移植肝冷保存-再灌注过程中线粒体Ⅴ复合体蛋白表达与肝细胞凋亡的关系

目的探讨大鼠肝移植冷保存-再灌注过程中肝细胞线粒体Ⅴ复合体(F0F1-ATPase)蛋白表达改变对肝细胞凋亡的影响。方法 150只Wistar大鼠,将其中144只随机等分为3组,采用改良"二袖套法"按冷保存30 min(A组)、6 h(B组)、12 h(C组)制作大鼠肝移植模型,剩余6只为对照组(D组)。分别于制模后12、24 h、3、5 d采集标本。检测肝细胞线粒体F0F1-ATPase蛋白表达、肝组织ATP含量、肝细胞凋亡计数及线粒体超微结构改变。结果制模后12 h,C组F0F1-ATPase表达量明显低于A、B组(P<0.05),并且线粒体超微结构损伤较重,肝细胞凋亡计数较A、B组明显增多(P<0.05)。24 h后A、B、C组F0F1-ATPase表达量增加,但C组仍低于A、B组(P<0.05)。3 d各组肝细胞凋亡计数无统计学差异(P>0.05)。结论冷保存再灌注早期F0F1-ATPase蛋白表达异常,是导致肝细胞凋亡的主要原因。     

心钠素对高血压大鼠动脉平滑肌细胞离子泵活性和基因表达的影响

目的 探讨心钠素(ANP)对自发性高血压大鼠(SHR)动脉平滑肌细胞膜(ASMC)Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性及Na+,K+-ATP酶α,亚单位、Ca+-ATP)酶亚型1(PMCA1)mRNA表达的影响.方法 对SHR大鼠,予不同浓度ANP和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)干预,通过放射免疫、生化酶学和逆转录-聚合酶链反应等方法,检测ASMC的ANP、AngⅡ含量,ATP酶活性及其mRNA表达变化并设WKY大鼠为对照.结果 SHR大鼠ANP含量比WKY大鼠下降[(7.3±2.4)pg·10-6比(19.3±3.3) Pg·10-6,P＜0.01],Ang Ⅱ含量增加[(57±4)pg·10-6比(44±4) pg·10-6,P＜0.01],Na+,K+-ATP酶、Ca2+-A11)酶活性及Na+,K+-ATP酶α1亚单位、PMCA1 mRNA表达均显著降低[Na+,K+-ATP:(4.3±0.8) μmol·h-1·mg-1比(5.3±1.0) μmol·h-1·mg-1,Ca2+-ATP酶:(3.2±0.7)μmol·h-1·mg-1比(4.5±0.7) μmol·h-1·mg-1,α1亚单位:0.524±0.025比0.704±0.116,PMCA1:0.193±0.030比0.547±0.045](P＜0.05～P＜0.01).ANP可增加SHR大鼠Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性及Na+,K+-ATP酶α1,亚单位及PMCA1 mRNA表达(均P＜0.01),Ang Ⅱ则抑制Ca2+-ATP酶活性和PMCA1 mRNA表达(P＜0.05～P＜0.01),仅1×10-7 mol/L AngⅡ抑制Na+,K+-ATP酶活性及α1亚单位mRNA表达,ANP能拮抗AngⅡ对两种ATP酶活性及其mRNA表达的效应.ANP也能拮抗AngⅡ对WKY大鼠Ca2+-ATP酶活性及PMCA1mRNA表达的效应,对Na+,K+-ATP酶活性及α1亚单位mRNA表达无影响(P＞0.05).结论 高血压大鼠ASMC两种ATP酶活性和基因表达下降与局部ANP和AngⅡ分泌异常有关,ANP能拮抗AngⅡ对两种ATP酶活性和基因表达的效应.     

冷缺血损伤对大鼠供肾转化生长因子β1表达的影响

目的探讨冷保存对转化生长因子β1(TGFβ1)在大鼠肾小管上皮细胞表达的影响。方法选择Wistar大鼠40只,采取原位灌注整块肾脏切取,HC-A(肾脏保护液)灌注,在0～4℃下分别保存0,12,24,36和48h,采用免疫组织化学术,原位杂交术分别检测肾小管上皮细胞TGFβ1表达水平。结果在0h组,12h组大鼠肾小管上皮细胞中TGFβ1极少表达,两组TGFβ1蛋白,mRNA平均阳性单位(PU值)分别为(6.37±2.77),(5.29±2.15);(6.11±1.82),(5.90±2.40);差异均无显著性(P>0.05)。随着冷缺血时间延长至24、36及48h,TGFβ1蛋白,mRNA表达逐渐增加[24h组PU值分别为(10.20±3.27),(11.32±3.34);36h组PU值分别为(13.84±3.91),(15.47±4.21);48h组PU值分别为(17.17±3.96),(19.01±3.53)],各组间比较差异有显著性(P<0.05),各组与0h,12h组相比较差异亦有显著性(P<0.05)。结论冷缺血损伤促进大鼠肾脏转化生长因子-β1表达增加,促进细胞外基质的合成。     

丹参对大鼠离体肝脏血红素氧合酶-1表达的作用

目的：研究丹参在大鼠离体肝保存时对HO-1mRNA及蛋白的表达的作用。方法：模拟临床供肝保存,大鼠肝脏切取后置4℃保存液中。实验根据灌注保存液不同分为平衡液组(A 组)、丹参组（B组）、丹参＋抑制剂预处理组（C 组）,每组分别为24只动物,根据保存时间各组分为4个亚组（0、1、3、6h）,每亚组6只动物。术前24小时,A、B组用生理盐水腹腔注射预处理,C组用锌原朴啉腹腔注射预处理。以RT-PCR和免疫组化半定量检测HO-1mRNA及蛋白表达的情况,对各组大鼠肝组织行病理切片,观察形态学改变并评分,并作HO-1的与肝脏损伤评分相关分析。结果：(1) B组各亚组肝组织HO-1的mRNA及蛋白的表达水平明显较A、C两组高（p﹤0.05）;(2) 除0h亚组外,各组同时间点亚组比较,以B组肝组织损害最轻,保存时间最长, C组的肝组织损伤明显重于A、B两组;（3）HO-1的mRNA及蛋白的表达与肝脏损伤评分呈相关性。结论：大鼠离体肝脏保存时,丹参可以诱导HO-1过表达;丹参诱导HO-1的表达可能是丹参对肝脏保护作用机制。 关键词：丹参; 血红素氧合酶-1;器官保存     

微囊蛋白1对哮喘气道平滑肌细胞增殖的抑制机制及罗红霉素的调控作用

目的 探讨微囊蛋白1抑制气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的可能机制以及罗红霉素的调控作用.方法 复制哮喘大鼠模型,光镜观察肺组织病理学变化,透射电镜观察各组ASMCs上微囊的结构及变化,用组织贴壁法体外培养ASMCs,实验设对照组(A组:含2.5％胎牛血清的高糖培养液处理1h)、哮喘组(B组:处理同A组)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路阻断剂PD98059组(C组:10×10-6mol/L的PD98059处理1h)、罗红霉素组(D组:100 mg/L的罗红霉素处理1h)、β-甲基环糊精组(E组:5μmol/L的β甲基环糊精处理1h);用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞的增殖情况,Western印迹检测各组微囊蛋白1表达;逆转录(RT)-PCR和Western印迹分别检测ERK1/2mRNA、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA和磷酸化ERK1/2、MCP-1蛋白的表达.结果 C、D组ASMCs增殖显著低于B组(0.68±0.15、0.63 ±0.13比0.96 ±0.14,均P＜0.05);E组(1.26±0.11) ASMCs增殖强于B组(P＜0.05).C、D组微囊蛋白1表达均显著高于B组(0.332±0.057、0.392±0.064比0.237±0.032,均P＜0.05);C、D组ERK1/2蛋白表达均显著低于B组(0.241±0.017、0.268±0.007比0.346±0.009,均P＜0.01),E组(0.441±0.011) ERK1/2蛋白表达高于B组;C、D组ERK1/2 mRNA表达均显著低于B组(0.277±0.043、0.338±0.026比0.591±0.022,均P＜0.01).C、D组MCP-1蛋白表达均显著低于B组(0.198±0.015、0.286±0.019比0.482±0.026,均P＜0.01),E组(0.521±0.023) MCP-1蛋白表达较B有升高趋势;C、D组MCP-1mRNA表达均显著低于B组(0.212 ±0.042、0.249±0.032比0.676±0.053,均P＜0.01).结论 微囊蛋白1可能通过ERK信号通路抑制MCP-1表达,从而抑制哮喘ASMCs的增殖.罗红霉素可能上调微囊蛋白1的表达,抑制MCP-1 mRNA表达和翻译,进而抑制哮喘ASMCs的增殖.     

手术创伤对大鼠海马中β淀粉样前体蛋白和β淀粉样蛋白表达的影响

目的 探讨手术创伤对大鼠海马中β淀粉样前体蛋白(App)、β淀粉样蛋白(Aβ)表达的影响.方法 49只SD大鼠随机分成对照组(A组,n=7)、假手术组(B组,n=21)、肝部分切除术组(C组,n=21),B、C组大鼠分别在术后24 h、3 d、7 d三个时间点取左侧海马(n=7),放射免疫法测Aβ,取右侧海马热启动荧光定量PCR测AppmRNA.结果 (1)肝部分切除术后24h大鼠海马中App770(Ct)/GAPDH(Ct)为(1.39±0.05),低于对照组和假手术组(P＜0.05),说明此时App770mRNA的表达增加.但是手术对于App695mRNA、App751mRNA以及App770mRNA在其他时间的表达没有影响.假手术组App695mRNA、App751mRNA、App770mRNA的表达与对照组差异无显著性(P＞0.05).(2)肝部分切除术组大鼠海马中Aβ的表达在术后24h、3d、7d分别为(58.3±2.6)pg/ml、(48.0±3.7)pg/ml、(27.2±3.6)pg/ml,明显高于对照组和假手术组,(P＜0.05).在相应的时间点中,假手术组与对照组没有差异(P＞0.05).结论 肝部分切除术后大鼠海马中App770mRNA的表达增加,Aβ表达水平上调.     

甘遂半夏膏对肝硬化腹水大鼠腹膜水通道蛋白-1基因表达影响的实验研究

目的:通过甘遂半夏膏对肝硬化腹水大鼠腹膜上水通道蛋白-1(AQP-1)表达的影响研究,探讨其利水机制.方法:80只健康SD大鼠分为空白对照组(A组),模型组(B组)、生理盐水组(C组)、甘遂半夏膏组(D组),各20只,采用苯巴比妥钠诱导加皮下注射CCl4制造细胞毒性肝硬化腹水大鼠模型;免疫组织化学检测AQP-1在各组大鼠腹膜上的表达.RT-PCR方法检测各组大鼠AQP-1在肝硬化腹水大鼠腹膜上mRNA的表达,并以3-磷酸甘油醛脱氢酶相对定量.结果:AQP-1蛋白质相对积分光密度:A组(28±8)、B组(14±8)、C组(12±6)、D组(23±9)和mRNA:A组(0.68±0.12)μg/μl、B组(0.34±0.14)μg/μl、C组(0.32±0.11)μg/μl、D组(0.58±0.15)μg/μl.结论:甘遂半夏膏可提高肝硬化腹水模型大鼠腹膜的AQP-1的表达,可能是其利水机制之一.     

环氧合酶-2在幽门螺杆菌影响酸分泌机制中的作用

目的通过幽门螺杆菌(Hp)感染的动物模型研究胃黏膜环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达在酸分泌机制中的作用。方法清洁级BALB／c小鼠40只,随机分4组:①阴性对照组予0．4 mL 0．9％氯化钠溶液灌喂;②急性感染组予0．4 mL Hp菌液灌喂;两组均为5 d,最后1次灌喂2周后处死。③清除组和慢性感染组:予0．4 mL,Hp菌液灌喂,共5 d,最后1次灌喂2个月后分为清除组(予克拉霉素3．5 mg·kg-1·d-1,分2次灌喂,连续7 d)和慢性感染组(予0．9％氯化钠溶液,方法同清除组);1个月后分别处死两组动物。均取胃黏膜标本,采用免疫组织化学半定量法测定胃窦黏膜COX-2蛋白和H -K ATP酶mRNA基因表达的变化。结果阴性对照组COX-2蛋白表达率为(3．25±1．50)％,显著低于急性感染组(11．38±2．93)％、慢性感染组(31．18±6．78)％和清除组(23．80±5.92)％(P值均<0.05)。4组的COX-2蛋白与H -K ATP酶mRNA基因表达均不相关(P值均> 0．05)。结论Hp感染后COX-2蛋白表达增多伴H -K ATP酶mRNA基因表达下降,清除Hp后COX-2蛋白表达下降伴H -K ATP酶mRNA基因表达上升,但两者不相关。     

Toll样受体4在人肺泡上皮细胞株中的表达及其在细胞炎症反应中的作用

目的 明确人Ⅱ型肺泡上皮细胞是否表达Toll样受体4(TLR4),探讨TLR4在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道炎症中的作用.方法 将人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549细胞分为正常对照组、转染腺病毒E1A质粒(E1A+组)和转染不含有腺病毒E1A的空白质粒组(E1A-组),分别以不同浓度的脂多糖(LPS,0、0.1、1、10μg/ml)、白细胞介素1β(IL-1β,0、0.1 ng/ml)、香烟提取物(CSE,0、10%、20%、40%)刺激.刺激后12、24 h,用反转录聚合酶链反应技术检测各组细胞IL-8 mRNA和TLR4 mRNA的表达,用蛋白质印迹技术测定核因子κB(NF-κB)亚单位P65蛋白的表达.结果 10μg/ml LPS、0.1 ng/ml IL-1β或20%CSE刺激24 h后,E1A+组IL-8 mRNA表达量(2.82、1.87、4.70)明显高于正常对照组(0.95、0.78、1.02,均P<0.05)和E1A-组(0.97、0.81、1.12,均P<0.05).10μg/ml的LPS刺激后12、24 h,E1A+组细胞TLR4 mRNA表达水平分别为4.52、7.99,明显高于正常对照组(1.91、3.81,均P<0.05)和E1A-组(2.00、3.88,均P<0.05);IL-1β也可增加TLR4 mRNA表达.CSE刺激对各组细胞TLR4 mRNA表达水平均无明显影响.3种刺激因子均可引起各组细胞NF-κB亚单位P65蛋白表达水平增高.结论 人Ⅱ型肺泡上皮细胞表达TLR4,LPS、IL-1β引起IL-8释放可能与TLR4介导的NF-κB激活有关.     

黄芪拮抗镉诱导大鼠附睾组织ATP酶毒性的作用

目的　观察黄芪注射液拮抗氯化镉诱导大鼠精子运动的毒性及对附睾尾组织ATP酶的影响。方法　将 48只SpragueDawley雄性大鼠随机分成 4组 :低浓度黄芪组 (A1 )、高浓度黄芪组 (A2 )、氯化镉组 (Cd)和对照组 (C)。预先连续 7d分别给A1 组和A2 组大鼠腹腔注射黄芪注射液 5g/ (kg·d)和 10g/ (kg·d) ,Cd组大鼠腹腔注射等量蒸馏水作对照 ,之后连续 7d给A1 组、A2 组和Cd组大鼠分别同时腹腔注射氯化镉溶液 [0 .4mg/ (kg·d) ]。染镉后第 8d处死大鼠 ,用计算机辅助精子分析系统 (CASA)分析附睾尾精子运动参数 ,并检测附睾尾组织ATP酶活性。结果　A2组精子活率 [( 4 3 .3 9± 5 .3 1) %]、前向运动精子百分率 [( 3 2 .3 3± 8.3 2 ) %]、曲线速度 [( 10 6.88± 2 8.5 1) μm/s]、平均路径速度 [( 5 8.0 3± 7.3 ) μm/s]和精子头摆幅度 [( 2 9.76± 3 .81) μm/s]等参数明显高于Cd组 [( 2 5 .83± 4.43 ) %、( 2 0 .92± 3 .0 4) %、( 90 .3 1± 12 .5 5 ) μm/s、( 3 6.91± 3 .2 6) μm/s和 ( 2 1.5 0± 3 .5 2 ) μm/s] (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;A2 组附睾尾组织Na K -ATP酶 [( 2 .0 3± 0 .2 8)× 10 - 3μmolPi/mgprot/hour]、Ca2 -ATP酶 [( 2 .2 0± 0 .15 )× 10 - 3μmolPi/mgprot/hour]和Ca2 Mg     

人肝癌SMMC-7721细胞株部分线粒体基因表达的研究

目的:观察人肝癌SMMC-7721细胞株部分线粒体DNA(mtDNA)基因表达的情况.方法:根据人线粒体DNA(mtDNA)基因序列,利用primer premier 5.0生物软件设计了4对PCR引物,分别是扩增D-loop区、ND6、ATPase8-ATPase6、16sRNA基因,采用RT-PCR方法对SMMC-7721细胞线粒体DNA上D-loop区及其他3个基因的表达进行了检测,并与其在正常人肝细胞株(L02)线粒体中的表达作了比较.结果:我们发现,与正常人肝细胞株(L02)相比,在SMMC-7721细胞中,D-loop区、ND6、ATPase8-ATPase6基因表达总体是增高的,16sRNA基因表达基本不变,同时在同一基因两条链(重链和轻链)之间的表达也存在差异.结论:我们认为,由于线粒体DNA编码的多肽均是氧化磷酸化酶复合物的亚单位,这些基因表达的异常可能造成细胞对氧利用障碍,细胞能量产生减少,成为造成SMMC-7721细胞主要以糖酵解的方式提供能量的重要原因之一.     

组织蛋白酶B在肝星状细胞HSC-T6中的动态表达和意义

目的观察组织蛋白酶B在肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC-T6)中的表达并探讨其在肝纤维化过程中的意义。方法向HSC-T6细胞中加入组织蛋白酶B抑制剂(Z-FA-FMK),作用12、24、36、48h后,用倒置显微镜分别观察各时间点细胞生长状态的差异并拍照。分别提取Z-FA-FMK作用前后12、24、36、48h的蛋白和RNA,用Western blotting法检测各时间点组织蛋白酶B(cathepsin B)和α-SMA的表达量,用反转录定量PCR(RT-PCR)方法测定各时间点cathepsin B mRNA、TGF-βmRNA和α-SMA mRNA的表达。统计学处理采用配对t检验和Pearson直线相关分析。结果显微镜观察Z-FA-FMK作用后细胞的增殖分化作用减慢。Western blotting结果显示,对照组和抑制剂组中cathepsin B的表达量随时间的延长而增加,抑制剂组cathepsin B的表达量(0.49±0.04)较对照组(0.68±0.09)有所减少,差异具有统计学意义(t=-6.31,P<0.05);α-SMA表达量的变化与cathepsin B的变化平行,抑制剂组α-SMA表达量(0.64±0.03)较对照组(0.79±0.01)有所减少,差异具有统计学意义(t=-6.18,P<0.05)。RT-PCR结果显示抑制剂组cathepsin B mRNA表达量(2.00±0.11)较对照组(2.24±0.47)减少,差异均具有统计学意义(t=-3.41,P<0.05);抑制剂组α-SMA mRNA的表达量(0.40±0.06)较对照组(0.81±0.08)减少,差异具有统计学意义(t=-4.28,P<0.05);抑制剂组TGF-βmRNA的表达量(1.43±0.16)较对照组(1.81±0.21)减少,差异均具有统计学意义(t=6.44,P<0.05)。结论组织蛋白酶B可抑制HSC的增殖和转分化,同时可降低肝纤维化指标如TGF-β和α-SMA的表达量,因此,组织蛋白酶B可作为今后治疗肝纤维化的治疗靶点。     

参附注射液改善大鼠肝移植缺血再灌注后Kupffer细胞的激活

目的观察参附(Shenfu,SF)注射液预处理对大鼠肝移植缺血再灌注后Kupffer细胞中糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)、核转录因子κB(NF-κB)表达的影响,探讨参附预处理保护缺血再灌注损害(ischemia reperfu-sion injury,IRI)的机制。方法将雄性SD大鼠按完全随机分组法分为正常对照组、缺血再灌注组和SF组,其中缺血再灌注组、SF组建立肝移植缺血再灌注模型,于缺血再灌注后6 h分离培养受体移植肝脏的Kupffer细胞。通过RT-PCR、Westernblot和激光共聚焦显微镜技术、免疫荧光法、ELISA等实验技术检测Kupffer细胞GR的mRNA和蛋白表达、NF-κB的蛋白表达、培养上清中TNF-α的含量。结果缺血再灌注组Kupffer细胞GR mRNA和蛋白表达均明显低于正常对照组(P<0.01),缺血再灌注组NF-κB、培养上清TNF-α表达量(830.19±71.34)明显高于正常对照组NF-κB、培养上清TNF-α表达量(65.41±37.63,P<0.01)。与缺血再灌注组相比,SF组GR水平明显上升(P<0.01),NF-κB活性、TNF-α表达量(543.59±41.27)明显下降(P<0.01)。结论缺血再灌注损伤会导致Kupffer细胞GR的表达下调,NF-κB的激活;参附预处理可以改善肝移植缺血再灌注后Kupffer细胞的激活。     

MG-132对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎小鼠细胞间黏附分子1表达的影响

目的 研究蛋白酶体抑制剂MG-132对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎(AP)小鼠核因子κB(NF-κB)与细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响.方法 45只BalB/c小鼠按随机数字表法分为9组,即对照3、6、12 h组,AP3、6、12 h组和MG-132 3、6、12 h组,每组5只.AP组小鼠雨蛙肽100μg/kg腹腔内注射诱导,1次/h,共6次.对照组则腹腔内注射相同剂最的生理盐水.MG-132组在AP诱导前30 min腹腔注射MG-132 10 mg/ks.检测血清淀粉酶和可溶性ICAM-1(sICAM-1)的浓度变化,观察胰腺的病理学变化,经免疫组化法检测胰腺组织中NF-κB的表达,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胰腺组织中ICAM-1 mRNA的表达.结果 MG-132各组血清淀粉酶(U/L)、血清sICAM-1(pg/ml)的浓度均低于相应时间点AP各组(1629±59、1794±123、2910±152比1282±61、1525±103、1809±117,133±10、157±10、217±43比106±6、135±4、163±19,P<0.05或P<0.01),MG-132各组胰腺组织的病理评分均分别低于相应时间点AP各组(5.7±1.0、7.1±1.2、9.6±2.1比3.2±1.0、5.3±1.0、6.9±0.8,P<0.05或P<0.01),MG-132组胰腺组织中NF-κB蛋白表达及ICAM-1 mRNA的表达均明显低于相应时间点AP各组(3.8±1.1、4.6±1.2、6.7±0.4比1.9±0.6、3.1±1.0、4.7±1.0,0.3±0.1、1.0±0.2、1.2±1.0比0.3±0.2、1.8±0.2、2.1±0.2,P<0.05或P<0.01)的表达.结论 蛋白酶体抑制剂MG-132对雨蛙肽诱导的AP具有保护作用,其机制可能与抑制NF-κB的活化、下调包括黏附分子在内的细胞因子的表达有关.     

失血性休克大鼠小肠上皮细胞线粒体ATPase8亚基表达的变化

目的探讨正常与休克大鼠小肠上皮细胞线粒体DNA（mitochondria DNA,mtDNA）ATPase8亚基及其表达的变化,为休克的防治提供理论基础。方法用透射电镜观察大鼠小肠上皮细胞线粒体形态学变化,用基因重组、测序,通过gene Bank与mtDNA已知序列进行比较,研究大鼠小肠上皮细胞mtDNA ATPase8基因的改变。用RT-PCR观察大鼠小肠上皮细胞线粒体ATPase8 mRNA的表达。结果休克组大鼠小肠上皮细胞线粒体数密度和面密度与对照组相比有显著差异（P〈0.05或P〈0.01）。正常组小肠上皮细胞mtDNA ATPase8亚基9个DNA测序有2处突变（A7868G,空7767-7768G）。休克组有3处突变,即A7797空,T7772C、T7863C。失血性休克组大鼠上皮细胞线粒体ATPase8 mRNA表达比正常组显著性下降（P〈0.05）,为对照组的27.3%。结论休克大鼠小肠上皮细胞mtDNA ATPase8基因突变以及表达水平下降是导致ATPase8亚基改变的重要原因。     

慢性间歇低氧训练对大鼠心肌线粒体ATP酶的影响

目的: 研究慢性间歇低氧训练对大鼠心肌线粒体ATP酶含量及Na+、K+-ATP酶和Ca2+、Mg2+-ATP酶的影响。方法: 32只雄性Wistar大鼠按低氧训练方案分为慢性组11只、急性组12只、对照组9只。慢性组行慢性间歇低氧训练, 首先置于低压氧舱, 模拟海拔3 km, 每日持续4 h, 训练2周;再模拟海拔5 km, 每日持续4 h, 训练2周;最后模拟海拔8 km, 放置4 h。急性组立即置于模拟海拔8 km, 放置4 h。对照组则不行低氧训练。低氧期满后, 断头处死大鼠, 分离心肌线粒体, 测定ATP酶活性。结果: 慢性组ATP酶含量(9.04±4.71)μmol·mg-1·h-1, 均较急性组(4.96±1.17)μmol·mg-1·h-1和对照组(4.38±0.95)μmol·mg-1·h-1明显升高(P< 0.01)。慢性组Na+、K+-ATP酶活性(2.55±1.41)μmol·mg-1·h-1, 与急性组(2.66±1.07)μmol·mg-1·h-1和对照组(3.08±1.37)μmol·mg-1·h-1差异均无统计学意义(P>0.05)。慢性组Ca2+、Mg2+-ATP酶活性(1.17±0.34)μmol·mg-11·h-1与对照组(1.28±0.42)μmol·mg-1·h-1差异无统计学意义(P>0.05), 但较急性组(0.58±0.14)μmol·mg-1·h-1明显升高(P< 0.01)。结论: 慢性间歇低氧训练可增强Ca2+、Mg2+-ATP酶活性, 同时能够显著增加ATP酶含量, 有助于提高心肌运动功能, 使大鼠适应低氧环境。     

热应激对大鼠肝组织及人前列腺癌PC-3细胞RhoB表达的影响

目的:观察烫伤后大鼠肝脏组织及热应激后前列腺癌PC-3细胞小G蛋白RhoB表达的变化,探讨热应激对体内外RhoB表达的影响.方法:制备雄性SD大鼠30%体表面积Ⅲ度背部烫伤模型,烫伤后2、4、8、16 h取相应大鼠肝脏组织(n=6),应用RT-PCR和Western印迹分析测定RhoB mRNA和蛋白水平,并以正常大鼠肝脏组织作对照(n=6).制备人前列腺癌PC-3细胞热应激模型,热应激后0.5、1、2、4、8 h取细胞检测RhoB的表达,并以未处理细胞作对照.结果:烫伤后4 h,大鼠肝组织RhoB mRNA表达量最高,为正常对照的3.2倍(P＜0.01),8 h开始下降;而RhoB蛋白表达量在烫伤后8 h最高(P＜0.01) .PC-3细胞RhoB mRNA在热应激后2 h时开始上调;4 h时达到最大值,约为对照的2.8倍(P＜0.01);热应激后8 h RhoB蛋白表达量最高(P＜0.01).结论:在体内、体外实验中热应激均能上调小G蛋白RhoB mRNA和蛋白的表达.     

ATP1B1真核表达质粒的构建及其对胃腺癌SGC-7901细胞的作用

目的构建Na ,K -ATP酶β1亚基(ATP1B1)真核表达质粒,为利用ATP1B1进行肿瘤基因治疗奠定基础。方法以白细胞文库为模板扩增ATP1B1 cDNA,定向插入到pEGFP-C3真核表达质粒中,构建pEGFP-ATP1B1重组质粒;经酶切分析和测序鉴定后,通过脂质体介导转染胃腺癌SGC-7901细胞,利用real-time PCR检测转染后SGC-7901细胞的ATP1B1基因表达,并进行其ATP酶活性检测;MTT法测定转染后SGC-7901细胞的增殖活性。结果重组质粒经鉴定证实含有ATP1B1 cDNA序列,转染pEGFP-ATP1B1的SGC-7901细胞ATP1B1基因表达增高达129.2%,ATP酶活性增强为(2.95±0.210)%,细胞生长增殖显著受抑。结论成功构建了ATP1B1真核表达质粒,为进一步利用ATP1B1研究恶性肿瘤基因治疗奠定基础。