RT—PCR方法检测病毒性心肌炎病原体

应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），对１０４０例疑似病毒性心肌炎患者的静脉血进行检测，共检出各种病毒感染者６１２例（５８．８４％）。其中检出感染柯萨奇病毒３８０例（６２．０９％），埃可病毒１２９例（２１．０７％），柯萨奇与埃可病毒合并感染８２例（１３．３０％），脊髓灰质炎病毒２１例（３．４３％）。结果表明，柯萨奇病毒的检出高于其它种病毒（Ｐ〈０．０５）。心电图有异常改变的占２０％，主要是ＳＴ段     

RT-PCR方法检测非神经元、类神经元、神经元细胞系中淀粉样前体蛋白基因表达

目的与方法：根据人淀粉样前体蛋白（ａｍｙｌｏｉｄｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＰＰ）基因ｃＤＮＡ序列设计的引物，提取总ＲＮＡ，利用ＲＴＰＣＲ方法检测非神经、类神经及神经细胞系ＡＰＰ基因的表达。结果：利用专门设计的引物不能检测野生型ＣＯＳ７细胞中ＡＰＰ基因的表达，但可以检测转染人ＡＰＰ基因的非神经元类ＣＯＳ７细胞，类神经元的野生型ＰＣ１２及人神经母细胞瘤细胞ＳＨＳＹ５Ｙ细胞中ＡＰＰ基因的表达。结论：利用特异设计的人ＡＰＰ基因引物及ＲＴＰＣＲ方法可以检测类神经及神经细胞系ＡＰＰ基因的表达     

庚型肝炎病毒的RT—PCR法检测

根据国外报道的庚型肝炎病毒基因组序列设计两对５’非编码区引物，用ＲＴ－ＰＣＲ法检测了２４例丙型肝炎和１０例透析病人血清静 标本。结果丙型肝炎病人透析病人各１例检出ＨＧＶ ＲＮＡ，占总受检例数的５．８８％。本研究说明了ＨＧＶ在我国的存在，提示开展ＨＧＶ相关研究的必要性。     

用原位RT—PCR技术检测大肠癌组织中相关新基因SNC66的表达

目的：探讨在肿瘤组织石蜡切片标本中原位检测内源性基因表达产物的灵敏方法，研究大肠癌相关新基因SNC66在大肠癌组织中的表达情况以及与大肠癌的相关性。方法：经原位逆转录后进行原位PCR扩增，在扩增过程中掺入地高辛标记的核苷酸（Dig-UTP)并加以检测。比较SNC66在大肠粘膜和大肠癌组织中的表达情况。结果：25个循环时，37例大肠癌组织标本有10例阴性不表达，27例强阳性表达。10个循环时，则14例呈阴性，18例弱阳性，5例强阳性。配对的37例大肠粘膜标本则都呈强阳性表达。结论：原位RT－PCR是一种检测内源性基因低拷贝转录产物mRNA的较灵敏的方法。SNC66基因在大肠癌组织中存在明显的表达降低或缺陷，可作为侯选的抑癌基因加以进一步研究。     

RT—PCR检测HCV—RNA及基因分型的研究

目的研究HCV基因分型的临床意义。方法应用RT－PCR方法检测HCV－RNA。结果150例献血员中抗-HCV6例阳性占40％，应用RT－PCR方法检测HCV－RNA10例阳性占6．6％，对其进行基因分型，其中HCV－Ⅱ型占89％，HCV-Ⅲ型占11％。结论说明我国人群HCV感染以Ⅱ型为主。12例抗-HCV阳性母亲及新生儿的HCV基因分型同属Ⅱ型，证明HCV母婴垂直传播存在。基因分型诊断为选择药物治疗提供科学依据。     

实时荧光PCR和RT—PCR方法检测登革病毒的比较研究

目的通过2种检测登革病毒方法的比较，以提高检测登革病毒的灵敏度和特异性。方法利用Taqman MGB技术，根据登革病毒3’端非编码区的一段高度保守序列，设计登革1～4型荧光PCR通用引物和TaqmanMGB探针，以登革热毒株作为标准，以乙脑毒株作对照，建立实时荧光PCR检测登革病毒的快速方法。并对10份ELISA法检测阳性的临床血清标本进行RT—PCR及荧光PCR扩增。结果RT—PCR检测10份临床血清标本，2份阳性，阳性率为20％。实时荧光PCR检测登革病毒与乙脑病毒无交叉反应，检测10份临床血清标本，5份阳性，阳性率为50％。从RNA提取到检测结果仅需4h。结论Taqman MGB实时PCR检测方法快速、敏感性高、特异性强，可作为登革病毒的快速检测方法，应用于登革热的临床早期诊断。     

应用RT—PCR技术检测人类甲六腺癌中ret癌基因活化的研究

目的 观察人类甲状腺癌中ｒｅｔ癌基因的活化及其意义。方法 应用ＲＴ－ＰＣＲ技术研究甲状腺癌新鲜组织中ｒｅｔ癌基因活化形式ＰＴＣ基因的表达。结果 ２５例甲状腺乳头状癌中有６例（２４％）ＰＴＣ基因表达阳性,主要分布于Ⅱ级以上肿瘤中;而甲状腺滤泡型癌、甲状腺腺瘤和正常甲状腺组织中ＰＴＣ均为阴性。结论 ＰＴＣ基因是ｒｅｔ癌基因新的活化仅限于甲状腺乳头状癌类型中,可能是乳头状癌的特殊遗传事件,因此检测ＰＴＣ     

RT—PCR法制备NGFcDNA

本研究直接以新生１８￣２１天龄的小鼠脑的全ＲＮＡ（含ＮＧＦｍＲＮＡ）为底物，进行逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），制备出了神经生长因子（ＮＧＦ）的ｃＤＮＡ片段。用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测序分析表明，所制备的ＮＧＦ ｃＤＮＡ片断为３６３ｂｐ，与编码成熟ＮＧＦ的ｍＲＮＡ碱基顺序相对应。直接利用全ＲＮＡ进行ＲＴ与ＰＣＲ一步联合反应，不仅简化了实验步骤，而且最大程度地减少了样品的需要量，减小了样品     

半定量RT—PCR方法检测肝癌相关cDNA克隆的表达

肝癌是我国常见的恶性肿瘤 ,研究其分子水平发病机制对预防及治疗该肿瘤有着重大现实意义。人类基因组 17ｐ13.3在肝癌组织中存在高频率的杂合性缺失 (ＬＯＨ) [1] ,提示该区段含有与肝癌发生发展相关的抑癌基因。采用该染色体区段内的人工酵母染色体 (ＹＡＣ)、人工细菌染色体 (ＢＡＣ)筛选人正常肝ｃＤＮＡ文库及外显子捕获 (ｅｘｏｎｔｒａｐｐｉｎｇ)方法 ,本实验室已找到若干该区域内的ｃＤＮＡ克隆[2 ] ,但这些表达序列与肝癌发生的关系尚未阐明 ,检测这些表达序列在肝癌和癌旁中的表达差异性无疑是寻找这种相关性的一种有效方法。材…     

肠道病毒基因实时定量RT—PCR方法的建立

肠道病毒感染可引发众多疾病 ,并可暴发流行 ,导致死亡 ,严重危害人类健康。该病毒是病毒性心肌炎的主要病原体 ,新近又发现该病毒的持续感染与扩张性心肌病有关[1] 。因此 ,及早发现病毒感染和治疗具有非常重要的意义。本研究建立了肠道病毒的实时、定量ＲＴ ＰＣＲ检测方法 ,制备了肠道病毒ＲＮＡ的检测试剂盒 ,为肠道病毒感染的诊断及随访提供了有效的检测手段。材料和方法材料　ｐＵＣｍ Ｔ克隆试剂盒购自上海博彩公司 ,ｐＳＰ 72载体购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司。逆转录酶、Ｔａｑ酶购自ＰＥ公司 ,内切酶购自Ｎｅｂ公司。Ｔｒｉｚｏｌ购自…     

庚型肝炎病毒的RT－PCR法检测

根据国外报道的庚型肝炎病毒基因组序列设计了两对５＇非编码区引物，用ＲＴ－ＰＣＲ法检测了２４例丙型肝炎和１０例透析病人血清标本。结果丙型肝炎病人和透析病人各１例检出ＨＧＶＲＮＡ，占总受检例数的５．８８％。本研究说明了ＨＧＶ在我国的存在，揭示开展ＨＧＶ相关研究的必要性。     

RT—PCR检测食管鳞癌组织中GST—π基因的表达

为了解原发性食管癌组织中ＧＳＴ－π基因的表达情况，用ＲＴ－ＰＣＲ方法定量检测了食管癌组织及相对应的正常食管粘膜组织中ＧＳＴ－π基因的表达。结果：在癌组织中ＧＳＴ－π基因表达的阳性率为８０．０％，在癌旁正常粘膜组织中为８６．６％。但在癌组织中ＧＳＴ－π基因表达的强度大于正常粘膜组织。管癌组织分化越差，ＧＳＴ－π基因阳性表达率越低，Ｐ〈０．０５。结果提示：在原发性食管组织中ＧＳＴ－π基因存在较高频率的     

白血病患者RT—PCR检测MDR1和MRP的意义

0引言肿瘤细胞对药物产生多药耐药性（MDR）是导致化疗失败的重要原因卜，“，我们观察了白血病患者骨髓或外周血单个核细胞中mdr基因（mdrl）和MDR相关蛋白（MRP）的基因表达情况，并对临床检测结果作了分析．1方法1．l试剂AMV逆转录酶、TaqDNA聚合酶，原平生物技术公司购人．1．2标本制备白血病患者20例，其中急性淋巴细胞白血病9例，急性非淋巴细胞白血病8例，慢性粒细胞性白血病（CML）3例，取患者骨髓或静脉血3mL，加等体积生理盐水稀释后置等体积淋巴细胞分离液上3000r／min离心20min后吸取单个核细胞．l．3RNA提取IX10’单…     

RT—PCR法检测甲状腺特异性转录因子—1mRNA

ＲＴ┐ＰＣＲ法检测甲状腺特异性转录因子┐１ｍＲＮＡ林玲１大野诚２远藤登代志２女屋敏正２１．福建医科大学附属第二医院内科（泉州３６２０００）２．日本山梨医科大学第三内科本文工作系第一作者在日本山梨医科大学研修期间完成（１９９５～１９９６年）关键词转录因...     

RT—PCR技术检测原发上皮性卵巢癌MDR1基因表达

目的建立适于临床检测原发上皮性卵巢癌ＭＤＲ１ｍＲＮＡ表达方法。方法应用半定量ＲＴ－ＰＣＲ技术对３７例原发上皮性卵巢癌、１０例正常卵巢和２０例外周血新鲜标本ＭＤＲ１基因进行了检测。结果原发上皮性卵巢癌标本中ＭＤＲ１基因阳性表达率为３０％,而正常卵巢和外周血标本则无ＭＤＲ１基因表达。结论ＲＴ－ＰＣＲ技术检测原发上皮性卵巢癌ＭＤＲ１基因表达具有灵敏度高、相对定量和结果可靠的优点,适于临床应用。     

原位RT—PCR法检测柯萨奇B3病毒感染HeLa细胞中的？…

利用生物素标记的核苷酸直接掺入法，建立了检测柯萨奇Ｂ３病毒感染的原位逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，并对经柯萨奇Ｂ３病毒感染的ＨｅＬａ细胞和未感染的ＨｅＬａ细胞进行了检测。结果表明，病毒感染的ＨｅＬａ细胞可见阳性信号，细胞呈蓝紫色，而未感染的ＨｅＬａ细胞无阳性信号，细胞不着色。说明该技术可应用于柯萨奇Ｂ３病毒感染的细胞和组织中的病毒ＲＮＡ检测，特别是用天病毒感染组织（如心肌炎、心肌病心     

RT—PCR方法在小鼠肝炎病毒检测中的应用

用４株小鼠肝炎病毒（ＭＨＶ１、ＭＨＶ３、Ａ５９和ＪＨＭ）的混合液定量人工感染ＳＣＩＤ小鼠、ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠、ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,接种病毒后１、２、５、８ｄ分别取小鼠的全血、肝,用组织总ＲＮＡ抽提试剂盒提取总ＲＮＡ,用一步法ＲＴ－ＰＣＲ方法检测小鼠肝炎病毒。结果显示：接种后１ｄ,ＳＣＩＤ小鼠和ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠即保检测到小鼠肝炎病毒,而ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠即可检测到小鼠肝炎病毒,而ＢＡＬＢ／ｃ小鼠至接