沙立度胺对ECV304细胞增生的抑制作用研究

目的在体外探讨沙立度胺(thalidomide,反应停)抗血管新生的作用机制.方法MTT法检测反应停对人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞增殖的抑制率;RT-PCR检测血管新生相关基因的表达;凝胶电泳迁移率实验(EMSA)检测反应停对NF-κB活化的影响.结果反应停对ECV304细胞增殖的抑制效应与药物浓度呈正相关(r=0.999,P＜0.001),当50μg/ml反应停处理72小时,其抑制率为34%;25μg/ml反应停处理24小时,ECV304细胞VEGF mRNA相对表达量明显低于对照组(0.48±0.14vs0.98±0.18,P=0.005);与对照组相比,IL-8 mRNA相对表达量无明显减少(5.77±0.44vs 5.99±0.52,P＞0.05);αv整合素亚基mRNA相对表达量明显低于对照组(0.47±0.13vs0.82±0.18,P=0.029),而β5整合素亚基mRNA相对表达量与对照组相比,差异无显著性(1.5±0.52vs 1.37±0.81,P＞0.05).当药物浓度为50μg/ml时,NF-κB转录因子活性明显降低,且其对NF-κB活化的抑制与药物浓度有关.结论反应停抑制血管新生可能与其通过直接抑制内皮细胞增殖、下调VEGF和αv整合素亚基表达以及抑制NF-κB的活化等多个环节有关.     

PTEN抑制人脐静脉内皮细胞ECV304的增殖和VEGF的表达

目的:探讨与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology deleted on chromo-some ten gene,PTEN)对人脐静脉内皮细胞ECV304细胞增殖、凋亡,及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体1(VEGF receptor 1,VEGFR1)的影响。方法:将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒Ad-PTEN-GFP及空载体腺病毒Ad-GFP感染ECV304细胞,MTT实验、Hoechst3342染色法及流式细胞术检测ECV304细胞的增殖和凋亡。实时荧光定量PCR法检测Ad-PTEN-GFP感染后ECV304细胞中PTEN、VEGF和VEG-FR1 mRNA表达水平,ELISA检测ECV304细胞培养上清中VEGF的水平。鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管生长实验检测PTEN对鸡胚血管生长的影响。结果:与Ad-GFP相比,Ad-PTEN-GFP感染能明显抑制ECV304细胞的增殖,诱导细胞凋亡,5 d时增殖抑制率可达(50.38±5.42)%、细胞凋亡率达(73.3±5.3)%。当感染复数为100时,Ad-PTEN-GFP组ECV304细胞的VEGF及VEGFR1 mRNA表达水平分别为未感染组的(13.40±1.32)%及(46.12±5.20)%。同时,Ad-PTEN-GFP感染能够明显抑制CAM体内血管生长[血管指数(57.6±3.37)%vs(92.2±4.37)%,P<0.05]。结论:PTEN能显著抑制人脐静脉内皮细胞ECV304的增殖、促进其凋亡,其机制可能与抑制VEGF和VEGFR1表达,抑制血管新生有关。     

内皮生长抑制素对血管内皮细胞和成纤维细胞的生物学作用

目的 研究重组人内皮生长抑制素对人脐静脉内皮细胞（ECV304细胞）和成纤维细胞（WI－38细胞）的增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用,探讨内皮生长抑制素抑制细胞增殖的有效性、特异性和可能的作用机制。方法 将细胞在含有内皮生长抑制素的培养液中孵育一定时间,观察其形态,并用MTT法测定细胞的增殖抑制率和ELISA法定量检测细胞凋亡程度。结果 重组人内皮生长抑制素可显著抑制ECV304细胞的增殖,其作用呈剂量依赖性,ED50约15－20μg/ml,并能诱导ECV304细胞凋亡（富集因子2．44）;对WI－38细胞无增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用。结论 重组人内皮生长抑制素具有特异性抑制血管内皮细胞增殖作用,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一。     

血管抑制素对血管内皮细胞系ECV-304的抑制作用

 目的　观察血管抑制素 (Angiostatin)对血管内皮细胞系ECV 3 0 4的抑制作用。 方法　利用MTT法分析结果 ,实验分为 :1 .将血管抑制素与细胞同时加入 ;2 .先接种细胞 ,培养 2 4h后再加血管抑制素。结果　血管抑制素对ECV 3 0 4的抑制作用呈典型的量效关系。结论　血管抑制素对血管内皮细胞有显著的抑制作用。     

蜂毒素对人脐静脉内皮细胞ECV304生长的影响及其机制探讨

目的：研究蜂毒素对人脐静脉内皮细胞ECV304生长的抑制作用及其机制。方法：将人脐静脉内皮细胞ECV304进行体外培养。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测蜂毒素对ECV304细胞的增殖抑制作用;流式细胞术测定细胞周期;膜联蛋白Ⅴ（AnnexinV）-异硫氰酸荧光素（FITC）＋碘化丙啶（PI）双参数检测细胞凋亡;免疫细胞化学法检测经不同浓度蜂毒素作用后ECV304细胞VEGF和bFGF的表达。结果：蜂毒素可显著抑制人脐静脉内皮细胞的增殖生长,并且呈浓度依赖性,其24h、48h和72h的IC50分别为5.11μg/ml、4.68μg/ml和4.40μg/ml。经蜂毒素作用后,S期细胞比例明显增加,G0/G1期细胞比例减小,细胞周期阻滞于S期,并可诱导细胞凋亡。蜂毒素可明显下调人脐静脉内皮细胞VEGF和bFGF的表达（P〈0.05和P〈0.01）。结论：蜂毒素在体外能够抑制人脐静脉内皮细胞增殖和合成VEGF及bFGF的功能,其机制可能与阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关。     

舒林酸对胃癌种植瘤的抑制作用及血管形成的影响

背景与目的:观察舒林酸的体内抗胃癌生长作用,并探讨舒林酸与胃癌血管生成的关系及其作用机制.材料与方法:建立人胃癌细胞BGC-823裸鼠种植瘤模型,随机分成舒林酸治疗组(12 mg kg)、舒林酸预防组(8 mg kg)、维生素C对照组(Vit C 20 mg k)和空白对照组(生理盐水),共4组,给予舒林酸干预;用免疫组化检测胃癌移植瘤中COX-2、VEGF的表达和微血管密度(MVD值);用TUNEL法检测凋亡.结果:舒林酸抑制胃癌种植瘤生长,舒林酸治疗组和舒林酸预防组的肿瘤体积从第2周开始明显小于对照组(P<0.05),直到第35 d实验结束时舒林酸组与2个对照组相比,种植瘤体积均保持被明显抑制,差异均具有统计学意义(P<0.05).肿瘤组织的凋亡指数:舒林酸治疗组为11.6,舒林酸预防组为10.4,维生素c对照组为3.5,空白对照组为3.1,舒林酸组高于对照组(P<0.05);MVD值:舒林酸治疗组为5.4,舒林酸预防组为9.0,维生素C对照组为19.6,空白对照组为20.7,舒林酸组显著低于对照组(P<0.01).免疫组化结果:舒林酸组肿瘤组织COX-2蛋白和VEGF蛋白的阳性表达率均低于对照组(P<0.05).结论:舒林酸在体内的抗胃癌效应显著,其机制可能涉及抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡及减少肿瘤新生血管的生成.     

重组可溶性KDR及其抗体对内皮细胞的增殖抑制作用

目的：分析可溶性KDR（sKDR)及其抗体对内皮细胞增殖的抑制作用。方法：通过ELISA分析大肠杆菌表达的sKDR纯化产物与VEGF165结合的能力；sKDR免疫家兔制备KDR262抗血清，Wenstern blot分析该抗血清与KDR262蛋白结合的特异性；用^3H-TdR掺入法，MTT法和细胞计数3种方法分析重组sKDR及其抗体对内皮细胞的增殖抑制作用。结果：sK-DR蛋白可与VEGF165特异性结合，肝素可增强其结合能力。KDR262抗血清具有特异性识别KDR蛋白的能力，其滴度为1：2000，用^3H-TdR掺入法和MTT2种方法分析sKDR蛋白及其抗体对内皮细胞的增殖抑制作用结果一致，sKDR蛋白浓度在10μg/ml,2μg/ml,0.4μg/ml时对内皮细胞增殖抑制率平均为56%，44%和32%；抗KDR262抗体在稀释度为50，200和800倍时对内皮细胞增殖的抑制率平均为70%，56%和43%，细胞计数法测定结果，sKDR及抗KDR262抗体组与VEGF165单独刺激组，GST和PBS对照组相比，内皮细胞增殖被明显抑制，随浓度增加抑制活性明显增强，但抗体的抑制活性比sKDR蛋白高。结论：大肠杆菌表达的sKDR及其抗体对内皮细胞均具有明显的增殖抑制作用。     

肝素和氢化可的松对血管内皮细胞和成纤维细胞的生长抑制作用

目的：研究肝素和氢化可的松以及二者联合应用对人脐静脉内皮细胞（ECV304细胞）和成纤维细胞（WI-38细胞）的生长抑制作用和细胞凋亡的影响,并比较普通肝素与低分子肝素作用的差异,探讨肝素和氢化可的松联合应用抑制血管生成的可能性。方法：将细胞在含有药物的培养液中孵育一定时间,观察其形态,用MTT法测定细胞的增殖抑制率,电镜下观察细胞凋亡情况和ELISA法定量检测细胞凋亡程度。结果：肝素和氢化可的松单独的可抑制ECV304细胞增殖,作用呈剂量依赖性;肝素对WI-38细胞亦有增殖抑制作用。肝素和氢化可的松联合应用具有协同作用。低分子肝素抑制作用强于普通肝素。经电镜观察和ELISA法检测,肝素和（或）氢化可的松没有明显诱导细胞凋亡作用。结论：肝素可抑素血管内皮细胞增殖但不具有特异性,且和氢化可的松具有协同作用。以上作用不是通过诱导细胞凋亡实现的。     

蜂毒素对人脐静脉内皮细胞ECV304生长的影响及其机制探讨

目的:研究蜂毒素对人脐静脉内皮细胞 ECV304 生长的抑制作用及其机制.方法:将人脐静脉内皮细胞 ECV304 进行体外培养.四甲基偶氮唑盐 (MTT) 法检测蜂毒素对 ECV304 细胞的增殖抑制作用;流式细胞术测定细胞周期;膜联蛋白Ⅴ (AnnexinV)-异硫氰酸荧光素 (FITC) 碘化丙啶 (PI) 双参数检测细胞凋亡;免疫细胞化学法检测经不同浓度蜂毒素作用后ECV304细胞VEGF和bFGF的表达.结果: 蜂毒素可显著抑制人脐静脉内皮细胞的增殖生长,并且呈浓度依赖性,其24h 、48h和72h 的 IC50分别为 5.11 μg/ml、4.68 μg/ml 和 4.40 μg/ml.经蜂毒素作用后,S 期细胞比例明显增加,G0/G1 期细胞比例减小,细胞周期阻滞于 S 期,并可诱导细胞凋亡.蜂毒素可明显下调人脐静脉内皮细胞 VEGF 和 bFGF 的表达 (P<0.05和P<0.01).结论: 蜂毒素在体外能够抑制人脐静脉内皮细胞增殖和合成 VEGF及bFGF 的功能,其机制可能与阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关.     

吲哚美辛对转移性乳腺癌患者免疫功能及凝血状态的影响

目的观察吲哚美辛对转移性乳腺癌患者免疫功能及凝血状态的影响。 方法选取2015年7月至2017年12月期间复旦大学附属中山医院闵行分院乳腺外科收治的转移性乳腺癌女性患者27例进行前瞻性研究,给予口服吲哚美辛50 mg/次,每日3次,连用2周。另选在本院体检的健康女性30例作为对照组。流式细胞仪检测转移性乳腺癌患者用药前、后及对照组外周血T淋巴细胞亚群;血栓弹力图描记对照组及患者用药前、后凝血状态;记录转移性乳腺癌患者用药后的不良反应。以CD4^＋细胞比率、CD8^＋细胞比率、CD4^＋细胞数/CD8^＋细胞数及自然杀伤(NK)细胞活性作为免疫功能评价指标;以血栓弹力图的反应时间(R值)、α角(ANG)、最大振幅(MA)等参数为凝血状态指标。乳腺癌组患者用药前、后指标的比较采用配对t检验;乳腺癌组与健康对照组指标的比较采用独立样本t检验。 结果转移性乳腺癌患者外周血中CD4^＋细胞比率、CD4^＋细胞数/CD8^＋细胞数及NK细胞活性低于健康对照组[(28.76±4.03)%比(46.28±4.92)%,t＝－14.596,P<0.050; 0.78±0.22比1.65±0.34,t＝－11.303,P<0.050; (16.28±7.41)%比(34.73±16.39)%,t＝－5.370,P<0.050],CD8^＋细胞比率则高于对照组[(36.35±3.76)%比(27.41±2.63)%,t＝10.483,P<0.050];R值降低,ANG、MA升高[(3.52±0.84) min比(5.26±2.05)min,t＝－4.128,P<0.050;(75.74±8.41)°比(68.84±7.50)°,t＝3.270,P<0.050;(72.63±11.69) mm比(62.89±6.61) mm,t＝3.926,P<0.050]。口服吲哚美辛2周后转移性乳腺癌患者外周血中CD4^＋细胞比率、CD4^＋细胞数/CD8^＋细胞数及NK细胞活性分别为(37.55±3.64)%、1.20±0.18、(25.62±9.8)%,较用药前明显提升(t＝36.926、23.995、12.818,P<0.05], CD8^＋细胞比率为(31.42±2.58)%,较用药前明显下降(t＝－20.087,P<0.050);R值、ANG、MA分别为(4.33±1.57) min、(67.12±9.36)°、(64.52±6.32) mm,R值较用药前升高,ANG、MA则降低(t＝5.210、－14.351、－6.677,P<0.050)。转移性乳腺癌患者用药期间3例出现头晕,7例胃部不适伴恶心呕吐,腹泻2例,未观察到严重不良反应。 结论转移性乳腺癌患者免疫功能严重受损,并处于病理性高凝状态。吲哚美辛应用可增强患者免疫功能,改善其凝血状态。     

Selective growth inhibition by sangivamycin of human umbilical vein endothelial cells

In the course of our screening for selective growth inhibitors of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), we isolated sangivamycin from the culture filtrate of Streptomyces. It inhibited the growth of HUVECs at approximately 30 times lower concentration than that needed to inhibit the growth of WI-38 human fibroblasts. Structurally-related nucleosides, such as toyocamycin, tubercidin, and formycins A and B, did not show the differential inhibition. Although sangivamycin is known to inhibit protein kinase C, other protein kinase C inhibitors did not inhibit the growth of HUVECs selectively. Sangivamycin effectively inhibited S-phase induction in HUVECs, like TNP-470 and LLnL, known selective inhibitors. However, unlike them sangivamycin did not induce p21 expression. On the other hand, sangivamycin was found to inhibit DNA synthesis selectively in HUVECs. Thus, sangivamycin was shown to be a new selective growth inhibitor of HUVECs acting on DNA synthesis.     

阿魏酸对人脐静脉血管内皮细胞辐射损伤的保护作用及其机制

目的：研究阿魏酸对电离辐射所致人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用,及其对辐射敏感蛋白Thbd和γH2AX的影响,探讨阿魏酸的抗辐射作用与机制。方法：以4~16 Gy的⁶⁰Co γ射线照射HUVEC细胞,照后48 h以MTS法检测细胞活力,探索适宜照射剂量。以10 Gy γ射线照射HUVEC细胞,分别于照射后1、3、6、12、24和48 h提取细胞总蛋白,蛋白质印迹法检测蛋白Thbd和γH2AX的表达水平。并于照射前2 h,预防性给予细胞0.001~1 μmol/L的阿魏酸,照后48 h检测细胞活力、Thbd和γH2AX蛋白表达水平的改变。结果：与未照射组（0 Gy）比较,HUVEC受到10 Gy γ射线照射后48 h,细胞活力约降低30%（P < 0.05）。以此剂量照射,照后1 h Thbd约降至正常水平的0.6（P < 0.05）,照射后48 h γH2AX约升高至正常水平的5倍（P < 0.05）。与照射对照组比较,0.1和1 μmol/L 的阿魏酸作用后,受照HUVEC的细胞活力提高（P < 0.05）,Thbd蛋白表达升高（P < 0.05）,γH2AX蛋白表达降低（P < 0.05）。结论：0.1~1 μmol/L的阿魏酸可调节10 Gy γ射线照射后HUVEC的Thbd和γH2AX蛋白的表达水平,从而促进HUVEC增殖,提高其细胞活力,发挥抗辐射作用。     

Anti-angiogenic effects of a nutrient mixture on human umbilical vein endothelial cells

Matrix metalloproteinases (MMPs) have been recognized as key players in the degradation of the extracellular matrix (ECM) by migration and proliferation of endothelial cells and their subsequent invasion of the underlying stroma. The prevention of ECM degradation through the inhibition of MMP activity has been shown to be a promising therapeutic approach to block the invasion that occurs during angiogenesis. In previous studies, we demonstrated the anti-tumor effect of a nutrient mixture (NM) containing ascorbic acid, lysine, proline, green tea extract, arginine, N-acetyl cysteine, selenium, copper and manganese on various tumor cell lines in vivo and in vitro. The aim of the present study was to determine whether this mixture has anti-angiogenic effects on human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). At near confluence, the HUVEC cell cultures were tested with NM at 0, 10, 50, 100, 500, and 1000 microg/ml in triplicate at each dose for proliferation, migration, MMP expression, and invasion. Cell proliferation was evaluated by MTT assay, invasion potential by Matrigel invasion, MMP expression by gelatinase zymography, and cell migration by a 2 mm-wide scratch in plates. For tube formation, HUVECs were cultured in previously polymerized Matrigel. NM inhibited HUVEC migration, MMP expression and invasion through Matrigel in a dose-dependent manner. Zymography showed a dose-dependent inhibition of MMP-2 expression with virtual total inhibition at a 500 microg/ml concentration. Invasion through Matrigel was totally inhibited at 500 microg/ml NM. NM reduced cell migration by scratch test in a dose-dependent fashion with total inhibition at a 500 microg/ml concentration. NM also inhibited the tube formation of HUVECs, but did not significantly inhibit cell proliferation. These results together with our earlier findings suggest that NM is a relatively non-toxic formulation with anti-angiogenic effects, such as inhibiting vascular tube formation and endothelial cell invasion and migration.     

Arresten抑制HUVEC细胞增殖和管腔形成的实验研究

目的:探讨血管生成抑制因子arresten对人脐静脉内皮细胞HUVEC增殖和体外血管腔形成的影响,了解其抑制血管生成的途径。方法:采用MTT比色法,观察不同浓度的arresten对HUVEC细胞增殖的影响;Matrigel胶体外管腔形成试验检测arresten对HUVEC细胞形成血管的影响。结果:MTT比色法显示,arresten对HUVEC细胞增殖具有抑制作用,随着浓度的增加,arresten对HUVEC细胞增殖抑制作用也增强,但当其浓度增加到800 ng/mL后其增殖抑制率不再提高; arresten浓度为0、400及800 ng/mL时,HUVEC细胞形成的血管腔数分别为17±2、9±1及5±1。结论:Arresten能够抑制HUVEC细胞的增殖,并抑制HUVEC细胞形成血管腔。     

Hyperthermia decreases cytokine-mediated adhesion molecule expression on human umbilical vein endothelial cells

Although hyperthermia has been used as an effective cancer treatment modality, its effects on metastasis of tumour cells are not clear. Since adhesion molecules play a key role in metastasis, we evaluated how the expression of adhesion molecules is influenced by hyperthermia. Human umbilical vein endothelial cells were incubated in vitro for 1 h. at 39, 42, 43 and 44°C with and without addition of tumour-necrosis factor (TNF) or interferon-gamma (IFN-γ) and the expression of endothelial cell leukocyte adhesion molecule-1 (ELAM-1), intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and major histocompatibility complex (MHC) class-II molecule was measured. Expression of MHC class-II molecules and expression of unstimulated constituent ICAM-1's was not reduced by heat treatment. In contrast, expression of cytokine-induced ELAM-1's and ICAM-1's was significantly lower after heat treatment. The adhesion to HUVEC in vitro of HL-60 leukemia cells, which express sialyl-Lewis-x antigen as a ligand to ELAM-1, was diminished after incubation at 42°C and totally lost after treatment at 44°C. This suggests that any decrease in metastasis formation after heat treatment, which is occasionally observed, could be due to a reduced action of TNF or related cytokines on adhesion molecule induction and subsequent membrane expression by the endothelial cell. A possible underlying mechanism involved is a heat-induced alteration or blockage of the biosynthetic pathways required for synthesis of ELAM-1 and ICAM-1 proteins.