早期梅毒和潜伏期梅毒的PCR分子诊断及重组Tnp47的免疫学诊断

目的建立早期梅毒、潜伏期梅毒特异性和敏感性很高的的新的检测方法。方法用腹股沟淋巴结针吸穿刺结合PCR的分子诊断以及用分子生物学的技术重组抗Tnp47的ELISA方法对早期梅毒、潜伏期梅毒以及非梅毒患者进行检测。结果腹股沟淋巴结针吸穿刺结合PCR分子诊断对早期梅毒、潜伏期梅毒特异性和敏感性均为100％；抗Tnp47ELISA的免疫学诊断方法可达83．3％，特异性为100％。结论腹股沟淋巴结针吸穿刺结合PCR分子诊断和抗Tnp47的免疫学诊断可作为对早期梅毒、潜伏期梅毒的新的、有用的实验方法。     

梅毒螺旋体荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立梅毒螺旋体的荧光定量PCR检测方法。方法依据梅毒螺旋体（Treponema pallidum,TV）DNA多聚酶I（polA）基因序列,设计MGB—Taqman探针和PCR引物,对TPPA法检测到的不同国家和人种梅毒螺旋体抗体阳性患者和阴性人员血液样本进行检测,验证该PCR方法的灵敏度和特异性,以及2种检测方法的一致性。结果PCR产物测序证实新建的荧光PCR方法可以扩增到梅毒螺旋体polA基因区200bp长DNA片段。该方法特异性强、灵敏度高,可检出每微升血液中10拷贝梅毒DNA。在31例TPPA法检测结果为阳性的样本中,有21例为PCR阳性。证明其中10例TPPA法阳性为非现行感染,可能不具有传染性。统计分析表明该荧光PCR方法与TPPA方法对不同国家和种族人群检测结果未出现显著差异。结论新建的荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,可排除TPPA法阳性梅毒患者中非现行感染的旅行者,是适用于不同地区和种族的旅行者进行梅毒检测的新方法。     

三种TP-IgM检测方法在先天梅毒早期诊断中的应用

目的：评价荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(Fluorescent Treponemal Antibody Absorption Test,FTA-ABS-Ig M)、梅毒螺旋体免疫蛋白印迹法(Western Blotting,TP-Ig M-WB)和酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,TP-IgM-ELISA)在先天梅毒早期诊断中的应用。方法：对300例疑似先天性梅毒婴儿血清标本进行FTA-ABS-IgM、TP-IgM-WB和TP-IgM-ELISA检测,并每隔3个月对三种方法结果进行随访至18个月,根据随访的最终结果回顾性分析三种方法在先天性梅毒早期诊断中的价值。结果：300例感染梅毒的孕妇分娩的婴儿中18例诊断为先天梅毒患儿。血清学检测中,FTA-ABS-IgM方法诊断特异性为100%,敏感性94.44%;TPIgM-WB方法诊断特异性为100%,敏感性为83.33%;TP-IgM-ELISA诊断特异性为96.45%,敏感性为72.22%。经统计分析,三种检测方法之间比较差异有统计学意义(χ²=23.40,P<...     

早期先天梅毒8例报告

先天梅毒又称胎传梅毒,是梅毒螺旋体由母体经过胎盘进入胎儿血循环所致,我们中心性病门诊自2000年12月～2002年12月共收治8例,现报告如下.     

梅毒螺旋体特异性IgG和IgM抗体在早期梅毒诊断和治疗的应用评价

目的 探讨梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)特异性抗体(Tp47、Tp45、Tp17、Tp15 IgG和IgM抗体)与梅毒血清甲苯胺红不加热血清试验(toluidine red unheated serum test,TRUST)滴度之间的相关性,分析治疗前后梅毒特异性抗体谱的特点,为临床诊断早期梅毒以及判定病情和疗效提供实验依据。方法 收集2015—2018年就诊于湖南省人民医院门诊或住院的梅毒早期患者166例为梅毒组,均满足早期梅毒临床表现(外阴有硬下疳或梅毒疹等)、TRUST和TPPA阳性,并以同期健康体检者166例为对照组。采用χ²检验分析四种IgG和IgM抗体与TRUST不同滴度之间的相关性;经苄星青霉素治疗后随诊12个月内进行免疫印记法检测梅毒特异性抗体的患者有41例,同时分析41例梅毒患者治疗前后血清各特异性抗体的表达变化情况。结果 梅毒组治疗前抗Tp47、Tp45、Tp17、Tp15 IgG抗体和抗Tp45、Tp17、Tp15 IgM抗体阳性率明显高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。治疗前TRUST高滴度组(TRUST滴度≥1∶8)Tp47、Tp45、Tp15 IgG抗体阳性检出率明显高于TRUST低滴度组(TRUST滴度＜1∶8),差异有统计学意义(均P<0.05),而Tp17 IgG抗体在二组中阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前TRUST高滴度组(TRUST滴度≥1∶8)抗Tp45、Tp17 IgM抗体阳性检出率明显高于TRUST低滴度组(TRUST滴度＜1∶8),差异有统计学意义(均P<0.05),Tp47和Tp15 IgM抗体在二组中阳性率差异无统计学意义(均P>0.05)。41例患者治疗后的IgM Tp45、Tp17抗体阳性表达率显著低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),四种IgG抗体及Tp47、Tp15 IgM抗体阳性表达率治疗前后无统计学意义(均P>0.05)。结论 Tp47、Tp45、Tp17、Tp15四种特异性抗体IgG和IgM联合检测有助于早期梅毒诊断和病情严重程度判断,Tp45、Tp17 IgM抗体有助于梅毒疗效的判断。     

梅毒螺旋体抗体检测在梅毒诊断中的应用

梅毒螺旋体又称苍白密螺旋体(T．pallidum，TP)。是人类梅毒的病原体。梅毒是由梅毒螺旋体引起的慢性传染病。在自然情况下梅毒只感染人类．人是人类的惟一染传染源．几乎可侵犯全身各器官．并产生多种多样的症状和体征。此外．梅毒又能以多年无症状而呈潜伏状态。在实验室以梅毒螺旋体抗体检测对该病有诊断意义。本文对近年来应用于临床的梅毒螺旋体抗体检查进行了临床观察．以探讨这一方法在梅毒病中的诊断作用。     

免疫印迹法在献血员梅毒抗体筛查中的应用

目的研究梅毒螺旋体免疫印迹试验(TP-WB)在献血员梅毒抗体筛查中的应用价值。方法使用梅毒标准血清盘,分析2种TP-ELISA试剂和1种TPPA试剂检测的准确性及不足;使用WB法对无偿献血筛查的279份TP-ELISA试剂阳性标本进一步检测,分析ELISA阳性结果与WB结果的相关性及WB阳性条带的分布特征。结果在40份以TP-WB结果为金标准的血清盘中,XC和WT两公司的TP-ELISA试剂的检测灵敏度均为100.00%,高于TPPA的88.46%,但两公司试剂检测的特异性分别为92.86%与85.71%,均低于TPPA的100.00%;在筛查的279份TP-ELISA法检测阳性标本中,WB确认阳性216份,阳性率为77.42%;其中包括S/CO值5且两种ELISA试剂检测同时阳性的标本205份,其WB确认试验阳性率为100.00%,占216份WB确认阳性标本数的99.91%。有序Logistic回归分析显示,ELISA法S/CO值5和双试剂阳性,与WB检测阳性分别存在统计关联(P0.01);216份TP-WB阳性标本WB条带分布分析,其中TP17条带与梅毒抗体Ig M阳性、TP15条带与Ig G及Ig G+Ig M阳性分别存在统计关联(P均0.01)。结论 ELISA法双试剂阳性且S/CO值5,基本可确诊为梅毒,WB试验条带阳性结果对献血者感染状况的判断有一定的指导意义。     

早期梅毒实验室诊断的对比研究

目的 探讨早期梅毒可靠及时的诊断方法。方法 以梅毒螺旋体暗视野检查(D-F)、梅毒螺旋体被动乳胶凝集试验(TPPA)、快速血浆反应素环卡片试验(RPR)3种检查方法对128例一期梅毒及190例二期梅毒分别进行检测并进行对比研究。结果 在128例一期梅毒中，D-F阳性107例(83．59％)，RPR阳性91例(71．09％)，TPPA阳性93例(72．66％)。在190例二期梅毒中，RPR、TPPA均为阳性(100．00％)。结论 在一期梅毒诊断中D-F检查，优于RPR及TPPA方法。在二期梅毒诊断中，RPR与TPPA阳性率达(100．00％)。     

梅毒螺旋体外膜蛋白Tp0136的制备及在血清学诊断中的应用

目的:为探索梅毒螺旋体(Treponema Pallidum,Tp)外膜蛋白Tp0136在早期梅毒诊断中的价值,利用基因重组技术制备Tp0136蛋白,用于血清抗体的检测。方法:采用PCR扩增Tp0136基因,构建不含信号肽序列的Tp0136基因原核表达载体,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况,镍离子亲和凝胶分子筛二步法纯化目的蛋白,Western blot检测其免疫反应性,免疫日本大耳白兔评价其免疫原性,免疫双扩检测其效价,以rTp0136为包被抗原的间接ELISA检测早期梅毒血清抗体。结果:重组工程菌包涵体形式表达相对分子质量约为46 KDa的rTp0136,表达率为15%,制备得到纯度大于98%的rTp0136。纯化的rTp0136能诱导大耳白兔产生特异性免疫应答,免疫双扩测得其效价为1:32。Western blot检测重组蛋白能与兔抗Tp0136多克隆抗体发生特异性反应。间接ELISA检测正常人血清均为阴性,而早期梅毒血清抗体的阳性率为75.1%。结论:重组Tp0136具有良好的免疫活性,预示其在早期梅毒血清学诊断中具有良好的前景。     

全自动化学发光免疫分析仪在梅毒螺旋体抗体检测中的应用

目的 探讨全自动化学发光免疫分析仪在梅毒螺旋体抗体检测中的应用价值.方法 选择2019年2月至2021年2月于医院接受治疗的260例疑似梅毒患者作为研究对象,均采用全自动化学发光免疫测定法(CLIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)测定血清中梅毒螺旋体抗体性质,以TPPA检测结果为金...     

Use of Treponema pallidum PCR in Testing of Ulcers for Diagnosis of Primary Syphilis

Treponema pallidum PCR (Tp-PCR) has been noted as a valid method for diagnosing syphilis. We compared Tp-PCR to a combination of darkfield microscopy (DFM), the reference method, and serologic testing in a cohort of 273 patients from France and Switzerland and found the diagnostic accuracy of Tp-PCR was higher than that for DFM.     

PCR技术在流脑监测中的应用研究

目的建立脑膜炎奈瑟菌种属及群的快速检出方法。方法应用PCR法扩增标准菌株及标本中脑膜炎奈瑟菌种属及各群的特异性DNA片段，通过电泳后对产物进行分析。结果11份标本中检出4份脑膜炎奈瑟菌CrgA基因片段，其中扩增出2份含有NmA群Off-2基因片段，2份含有NmC群siaD（C）片段。结论PCR技术可用于临床标本中脑膜炎奈瑟菌种属及各群的特异性检测。     

PCR在钩端螺旋体病诊断和流行病学上的应用

钩端螺旋体病足具有强传染性的人兽共患病,其临床症状多变,容易与其他感染性疾病混淆,快速准确地诊断钩端螺旋体病及进行有效的流行病学调查十分重要.PCR具有特异性强、自动化程度高、快速高效等优点,在钩端螺旋体病的早期诊断和流行病学调查上具有很好的应用前景.     

甲肝病毒TaqMan PCR检测方法的建立

目的建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,对甲肝病毒核酸进行检测。方法根据GenBank发表的HAV全基因组序列资料分析结果,在其保守区段设计HAV特异性引物和探针,优化引物、探针浓度,与最佳退火温度,并考察检测体系的特异性、敏感性与重复性。结果本研究体系的引物和探针浓度为0.8μmol/L和0.6μmol/L,退火温度为52℃时,具有良好的特异性与敏感性,检测灵敏度可达0.1TCID50。同一样品重复检测3次,Ct值的变异系数均小于5%。结论本研究建立的HAV TaqMan RT-PCR方法特异、敏感、快速且有效减少交叉污染的概率,为临床及水产品中的甲肝病毒的早期快速检测提供了一种新方法。     

PCR检测技术在志贺菌引起的腹泻疫情中的应用

目的：通过采用PCR方法对某次疫情中分离的福氏1 a志贺菌进行保守基因检测及毒力基因分析研究,探讨在感染性腹泻疫情中,PCR技术快速检测志贺菌的应用。方法：对标本中分离的7株福氏1 a志贺菌,用PCR方法检测侵袭性质粒抗原基因（ipaH）、志贺肠毒素1（ShET-1）和志贺肠毒素2（ShET-2）的基因检测,并进行基因分型。结果：7株F1 a菌均检测出ipaH基因,ShET-1和ShET-2,基因型为ShET1（＋）/ShET2（＋）,整个实验可在3 h内完成。结论：该所建立的PCR检测方法准确、快速、简便、特异性强,为其应用于环境、食品及临床腹泻样本中志贺菌的检测打下良好基础。ShET-1/ShET-2基因分型对福氏志贺菌暴发流行中的同源性分析有重要意义。     

多聚酶链反应临床应用970例分析

目的探讨多聚酶链反应（PCR）检测患者淋球菌（NG）、人乳头病毒（HPV）、结核杆菌（TB）、乙肝病毒（HBV）、肺炎支原体（PM）、疱疹病毒（HSV）、非淋菌性尿道炎（NGU）的沙眼衣原体（CT）和解脲支原体（MU）的临床意义。方法采用FQ-PCR方法检测临床上拟诊断为淋球菌感染（淋病）、尖锐湿疣、结核、支原体肺炎、非淋菌性尿道炎患者的沙眼衣原体（CT）和解脲支原体（MU）的970例患者，判断其阳性率。结果NG阳性率38．2％（240／627），HPV阳性率66．O％（70／106），TB阳性率27．7％（20／72），HBV阳性率35．1％（33／94），PM阳性率33．3％（2／6），HSV阳性率20．O％（1／5），MU阳性率12．0％（4／33），CT阳性率22．0％（6／27）。结论FQ-PCR方法具有简便、快速、准确、特异性强等优点，可应用于常见细菌、病毒、衣原体、支原体等疾病的诊断、治疗及疗效观察。     

聚合酶链式反应诊断2型猪链球菌

目的从分子水平鉴定四川省2005年不明原因疾病病原菌的属、种、型及毒力基因,为诊断和治疗提供科学依据。方法聚合酶链式反应(PCR)检测链球菌属特异性基因(TUF)、猪链球菌种特异性基因(Species)、2型和毒力特异性基因(CPS2J)以及毒力基因溶菌酶释放相关蛋白基因(MRP)和溶血素基因(SLY);同时与VITEK2等全自动生化鉴定仪鉴定结果进行比对。结果所试103份标本中,98份均具有所检测的5个基因,确定为猪链球菌2型;另5份标本排除猪链球菌可能。73株纯培养细菌用VITEK2全自动生化鉴定仪鉴定有68株菌被鉴定为猪链球菌2型,3株菌被鉴定为猪链球菌1型,2株菌不能鉴定。结论2005年四川省不明原因疾病疫情为猪链球菌2型感染人造成。PCR检测5个特异基因鉴定猪链球菌2型,其结果优于VITEK2全自动生化鉴定仪。     

多聚酶链反应技术在麻风诊断中的应用研究

目的 了解用１６ＳrRNA作引物,用ＰＣＲ方法,检测麻风的可行性。方法 用麻风分枝杆菌１６ＳrＲＮＡ基因片段作引物,采用ＰＣＲ技术,对２０余种非麻风分枝杆菌进行检测;同时也对麻风流行地区的７２名经传统方法诊断的麻风症人和４５名健康自愿受试者进行检测。结果 ２者的检测结果进行比较;x^2检验Ｐ＞０.０５,差异无显著性。进行了２种方法检查结果的比较研究,结果也完全一致。结论 １６srＲＮＡ作引物,用ＰＣＲ检测诊断麻风病人与传统方法诊断结果基本一致。     

聚合酶链反应检测霍乱弧菌肠毒素基因ctx的应用研究

〔目的〕建立霍乱病原菌快速检测的检验技术。〔方法〕运用单次和巢式聚合酶反应检测霍乱弧菌肠毒素基因ctx。〔结果〕本技术检测霍乱病原菌特异性强 ,检测下限达 4cfu/ml( 10 0 cfu/ml级水平 )。〔结论〕本技术检定霍乱病原菌简便、快速、敏感度高且准确性好。