发灶、癌旁黏膜及区域淋巴结中的表达情况．并探讨其表达与胃癌临床病理特征及预后的关系。方法对收集的55例胃癌患者的标本．采用RT-PCR和免疫组织化学染色的方法．检测CD24在胃癌原发灶、癌旁黏膜及区域淋巴结中的表达情况．并分析CD24的表达情况与患者临床病理特征及预后之间的关系。结果胃癌中CD24mRNA和蛋白的表达均高于癌旁黏膜（P〈0．05）：转移淋巴结中CD24mRNA和蛋白的表达均高于未转移淋巴结（P〈0．05）。除男性患者CD24的表达高于女性患者（P〈0．05）．CD24的表达与其他临床病理特征及预后之间并无相关性（均P〉0．05）。结论CD24的高表达可能在胃癌的发生和转移中具有重要作用。     

烫伤合并金葡菌感染大鼠组织CD14 mRNA的改变

目的　探讨细菌脂多糖受体CD14在烫伤合并金黄色葡萄球菌 (金葡菌 )感染中的变化规律及其意义。　方法　采用大鼠 2 0 %总体表面积Ⅲ度烫伤合并金葡菌攻击造成脓毒症模型 ,动态检测心、肝、肺、肾等重要器官中CD14mRNA表达的改变 ,同时观察内毒素在动物循环及主要脏器内的分布特点。　结果　烫伤合并金葡菌脓毒症早期 ,各脏器内毒素含量即明显高于正常对照组 ,并于2～ 6h达峰值 ,其中以肝、肺组织内毒素水平升高幅度最为显著 (P <0 .0 5 )。而血浆内毒素水平亦于伤后 2h显著高于正常对照组 (分别为 0 .30 5 6EU/ml和 0 .12 5 0EU/ml,P <0 .0 5 )。与此同时 ,小肠组织中二胺氧化酶的活性明显降低 (P <0 .0 5 )。烫伤合并金葡菌感染后 ,各组织CD14mRNA的表达亦呈不同程度升高 (P <0 .0 5 ) ,其中肺脏改变尤为显著 ,伤后 6、2 4h肺脏CD14mRNA表达分别为正常对照组的 1.80和 1.81倍。　结论　烫伤合并金葡菌攻击可导致内毒素移位和组织CD14mR NA表达不同程度升高 ,CD14基因表达的上调可能与移位内毒素的刺激作用有关。     

Influence of CD14 polymorphism on CD14 expression in patients with extensive burns

We sought to investigate the association of CD14 genotype with the risk of mortality after burn, and we also attempted to evaluate whether CD14-159 C/T polymorphism affects the kinetics and extent of CD14 expression as well as its release, and TNF-alpha expression in burned patients. The study involved 64 patients in Chinese Han population incurring burns covering more than 30% of the total body surface area. CD14 polymorphism was determined by polymerase chain reaction (PCR) and subsequent restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis. Meanwhile, leukocyte CD14 mRNA expression and soluble CD14 (sCD14) levels were measured during a 28-day observation period. TNF-alpha mRNA and protein levels were also determined in patients with different genotypes of CD14. On day 21 after burn, CD14 mRNA expression and sCD14 levels were significantly higher in TT homozygotes than in CC genotypes (1.33+/-0.36 microg/ml vs. 0.75+/-0.28 microg/ml and 16.1+/-4.6 microg/ml vs. 9.7+/-3.4 microg/ml, P<0.05), and these values were also higher in non-survivors than in survivors (1.32+/-0.40 microg/ml vs. 0.87+/-0.32 microg/ml and 14.8+/-4.5 microg/ml vs. 11.1+/-4.8 microg/ml, P<0.05). In addition, TNF-alpha mRNA and protein levels were significantly lower in both CC homozygotes and survivors than in TT genotypes or non-survivors during the 28-day observation period (P<0.05). However, TT genotype did not impart an increased risk for burn mortality in this small study. In conclusion, CD14-159 C/T polymorphism might be associated with the kinetics and extent of CD14 expression as well as its release, and it was also related to TNF-alpha expression. However, this study did not confirm CD14-159 C/T polymorphism was associated with the outcome of extensive burns.     

烧伤后多器官功能障碍综合征患者可溶性脂多糖受体CD14的变化

目的探讨可溶性脂多糖受体ＣＤ１４（ｓＣＤ１４）与严重烧伤后多器官功能障碍综合征（ＭＯＤＳ）发生、发展的关系及ｓＣＤ１４诱生的可能机制。方法烧伤总面积大于７０％患者２２例,其中并发ＭＯＤＳ者９例,非ＭＯＤＳ者１３例。分别于伤后２４小时、第３、７、１４、２１、２８天收集血标本,检测ｓＣＤ１４、内毒素及肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）含量。结果大面积烧伤后第７天患者血清ｓＣＤ１４水平明显升高,且持续至伤后第３周。伤后第７、１４、２１天ＭＯＤＳ组血清ｓＣＤ１４水平显著高于非ＭＯＤＳ组（Ｐ＜００５）,其变化与循环内毒素呈显著正相关。同时,随着ｓＣＤ１４均值上升,患者死亡率亦逐渐增高。结论ｓＣＤ１４与严重烧伤后ＭＯＤＳ的发生、发展密切相关,动态监测其变化对ＭＯＤＳ的发生及病情转归具有一定的预警意义     

Time course of CD marker expression in patients with burns and its prognostic value

Introduction

Due to immune suppression sepsis has remained the leading cause of mortality after burns. CD marker expression in circulating blood has not been fully examined in humans. The aim of our study was to asses CD marker expression after burns and to compare it between survivors and non-survivors.

Patients and methods

Blood samples from all patients (n = 35) receiving intensive care treatment with more than 20% burned surface area were collected on admission and 5 consecutive days thereafter. Expressions of CD11a, CD11b, CD18, CD49d, CD97 and CD14 were measured on granulocytes, lymphocytes and monocytes.

Results

Expressions of granulocytes CD11a (days 1–2), CD18 (day 1), lymphocytes CD11a (days 1–5), CD11b (days 2–4), CD18 (days 1–6), CD49d (days 1–6), CD97 (day 1), monocytes CD11a (days 1–6), CD11b (day 2 and 5–6), CD18 (days 1–6), CD49d (days 1–6), CD97 (days 1–2), and CD14 (days 4–6) were significantly lower in patients than in healthy controls.Expressions of granulocyte CD11a (days 3–6), lymphocytes CD11a (days 3–6), CD11b (days 4–6), CD18 (days 4–6), monocyte CD97 (days 3–6) were significantly higher in survivors (n = 20) than in non-survivors (n = 15).

Conclusion

These results suggest that burns is associated with immunosuppression and overwhelming anti-inflammatory processes may be signs of bad prognosis.     

严重烧伤患者血浆凝溶胶蛋白水平及其与预后的关系

目的 观察严重烧伤患者血浆凝溶胶蛋白水平变化规律,探讨其与脓毒症和死亡之间的关系. 方法 2010年5月-2012年5月,将2家笔者单位收治的102例烧伤总面积大于或等于30％ TBSA的患者设为烧伤组,另设25名健康志愿者为健康对照组.分别于伤后1、3、7、14、21 d采集患者外周静脉血,双抗体夹心ELISA法检测血浆凝溶胶蛋白水平;同法取健康对照组人员血液行相同检测.(1)按烧伤总面积将烧伤组患者分为小面积(30％ ～ 49％ TBSA)烧伤组39例、中面积(大于49％且小于或等于69％ TBSA)烧伤组33例、大面积(大于69％且小于或等于99％ TBSA)烧伤组30例;(2)根据烧伤脓毒症诊断标准,将烧伤组患者分为脓毒症组43例与非脓毒症组59例;(3)根据脓毒症患者的预后情况,将脓毒症组患者分为脓毒症死亡组14例与脓毒症存活组29例.比较各组患者血浆凝溶胶蛋白水平,分析其与患者并发脓毒症及死亡的关系.对数据进行方差分析、LSD检验、单因素Logistic回归分析. 结果 (1)伤后l、3、7、14、21 d,烧伤组患者血浆凝溶胶蛋白水平均较健康对照组明显降低(F值分别为140.01、369.52、702.15、360.14、84.16,P值均小于0.01).(2)大、中、小面积烧伤组患者血浆凝溶胶蛋白水平5个时相点均值分别为(43±11)、(85 ±23)、(124±38) mg/L,组间比较差异有统计学意义(F=367.76,P＜0.01),且均明显低于健康对照组的(326±51) mg/L(P值均小于0.01).(3)脓毒症组、非脓毒症组患者血浆凝溶胶蛋白水平5个时相点均值分别为(77±12)、(122±38)mg/L,脓毒症组患者伤后3、7、14、21 d血浆凝溶胶蛋白水平显著低于非脓毒症组(F值分别为30.35、111.59、209.36、422.76,P值均小于0.01).(4)脓毒症死亡组、脓毒症存活组患者血浆凝溶胶蛋白水平5个时相点均值分别为(53±8)、(103±25) mg/L,脓毒症死亡组患者伤后1 ～21 d血浆凝溶胶蛋白水平均显著低于脓毒症存活组(F值分别为9.05、18.48、41.34、107.11、180.48,P值均小于0.01).(5)Logistic回归分析显示,血浆凝溶胶蛋白水平是患者并发脓毒症(优势比为5.44,95％置信区间为2.35 ～12.74,P＜0.01)及死亡(优势比为5.52,95％置信区间为2.34～12.19,P＜0.01)的独立危险因素. 结论 严重烧伤可导致患者血浆凝溶胶蛋白水平明显降低,患者烧伤面积越大、病情越重该指标水平越低.凝溶胶蛋白水平可作为早期预测严重烧伤患者并发脓毒症或死亡的独立指标.     

乳腺浸润性导管癌中CD74的表达及临床意义

目的:研究乳腺浸润性导管癌中CD74的表达及其临床意义.方法:用免疫组化技术检测45例乳腺浸润性导管癌组织中CD74,雌激素受体(ER),孕激素受体(PR)及c-erbB-2的表达,分析CD74表达与ER,PR及c-erbB-2表达及临床病理特征和预后的关系;观察乳腺癌MB-MDA-435细胞(高侵袭性),MCF-7细胞(低侵袭性)和转染CD74表达质粒的MCF-7细胞中CD74蛋白的表达,并用Transwell小室检测3种细胞的侵袭能力.结果:乳腺浸润性导管癌中,CD74的表达量与病理分级有关(P＜0.01),癌细胞分化愈差则CD74表达愈高;CD74在受体阳性组中的表达率明显低于受体阴性组(P＜0.01);三阴乳腺癌中CD74的阳性表达率明显高于非三阴乳腺癌组(P＜0.01);CD74阳性患者淋巴结转移率明显高于阴性表达者(P＜0.01);CD74表达阳性与否与患者的5年生存率未见明显关系性.高侵袭性MB-MDA-435细胞CD74蛋白表达量明显高于低侵袭性MCF-7细胞;MCF-7细胞转染CD74表达质粒后侵袭能力明显增强.结论:CD74可能在乳腺癌的侵袭和淋巴结转移中起着重要作用,并有可能成为一种潜在的高侵袭性乳腺癌特别是三阴乳腺癌的标志物.