金银花抗氧化作用的分子学机理研究

目的探讨金银花抗氧化作用分子学机理。方法采用过氧化氢（H2O2）作用于人正常RBL肝细胞，制作氧化应激损伤的细胞模型。将培养的细胞分为四个实验组：正常对照组（C），H2O2损伤组（H2），金银花前保护组（Jb），金银花后保护组（Ja）。采用TUNEL和DNA Ladder法，检测各组细胞凋亡情况。应用免疫组化和Western blot观察各组细胞的HSP-70、NF-kB、Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达及免疫反应活性。应用MTT实验检测RBL细胞的生存率。结果Jb组的细胞凋亡率明显低于H2和Ja组，Bcl-2表达增高，HSP-70、NF-kB、Bax和Caspase-3的表达降低。结论金银花对RBL细胞氧化应激损伤具有一定保护作用．且前保护作用效果好于后保护作用，其保护作用机理可能是通过抑制HSP-70和NF-kB的表达，阻抑NF-kB信号传导途径并提高细胞内抗氧化防御酶系水平。     

金银花在体内抗氧化作用的实验研究

目的探讨金银花在体内的抗氧化作用。方法将20只Wistar大鼠随机分为两组。其中,实验 1组(大剂量组10只)予金银花水煎液(10g／kg)灌胃;实验2组(小剂量组10只)予金银花水煎液(5g／kg) 灌胃;另设对照组(10只)予蒸馏水灌胃。分别在灌胃前、灌胃后1、2h由眼眶取血,分离血浆,检测不同时间血浆内T-AOC、GSH-Px、GSH、MDA、NOS、NO、SOD的变化。结果实验1组和实验2组与对照组相比,灌胃1、2h后T-AOC、GSH-Px、GSH、SOD都有明显增加,而NOS和NO无明显变化,MDA明显下降; 1h时增加或减少幅度大于2h。结论金银花可提高体内抗氧化作用,且有剂量依赖性。     

配伍红花籽油对大鼠嗜铬细胞瘤细胞抗氧化损伤的保护作用

目的研究配伍红花籽油(CSSO)对过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞损伤的影响。方法建立H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤模型用不同浓度的配伍红花籽油(CSSO)进行药物干预,用MTT法和流式细胞技术检测细胞损伤和凋亡情况,倒置荧光显微镜下进行一般形态学观察。结果200μmol.L-1H2O2诱导PC12细胞6h,细胞呈现明显损伤形态,配伍红花籽油(CSSO)0.3～0.5g.L-1处理24h后,其存活率显著增加(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.05)。结论CSSO可显著的抑制H2O2诱导PC12细胞损伤,其作用机制可能与细胞内的氧化-抗氧化环节有关。     

蒺藜皂苷对PC12细胞凋亡的保护作用及机制

目的探讨蒺藜皂苷(gross saponin tribulus terrestris,GSTT)对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cells,PC12)凋亡的保护作用及其机制。方法PC12细胞分为对照组、模型组及蒺藜皂苷高(GSTT1)、低(GSTT2)剂量组。用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,倒置相差显微镜观察细胞形态,Hoechst 33258荧光核染色,流式细胞仪检测PC12细胞亚二倍体峰比率及Western blot方法检测与凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax。结果与模型组比较蒺藜皂苷组随着剂量的增加PC12细胞存活率提高(P<0.01),凋亡细胞减少,凋亡比率下降(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.05),而Bax的表达降低(P<0.05)。结论蒺藜皂苷可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡及影响凋亡相关蛋白的表达有关。     

红花甙对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞凋亡保护作用的实验研究

目的研究红花甙(carthamin)对过氧化氢(H2O2)诱导神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞(SH-SY5Y cells)凋亡的影响,并探讨其机制。方法实验分为空白对照组、H2O2损伤组及红花甙高、中、低剂量组。用H2O2作用于SH-SY5Y细胞,使其发生凋亡。MTT法检测SH-SY5Y细胞活性,比色法测丙二醛(MDA)的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与损伤组比较,随着红花甙剂量的增加,SH-SY5Y细胞存活率提高(P<0.01),MDA生成量减少(P<0.01),凋亡率下降(P<0.05)。结论红花甙对H2O2诱导SH-SY5Y细胞凋亡有保护作用,与红花甙能抗氧化、降低细胞凋亡有关。     

西洋参皂苷对H_2O_2致PC12细胞损伤的保护作用

目的研究西洋参皂苷对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用。方法建立H2O2诱导PC12细胞损伤模型,化学比色法测定细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶活性,并在显微镜下观察其形态学特征。结果200μmoL/L H2O2诱导PC12细胞,10 h呈明显损伤作用,250μg/mL西洋参皂苷对H2O2致PC12损伤的细胞有增殖作用。结论西洋参皂苷对H2O2致PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧能力有关。     

槲皮素对过氧化氢损伤小鼠成纤维细胞的保护作用

目的探讨槲皮素对过氧化氢(H_2O_2)损伤小鼠成纤维细胞(NIH-3T3)的保护作用。方法体外培养NIH-3T3细胞,取对数生长期的NIH-3T3细胞分成四个实验组。对照组(C)仅加含有10%胎牛血清的DMEM培养基。实验1(Q_1)组先用0．5mmol/LH_2O_2作用细胞30min,然后再用含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24h。实验2(Q_2)组先用含有501μmol/L的槲皮素培养基作用24h,再换含有0．5mmol/L H_2O_2作用细胞30min。H_2O_2实验(H_2)组先用含有0．5mmol/L H_2O_2作用细胞30min,再换仅含有10%胎牛血清的DMEM培养基作用24h。取培养细胞提取DNA和制备1×10~7/ml细胞悬液的滴片,应用TUNEL和Ladder电泳检测细胞凋亡率；应用Weaster blod和细胞免疫组化技术检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、HSP-70、NF- kB蛋白质的表达。结果由TUNEL和Ladder实验得出,Q_1组的细胞凋亡率明显低于H_2组和Q_2组。由Weaster blod和细胞免疫组化技术检测分析得出,Q_1组与Q_2、H_2组相比,Bcl-2的表达明显增高,Bax、Caspase-3、NF-kB、HSP-70的表达减低。结论槲皮素可能主要是通过抑制NF-kB的表达,提高HSP-70的表达,对H_2O_2诱导的NIH-3T3细胞损伤产生保护作用。     

槲皮素对NIH-3T3细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨槲皮素对NIH-3T3细胞氧化损伤的保护作用。方法取处于对数生长期的3T3细胞,平均分为以下四个实验组。槲皮素前保护组(Q1组):先加含有50μmol/L槲皮素培养液培养24h,再换含有0.5mmol/LH2O2的培养液培养30min。槲皮素后保护组(Q2组):先加含有0.5mmol/LH2O2的培养液培养30min;再换含有50μmol/L槲皮素培养液培养24h;H2O2损伤组(H2组):先加含有0.5mmol/LH2O2的培养液培养30min,再换仅含有10%的胎牛血清的培养液培养24h。对照组(C组):仅加10%胎牛血清的DMEM培养液培养24h。收集并裂解各组细胞,检测细胞内T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH、NOS、NO、MDA的变化,应用MTT实验检测3T3细胞的生存率。结果Q1与Q2、H2组相比,Q1组细胞内T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH均有增加,NOS、NO无明显改变,MDA减少,细胞存活率明显增加。结论槲皮素可能是通过上调抗氧化酶系活性对3T3细胞的氧化损伤产生保护作用。     

An integrated approach to study the molecular aspects of regulatory peptides biological mechanism

An integrated methodological approach to study the molecular aspects of short regulatory neuropeptides biological mechanism is proposed. The complex research is based on radioligand‐receptor method of analysis and covers such points of peptides molecular activity as: specific binding of peptides to brain cells plasmatic membranes, formation of tissue specific synacton, influence of peptides (as allosteric modulators) on functionality of different neuroreceptors as well as delayed in time effects of peptides on receptor‐binding activity of well‐known neuroreceptor systems. Radiolabeled ligands in such complex study are the one of the best and precision instruments to uncover the molecular mechanism of multiple and multitarget biological effects of regulatory peptides. In this issue we used heptapeptide Semax as a model regulatory peptide, [³H]Ach and [³H]GABA as an effector molecules, and the rat model of stress‐induced memory and behavior impairment as a morbid state. We showed the ability of Semax to modulate in a dose‐dependent manner [³H]Ach and [³H]GABA specific binding to some of its corresponding receptors as well as to affect the number of [³H]GABA specific binding places on rat neurons plasmatic membranes after complex stress exposure.     

2,3-吲哚醌对多巴胺能细胞氧化损伤的保护作用

目的采用过氧化氢(H2O2)作为损伤因素,检测2,3-吲哚醌(isatin,ISA)对MES 23.5细胞的保护作用及其机制。方法 MTT比色法检测H2O2的毒性作用及ISA的保护作用。细胞分为:对照组,H2O2 20μmol.L-1组,和ISA 100μmol.L-1+H2O2 20μmol.L-1组,采用流式细胞技术(FCM)检测线粒体膜电位(△ψm)的变化;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)变化。结果 H2O2组细胞存活率明细降低。ISA 100μmol.L-1及以上浓度处理的细胞存活率均高于H2O2组(P<0.05)。H2O2组细胞内R123平均荧光强度较对照组明显降低而ISA组明显增强(P<0.01)。H2O2组细胞内Fluo-3荧光强度明显高于对照组(P<0.01),而ISA组细胞内荧光强度明显低于H2O2组(P<0.01)。结论 ISA可减轻H2O2导致的DA能MES 23.5细胞损伤,其机制与减轻△ψm异常,降低[Ca2+]i水平有关。     

Solvent effects on the conformation of cyclo(-D-Trp-D-Asp-Pro-D-val-Leu-) An NMR spectroscopy and molecular modeling study

The conformations of cyclo(-D-Trp-D-Asp-Pro-D-val-Leu-) in dimethyl sulfoxide-d₆ (DMSO-d₆) and water were determined using two-dimensional nuclear magnetic resonance spectroscopy and restrained molecular dynamics. Comparisons were made between conformations of the cyclic pentapeptide in both solvents. The NMR study revealed that, while the backbone remained relatively unchanged in both solvents, the side-chains adopted distinctly different orientations in DMSO-d₆ vs. H₂O. A modeling study, minus NOE constraints, produced a set of low-energy conformers possessing agreement in backbone conformation with the NMR-derived structures; however, lowest-energy conformers did not have this agreement. These results show that different solvents can significantly affect the preferred side-chain conformation of small cyclic peptides in solution. This finding will impact the selection of solvent when determining structures for use as templates in rational drug design.     

H_2O_2氧化损伤血管内皮模型的构建及超氧化物歧化酶对损伤的逆转作用

目的构建离体血管H2O2氧化损伤模型,并初步探讨其损伤机制,实验超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)对该损伤的修复作用。方法采用大鼠离体胸主动脉环,构建H2O2氧化损伤血管模型,通过乙酰胆碱(acetylcho-line,ACh)引起的舒张评价该模型的内皮功能;通过硝普钠(nitroprusside sodium,SNP)引起的舒张及苯肾上腺素(phenylephrine,PE)引起的收缩评价该模型的平滑肌功能。同时,用120U·ml-1的SOD作用于该模型30min,评价SOD对模型损伤的修复作用。结果H2O2氧化损伤的血管,对SNP引起的舒张及PE引起的收缩无影响,而对ACh引起的内皮依赖性舒张程度降低,120U·ml-1 SOD作用后,能明显改善该模型的氧化损伤状态。结论H2O2 1mmol·L-110min能够氧化损伤大鼠胸主动脉内皮,120U·ml-1的SOD可以较好地修复H2O2造成的内皮损伤。     

免疫球蛋白IgG对H_2O_2所致内皮细胞损伤的抑制作用及其机制

目的探讨免疫球蛋白IgG对H2O2诱导的内皮细胞的黏附分子和趋化因子的表达及作用机制。方法IgG和H2O2加入内皮细胞中孵育2 h,应用RT-PCR以及实时定量RT-PCR检测黏附因子(ICAM-1、VCAM-1、E-se-lectin)及趋化因子(MCP-1、CXCL-1、MIP-2)的mRNA及蛋白表达;进一步应用Western blot检测IgG对H2O2诱导的p38、ERK1/2和JNK1/2的磷酸化情况。结果 H2O2可显著诱导黏附分子(ICAM-1、VCAM-1和E-selectin)、趋化因子(MCP-1、CXCL-1、MIP-2)的表达,而IgG对H2O2诱导的这些因子的表达有抑制作用;且IgG可抑制H2O2诱导的p38、JNK1/2和ERK1/2的磷酸化。结论 IgG对H2O2诱导的内皮细胞黏附分子及趋化因子表达的抑制作用可能通过抑制p38、JNK1/2、ERK1/2的信号通路实现,这可能是IgG调节内皮细胞炎症的机制之一。     

山楂叶总黄酮对H_2O_2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨山楂叶总黄酮(FMCL)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,倒置显微镜观察细胞生长状况和形态变化,琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯状图谱,流式细胞仪检测PC12细胞亚二倍体比率及线粒体膜电位的变化。结果与模型组比较FMCL 100、30mg.L-1两组PC12细胞活性增强,贴壁生长数量增多,而圆缩脱落者减少,未见典型DNA梯状图谱,凋亡比率下降,线粒体膜电位回升,且在一定范围内存在剂量依赖关系。结论山楂叶总黄酮可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。     

H_2O_2预处理对多巴胺损伤PC12细胞的适应性保护作用

目的探讨H2O2预处理对多巴胺(dopamine,DA)损伤PC12细胞的适应性保护作用。方法透射电镜、Hoechst染色和PI染色流式细胞仪(flowcytometry,FCM)观测细胞凋亡,MTT代谢率法观察细胞线粒体氧化磷酸化功能状态,Rh123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)。结果50μmol·L-1DA作用PC12细胞24h后,电镜可观察到PC12细胞体积缩小,核染色质浓缩、边集,核碎裂等细胞凋亡征象。Hoechst33258染色显示,DA(50μmol·L-1)作用24h后,经H2O2预处理的PC12细胞的凋亡量较未预处理的明显减少。50、100和200μmol·L-1DA作用24h后,PC12细胞的凋亡率分别为(20.9±1.8)%、(40.5±6.4)%、(88.1±3.9)%,而经H2O2预处理的PC12细胞的凋亡率分别下降至(4.9±2.9)%、(12.0±1.4)%、(61.5±3.4)%(P<0.01)。20、40、80μmol·L-1DA作用细胞24h后,细胞MTT代谢率明显下降,而H2O2预处理抑制20、40、80μmol·L-1DA引起的PC12细胞MTT代谢率的下降(P<0.01)。50μmol·L-1DA作用24h后,PC12细胞的平均Rh123荧光强度由正常对照的(46.87±0.33)下降至(4.39±2.93),而经H2O2预处理的PC12细胞,其平均Rh123荧光强度仅下降到(10.50±0.28),下降程度明显减轻(P<0.01)。结论H2O2预处理对DA损伤PC12细胞具有适应性保护作用。     

复方丹参注射液对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的:探讨复方丹参注射液(ISM)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡保护作用的机制.方法:在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,采用MTT比色分析测细胞存活率,Hoechst-PI荧光染色和流式细胞仪检测分析细胞凋亡情况,RT-PGR检测par-4和NF-gB P 65基因mRNA表达,Western b1ot检测Par-4和NF-κB P 65蛋白表达.结果:不同剂量ISM预处理1 h可提高PC12细胞的存活率,降低par-4和NF-κB P 65的mRNA表达以及蛋白表达.结论:ISM可剂量依赖性地对抗H2O2的神经毒性作用,其机制可能与降低凋亡基因par-4的表达有关.     

阿魏酸钠对H_2O_2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用的探讨

目的　探讨阿魏酸钠 (sodiumferulate ,SF)对H2 O2 引起的PC12细胞凋亡保护作用的可能机制。方法　在H2 O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上 ,采用MTT比色分析测细胞存活率 ,RT PCR检测 par 4和caspase 3基因mRNA表达 ,Westernblot检测Par 4蛋白表达和Caspase 3P2 0活性片段 ,用比色法检测Caspase 3相对活性。 结果　不同剂量SF预处理 1h可提高PC12细胞的存活率 ,降低 par 4和cas pase 3的mRNA表达以及Par 4的蛋白表达 ,Caspase 3P2 0活性片段和Caspase 3相对活性减少 ,但变化不明显。结论　SF可剂量依赖性地对抗H2 O2 的神经毒性作用 ,其机制可能与凋亡基因 par 4表达有关 ,与Caspase 3的关系尚需进一步探讨     

浒苔多糖对H_2O_2诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的研究浒苔多糖对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法用水提法提取浒苔多糖,除蛋白后用DE-52离子交换柱进行纯化。用MTT法检测纯化的浒苔多糖对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用。结果纯化的浒苔多糖能明显改善H2O2导致的细胞损伤,与H2O2处理组相比,浒苔多糖100,200和300μg/mL组可使细胞存活率升高。结论浒苔多糖对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用。     

褐藻多糖硫酸酯的抗炎与抗氧化活性研究进展

褐藻多糖硫酸酯是一种天然来源的海藻多糖，具有多种生物活性，尤其是抗炎和抗氧化应激活性近年来受到了研究者的广泛关注。研究表明，褐藻多糖硫酸酯可通过与细胞膜上的选择素结合而参与炎症的病理过程，也可作为清道夫受体的配体发挥抗炎症作用，它亦参与调节多种炎症相关因子的生成。褐藻多糖硫酸酯还可以抑制活性氧自由基的生成并促进其清除，从而表现出抗氧化活性。     

淫羊藿总黄酮注射液保护缺血心肌的实验研究*

目的:观察淫羊藿总黄酮注射液(EFI)对犬急性实验性心肌梗死的治疗作用及对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:采用左冠状动脉前降支(LAD)两步结扎复制犬急性心肌梗死模型,心肌切片氯化硝基四氮唑蓝(N-BT)染色计算心肌梗死范围,测定血清游离脂肪酸(FFA)和乳酸(LA)水平。通过体外培养大鼠乳鼠心肌细胞,流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳检测心肌细胞凋亡。结果:5,10和15 mg·kg~(-1)EFI均能显著缩小犬心肌梗死范围,降低血清FFA和LA水平。100μmol·L~(-1)H_2O_2作用12h后乳鼠心肌细胞凋亡率显著高于正常对照组,且出现典型凋亡的DNA梯带;100,200和400 mg·L~(-1)EFI可剂量依赖性降低乳鼠心肌细胞凋亡率,同时可减少DNA梯带形成。结论:EFI对犬急性实验性心肌梗死有较好的治疗作用,对H_2O_2诱导的乳鼠心肌细胞凋亡具有保护作用。