Fura－2荷载血小板胞内游离钙浓度的连续测定

以Ｃａ２＋荧光指示剂Ｆｕｒａ－２荷载血小板，连续测定血小板胞内游离Ｃａ２＋（［Ｃａ２＋］ｉ）浓度动态变化。在生理胞外Ｃａ２＋浓度时。正常成人血小板［Ｃａ２＋］ｉ静息水平为１０８．３±３．６ｎｍｏｌ／Ｌ（－ｘ±ｓ－ｘｎ＝１５，下同），以凝血酶０．２Ｕ／ｍｌ作诱导，［Ｃａ２＋］ｉ迅速升至峰值７７０．３±２７．３ｎｍｏｌ／Ｌ，其下降幅度在４ｍｉｎ时为４０．９％±１．８％；以ＴＭＢ８４００μｍｏｌ／Ｌ阻滞胞内Ｃａ２＋释放，［Ｃａ２＋］ｉ的峰值（４４３．７±２７．７ｎｍｏｌ／Ｌ）明显下降（Ｐ＜０．００１），而４ｍｉｎ的下降幅度（４７．７％±３．８％）则无明显差异（Ｐ＞０．０５）。在胞外Ｃａ２＋＜１０－８ｍｏｌ／Ｌ时，［Ｃａ２＋］ｉ静息水平７０．２±７．５ｎｍｏｌ／Ｌ，作同样的诱导，［Ｃａ２＋］ｉ的峰值（３２１．２±１７．８ｎｍｏｌ／Ｌ）及下降幅度（９９．２％±３．６％）均有显著变化（ｐ＜０．００１）。结果表明，本文所建立的方法能连续测定血小板［Ｃａ２＋］ｉ的动态变化。     

17β—雌二醇对人的类成骨细胞HOS TE85胞内游离钙,IP3及？…

目的 观察１７β－雌二醇（Ｅ２０）对成骨细胞内游离钙（「Ｃａ＾２＋」ｉ）１,４,５,－三磷酸肌醇（ＩＰ３）含量及钙调蛋白（ＣａＭ）含量的影响。方法 以Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ为钙荧光指示剂,采用激光共聚焦显微系统测定细胞内钙荧光值的改变,以反映「Ｃａ＾２＋」ｉ含量的变化。用阳离子交换法测定ＩＰ３含量。以测定钙依赖的磷酸二酯酶活性方法测定ＣａＭ含量。     

成年大鼠脑细胞内钙的测定

目的：探讨成年大鼠脑细胞分离及其细胞内钙（［Ｃａ２＋］ｉ）的测定。方法：低浓度胰蛋白酶消化及机械吹打等方法分离脑细胞，以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为Ｃａ２＋－敏感的荧光指示剂，应用荧光分光光度计测定［Ｃａ２＋］ｉ。结果：分离的脑细胞存活率在９５％以上，在细胞外Ｃａ２＋１ｍｍｏｌ／Ｌ的情况下［Ｃａ２＋］ｉ为（２７０±３５）ｎｍｏｌ／Ｌ，高钾使［Ｃａ２＋］ｉ急剧增加。结论：本方法分离成年大鼠脑细胞简单、可靠，且能准确反映［Ｃａ２＋］ｉ的变化。     

NIDDM患者血小板Ca_(2+)转运及其与聚集功能的关系

３２例ＮＩＤＤＭ患者，分血小板聚集功能亢进组（ｎ＝１７）和无亢进组（ｎ＝１５），探讨Ｃａ２＋转运影响血小板胞浆游离Ｃａ２＋（［Ｃａ２＋］ｉ）变化与最大聚集（ＭＡＲ）的关系。结果：亢进组血小板静息［Ｃａ２＋］ｉ高于对照组（１３４．４±２６．４对１０１．５±１３．３ｎｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜０．０１）。［Ｃａ２＋］ｉ与ＭＡＲ呈正相关（ｒ＝０．３２１９，Ｐ＜０．０５）以凝血酶刺激，有胞外Ｃａ２＋内流及胞内Ｃａ２＋释放时，亢进组［Ｃａ２＋］ｉ高于对照组（９１８．９±２０７．６对７９１．２±１１９．６ｎｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜０．０１），并与ＭＡＲ呈正相关（ｒ＝０．３３７１，Ｐ＜０．０１）；以ＴＭＢ８阻滞胞内Ｃａ２＋释放，组间差异仍然显著（Ｐ＜０．０５）；当缺乏胞外Ｃａ２＋内流时，则组间不呈显著差异（Ｐ＞０．０５）。以钙载体Ａ２３１８７刺激，在有或无胞外Ｃａ２＋时，亢进组［Ｃａ２＋］ｉ均高于对照组（Ｐ均＜０．０５）然而，无亢进组上述各指标与对照组间均未呈显著差异。提示ＮＩＤＤＭ患者血小板聚集功能亢进与［Ｃａ２＋］ｉ变化有关，可能涉及胞浆内Ｃａ２＋稳态异常，凝血酶刺激胞外Ｃａ２＋内流及Ａ２３１８７作用胞内Ｃａ２＋释放增强等环节     

三磷酸肌醇在兔急性肾缺血及再灌流损伤中的作用

用新西兰大白兔制作急性肾缺血及再灌流损伤模型，观察肾组织细胞内三磷酸肌醇（ＩＰ３）、细胞内总钙及胞浆游离钙（［Ｃａ（２＋）］ｉ）浓度变化。结果显示，缺血组与对照组的ＩＰ３浓度（±ｓ）分别为（４３０．３±４６．８）、（２９７．９±５４．３）ｍｉｎ（－１），［ｃａ（２＋）］ｉ浓度分别为（２１２．５±４３．５）、（１０６．１±１５．５）ｎｍｏｌ／Ｌ，前者较后者均显著性升高（均为Ｐ＜０．０１），总钙浓度分别为（３９８．６±３２．３）、（３８５．０±３２．４）μｍｏｌ／Ｌ，两组无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。再灌流６０ｍｉｎ后ＩＰ３浓度为（７７６．０±６８．０）ｍｉｎ（－１）、［Ｃａ（２＋）］ｉ浓度为（４１２．１±４７．３）ｎｍｏｌ／Ｌ、总钙浓度为（４４７．１±４２．５）μｍｏｌ／Ｌ，较对照组和缺血组均显著性增加（Ｐ＜０．０１）。提示，细胞内ＩＰ３对急性肾缺血及再灌流损伤中肾组织细胞内钙超负荷的形成具有重要作用。     

TMB-8对去甲肾上腺素BHQ引起新生大鼠单个脑细胞内游离钙增高的影响

应用ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子测定系统，研究ＴＭＢ－８对体外新生ＳＤ大鼠单个脑细胞内游离钙的抑制作用及其机制。结果表明，在无细胞外钙情况下，静息［Ｃａ２＋］ｉ为７９±１３ｎｍｏｌ·Ｌ－１。ＴＭＢ－８１０，３０μｍｏｌ·Ｌ－１能明显降低静息［Ｃａ２＋］ｉ。ＴＭＢ－８１００μｍｏｌ·Ｌ－１对高钾去极化引起的［Ｃａ２＋］ｉ显著增高无明显影响。在细胞外钙为１．３ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，去甲肾上腺素诱导的细胞内［Ｃａ２＋］ｉ升高可部分被ＴＭＢ－８抑制；ＴＭＢ－８（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）对ＢＨＱ引起的［Ｃａ２＋］ｉ的升高无明显抑制作用。而当细胞外液［Ｃａ２＋］ｉ为０时，ＴＭＢ－８几乎完全抑制了去甲肾上腺素和ＢＨＱ的作用。提示ＴＭＢ－８降低脑细胞内游离钙的作用机制是通过促使细胞内钙进入肌浆网以抑制内钙的释放，并通过饱和肌浆网内Ｃａ２＋间接地阻滞细胞膜钙通道     

呼吸中枢M受体亚型与细胞内钙

目的探讨呼吸中枢Ｍ受体亚型与细胞内钙的关系。方法采用Ｆｕｒａ－２双波长荧光法测定Ｍ１和Ｍ２受体激动剂和拮抗剂对胎鼠桥脑和延脑神经细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的影响。结果在静息状态下，其［Ｃａ２＋］ｉ为７２±６ｎｍｏｌ／Ｌ，加入２００μｍｏｌ／ＬＡｃｈ，［Ｃａ２＋］ｉ升高３８％，匹鲁卡品（Ｐｉｌ）０．４～２００μｍｏｌ／Ｌ无明显的升高细胞内钙的作用，而Ｍ２受体激动剂６β－乙酰氧基去甲托烷（６β－ＡＮ）１～１０μｍｏｌ／Ｌ。对神经细胞内的游离钙均无明显影响。Ｍ１－Ｒ拮抗剂哌仑西平（Ｐｉ）６０μｍｏｌ／Ｌ能拮抗Ａｃｈ升高细胞内钙的作用，Ｍ２－Ｒ拮抗剂ＡＦ－ＤＸ１１６２０μｍｏｌ／Ｌ不能拮抗。结论Ｍ１－Ｒ兴奋与细胞内钙升高有关。     

海风藤醇B对PAF诱导的兔血小板钙内流和胞内游离钙浓度升高的抑制作用

应用４５Ｃａ２＋和钙荧光指示剂Ｑｕｉｎ－２／ＡＭ进行实验，发现海风藤醇Ｂ（１０、１００μｍｏｌ·Ｌ－１）无论对血小板激活因子（ＰＡＦ）引起的兔洗涤血小板Ｃａ２＋内流还是胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）升高均有抑制作用，且呈良好的剂量相关，最大抑制率分别为３７．２％和５０．８％；但对Ａ２３１８７引起的胞内［Ｃａ２＋］ｉ升高无显著抑制作用。结果表明：海风藤醇Ｂ能选择性拮抗ＰＡＦ诱导的钙内流和［Ｃａ２＋］ｉ的升高。     

应用Fura-2/AM测定兔视网膜细胞内游离钙的方法

目的：建立适宜条件下，用荧光指示剂Ｆｕｒａ－２测定乳兔视网膜细胞内游离钙（简称［Ｃａ２＋］ｉ）的方法。方法：用酶解制备视网膜细胞悬液。Ｆｕｒａ－２／ＡＭ负载进行荧光测定。结果：经０．０５％胰蛋白酶消化１０分钟，可使细胞存活率达９０％以上。在３７℃条件下与Ｆｕｒａ－２／ＡＭ温育４０分钟，于３０分钟内测定为最佳条件。结论：静息状态下（［Ｃａ２＋］ｉ）水平为（２２３±２７）ｎｍｏｌ／Ｌ，其值在文献报道范围内。高钾去极化，在Ｋ＋为２５ｍｍｏｌ／Ｌ和５０ｍｍｏｌ／Ｌ时，分别使（［Ｃａ２＋］ｉ）增加了５９％和１４８％，由此证明视网膜细胞悬液制备和测定方法是可行的。     

钙增敏剂MCI-154对内毒素休克大鼠心肌钙稳态的影响

目的：研究钙增敏剂ＭＣＩ－１５４ 对内毒素休克大鼠心肌钙稳态的影响。方法：甲腈吡酮或ＭＣＩ－１５４ 治疗内毒素休克大鼠后１、３、５ ｈ,分别测定心肌组织、线粒体、肌浆网（ＳＲ）的钙含量;离体分离内毒素休克大鼠心肌细胞,分别与１×１０－ ３、１×１０－ ２、１×１０－ １ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ甲腈吡酮或ＭＣＩ－１５４孵育,利用Ｆｕｒａ ２－ＡＭ 测定心肌细胞胞浆钙浓度（［Ｃａ２＋ ］ｉ）。结果：内毒素休克后,心肌组织、线粒体、ＳＲ钙含量明显增加。甲腈吡酮治疗后,上述指标进一步升高;而ＭＣＩ－１５４ 治疗后,心肌组织、线粒体、ＳＲ钙含量无明显增加,治疗后３、５ ｈ 值同单纯生理盐水（ＮＳ）治疗组无明显差别,显著低于甲腈吡酮治疗组值。内毒素休克大鼠心肌细胞［Ｃａ２＋ ］ｉ明显高于对照组,甲腈吡酮与内毒素休克心肌细胞孵育后,［Ｃａ２＋ ］ｉ随药物浓度增大而显著升高;不同浓度的ＭＣＩ－１５４均不明显升高心肌细胞［Ｃａ２＋ ］ｉ。结论：ＭＣＩ－１５４用于内毒素休克治疗时,不进一步加重心肌钙稳态失衡及心肌细胞内钙超载。     

蛋白磷酸酶抑制剂对人成神经细胞瘤细胞钙瞬态的影响

应用荧光倒置显微镜系统,分别检测了蛋白磷酸酶ＰＰ－２Ａ和ＰＰ－１抑制剂岗田酸（Ｏｋａｄａｉｃａｃｉｄ,ＯＡ）和ＰＰ－２Ｂ抑制剂三氟吡拉嗪（Ｔｒｉｆｌｕｏｐｅｒａｚｉｎｅ,Ｔｒｉ）处理的人成神经细胞瘤细胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）胞浆钙瞬态变化。结果发现：１ｎｍｏｌ／ＬＯＡ抑制ＰＰ－２Ａ时,胞浆游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）瞬时波动明显增强,［Ｃａ２＋］ｉ在２０ｍｉｎ内逐步轻微升高,后逐渐回复;而用１００ｎｍｏｌ／ＬＯＡ同时抑制ＰＰ－２Ａ和ＰＰ－１时,则引起［Ｃａ２＋］ｉ即刻持续升高,并同时伴有［Ｃａ２＋］ｉ瞬时波动明显增强;用１００μｍｏｌ／ＬＴｒｉ抑制ＰＰ－２Ｂ时,则引起［Ｃａ２＋］ｉ即刻持续升高,［Ｃａ２＋］ｉ瞬时波动没有明显变化。提示：蛋白磷酸酶降低可能通过钙瞬态变化而参与Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病（ＡＤ）的发病过程。     

内皮素-1对成纤维细胞内游离钙的影响

目的研究内皮素（ＥｎｄｏｔｈｅｌｉｎＥＴ）对成纤维细胞（ＨＬＦ）内钙离子浓度（［Ｃａ＋２］ｉ）的影响及维拉帕米（Ｖｅｒ）对ＥＴ促［Ｃａ＋２］ｉ效应的阻断作用。方法采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ钙荧光指示剂测定ＨＬＦ细胞内Ｃａ＋２浓度。结果ＥＴ在很短时间内即可明显提高ＨＬＦ细胞内Ｃａ＋２浓度（Ｐ＜０．０１～０．００１）。并且在细胞外液无Ｃａ＋２存在情况下，亦可提高［Ｃａ＋２］ｉ，且有明显的量效关系（Ｐ＜０．０５～０．０１）。同时，Ｖｅｒ对ＥＴ的上述作用具有显著的作用（Ｐ＜０．０５）。结论ＥＴ对Ｖｅｒ的调控作用是通过［Ｃａ＋２］ｉ转运而产生的。     

三七皂甙对烫伤小鼠巨噬细胞IP3→CaM信号途径的影响

目的 研究中药三七皂甙对巨噬细胞（ＭΦ）肌醇脂质信号系统中ＩＰ３－ＣａＭ途径的调理作用。方法 用中药三七皂甙治疗烫伤昆明种小鼠,通过观察伤鼠ＭΦ的ＰＬＣ活性、ＩＰ３活性、胞内Ｃａ２＋浓度、ＣａＭ量和它们参与产生分泌的ＩＬ－１。结果 三七皂甙能使伤后该途径中升高的信使物质及其产物 ＰＬＣ、ＩＰ３、胞内Ｃａ２＋、ＣａＭ和它们参与产生分泌的ＩＬ－１得到一定程度的调理。三七皂甙可使升高的ＰＬＣ活性从（５７．５８±８．９１）μｍｏｌ／Ｌ降到（２７．００±２．３１）μｍｏｌ／Ｌ、可使升高的ＩＰ３活性从（１８ ８４４．５±２ ４４５．９）Ｂｑ／１０６　ｃｅｌｌ降到（４ １６９．７±５４３．３）Ｂｑ／１０６ ｃｅｌｌ、可使升高的胞内Ｃａ２＋ 浓度从（３９３．１８±３９．６２）ｎｍｏｌ／Ｌ降到（９０．５６±７．２１） ｎｍｏｌ／Ｌ、可使升高的 ＣａＭ量从（５９８．１５±５０．２１）ｎｍｏｌ．Ｌ降至（３１６．３１±２５．３５）ｎｍｏｌ／Ｌ、可使升高的ＩＬ－１量从０．９９８±０．０５８降至０．５９０±０．０５０。结论 中药三七皂甙对肌醇脂质信号系统中ＩＰ３－ＣａＭ途径具有较好的调理作用。     

高钾离子引起PC12细胞内游离Ca2+浓度升高的机制

目的：分析高钾离子（Ｋ＾＋）引起ＰＣ１２细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）升高的可能机制。方法：利用ＭｉｒａＣａｌ Ｉｍｉａｇｅ Ｓｙｓｔｅｍ检测［Ｃａ＾２＋］ｉ，Ｃａ＾２＋荧光探针为Ｆｕｒａ－２／ＡＭ。结果：（１）ＫＣ１浓度为３０￣１００ｍｍｏｌ／Ｌ时，可剂量依赖性地诱导ＰＣ１２细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ升高；（２）在细胞外无Ｃａ＾２＋时，高Ｋ＾＋对ＰＣ１２细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ无影响；（３）Ｌ－     

大鼠感染性脑损伤中神经细胞内游离钙的变化

采用荧光法测定负载Ｆｕｒａ－２／ＡＭ大脑皮层突触体内游离钙［Ｃａ２＋］ｉ浓度在大鼠感染性脑损伤（感脑）中的变化及其意义。结果显示：百日咳菌液组（０．５ｈ，４ｈ，２４ｈ）的［Ｃａ２＋］ｉ，含水量（ＷＣ）及伊文思蓝（ＥＢ）含量均高于对应盐水对照组（Ｐ＜０．０５或＜０．０１）；菌液组［Ｃａ２＋］ｉ增高呈时效关系，以２４ｈ组含量最高（４ｈｖｓ０．５ｈ，Ｐ＜０．０５；２４ｈｖｓ４ｈ，Ｐ＜０．０１），并分别与ＷＣ及ＥＢ含量呈高度正相关（０．５ｈ，４ｈ，Ｐ＜０．０１）及无相关（２４ｈ，Ｐ＞０．０５）。结果表明，神经细胞内［Ｃａ２＋］ｉ聚积在急性和迟发性感脑的发病机制中均有重要作用     

钙拮抗剂TMB-8抑制BHQ,NE和KCl引起的培养乳牛基底动脉单个平滑肌细胞内游离钙的升高

用ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子测定系统,测量单个细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）,研究８－（Ｎ,Ｎ－二乙胺）－ｎ－辛基－３,４,５－三甲氧基苯甲酸酯（ＴＭＢ－８）对培养乳牛基底动脉平滑肌［Ｃａ２＋］ｉ的作用。在细胞外钙浓度为１．３ｍｍｏｌ·Ｌ－１时,Ｔ...     

糖尿病患者血小板游离钙变化与血栓素B2生成的关系

为了探讨糖尿病患者血小板胞浆内游离Ｃａ￣（２＋）浓度（［Ｃａ￣（２＋）］ｉ）与血栓素Ｂ＿２（ＴＸＢ＿２）生成的关系，及其在糖尿病微血管病变发病中的作用，作者用Ｃａ￣（２＋）荧光指示剂ｆｕｒａ－２直接测定２７例糖尿病患者（合并微血管病变苔１３例，无微血管病变者１４例）血小板［Ｃａ￣（２＋）］ｉ，并且同步测定ＴＸＢ＿２。结果：以钙载体Ａ＿（２３１８７）诱导，糖尿病组血小板［（Ｃａ￣（２＋）］ｉ峰值为１１４７±５２ｎｍｏｌ／Ｌ，高于对照组（８９７±４９ｎｍｏｌ／ＬＰ＜０．０１），且与ＴＸＢ，生成呈正相关：而用花生四烯酸诱导，糖尿病组血小板［Ｃａ￣（２＋）］ｉ峰值为３５３±１４ｎｍｏｌ／Ｌ，虽高于对照组（３１２±１６ｎｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜０．０５），但与ＴＸＢ＿２生成未呈显著相关。上述改变在糖尿病有或无微血管病变两组之间比较无显著性差异，提示糖尿病患者血小板［Ｃａ￣（２＋）］ｉ变化可能通过膜磷脂酶环节致使ＴＸＢ＿２生成增多，参与微血管病变的发病。     

黄腐酸和超氧阴离子对软骨细胞内钙离子浓度的影响

目的：为探讨病区黄腐酸（ＦＡ）和活性氧自由基可能引起大骨节病，我们测定了在ＦＡ和超氧自由基（）作用下，软骨细胞内钙离子浓度（［Ｃａ￣（２＋）］ｉ）随时间的变化。方法：应用萤光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ测定细胞内钙离子浓度并用下式计算：［Ｃａ￣（２＋）］ｉ＝Ｋｄ（Ｆ－Ｆ＿（ｍｉｎ））／（Ｆ＿（ｍａｘ）－Ｆ）。结果：作用４５ｍｉｎ后，［Ｃａ￣（２＋）］ｉ从１．６２×１Ｏ￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ升达１．１８×１０￣（－６）ｍｏｌ／Ｌ；ＦＡ作用４ｈ后，［Ｃａ￣（２＋）］ｉ从３．７８×１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ升达５．５１×１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ。结论：说明ＦＡ与·有相似的促进［Ｃａ￣（２＋）］ｉ升高的作用，［Ｃａ￣（２＋）］ｉ的升高将造成软骨细胞损伤，而软骨坏死是大骨节病的重要病理特症之一。     

槲皮素对血小板激活时胞浆游离钙的影响

采用钙荧光指示剂Ｑｕｉｎ－２定量测试法观察了槲皮素对血小板胞浆内游离钙浓度的影响。结果发现，槲皮素２５￣４００μｍｏｌ／Ｌ能剂量依赖性地抑制凝血酶引起的血小板胞浆游离钙［Ｃａ＾２＋］ｉ的升高（ＩＣ５０和９５％可信区间为７８．５（４９．５￣１２４．４）μｍｏｌ／Ｌ）；但不能抑制同等剂量凝血酶所引起的胞内贮存钙的释放；抑制钙内流可能是槲皮素抑制血小板聚集和［Ｃａ＾２＋］ｉ升高的机制。     

1,6—二磷酸果糖对心肌细胞胞质游离Ca^2＋和pH的影响

考察外源性的１，６－二磷酸果糖（ＦＤＰ）对心肌细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度和ｐＨ值的影响，用荧光探针（Ｆｕｒａ－２，ＢＣＥＣＦ）技术同时测定成年大鼠心肌细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度和ｐＨ值，并观察其在缺氧／复氧条件下的变化，结果：在缺氧／复氧过程中，胞质游离Ｃａ＾２＋胞质游离Ｃａ＾２＋浓度缓慢升高，从基础值１３０±２９．５ｎｍｏｌ／Ｌ上升至７４２±１５４ｎｍｏｌ／Ｌ，胞质ｐＨ值则从７．１２±０．０８降至６