基质金属蛋白酶/金属蛋白酶组织抑制因子在大鼠创伤性深静脉血栓形成中的表达及作用

背景：创伤性深静脉血栓形成机制复杂，大量研究主要集中在临床观察和流行病学层面，其分子机制研究一直没有新的突破。 目的：应用基因芯片技术研究创伤性深静脉血栓形成过程中基质金属蛋白酶的表达变化规律，探讨其在创伤性深静脉血栓形成中的作用。 方法：SPF级8~12周龄SD大鼠150只，体质量250~300 g，随机分为正常对照组10只和模型组140只。模型组140只采用直接钳夹股静脉+双后肢石膏固定方式，建立大鼠创伤性深静脉血栓动物模型。又分为7组亚组，创伤即刻组(0.5 h)、血栓形成初始期组(2.5 h)、高峰期血栓形成组(25 h)、高峰期血栓不形成组(25 h)、血栓消退组(72 h)、血栓不消退组(72 h)和创伤后持续无血栓组(168 h)，每组10只。在相应时相点无创切取股静脉血管组织，随后抽取总RNA，采用Genechip Rat Genome 430 2.0芯片对股静脉血管组织进行基因表达检测。观察创伤性深静脉血栓形成与不形成和消退与不消退的发生率；运用基因芯片数据分析方法分析基质金属蛋白酶和金属蛋白酶组织抑制因子在各时相点的表达。 结果与结论：模型组死亡3只，147只大鼠进入结果分析。造模后25 h血栓形成率约为50.5%，血栓不形成率约为49.5%；168 h，有血栓的大鼠中大概有56.7%发生消退，43.3%的血栓持续存在不消退。基质金属蛋白酶和金属蛋白酶组织抑制因子等均呈不同程度差异表达。血栓不消退状态时，基质金属蛋白酶仍呈高表达，金属蛋白酶组织抑制因子表达在血栓形成过程中处于下调状态，在消退过程呈明显抑制状态。在创伤性深静脉血栓形成与消退演化过程中，创伤后基质金属蛋白酶与创伤性深静脉血栓之间存在密切的关系，基质金属蛋白酶/ 金属蛋白酶组织抑制因子可能是影响血栓生物学状态的重要因素之一。     

组织蛋白酶L/G对创伤性深静脉血栓模型大鼠静脉壁的影响

背景：目前,深静脉血栓的分子病因学机制及其形成的核心调控网络仍未完全阐明,对于深静脉血栓的早期诊断预测也无理想的方法。 目的：研究组织蛋白酶L/G与创伤性深静脉血栓的预测。 方法：采用蚊式钳夹闭50只SD大鼠双侧股静脉的3个不同部位3 s随后予以模具制动制备大鼠创伤性深静脉血栓模型,根据股静脉血栓形成的不同阶段和生物学特征,将模型大鼠分为血栓形成前组、血栓形成组和无血栓形成组,另取10只正常大鼠作为对照组。在相应时间点取大鼠创伤静脉,提取总RNA,经过基因芯片技术筛选差异表达基因,并进一步应用real-time PCR进行验证。 结果与结论：基因芯片杂交结果发现组织蛋白酶L/G基因在各组间差异表达明显,其中血栓形成组最高,无血栓形成组和血栓形成前组次之,均明显高于对照组(P < 0.05);real-time PCR分析结果与基因芯片杂交分析结果相一致。说明局部静脉血管壁中组织蛋白酶L/G表达水平升高与创伤性深静脉血栓形成有关,可作为深静脉血栓形成早期诊断、预测的候选分子标志。     

创伤后深静脉血栓形成中的黏着斑激酶信号通路*☆

背景：创伤后深静脉血栓形成的分子机制复杂,黏着斑激酶信号通路在深静脉血栓形成过程中的作用尚未阐明。 目的：探讨黏着斑激酶信号通路在创伤性深静脉血栓形成中的作用。 方法：取20只SD大鼠制备股骨骨折模型。造模后5 d,根据血栓形成情况将模型大鼠分为2组：血栓形成组和无血栓形成组,每组10只。另取10只正常大鼠作为对照组。无创切取大鼠股静脉血管组织,抽取总RNA,Genechip Rat Genome 430 2.0芯片测定股静脉RNA的表达,并分析黏着斑激酶信号通路基因表达的变化。 结果与结论：与无血栓形成组比较,血栓形成组中黏着斑激酶信号通路细胞外基质、蛋白激酶C、Fyn、辅肌动蛋白、Vav等关键基因均上调;下调的有整联蛋白α、肌球蛋白轻链磷酸酶、c-Jun基因。结果提示黏着斑激酶信号通路可能是调控血栓生物学状态的重要信号通路。     

创伤性深静脉血栓模型大鼠组织蛋白酶B，C基因对血管内皮细胞的作用☆

背景：骨科手术后易出现深静脉血栓形成，但目前临床上对此尚缺乏有效预测诊断手段，组织蛋白酶可能是血栓形成的有效生物标记物。 目的：观察大鼠深静脉血栓形成前后组织蛋白酶B和组织蛋白酶 C在血细胞中的表达变化情况，探讨二者作为深静脉血栓形成早期诊断候选分子标志物的可行性。 方法：将100只SD大鼠随机分为正常对照组和模型组，模型组采用血管钳夹股静脉+双后肢固定制动的方式建立大鼠创伤性深静脉血栓模型，根据观察时间点和血栓形成情 况分为血栓形成前组、血栓形成高峰期组和血栓不形成组，提取各组血液RNA并反转录为cDNA，应用实时荧光定量PCR检测组织蛋白酶 B和组织蛋白酶 C在血细胞中的表达变化情况。 结果与结论：血栓形成高峰期组大鼠血细胞中组织蛋白酶B，C 表达明显，血栓形成前组和血栓不形成组大鼠血细胞中组织蛋白酶B，C表达于正常对照组大鼠为无明显差异。提示组织蛋白酶B和组织蛋白酶C与深静脉血栓形成密切相关，可作为深静脉血栓形成早期诊断的候选分子标志物。     

螺内酯对碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管形成的影响及其机制研究

背景：螺内酯为醛固酮受体拮抗剂,近来有实验证实螺内酯在体内外能够有效地抑制新生血管的形成。 目的：验证螺内酯对碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管的抑制作用。 方法：取SD大鼠36只,采用碱烧伤方法制备大鼠角膜新生血管模型,造模后以数字表法随机分成实验组和对照组。实验组术后灌胃给予螺内酯100 mg/kg,1次/d,对照组灌胃给予等量生理盐水。另取大鼠6只不作任何处理作为正常对照组。于造模后4,7,14 d运用裂隙灯观察各组大鼠角膜新生血管并计算面积,并每组随机处死6只大鼠,运用免疫组化染色方法和计算机图像分析系统检测观察血管内皮细胞生长因子及基质金属蛋白酶2的表达。 结果与结论：正常角膜组织未见炎症细胞与新生血管,角膜上皮及基质层仅见微弱血管内皮细胞生长因子表达,未见基质金属蛋白酶2表达。与对照组比较,实验组各个时期新生血管面积减小,血管内皮细胞生长因子和基质金属蛋白酶2表达降低(P < 0.05)。提示螺内酯可能通过参与下调血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶2表达,从而有效地抑制角膜新生血管的形成。     

重组人表皮生长因子对大鼠角膜碱烧伤后基质金属蛋白酶的影响

背景：研究表明,基质金属蛋白酶1与组织金属蛋白酶抑制剂1在碱烧伤后角膜缺损溃疡的发生发展转归中扮演着重要的角色。 目的：观察重组人表皮生长因子对碱烧伤后角膜的促恢复作用,并探讨重组人表皮生长因子对角膜碱烧伤后基质金属蛋白酶及其抑制剂在大鼠角膜中的表达影响及意义。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-03/2009-05在辽宁医学院实验动物中心完成。 材料：健康SD大鼠60只,体质量180~210 g,鼠龄6~8周,雌雄各半,实验前用裂隙灯显微镜检查证实无眼前段病变。 方法：将60只大鼠随机分为实验组和对照组,每组30只。建立大鼠角膜碱烧伤模型,实验组大鼠角膜给予重组人表皮生长因子滴眼液滴眼,对照组给予生理盐水滴眼液滴眼,4次/d,连续用药21 d。于碱烧伤后1,4,7,14,21 d每组分别随机处死6只大鼠,取角膜组织。 主要观察指标：①裂隙灯显微镜观察烧伤后两组大鼠角膜变化。②在碱烧伤后不同时期用免疫组织化学染色方法和计算机图像分析系统检测基质金属蛋白酶1及组织金属蛋白酶抑制剂1的表达。 结果：裂隙灯显微镜观察,烧伤后第14天实验组角膜溃疡面积与同期对照组相比明显减少。对照组角膜中基质金属蛋白酶1于伤后第1天开始升高,14 d达到最高,此后呈现下降趋势。而组织金属蛋白酶抑制剂1早期有所表达,而后活性逐渐下降,伤后第14天降至最低水平,此后又再度上升,21 d时达到最高。实验组各时间点基质金属蛋白酶1表达低于对照组,而组织金属蛋白酶抑制剂1表达高于对照组。 结论：重组人表皮生长因子可通过调节基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达平衡,从而能有效促进角膜上皮缺损的修复。     

大鼠胸主动脉损伤后基质金属蛋白酶组织抑制因子1，2的表达与血管内膜增生

背景：已有研究发现,基质金属蛋白酶及其组织特异性抑制因子通过影响血管平滑肌细胞迁移以及细胞外基质的代谢参与再狭窄过程。 目的：观察基质金属蛋白酶组织抑制因子1,2在大鼠胸主动脉损伤后不同时间的表达情况。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-07在辽宁医学院动物实验中心完成。 材料：选用SD雄性大鼠60只,按随机数字表法分为2组,单纯球囊损伤组及对照组各30只。 方法：单纯球囊损伤组大鼠采用2F Fogarty导管损伤胸主动脉;对照组行左颈总动脉结扎术,不插入2F Fogarty导管。 主要观察指标：2组于术后第1,3,7,10,14,28天分别处死5只大鼠,取完整的血管内膜,应用蛋白印迹法检测动脉损伤后不同时间点基质金属蛋白酶组织抑制因子1,2表达水平,并进行比较。 结果：基质金属蛋白酶组织抑制因子1于大鼠动脉损伤后第1天开始表达增加,第7天达到高峰,第28天几乎无表达。基质金属蛋白酶组织抑制因子2于大鼠动脉损伤后第1,3天仅有较弱的表达,第7,10天表达明显增加,第14天达到高峰,第28天仍有较强表达。对照组中各时间点基质金属蛋白酶组织抑制因子1,2的表达均无明显变化(P > 0.01)。术后各时间点基质金属蛋白酶组织抑制因子1,2的表达水平单纯球囊损伤组均显著高于对照组(P < 0.01)。 结论：大鼠胸主动脉球囊损伤后基质金属蛋白酶组织抑制因子1,2的表达均明显增加。 关键词：基质金属蛋白酶组织抑制因子1,2;动脉损伤;再狭窄     

重组腺病毒介导TIMP1基因对类风湿关节炎大鼠滑膜新生血管的影响

背景：滑膜血管翳形成后可分泌一系列酶如基质金属蛋白酶等,可促进血管新生和炎症反应,形成软骨和骨的破坏。 目的：研究重组腺病毒介导的基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)基因对类风湿关节炎模型大鼠关节炎症及滑膜血管新生的影响。 设计、时间及地点：基因治疗动物体内实验,于2005-07/2007-06在扬州大学完成。 材料：HEK-293A细胞系购于中科院上海细胞生物研究所细胞库,ECV-304细胞为自备,带有绿色荧光蛋白(GFP)基因或/和基质金属蛋白酶组织抑制因子1基因的重组腺病毒(rAD-GFP-TIMP1及rAD-GFP)的病毒贮存液由南京师范大学分子医学实验室惠赠。清洁级4~6周龄SD大鼠40只。 方法：将rAD-GFP-TIMP1和rAD-GFP扩增、纯化,用紫外分光光度法检测重组腺病毒的颗粒数。用rAD-GFP-TIMP1感染ECV-304细胞检测病毒活力。30只大鼠注射Ⅱ型胶原建立类风湿关节炎大鼠模型,分为：①模型组注射PBS。②模型+ rAD-GFP-TIMP1组注射rAD-GFP-TIMP1。③模型+RAD-GFP组注射rAD-GFP,均为膝关节腔内注射;10只大鼠注射生理盐水造模做对照组。1次/周,4周。 主要观察指标：①rAD-GFP-TIMP1及rAD-GFP在HEK-293A细胞中扩增、纯化后病毒的颗粒数及GFP蛋白表达。②各组大鼠每周进行1次关节炎指数评分。③于造模第4周处死大鼠取膝关节行滑膜病理免疫组织化学染色及微血管密度检测。④取血清采用Western Blot检测大鼠体内基质金属蛋白酶组织抑制因子1、血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶1,2,3,9的表达。 结果：①纯化后的rAD-GFP-TIMP1和rAD-GFP滴度分别为：5.7×1012,4.8×1012 pfu/mL;A260 nm/A280 nm均> 1.3;用rAD-GFP-TIMP1感染ECV-304细胞获得成功提示病毒活力正常。②感染rAD-GFP-TIMP1的关节炎大鼠血清中基质金属蛋 白酶组织抑制因子1获得了高表达,rAD-GFP-TIMP1治疗组大鼠血清中基质金属蛋白酶组织抑制因子1的相对含量明显高于模型组和rAD-GFP治疗组。③rAD-GFP-TIMP1治疗组的关节炎指数评分明显低于模型组。④感染rAD-GFP-TIMP1可使滑膜新生血管数目明显减少,同时能抑制基质金属蛋白酶1,3,9的表达,而对血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶2的抑制作用不明显。 结论：①感染rAD-GFP-TIMP1的大鼠体内基质金属蛋白酶组织抑制因子1基因获得了有效的表达。②感染rAD-GFP-TIMP1能明显降低模型大鼠的关节炎指数评分。③血管内皮生长因子,基质金属蛋白酶1,2,3,9共同参与促进关节炎大鼠滑膜血管新生的形成和发展,rAD-GFP-TIMP1可能通过抑制基质金属蛋白酶1,3,9的表达而发挥抗血管新生的作用。     

创伤性深静脉血栓模型大鼠及精氨酸酶Ⅰ表达的变化★

背景：近期相关研究发现精氨酸酶Ⅰ与多种心血管疾病发生发展有关, 但国内外相关研究大都集中在动脉， 并未对静脉性疾病， 进行广泛研究。 目的：观察深静脉血栓形成模型大鼠精氨酸酶Ⅰ的表达变化， 分析其在深静脉血栓形成过程中可能发挥的作用。 方法：将100只SD大鼠随机分为正常对照组和模型组，采用血管钳夹股静脉+双后肢髋人字石膏外固定制动的方式建立大鼠创伤性深静脉血栓模型， 根据不同的观察时间点和血栓形成的不同病理生理过程情况分为血栓形成前组、血栓形成高峰期组和无血栓形成组，提取各组血液RNA，应用实时荧光定量PCR检测精氨酸酶Ⅰ在各组血细胞中的表达变化。 结果与结论：血栓形成高峰期组精氨酸酶Ⅰ 表达量比其他3组明显上升(P < 0.01)，正常对照组、血栓形成前组和无血栓形成组精氨酸酶Ⅰ表达差异无显著性意义 (P > 0.05)。提示精氨酸酶Ⅰ与深静脉血栓形成密切相关。     

创伤性深静脉血栓形成大鼠模型Wnt信号通路的作用*☆

背景：创伤后深静脉血栓形成具有潜在的临床危害性,可并发肺栓塞、脑栓塞。Wnt信号途径调节控制多种疾病过程,可能影响深静脉血栓的形成。 目的：探讨Wnt信号通路在创伤性深静脉血栓形成中的作用。 方法：将30只SD大鼠随机分为正常对照组和模型组。模型组根据造模后的不同生物学状态再分为高峰期血栓形成组和高峰期血栓不形成组,造模后5d无创切取股静脉血管组织,随后抽取各组大鼠总RNA,用Genechip Rat Genome 230 2.0芯片测定股静脉RNA表达,并分析Wnt信号通路基因表达变化情况。 结果与结论：与正常对照组比较,血栓形成组发现1 906个基因出现表达差异,无血栓形成组差异表达基因数目合计1 568个;与无血栓形成组比较,血栓形成组有437个出现表达差异,其中Wnt信号通路卷曲相关蛋基因、膜联结合蛋白基因、酪蛋白激酶Ⅱ基因、p53基因、蛋白磷酶2A 基因、环腺苷酸依赖性激酶同功酶基因、连接素β基因、原癌基因、fos相关抗原基因、Rac基因、钙调素依赖型蛋白激酶Ⅱ基因、钙调神经磷酸酶基因等均上调;卷曲蛋白基因、磷脂酶C基因等下调。提示Wnt信号通路可能是调控血栓的生物学状态的重要信号通路之一。     

Matrix metalloproteinase-9 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 expression in early focal cerebral infarction following urokinase thrombolysis in rats

Activity of matrix metalloproteinase-9 increases following cerebral ischemia/reperfusion,and is associated with cerebral microvascular permeability,blood-brain barrier destruction,inflammatory cell infiltration and brain edema.Matrix metalloproteinase-9 also likely participates in thrombolysis.A rat model of middle cerebral artery infarction was established by injecting autologous blood clots into the internal carotid artery.At 3 hours following model induction,urokinase was injected into the caudal vein.Decreased neurological severity score,reduced infarct volume,and increased expression of matrix metalloproteinase-9 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 were observed in the cerebral cortex 24 hours after urokinase thrombolysis.These results suggest that urokinase can suppress damage in the acute-early stage of cerebral infarction.     

两次线栓法构建脑缺血耐受模型大鼠血脑屏障通透性改变与基质金属蛋白酶9的表达☆

背景：诸多研究证实,短暂性脑缺血预处理可诱导脑缺血耐受。然而,脑缺血耐受的内源性保护机制尚未明确。 目的：观察脑缺血预处理诱导脑缺血耐受大鼠再灌注不同时间窗血脑屏障通透性改变及基质金属蛋白酶9表达的变化。 方法：将Wistar大鼠随机分为3组,缺血预处理组采用线栓法阻塞大脑中动脉10 min建立局灶性缺血预处理模型,分别在缺血预处理后1,3,7,14,21 d进行再次缺血2 h;模型组不进行缺血预处理,假手术组不阻塞血管。于再灌注22 h进行神经功能检测,采用TTC染色测定脑梗死体积,通过测定渗出血管外的伊文思蓝含量来评价血脑屏障通透性的变化,免疫组织化学和原位杂交法检测基质金属蛋白酶9蛋白及mRNA的表达。 结果与结论：与模型组比较,缺血预处理组1,3,7 d亚组的神经功能评分、脑梗死体积、血脑屏障通透性、脑含水量以及基质金属蛋白酶9蛋白和mRNA表达均明显减小/降低(P < 0.05或P < 0.01),其中以3 d亚组降低最为明显。提示缺血预处理诱导了脑缺血耐受,预缺血诱导的血脑屏障通透性改变以及基质金属蛋白酶9表达减低在脑缺血耐受中发挥重要作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后MMP-9、TIMP-1的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在局灶性脑缺血再灌注中的表达规律.方法 健康雄性Wistar大鼠40只按随机数字表法分为缺血再灌注组(I/R组,共25只)和假手术组(Sham组,共15只).采用线栓法成功制作可复血流的大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h后再灌注,于再灌注6 h、24 h、48 h、72 h和7 d时取材,进行MMP-9、TIMP-1免疫组织化学染色,通过免疫组化方法分析MMP-9、TIMP-1表达规律和在脑组织中的分布.结果 在I/R组,MMP-9再灌注6 h即有表达,24 h明显增多,48 h达高峰,72 h下降,7d时有微量的表达;TIMP-1在6h亦有表达,24h达高峰,48h时开始下降,7d时有微量表达.二者的阳性表达部位主要在血管内皮细胞,神经元、小胶质细胞亦有少量表达.Sham组未见阳性结果.结论 脑局部缺血再灌注后可诱导MMP-9、TIMP-1的大量表达,缺血后血管内皮损害是MMP-9及TIMP-1高表达的主要原因.     

Exercise pre-conditioning reduces brain inflammation in stroke via tumor necrosis factor-α, extracellular signal-regulated kinase 1/2 and matrix metalloproteinase-9 activity

Abstract

Objective: We sought to determine whether cerebral inflammation in ischemic rats was reduced by a neuroprotective action of pre-ischemic tumor necrosis factor-α up-regulation, which down-regulated matrix metalloproteinase-9 activity via extracellular signal-regulated kinase 1/2 phosphorylation.

Material and methods: Adult male Sprague–Dawley rats were subjected to 30 minutes of exercise on a treadmill for 3 weeks. Stroke was induced by a 2 hour middle cerebral artery occlusion using an intraluminal filament. The exercised animals were treated with tumor necrosis factor-α antibody, UO126 (extracellular signal-regulated kinase 1/2 inhibitor), or both UO126 and doxycycline (matrix metalloproteinase-9 inhibitor). Brain infarct volume was assessed using Nissl staining. Leukocyte infiltration was evaluated using myeloperoxidase immunostaining. Intercellular adhesion molecule-1 and matrix metalloproteinase protein levels were determined by Western blot, and enzyme activity was evaluated using zymography.

Results: There was a significant decrease in neurological deficits, brain infarct volume and leukocyte infiltration, in association with reduction in matrix metalloproteinase-9 and intercellular adhesion molecule-1 expression in exercised animals. Exercised animals treated with either tumor necrosis factor-α antibody or with UO126 showed a reversal of neurological outcome, infarct volume and leukocyte infiltration. Matrix metalloproteinase-9 activity was reversed, at least partially, but the intercellular adhesion molecule-1expression was not. Neuroprotection remained when the exercised ischemic rats were treated with both UO126 and doxycycline.

Conclusion: These results suggest that exercise-induced up-regulation of tumor necrosis factor-α before stroke and extracellular signal-regulated kinase 1/2 phosphorylation play a role in decreasing brain inflammation by regulating matrix metalloproteinase-9 activity.     

High matrix metalloproteinase-9 expression induces angiogenesis and basement membrane degradation in stroke-prone spontaneously hypertensive rats after cerebral infarction

Basement membrane degradation and blood-brain barrier damage appear after cerebral infarc- tion, severely impacting neuronal and brain functioning; however, the underlying pathogenetic mechanisms remain poorly understood. In this study, we induced cerebral infarction in stroke- prone spontaneously hypertensive rats by intragastric administration of high-sodium water （1.3% NaC1） for 7 consecutive weeks. Immunohistochemical and immunofluorescence assays demonstrated that, compared with the non-infarcted contralateral hemisphere, stroke-prone spontaneously hypertensive rats on normal sodium intake and Wistar-Kyoto rats, matrix metalloproteinase-9 expression, the number of blood vessels with discontinuous collagen IV expression and microvessel density were significantly higher, and the number of continuous collagen IV-positive blood vessels was lower in the infarct border zones of stroke-prone sponta- neously hypertensive rats given high-sodium water. Linear correlation analysis showed matrix metalloproteinase-9 expression was positively correlated with the number of discontinuously collagen IV-labeled blood vessels and microvessel density in cerebral infarcts of stroke-prone spontaneously hypertensive rats. These results suggest that matrix metalloproteinase-9 upregula- tion is associated with increased regional angiogenesis and degradation of collagen IV, the major component of the basal lamina, in stroke-prone spontaneously hypertensive rats with high-sodi- um water-induced focal cerebral infarction.     

Standardization of a novel blood-sampling method through the jugular vein for use in the quantified [14C] 2-deoxyglucose method

In the traditional [¹⁴C] deoxyglucose (2DG) method for the measurement of local cerebral glucose utilization (LCGU), blood samples are collected from the femoral artery. However, the placement of a femoral catheter can affect locomotor activity of the animal. We wanted to develop a new technique for blood sampling that would not interfere with the ongoing behavior. Therefore, the present report establishes a method of collecting blood samples for the 2DG method through the jugular vein. To calibrate this method, catheters were inserted in both the femoral artery and jugular vein of adult male Sprague Dawley rats. The next day, rats were injected with 2DG (125 μCi/kg) through the jugular vein. To quantify ¹⁴C in plasma, the standard method of blood collection was used for the femoral artery while syringes were used to extract blood samples from the jugular vein. We calculated the integrated specific activity of the plasma and final tissue 2DG concentrations based on Sokoloff's original equation using blood samples derived from both vessels. LCGU determined in selected brain regions was equivalent using both sampling methods. In conclusion, sampling from the jugular vein is appropriate for the quantified 2DG method and does not disrupt locomotor activity of the rat.     

Rolipram impairs NF-kappaB activity and MMP-9 expression in experimental autoimmune encephalomyelitis

Rolipram suppresses experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) and diminishes cell infiltration of the central nervous system (CNS). In Lewis rats with EAE, rolipram reduced matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) gene expression in lymph node cells (LNCs) and spinal cord, decreased basal levels of nuclear (p50/p65) NF-kappaB in LNCs from treated rats, and impaired CD3 mediated NF-kappaB translocation. Rolipram reduced the luciferase activity directed by the NF-kappaB binding site of the MMP-9 gene in lymphocytes. It also diminished NF-kappaB activity and the ability of a myelin basic protein (MBP) specific cell line to migrate across artificial basement membranes. IL-2 induced MMP-9 proteolytic activity was only slightly reduced indicating that additional factors contribute to inhibit cell migration mediated by rolipram.     

“承载丸”对股骨头坏死大鼠细胞黏附分子基因的影响

背景：研究表明承载丸治疗激素性股骨头坏死具有明确的疗效,可明显增加骨密度、骨重量、骨强度和刚性,能改变雌激素水平低下状态。 目的：观察承载丸对激素性股骨头坏死大鼠骨细胞中细胞黏附分子基因的影响,以明确该药对坏死股骨头内血管恢复正常血运的作用。 设计、时间及地点：分组对照观察,于2006-03/08在中国中医科学院望京医院药理实验室及生物芯片北京国家工程研究中心所属博奥芯片公司实验室完成。 材料：6月龄雄性SD大鼠6只,体质量(280±20) g。承载丸主要成分：有当归,杜仲,黄芪,枸杞子,鹿角霜,肉苁蓉、地鳖虫,水蛭、丹参,续断等22味中药。由北京市勃然制药有限公司提供。 方法：6只SD大鼠采用内毒素和甲基强地松龙制做激素性股骨头坏死动物模型,随机将大鼠分为模型组和承载组,每组各3只。承载组大鼠自第1次注射甲基强地松龙后,灌服承载丸药液1.5 g/kg,1次/d,共灌服 6周。6周后取股骨头提取总RNA,进行基因谱测试。 主要观察指标：基因谱测试结果中的细胞黏附分子基因作用路径分析。 结果：3只模型大鼠使用承载丸后,与模型大鼠相比较,出现1.5倍以上改变的基因,分别为633个(下调506个,上调127个)、883个(下调640个,上调243个)、593个(下调408个,上调185个)。使用MAS软件归类分析后,共有相关作用路径79个,涉及297个基因。其中细胞黏附分子路径有8个下调基因。 结论：大鼠服用承载丸后,使上述基因下调,恢复了大鼠巨噬细胞及靶细胞的识别功能,恢复了上皮细胞包括血管内皮细胞的正常生存条件,细胞黏附分子作用路径持正常水平,这是坏死股骨头内血管恢复正常血运的关键。