碱性成纤维细胞生长因子对卵巢癌CAOV3细胞cyclin D1及GADD153表达的影响

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人卵巢癌CAOV3细胞细胞周期调节蛋白cyclin D1 及GADD153表达的影响，探讨bFGF促进人卵巢癌CAOV3细胞增殖、抑制凋亡的信号机制。方法:利用无血清饥饿诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡。分为对照组、bFGF组。分别应用MTT、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳观察 25、50、75 μg/L bFGF对CAOV3细胞增殖率、细胞周期及细胞凋亡的影响。利用Western blotting检测bFGF对CAOV3细胞cyclin D1、GADD153以及转录因子（c-Fos、c-Jun）表达的影响。结果:与对照组相比，bFGF呈剂量依赖性加速CAOV3细胞细胞周期进程，促进细胞增殖，抑制饥饿诱导的凋亡（P＜0.01）；呈时间依赖性促进cyclin D1、c-Fos、c-Jun，抑制GADD153蛋白表达（P＜0.01）。结论:bFGF可能通过上调cyclin D1、c-Fos、c-Jun，下调GADD153表达促进细胞增殖，抑制饥饿诱导的卵巢癌CAOV3细胞凋亡。     

Roscovitine促进增殖期PC12细胞凋亡

目的探讨细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）抑制剂Roscovitine导致增殖期PC12细胞死亡的性质和CDK调控的细胞周期与细胞凋亡的关系。方法利用培养的增殖期PC12细胞模型，进行MTT细胞活性检测、Hoechst 33342胞核荧光染色和倒置显微镜观察。结果分别用5、10、20、50和100μmol／L浓度的Roscovitine溶液处理细胞12h，细胞存活率呈剂量依赖性下降；另外，50μmol／L浓度的Roscovitine分别处理细胞4、12、24和48h，细胞死亡也呈现时间依赖性。细胞死亡的形态学表现是细胞皱缩、核染色体固缩和核碎片形成。结论Roscotivine导致的增殖期PC12细胞凋亡与CDK调控的细胞周期蛋白有关。     

槲皮素对U937细胞系抑制增殖和诱导凋亡作用的研究

目的 探讨黄酮类化合物槲皮素（Que）对人类单核细胞白血病U937细胞系的抑制增殖和诱导凋亡的作用。方法 应用MTT法检测不同浓度槲皮素对U937细胞的增殖抑制作用；AO／PI荧光染色后倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化；琼脂糖凝胶电泳测定细胞DNA的片段化；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布。结果槲皮素能明显抑制U937细胞增殖，并存在剂量-效应关系和时间-效应关系；诱导U937细胞出现凋亡所具有的形态学和生化特征；随着槲皮素浓度升高，凋亡细胞和坏死细胞比例增加；将细胞特异性地阻滞在S期，出现凋亡峰。结论 槲皮素能抑制U937细胞增殖，诱导细胞凋亡，并具有细胞周期特异性。     

γ-氨基丁酸对人细胞因子诱导的杀伤细胞增殖的影响

目的：研究γ-氨基丁酸（GABA）及A受体激动剂（THIP）对人细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-induced killer，CIK）增殖和凋亡的影响以及作用机制。方法：在体外用不同浓度的GABA和THIP与人CIK细胞作用后，用MTT比色法和流式细胞仪（FCM）检测人CIK细胞的增殖能力、细胞凋亡、细胞周期和免疫表型的变化。结果：GABA能显著抑制CIK细胞的生长（P〈0．01），且具有浓度依赖性，THIP对GABA的抑制细胞增殖有明显促进作用；GABA显著影响细胞周期比例的分布，促进细胞凋亡；GABA显著降低CIK细胞表面分子CD28、CD25的表达，并能被THIP增强。结论：GABA可抑制CIK细胞增殖，诱导其凋亡，降低其细胞表面CD28、CD25的表达，抑制T淋巴细胞活化，具有免疫抑制作用。这些作用通过T淋巴细胞上的GABAA受体介导。     

下调解耦联蛋白2表达抑制Fadu细胞增殖

目的 探讨解耦联蛋白2（UCP2）对下咽癌Fadu细胞的影响，及UCP2对细胞周期以及细胞增殖的影响；同时探讨临床常用化疗药物顺铂（cisplatin）对UCP2基因下调后的Fadu细胞增殖的影响。 方法 流式细胞术/PI染色法检测UCP2基因对Fadu细胞周期的影响；集落形成实验检测UCP2基因下调对Fadu细胞增殖的影响；MTT法和Brdu法检测UCP2能否增强Fadu细胞对顺铂的敏感性以及使用UCP2抑制剂京平尼（genipin）处理细胞后，Fadu细胞的增殖情况。 结果 干扰UCP2表达抑制Fadu细胞周期于G₁/S期；抑制细胞集落形成，但干扰UCP2表达对cisplatin抑制Fadu增殖无协同作用；genipin抑制UCP2的表达后，细胞增殖受到抑制，具有时间/浓度依赖性。 结论 下调UCP2的表达后，Fadu细胞的增殖能力减弱，且抑制细胞周期于G₁/S期，提示UCP2可能在下咽癌Fadu细胞增殖过程中发挥重要的调节作用。     

atRA对新生大鼠纹状体神经干细胞增殖和分化的影响

目的：研究全反式视黄酸（atRA）对体外培养的NSCs分裂增殖和分化的作用及其机制。 方法： 分离培养新生SD大鼠纹状体神经干细胞（NSCs），免疫荧光细胞染色加以鉴定；采用不同组合配方的培养液培养细胞，FCM检测atRA对NSCs细胞周期分布和增殖的影响；利用免疫荧光鉴定和分化细胞的分类计数法，判定atRA对NSCs分化的影响。 结果： 细胞周期分析表明，atRA处理组G0/G1期细胞数量显著增加，PI值小于对照组。atRA处理组与对照组的NSCs，经诱导分化后产生的细胞类型有显著差异，atRA处理组产生的神经元是对照组的2.5倍。 结论： atRA能抑制NSCs细胞增殖，并抵消生长因子对NSCs的促有丝分裂作用，atRA还促进NSCs向神经元方向分化。     

脂氧素A4拮抗肿瘤坏死因子α对系膜细胞Jak1/STAT3途径的活化

目的：验证脂氧素A4(LXA4) 是否抑制肿瘤坏死因子α(TNFα) 所致的大鼠肾小球系膜细胞的增殖，并探讨其作用中信号转导的分子机制。 方法： 对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞，用不同浓度的LXA4 预刺激，再加入TNFα共同孵育，或单用TNFα刺激系膜细胞。用MTT渗入法检测细胞的增殖。用凝胶电泳迁移率试验（EMSA）检测信号转导子和转录激活子-3（STAT3）的活性。用RT-PCR法检测细胞周期素E的mRNA表达。用Western blotting法检测细胞周期素E的蛋白表达量。结果： LXA4呈剂量依赖性地抑制TNFα诱导的肾小球系膜细胞的增殖、STAT3结合活性增加、细胞周期素E mRNA表达与蛋白合成的亢进。结论： LXA4能够抑制TNFα所致的大鼠系膜细胞的增殖，其机制可能是阻断Jak1/STAT3信号转导途径。     

小檗碱抗肿瘤新生血管形成作用机制的研究

目的：研究小檗碱对bFGF活化人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响，探讨其对肿瘤新生血管形成作用的机制。方法：MTT法检测小檗碱对bFGF活化HUVEC的增殖作用；流式细胞仪检测用药后细胞周期的变化；激光共聚焦扫描显微镜下观察药物对细胞形态、细胞内钙的影响；流式细胞仪检测小檗碱对细胞凋亡的作用。结果：小檗碱能明显抑制bFGF活化的HUVEC增殖，且存在剂量依赖关系；使细胞在G0-G1期的比例明显增多；使细胞核浓缩、甚至裂解成碎块，同时使细胞内钙增多；并诱导活化HUVEC发生细胞凋亡。结论：小檗碱可能通过将bFGF活化的HUVEC细胞周期阻滞在G0-G1期，抑制活化HUVEC的增殖：诱导活化HUVEC细胞发生凋亡等机制，阻止新生血管形成，发挥其抗肿瘤作用。     

抗角蛋白16单克隆抗体对角质质形成细胞增殖活性的影响

目的 研究抗角蛋白单克隆抗体（mAb）对体外培养的角质形成细胞增殖活性与细胞周期的影响。方法 以无血清培养基体外原代培养角质形成细胞。应用^3H-TdR掺入DNA合成测定法，观察抗角蛋白16mAb(anti-K16 mAb)对角质形成细胞代谢增殖的影响。用流式细胞仪分析anti-K16 mAb作用后角质形成细胞的细胞周期变化。结果 mAb作用后，角质形成细胞样品的epm降低，并呈抗体剂量依赖方式。流式细胞信分析表明，处于S期的细胞比例由27％上升至42．2％，同时处于G1期与G2期的细胞比例分别相应下降。结论 anti-K16 mAb可抑制体外培养的角质形成细胞的增殖活性，且将细胞阻滞于S期，无法进入G2期与M期分裂增殖。     

上调胰岛素样生长因子结合蛋白6基因对乳腺癌细胞 MDA-MB-231细胞周期和凋亡的影响*

目的：探究上调胰岛素样生长因子结合蛋白6（IGFBP-6）基因对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞周期和凋 亡的影响。方法：体外培养人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,转染IGFBP-6 过表达质粒,实时荧光定量PCR 法验证转染效率;流式细胞术检测转染IGFBP-6 后的细胞周期的改变及凋亡的情况;免疫印迹检测增殖细胞核抗 原（PCNA）、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、凋亡相关蛋白Bcl-2 和Bax 的蛋白表达水平。结果：IGFBP-6 转染 MDA-MB-231细胞后,IGFBP-6 的mRNA水平明显上调;PCNA、细胞周期蛋白D1 的表达水平明显降低;细胞 G1/S 期阻滞;凋亡细胞增多。结论：IGFBP-6 可以显著抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

细胞周期调控研究进展

细胞周期是细胞生命活动的基本过程,由细胞周期素（Cyclin)依次激活相应的细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）所推动。Cyclin的周期性积累与分解对细胞周期进展起着正调控作用,而细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（CKI）通过在细胞周期适当的时间点上抑制CDK的活性,从而对细胞周期进展起负调控作用。Cyclin、CDK、CKI多因素相互协同作用,通过pRb途径和p53途径共同影响细胞周期进程。对细胞周期调控的研究有助于阐明肿瘤的发生以及终末细胞的分化,将为治疗肿瘤和诱导终末分化细胞的增殖提供有益的思路。     

细胞周期分子调控与癌变

细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）、细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶（ＣＤＫ）以及ＣＤＫ抑制蛋白（ＣＫＩ）三类分子的调控。细胞周期蛋白分别在细胞周期的不同时期程序性合成和降解，同时做为调节亚基对ＣＤＫ活性进行调节，ＣＤＫ的活性还受磷酸化状态的影响。ＣＫＩ能结合ＣＤＫ－ｃｙｃｌｉｎ复合物并抑制其活性，ＣＫＩ的失活可导致ＣＤＫ活性的异常，使细胞无限增殖。肿瘤的发生同细胞周期调控机制的改变密切相关。     

血管紧张素Ⅱ和血小板源生长因子对心肌细胞周期素和p27蛋白表达量的调节

目的：细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎ）和ＣＤＫ抑制蛋白（ＣＫＩ）是对细胞周期起正性和负性调节作用的两类物质。ｐ２７蛋白是ＣＫＩ的一种，主要对细胞外部促进或抑制增殖的信号起反应。本文观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对心肌细胞细胞周期素和ｐ２７蛋白表达量的影响。方法：培养的心肌细胞除血清２４ｈ使其处于静止状态，加入ＡｎｇⅡ１０－６ｍｏｌ／Ｌ、ＰＤＧＦ－ＢＢ２０ｎｇ／ｍＬ后不同时间收集细胞，用碘化丙啶（ＰＩ）标记细胞ＤＮＡ，以确定细胞所处的周期。用细胞周期素或ｐ２７蛋白的单抗和标记ＦＩＴＣ的二抗标记细胞，用流式细胞仪测定被激发出的荧光量来测定细胞周期素和ｐ２７蛋白表达的相对量。结果：ＡｎｇⅡ可促进细胞周期素的表达，但对ｐ２７蛋白的表达没有影响，不能促进心肌细胞增殖；ＰＤＧＦ明显促进心肌细胞细胞周期素的表达，也不能明显抑制ｐ２７的表达，也不能促进心肌细胞增殖。结论：细胞周期素的表达增加与心肌细胞能否进入细胞周期并不一致，ｐ２７蛋白是心肌细胞能否进入细胞周期并进行有丝分裂的重要调节因子。     

细胞周期分子调控与癌变

细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）、细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶（ＣＤＫ）以及ＣＤＫ抑制蛋白（ＣＫＩ）三类分子的调控。细胞周期蛋白分别在细胞周期的不同时期程序性合成和降解，同时做为调节亚基对ＣＤＫ活性进行调节。ＣＤＫ的活性还受磷酸化状态的影响。ＣＫＩ能结合ＣＤＫ－ｃｙｃｌｉｎ复合物并抑制其活性，ＣＫＩ的失活可导致ＣＤＫ活性的异常。使细胞无限增殖。肿瘤的发生同细胞周期调控机制的改变密切相关。     

TMB-8对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的: 研究胞内钙离子释放阻断剂8- (N,N-二乙胺) 辛基-3,4,5-三甲氧基苯甲酸酯（TMB-8）对刀豆蛋白A（Con A）介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响。方法: 以Con A作为T细胞活化、增殖的刺激剂，以不同浓度的TMB-8及与环孢菌素A（CsA）联合作用于该系统，用流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子的表达；以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）染色流式细胞术，分析TMB-8在Con A刺激下小鼠淋巴细胞的增殖相关指数（PI）；以碘化丙啶染色分析细胞周期的分布情况。结果: Con A作用6 h后，CD69+ T细胞的比率为（74.88±1.88）%，TMB-8在终浓度10、20、40 μmol/L下均抑制Con A介导的T细胞CD69表达（P<0.01），其中，40 μmol/L的TMB-8为（52.55±1.54）%, 达到最高抑制率。培养48 h和72 h，Con A刺激下的PI值分别为1.24±0.01和2.05±0.07，TMB-8从5 μmol/L起均抑制Con A介导的淋巴细胞增殖（P<0.01），以40 μmol/L的效果最为显著，PI值分别为1.01±0.01和1.10±0.01；10 μmol/L的TMB-8与25 μg/L的环孢菌素A（CsA）具有明显的协同抑制作用（P<0.01）。细胞周期分析显示，培养48 h的TMB-8从10 μmol/L起即显著抑制S期（P<0.01）。结论: TMB-8可明显抑制Con A介导下的T细胞早期活化及增殖，并具T细胞周期的S期阻滞作用。     

两株肺癌细胞系体外培养细胞和裸鼠体内移植瘤细胞增殖状态的比较研究

目的：比较两株肺癌细胞系（经实验证明为高、低侵袭系）体外培养细胞和裸鼠体内移植瘤细胞的增殖状态；方法：采用激光流式细胞仪，测量单个完整细胞群体的ＤＮＡ含量，分析其各细胞周期的比率；结果：体外培养的高增殖系细胞，移植入裸鼠体内后其Ｇ２／Ｍ期细胞比率反而降低，体外培养的低增殖系细胞，移植入裸鼠体内后其Ｇ２／Ｍ细胞比率反而升高，两株肺癌细胞系的增殖指数间无显著差异；结论：两株肺癌细胞系在体内、外增殖状况的差异性，说明肿瘤细胞在体外增殖速度的快慢不能准确反映其在体内的增殖状态，必须结合肿瘤细胞的其它生物学特性，才能比较准确地分析和判断肿瘤细胞的恶性程度。     

鬼臼苦素对人结直肠癌HCT-15细胞增殖和周期的影响及其作用机制

目的 探讨鬼臼苦素（PPP）对人结直肠癌细胞系HCT-15细胞增殖和周期的影响及其作用机制。方法 不同浓度PPP处理HCT-15细胞,采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测HCT-15细胞的增殖活性;倒置显微镜下观察HCT-15细胞的形态变化;流式细胞术检测HCT-15细胞周期的改变;Western blotting检测增殖细胞核抗原（PCNA）及细胞周期蛋白D1（cyclinD1）的蛋白表达水平。结果 CCK-8法结果显示,PPP能显著抑制HCT-15细胞的增殖活性,并呈剂量-时间依懒性;倒置显微镜下观察发现,细胞失去原有形态回缩为圆形,折光性降低,活细胞数量明显减少;流式细胞术结果显示,G₂/M期细胞比例显著升高,G₀/G₁期和S期细胞比例明显降低;Western blotting结果显示,PCNA、细胞周期蛋白D1的表达水平明显降低。结论 PPP可显著抑制人结直肠癌HCT-15细胞的增殖,其作用机制可能是通过下调PCNA、cyclinD1的表达水平,进而将细胞阻滞于G₂/M期发挥抑制作用。     

Cyclin D1和p16蛋白在胎儿心肌细胞中的表达

心肌细胞从胚胎期具有增殖能力的细胞成为成年期不具有增殖能力而只有发生肥大反应能力的过程中,存在增殖能力的变化和逐渐分化现象,该现象受细胞周期调控。细胞周期素(cyclin)是对细胞周期起正性调节作用的一类物质。p16蛋白是细胞周期素依赖的蛋白激酶     

低表达S100钙离子结合蛋白A6促进食管腺癌SK-GT-4细胞的增殖和迁移

目的 探讨S100钙离子结合蛋白A6（S100A6）对食管腺癌SK-GT-4细胞增殖和迁移的影响。 方法 慢病毒转染,构建稳定细胞系shNC和shS100A6,Real-time PCR检测S100A6 mRNA表达情况;倒置显微镜和MTT检测细胞的增殖能力,Transwell检测细胞的迁移能力及U0126（MER1/2的抑制剂）、LY294002（PI3K抑制剂）对细胞增殖、迁移的影响;Western blotting检测细胞中S100A6、p-ERK、p-Akt及其下游参与增殖、迁移的相关蛋白的表达情况,检测U0126、LY294002对p-ERK、p-Akt及其下游参与增殖、迁移的相关蛋白表达的影响。 结果 构建了敲低S100A6的稳定细胞系,敲低S100A6促进了细胞的增殖和迁移,p-ERK、p-Akt水平升高,细胞周期抑制蛋白p21表达量下降、细胞周期蛋白D1(cyclinD1）表达升高,间质细胞标志蛋白——波形蛋白（vimentin）、β-连环蛋白（β-catenin）表达升高;U0126处理shS100A6细胞后,对细胞的增殖无影响,抑制细胞的迁移,p-ERK、β-catenin表达下降;LY294002处理shS100A6细胞后,抑制细胞的增殖和迁移,p-Akt表达下降,p21表达量升高,cyclinD1表达量下降,β-catenin表达下降。 结论 低表达S100A6促进细胞的增殖和迁移,其可能机制是通过p-Akt调控细胞周期的进程促进细胞增殖,通过激活p-Akt/p-ERK调控β-catenin促进细胞的迁移。     

鼠内皮抑素基因腺病毒载体的构建及对血管内皮细胞的生长抑制

构建含鼠内皮抑素基因的腺病毒载体（pAd／mEnd），并观察内皮抑素蛋白对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的生长抑制、细胞周期和凋亡的影响。结果发现pAd／mEnd感染BEL7402细胞后，能有效表达内皮抑素蛋白，显著抑制HUVEC增殖，阻滞HUVEC细胞S期，凋亡指数显著增加。