脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞Gsα和Giα蛋白亚型的影响*

目的：观察脂多糖（LPS）对大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVECs)G蛋白的影响及甲基强的松龙的干预作用。方法：用流式细胞技术（FCM）检测G蛋白亚型的变化。结果：①10μg/ml LPS作用于RPMVECs30和90min后,Gsα蛋白水平较对照组显著下降。甲基强的松龙干预30和90min后,对LPS致RPMVECs膜Gsα蛋白水平的变化有显著抑制作用。②10μg/ml LPS作用于RPMVECs30和90min后,Giα蛋白水平较对照组显著下降。甲基强的松龙干预30和90min后,对LPS致RPMVECs膜Giα蛋白水平的变化有显著抑制作用。结论：①LPS诱导RPMVECS Gsα和Giα蛋白水平的变化可能是LPS诱导RPMVECs单层通透性增加的机制之一。②甲基强的松龙参与抑制LPS诱导RPMVECs单层通透性增加的作用。     

针刺不同经穴对偏头痛大鼠脑干组织G蛋白亚基含量的影响

目的研究针刺不同经腧穴对偏头痛大鼠脑干组织G蛋白亚基（Gsα和Giα）含量的影响。方法通过皮下注射硝酸甘油（10mg／kg）建立实验性偏头痛大鼠模型，将动物随机分成正常对照组、生理盐水组、模型对照组、针刺肝经组、针刺胆经组和针刺三焦经组，运用免疫印迹法（Westem blot）检测脑干组织Gsα和Giα的含量。结果皮下注射硝酸甘油4h后脑干组织Gsα蛋白含量明显升高（P〈0．01），Giα蛋白含量明显降低（P〈0．01），Gsα／Giα蛋白比值升高；三个针刺治疗组与模型组比较，脑干组织中Gsα蛋白含量明显降低（均P〈0．01），Giα蛋白含量明显升高（均P〈0．01），Gsα／Giα蛋白比值降低；而针刺胆经组G蛋白含量变化最为明显。结论偏头痛发作可能与大鼠脑干组织G蛋白信号传导系统功能障碍有关；针刺介导的G蛋白信号通路可能是其防治偏头痛的重要机制之一；针刺胆经腧穴较针刺其他两组经腧穴介导G蛋白信号通路作用更强。     

急性脑损伤致心肌损害中心肌G蛋白表达的改变

目的建立动物急性脑损伤(acute brain injury,ABI)模型,观察心肌Gs蛋白α亚基(αsubunite of Gs,Gsα)和Gq蛋白α亚基(αsubunite of Gq,Gqα)的变化,探讨Gs和Gq在急性脑损伤致心肌损伤中的作用及其β1肾上腺素受体阻断剂(adrenalinβ1receptor blocker,β1-ARB)和5-羟色胺受体2A阻断剂(5-hydroxytryptamine 2A receptor blocker,5-HT2ARB)对G蛋白的影响。方法复制Wistar大鼠ABI模型(n=8)。采用数字表法随机分为正常组(NORM)、假手术对照组(SHAM)、急性脑损伤模型组(ABI)、β1-ARB组(BETA)和5-HT2ARB组(KETA组)。利用RT-PCR方法测定Gsα和GqαmRNA表达;通过Western blotting方法测定Gsα和Gqα蛋白表达。结果与正常对照组(NORM:100%)相比,SHAM组、ABI组和BETA组GsαmRNA表达分别为(92.6±24)%、(39.7±30)%和(80.1±12)%。ABI组GsαmRNA表达比SHAM组显著降低(P<0.05),预先应用β1-ARB的BETA组GsαmRNA表达比ABI组增高(P<0.05),而与SHAM组比差异无统计学意义(P>0.05);与正常对照组(NORM:100%)相比,SHAM组、ABI组和BETA组Gqα蛋白表达分别为(105±30)%、(110±14)%和(107±23)%,各组之间Gqα蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ABI组GsαmRNA和Gsα蛋白表达水平于脑损伤后显著降低。提示急性脑损伤致心肌损伤的发生可能与抑制Gs蛋白介导的信号转导通路有关,Gs蛋白可能以Gsα蛋白表达量改变的方式参与了急性脑损伤致心肌损伤的发生过程。     

地塞米松对哮喘豚鼠肺组织Giα、Gqα的抑制作用

目的　研究糖皮质激素对豚鼠哮喘模型肺组织G蛋白α亚族表达的影响。方法　 18只豚鼠随机分为正常对照组(NS) ,哮喘组 (AS)和地塞米松治疗组 (DEX)。AS组用卵蛋白皮下及腹腔注射致敏 ,卵蛋白重复雾化吸入激发复制豚鼠哮喘模型。DEX组在每次激发前腹腔内注射地塞米松 2mg/kg进行干预。用Westernblot分析法测定豚鼠肺组织G蛋白α亚族的表达水平。结果　三组豚鼠肺组织Giα水平分别为NS组 10 0 % ,AS组 (15 3± 18) % ,DEX组 (113± 18) % ,AS组与NS组比较、DEX组与AS组比较差别显著 (P <0 .0 5 )。三组豚鼠肺组织Gqα水平分别为NS组 10 0 % ,AS组 (15 1± 19) % ,DEX组 (98± 4 ) % ,AS组与NS组比较、DEX组与AS组比较差别显著 (P <0 .0 5 )。在同样的条件下Gsα水平无显著变化 (P >0 .0 5 )。地塞米松能够显著抑制哮喘豚鼠肺组织中Giα、Gqα的高表达。结论　肺组织Giα ,Gqα的高表达变化参与了豚鼠哮喘模型的病理性信号传导 ,抑制哮喘肺组织Giα、Gqα的高表达可能是糖皮质激素治疗哮喘的机制之一。     

G-蛋白结构及信号传导机制研究进展

<正>1 G-蛋白的结构及种类 G蛋白是由α、β、γ三个亚单位组成的异构三聚体,其中目前已发现Gα20种,是三种亚单位中最重要的一种,称功能性亚单位。Gβ、Gγ分别有6种和12种,可协调细胞反应。G蛋白有数类:Gs、Gi、Gq、Go、Gt和G12/13等,每一种G蛋白又包含许多亚类共计30余种,这些G蛋白分别含有不同的亚单位,具有相似的结构和功能,其间氨基酸序列具高度同源性。它们分别接受不同的膜受体传来的信号,作用于相应的细胞效应酶,从而发挥信息传递及其他调节功能。     

高原缺氧条件下梭曼中毒大鼠心肌Gi α mRNA表达的变化

目的探讨高原缺氧条件下梭曼中毒大鼠心肌抑制性G蛋白α亚基(Giα)mRNA表达的变化.方法实验大鼠随机分为正常对照组、高原缺氧组、平原中毒组和高原中毒组.采用半定量RT-PCR技术检测各组大鼠心肌GiαmRNA表达的变化.结果缺氧、梭曼中毒单一或复合致伤均可引起心肌GiαmRNA表达降低,与平原中毒组比较,高原中毒24h时大鼠心肌Giα mRNA的表达降低4.1%(P＜0.05).结论高原中毒组大鼠心肌GiαmRNA表达的降低,可能是高原缺氧条件下梭曼中毒大鼠心功能损害加重的重要原因之一.     

铅对胚胎大鼠海马神经元G蛋白mRNA表达的影响

目的研究铅对神经信号传导的关键部位--细胞膜上G蛋白(G-proteins)的mRNA表达水平的影响.方法采用胚胎大鼠海马神经元无血清培养方法,加入不同浓度的氯化铅溶液,设立无铅暴露的空白对照组,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术半定量测定G蛋白三种不同类型α亚基,包括Gs、Gi2和Golα亚基mRNA表达水平,然后对结果进行相关矩阵分析.结果随着铅暴露水平的提高,Gi2α、GolαmRNA表达水平显著增加,而GsαmRNA表达水平却无明显改变.结论铅暴露可干扰海马神经元G蛋白mRNA的表达,使G蛋白不同α亚基的mRNA表达水平失去平衡,从而影响神经信号的正常传递.     

内脂素在糖尿病大鼠肝组织的表达及其对肝糖代谢的作用

目的：检测糖尿病大鼠肝组织内脂素（visfatin）的表达,探讨内脂素在肝糖代谢的作用。方法雄性 SD 大鼠,分为5组：正常对照组（NC 组）、肥胖组（DIO 组）、糖尿病组（DM 组）、胰岛素治疗组（INS 组）、二甲双胍治疗组（MET 组）。检测大鼠空腹血糖（FPG）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、游离脂肪酸（FFA ）、空腹胰岛素（Fins）水平;RT‐PCR 测定大鼠肝组织 visfatin 、葡萄糖6磷酸酶（G‐6‐Pase）mRNA 的水平,Western blot 检测 visfatin 、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶‐α（p‐AMPKα）和腺苷酸活化蛋白激酶‐α（AMPKα）蛋白表达量。结果 DM 组 FBG 较 NC 组、DIO 组均显著升高（P＜0．01）;INS 组、MET 组 FBG 较 DM 组显著下降（P＜0．01）。 DIO 组、DM 组 HOMA‐IR 均较 NC 组显著升高（P＜0．01）;DM 组 HOMA‐IR 较 DIO 组显著升高（P ＜0．01）。DIO 组、DM 组 ISI 均较 NC 显著降低（P＜0．01）,DM 组 ISI 较 DIO 组显著降低（P＜0．01）。 DIO 组 TG 较 NC 组显著升高（P＜0．01）;INS 组、MET 组 TG 较 DM 组显著降低（P＜0．05）,DM 组、INS 组、MET 组 TG 、TC 均较 NC 组升高（P＜0．05）。 DM 组、MET 组、INS 组 FFA 均较 NC 组明显升高（P＜0．05）;DM 组 FFA 较 DIO 组明显升高（P＜0．05）。 DM 组 visfatin mRNA 表达较NC 组、DIO 组显著升高（P＜0．05）;INS 组、MET 组 visfatin mRNA 较 DM 组显著降低（P ＜0．01）。 DM 组、MET 、INS 组 G‐6‐Pase mRNA 较 DIO 组显著升高（P＜0．05）,MET 组 G‐6‐Pase mRNA 较 DM 组显著降低（P ＜0．05）。 DM 组、INS 组、MET 组visfatin 蛋白表达较 NC 组显著升高（P＜0．05）;DM 组、MET 组、INS 组 AMPKα蛋白表达较 NC 组显著降低（P＜0．05）,DM 组AMPKα蛋白表达较 DIO 组显著降低（P ＜0．05）;DIO 组、DM 组、INS 组、MET 组 p‐AMPKα蛋白表达较 NC 组显著降低（P＜0．01）。结论大鼠肝组织 visfatin 表达可能与肝糖脂代谢有关联,visfatin 可能未参与到二甲双胍激活 AMPK 降低血糖的机制中。     

脉搏灌注指数变异指导液体复苏对低血容量性休克患者预后的影响

目的：探讨低血容量性休克患者在脉搏灌注指数变异（Pleth Viability Index ,PVI）指导下液体复苏对预后的影响。方法分析河北省人民医院重症医学科近年救治的低血容量性休克病例40例,分成PV I指导下液体复苏组和常规液体复苏组,分别测定发生低血容量性休克后2、6、12、24h时血浆 TNF-α、IL-6、血乳酸及MODS发生率及病死率。结果采用PVI指导下液体复苏和常规液体复苏方法治疗低血容量性休克患者血浆TNF-α、IL -6、血乳酸比较差异有统计学意义（P＜0．05）,但MODS发生率及病死率差异无统计学意义。结论 PVI指导下液体复苏能较快改善低血容量性休克患者微循环状态,减轻炎症反应状态,但M ODS发生率及病死率影响不大,需要大样本进一步研究证实。     

经皮血氧分压在休克不同时期的诊断及预后判断中的临床价值

目的：应用经皮血氧分压对低血容量休克的不同时期进行诊断,并进行预后判断中的临床价值分析。方法：2013年5月至2014年8月我院收治的具有失血性休克征象的住院病患150例作为研究对象。根据病患所处休克的时期相应分为A组、B组和C组。并使用经皮血氧分压对每组病患进行诊断,观察记录所有病患的动脉血压（BP）、动脉血氧分压（PaO2）以及组织氧分压（PtCO2）。结果：A组经过复苏后结局显著优于B组和C组,死亡率显著低于C组（ P＜0．05）,B组完美复苏率显著优于C组,死亡率显著低于C组（ P＜0．05）。 A组患者休克中收缩压和PaO 2与休克前比较无统计学差异（P＞0．05）,休克中PtCO2显著低于休克前（P＜0．05）,在进行复苏后收缩压、PaO2、PtCO2开始不同程度上升（ P＜0．05）,A组上述指标显著优于B组、C组（ P＜0．05）。完美复苏患者和复苏后伴有并发症患者复苏后收缩压、PaO2、PtCO2开始不同程度上升（ P＜0．05）,死亡患者复苏后BP、PaO2、PtCO 2无显著变化（ P＞0．05）。结论：应用经皮血氧分压进行不同阶段的低血容量休克诊断能明显反映出机体失血后组织灌注的各项指标变化,有利于针对性治疗和复苏。临床诊断及预后判断都具有较高的价值,值得推荐。     

STUDY OF CULTURING CARDIOVASCULAR TISSUE IN VITRO

Objective To evaluate the feasibility of utilizing vascular cells combined with folded and framed culture model to develop completely autologous human tissue without using any scaffold material under the principles of Tissue Engineering. Methods Human vascular cells cultured from ascending aorta (group A ) and saphenous vein (group B) were seeded into 15cm-dishes (each n = 12 ) and cultured to form cell sheets over a period of four weeks with Dulbecco‘s modified Eagle‘s medium supplemented with lmmol/L L-ascorbic acid 2-phosphate. Thereafter, cell sheets (6 samples of each group) were four-layer folded and cultured in a newly developed frame device for additional four weeks. Controls remained under standard culture conditions. Tissue development was evaluated by light and electron microscopy, biochemical assays. Results The formation of multi-layered cell sheets and production of extracellular matrix were observed in each group after the initial four weeks. Analysis of the folded and framed neo-tissue revealed a solid structure with increased matrix formation and tissue organization compared to the control groups after additional four weeks. DNA assay indicated significantly lower cell proliferation infolded and framed cell sheets than in that of unframed counterparts. Yet hydroxyproline assay demonstrated significant increase of collagen content in the framed aortic and venous derived tissues, which contained 82% and 42% that of human pericardium. Conclusion It is feasible to obtain completely autologous human cardiovascular tissue with the alternative new approach. Numerous issues including improvement of mechanical strength of neo-tissue remain to be investingated.     

用组织培养法保存软骨活性

目的 :观察用组织培养法保存软骨块活性的可行性 .方法 :取成年新西兰白兔全厚层喉甲状软骨 ,切成大小约5mm× 2mm× 1mm小块后用RPMI16 4 0培养液进行组织培养 ,并与 4 0 g·L-1甲醛和 9mL·L-1生理盐水所保存的软骨在保存 2 4h ,5 ,10 ,2 0和 30d时分别用倒置显微镜、HE和AB/PAS切片染色及台盼蓝排斥试验进行软骨活性比较 .结果 :用 4 0mL·L-1甲醛和生理盐水所保存的软骨分别于 2 4h及10d后基本失去活性 ,软骨细胞及基质变性坏死 ,而用RPMI16 4 0培养液所保存软骨在培养 30d后仍保持较好活性 ,软骨基质强度无明显变化 ,软骨细胞活性保持在 75 %以上 .结论 :与甲醛等化学保存方法相比 ,用组织培养法能较长期地保存软骨块活性 ,有望为临床提供一种活性较好的新型软骨材料     

循环灌注式三维组织培养装置的设计及其性能测试

目的一种循环灌注式三维组织培养装置的设计并测试其性能.方法设计、制造一套循环灌注式三维组织培养装置,然后测定其流量、恒温效果、无菌效果并进行工程化组织的初步培养观察.结果循环灌注式三维组织培养装置可提供的循环流量为5.5～87.5 ml/min,流量恒定,培养室内温度可控制在36.5～37.5℃,昼夜温差小,系统连续运转7 d培养液中无细菌生长,初步培养结果表明,体外构建的组织工程骨在循环灌注式三维组织培养装置中可获得良好的培养效果.结论循环灌注式三维组织培养装置可用于组织工程研究,也可为临床提供较大量的工程化组织,是一种较为理想的组织工程生物反应器.     

肾素-血管紧张素-醛固酮系统中不同组分在脂肪组织中的表达

目的观察肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的不同组分在人皮下、肾脏和肾上腺周围脂肪组织中的表达,探讨不同脂肪组织中RAAS各组分的特点。方法提取12例皮下脂肪、12例肾周脂肪和9例肾上腺周围脂肪总RNA,逆转录-聚合酶链反应方法进行血管紧张素原(AGT)、肾素(Renin)、血管紧张素转化酶(ACE)、血管紧张素转化酶2(ACE2)、血管紧张素Ⅱ受体1(AT1)、血管紧张素Ⅱ受体2(AT2)、醛固酮合成酶(CYP11B2)的mR-NA表达。结果皮下、肾脏和肾上腺周围脂肪组织中均存在AGT、ACE、ACE2、AT1和AT2mRNA表达,无CYP11B2mRNA表达。肾素mRNA仅在肾周和肾上腺周围脂肪组织中表达,其在肾周的表达显著高于肾上腺周围脂肪组织(P<0·05)。ACE、ACE2mRNA在肾周脂肪组织中的表达显著高于皮下脂肪组织(P<0·05)。ACEmRNA在3种脂肪组织中的表达均显著高于ACE2(P<0·05)。在肾上腺周围脂肪组织中,AT2mRNA的表达显著高于AT1(P<0·05)。结论脂肪组织中存在局部肾素-血管紧张素系统,但无醛固酮合成。     

体外培养心血管组织的研究

目的 探讨以血管细胞结合折叠-支架培养模式来获得完全自身心血管新生组织的可行性。方法 将人体大隐静脉和升主动脉血管壁组织培养出的细胞种植于15cm培养碟中，经过4周的培养，将获得的细胞薄膜折叠成4层，固定于支架上，再经过4周的培养，获得来源于静脉或动脉血管壁的完全自身组织。比较二种来源的新生组织的组织学、超微形态学、DNA含量、胶原含量的差异。结果 经过4周的培养，二种来源的细胞都形成含有多层细胞的薄膜；再4周的培养后，折叠-支架培养模式得到的组织比非折叠-支架培养的组织更有弹性，形态学上更均一致密，有更多的细胞外基质生成，虽然DNA含量低于后肯，但胶原含量明显高于后者；动脉和静脉来源的细胞经折叠-支架培养得到的组织，其胶原含量分别达到人体心包的82％和42％。结论 仅以血管细胞结合折叠-支架培养模式来获得完全自身心血管新生组织的方法是可行的。     

脑垂体生长激素的提取及其特性鉴定

本文报道一种从新鲜、冰冻猪脑垂体提取高纯度生长激素 (FGH) 的程序,包括常规的萃取、离子交换树脂层析和凝胶过滤。使用超速离心、聚丙烯酰胺凝胶电泳和生物学分析测定PGH的特性,其蛋白质的分予量是22000,沉降系数 (S20W) 为2.2267。每克新鲜猪脑垂体可获得0.8mg PGH。     

带血管蒂组织瓣转位修复小腿组织缺损

目的 :回顾性研究了带血管蒂组织瓣转位修复小腿组织缺损的治疗效果。方法 :应用腓肠肌皮瓣、肌瓣、比目鱼肌瓣、肌骨膜瓣、跗外侧血管蒂骰骨趾短伸肌复合瓣、胫前或胫后血管节段性骨膜支骨膜瓣转位修复小腿组织缺损 37例。结果 :组织瓣全部存活 ,骨愈合时间 4～ 6个月 ,无炎症复发、窦道及溃疡。结论 :带血管蒂组织瓣转位修复小腿组织缺损 ,疗程短、疗效好 ,手术简便易行 ,不仅可修复软组织缺损 ,而且同时一期修复骨缺损。     

组织因子及组织因子途径抑制物在PCI中无复流的研究进展

研究发现组织因子及组织因子途径抑制物与PCI中无复流的发生密切相关,现就组织因子及组织因子途径抑制物与无复流做一综述。     

基于重组组织因子凝血活酶试剂的研究进展

在20世纪90年代出现可纯化TF之前,凝血活酶试剂由人或动物组织粗提物制成。近年来,已经使用高度纯化的重组组织因子（rTF）或者可溶性组织因子（sTF）来制备凝血活酶试剂。本文综述国内外基于重组组织因子的凝血酶原试剂研发技术的发展历程,归纳出重组凝血活酶试剂优于组织提取物试剂的特点,分析了凝血活酶的发展趋势,并指出高灵敏性和稳定性重组凝血活酶是未来凝血活酶的发展方向。     

联合应用Schwann细胞与同种异体基底膜修复鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 :观察自体Schwann细胞与同种异体基底膜合用促进鼠坐骨神经再生的能力。方法 :将无细胞成分的同种异体基底膜与Schwann细胞混合培养 7d ,获得含Schwann细胞的基底膜。 2 4只BALB/C小鼠随机分为A、B两组并分别移植含有Schwann细胞的基底膜及无细胞成分的基底膜。术后 1,2 ,4,8周测定A、B两组坐骨神经功能指数 (SFI)及再生髓鞘平均厚度 (TRMS)。结果 :术后 1,2周 ,A、B两组SFI及TRMS无差异 (P >0 .0 5 ) ,术后 4,8周 ,A组SFI及TRMS优于B组 (P <0 .0 1)。结论 :自体Schwann细胞与同种异体基底膜合用可较单纯的基底膜更好地促进神经再生及功能的恢复。