人骨髓间质干细胞的体外菲立磁标记

背景: 常规干细胞示踪的检测方法,需取实验动物组织进行检查,缺乏示踪的动态检测和无创性.目的: 通过体外菲立磁标记骨髓间质干细胞并进行磁共振成像扫描,明确不同浓度菲立磁对人骨髓问质干细胞细胞活性的影响和检测菲立磁标记的最佳浓度,并筛选出适合人骨髓间质干细胞磁共振成像扫描的成像序列.方法: 使用不同质量浓度菲立磁(100,50,25,12.5 mg/L)与生长状态良好第3代人骨髓间质干细胞孵育24～48 h,另设未进行标记的第3代细胞为空白对照组.两组细胞进行四甲基偶氮唑蓝法检测增殖生长情况并描绘生长曲线.细胞普鲁士蓝染色鉴定人骨髓间质干细胞的标记情况.进行磁共振成像检测,确定最佳磁共振成像序列.结果与结论: 质量浓度≤25 mg/L的菲立磁标记对人骨髓间质干细胞的增殖能力不会产生影响,并且以25 mg/L的标记效果最佳.而≥50 mg/L的菲立磁标记则明显抑制人骨髓间质干细胞的增殖.磁共振成像扫描显示菲立磁标记24,48 h或子代的人骨髓间质干细胞标本T1WI、T2WI以及T2*WI 3个序列上均可见信号降低,以T2*WI变化最为明显.证实菲立磁可用于体外标记人骨髓间质干细胞连续性研究.菲立磁标记对人骨髓间质干细胞增殖能力的影响存在浓度相关性,25 mg/L为最佳标记浓度.磁共振成像T2*WI序列更适合追踪菲立磁标记的人骨髓间质干细胞.     

超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞

背景：目前,超顺磁性氧化铁纳米颗粒标记的骨髓间充质干细胞在治疗心、肝、肾及中枢神经系统疾病方面已经得到了快速的应用。目的：对国内外应用超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞的现状及新进展作一综述。方法：应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中2001-12/2009-12关于超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞的文章,在标题和摘要中以＂超顺磁性氧化铁,干细胞,标记,磁共振成像＂或＂superparamagnetic iron oxide,stem cells,label,magnetic resonance imaging＂为检索词进行检索。选择近5年内文章内容与超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。初检得到243篇文献,根据纳入标准选择关于超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞的40篇文献进行综述。结果与结论：以往通过光镜识别干细胞标记物的研究中,必须用传统的组织病理学检查,从体内取得组织才能进行细胞探测,这显然不适合进行动态观察,更不适用于临床研究。超顺磁性氧化铁可以有效地进行活细胞标记,而这种标记方法不会影响细胞的活力、生长、分裂、迁移、分化等生物学功能,对细胞没有毒性,具有良好的安全性,可以用MRI进行活体示踪研究。     

超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞

背景:目前,超顺磁性氧化铁纳米颗粒标记的骨髓间充质干细胞在治疗心、肝、肾及中枢神经系统疾病方面已经得到了快速的应用.目的:对国内外应用超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞的现状及新进展作一综述.方法:应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中2001-12/2009-12关于超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞的文章,在标题和摘要中以"超顺磁性氧化铁,干细胞,标记,磁共振成像"或"superparamagnetic iron oxide,stem cells,label,magnetic resonance imaging"为检索词进行检索.选择近5年内文章内容与超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章.初检得到243篇文献,根据纳入标准选择关于超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞的40篇文献进行综述.结果与结论:以往通过光镜识别干细胞标记物的研究中,必须用传统的组织病理学检查,从体内取得组织才能进行细胞探测,这显然不适合进行动态观察,更不适用于临床研究.超顺磁性氧化铁可以有效地进行活细胞标记,而这种标记方法不会影响细胞的活力、生长、分裂、迁移、分化等生物学功能,对细胞没有毒性,具有良好的安全性,可以用MRI进行活体示踪研究.     

大鼠骨髓间充质干细胞的超顺磁氧化铁颗粒标记及MR成像

目的描述超顺磁氧化铁(SPIO)颗粒标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)后对细胞的影响及MR成像特点,评价其标记效果。方法分离、纯化并培养大鼠BMSCs,使用多聚赖氨酸(PLL)对细胞进行SPIO(50μgFe/ml,48h)标记,采用普鲁士蓝染色、细胞内铁含量检测等评定SPIO标记BMSCs的效率;通过台盼蓝染色、二甲基亚砜比色法检测细胞活力和增殖情况,通过Hoechst染色观察细胞凋亡情况,评价SPIO是否影响BMSCs的生物学特性;并对标记的BMSCs进行MR成像(序列:T1SE、T2FSE及T2*GRE)。结果细胞标记率达100%,标记细胞铁含量明显高于未标记细胞;细胞活力、增殖、周期和凋亡检测显示标记细胞与未标记细胞间无统计学差异(P>0.05);MR成像显示标记细胞数目大于5×103个细胞时,3个序列图像均能够观察到信号变化,以T2*WI最为明显。结论大鼠BMSCs可以被SPIO(50μgFe/ml,48h)有效标记,且对细胞的生物学特性无明显影响;1.5TMR能够在体外观察到标记后的细胞。     

超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞的体外标准化实验

背景:超顺磁性氧化铁颗粒标记成像可在体观察标记细胞移植后情况,但结合临床细胞治疗剂量,其标记浓度及标记时间对细胞标记率、标记活性及标记后成像效果的综合影响还需进一步分析.目的:筛选超顺磁性氧化铁体外标记大鼠骨髓间充质干细胞的标准化剂量,拟为体内成像提供最佳标记"浓度-时间".设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2008-02/10在山西医科大学完成.材料:清洁级Wistar大鼠10只,由山西医科大学动物实验中心提供.Resovist中含超顺磁性氧化铁铁颗粒28 g/L,为德国Schering公司产品.方法:全骨髓法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞.取Resovist,分别配制含终浓度为0,25,50,75,100,150 mg/L超顺磁性氧化铁的培养基,加入P3代骨髓间充质干细胞中进行孵育标记.主要观察指标:普鲁士蓝法检测细胞标记率,锥虫蓝拒染法检测标记细胞活性,观察标记细胞体外磁共振成像情况.结果:细胞标记率达100%,随着标记时间的延长,胞质内蓝染颗粒逐渐减少.标记1 d和3 d时,与0 mg/L超顺磁性氧化铁组比较,25,50 mg/L组锥虫蓝拒染率无明显差异(F=0.28～3.15,P0.05);与25 mg/L超顺磁性氧化铁组比较,50 mg/L组锥虫蓝拒染率无明显差异(F=0.28～0.79,P0.05).体外磁共振成像示标记3 d时,标记浓度为50 mg/L组的T2WI及T2·WI信号降低最明显.结论:超顺磁性氧化铁"50 mg/L-3 d"体外标记效率高,对细胞活性无影响,且磁共振成像信号降低最明显,为最适"浓度-时间"组合.     

磁标记大鼠肾脏骨髓间充质干细胞移植MR成像研究

目的对移植入大鼠正常肾脏的Fe2O3-PLL标记MSCs进行MR成像并探讨其成像技术。方法分离培养大鼠骨髓MSCs,Fe2O3-PLL标记细胞。将标记和未标记细胞经左肾动脉移植入大鼠肾脏,移植后即刻,第1、3、5、8天应用MRI对移植细胞进行活体示踪并与肾脏组织切片对照。结果MSCs的Fe2O3-PLL标记率近100%。标记细胞移植后T2WI肾脏皮质区信号强度明显下降,持续至移植后第8天。组织学分析见绝大多数标记细胞分布于肾小球内。结论1.5T磁共振仪可对移植入正常肾脏的Fe2O3-PLL标记细胞进行活体成像,T2WI信号变化最明显。     

超顺磁性氧化铁纳米粒子标记人骨髓和脐带间充质干细胞：

背景：优化人源细胞安全、有效的标记参数及细胞移植后的定位是评价其治疗效果至关重要的环节。目的：比较核磁影像对比剂超顺磁性氧化铁纳米粒子体外标记入骨髓和脐带间充质干细胞的细胞活率、标记效率及核磁共振T2＊WI成像的效果,优化标记细胞处理细节。方法：培养第3代人骨髓和脐带间充质干细胞,以5-30mg／L菲立磁（FeridexIV）结合硫酸鱼精蛋白标记细胞。结果与结论：人骨髓和脐带间充质干细胞标记前后细胞的存活率接近（P〉0．05）。以530mg／L菲立磁标记骨髓间充质干细胞的阳性标记率差异无显著性意义（P〉0．05）：而5mg／L菲立磁标记脐带间充质干细胞的阳性标记率与20和30mg／L菲立磁标记的差异有显著性意义（P〈0．05）：10mg／L菲立磁标记脐带间充质干细胞的阳性标记率低于骨髓间充质干细胞（P〈O．05）。当≥20mg／L菲立磁标记细胞时,2种来源的细胞悬液中均出现不易洗脱和过滤去除的氧化铁颗粒。标记后细胞在3.0T MR GRE T2＊WI扫描均见随菲立磁的浓度升高,信号强度减弱。提示这2种组织来源的间充质干细胞,以10mg／L的菲立磁硫酸鱼精蛋白复合物标记是安全有效的,可用临床T2＊WI的MR成像观察。     

菲立磁-多聚赖氨酸复合物体外标记兔骨髓基质细胞

背景：为明确细胞移植后症状改善是否由移植所致,既往多采用侵袭性方法,但是这种方法不适用于动态追踪及人体研究。如果能够在合适示踪剂的帮助下,采用无创伤性影像学技术在活体识别、跟踪移植后细胞的存活状态,将显著提高细胞移植疗法的学术价值。 目的：初步探讨菲立磁-多聚赖氨酸复合物体外磁性标记兔骨髓基质细胞的可行性。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-03108在珠江医院神经外科实验室完成。材料：2月龄新西兰大白兔8只,由广州中医药大学实验动物中心提供。菲立磁为Advanced Magnetic公司产品,多聚赖氨酸为sigma公司产品。方法：无菌条件下穿刺抽取兔股骨骨髓,梯度密度离心法分离获取骨髓基质细胞,收集第2代细胞,加入含白血病抑制因子、碱性成纤维细胞生长因子及胎牛血清的神经干细胞培养基诱导5d。将50mg／L菲立磁和1．5mg／L多聚赖氨酸混合,振荡30min后,将复合物加入到细胞培养基中进行标记,孵育细胞24h。主要观察指标：骨髓基质细胞向神经干细胞诱导分化情况,细胞内铁的鉴定,菲立磁多聚赖氨酸复合物标记对细胞增殖或分化的影响。 结果：骨髓基质细胞诱导后可见少量细胞的胞体变圆变大,突起缩短,随时间延长,圆形细胞逐渐增多,部分聚集成簇、成球,FITC荧光染色示巢蛋白呈阳性表达。普鲁士蓝染色结果显示99％以上骨髓基质细胞的胞质内出现细4、的蓝色铁颗粒。在含菲立磁-多聚赖氨酸复合物的培养基中,骨髓基质细胞可继续增殖和分化,但增殖分裂后细胞质内铁颗粒数量较增殖前有所减少,经鉴定部分为神经元特异性烯醇化酶阳性细胞。 结论：菲立磁-多聚赖氨酸复合物可在体外高效标记骨髓基质细胞,且标记后细胞的活性、增殖和分化能力不受影响。     

骨髓间充质干细胞提取方法的改良

背景：目前从大鼠骨髓中分离骨髓间充质干细胞仍以密度梯度离心法为主，虽可提取较纯的骨髓间充质干细胞，但步骤较繁琐，容易污染，且较昂贵。目的：试图寻找一种经济、方便及可靠的骨髓间充质干细胞提取方法。设计、时间及地点：以细胞为对象的对比观察实验，于2008—02／04在南方医科大学珠江医院中心实验室完成。材料：10只健康SD大鼠-侧前后肢提取出的骨髓间充质干细胞为实验组，另一侧前后肢提取出的骨髓间充质干细胞为对照组。方法：将实验组骨髓在含体积分数为0．10～0．15的胎牛血清、100IU／mL双抗及0．1％hepes液的DMEM培养基中培养，用注射器进行吹打，使骨髓与培养基充分混匀，吸取混合液，通过200目的筛网滤过后将其置于培养瓶中培养，提取较纯的骨髓间充质干细胞，对照组采用传统的密度梯度离心法提取骨髓间充质干细胞。主要观察指标：传代至第3代时，采用流式细胞仪鉴定提取的细胞，并从形态及数量上比较两种方法提取的细胞差异。结果：两种方法提取的骨髓间充质干细胞形态无明显差别，流式细胞仪检测通过改良法提取的细胞CD29^＋、CD44^＋、CD45^＋，可鉴定为骨髓间充质干细胞。两组间骨髓间充质干细胞数量无明显差异（P〉0．05）。结论：实验采用的改良提取方法具有经济、操作简便等特点，是较为理想的大鼠骨髓间充质干细胞提取方法。     

菲立磁-多聚赖氨酸复合物体外标记免骨髓基质细胞

背景:为明确细胞移植后症状改善是否由移植所致,既往多采用侵袭性方法,但是这种方法不适用于动态追踪及人体研究.如果能够在合适示踪剂的帮助下,采用无创伤性影像学技术在活体识别、跟踪移植后细胞的存活状态,将显著提高细胞移植疗法的学术价值.目的:初步探讨菲立磁-多聚赖氨酸复合物体外磁性标记兔骨髓基质细胞的可行性.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/08在珠江医院神经外科实验室完成.材料:2月龄新西兰大白兔8只,由广州中医药大学实验动物中心提供.菲立磁为Advanced Magnetic公司产品,多聚赖氨酸为sigma公司产品.方法:无菌条件下穿刺抽取兔股骨骨髓,梯度密度离心法分离获取骨髓基质细胞,收集第2代细胞,加入含白血病抑制因子、碱性成纤维细胞生长因子及胎牛血清的神经干细胞培养摹诱导5 d.将50 mg/L菲立磁和1.5 mg/L多聚赖氨酸混合,振荡30 min后,将复合物加入到细胞培养基中进行标记,孵育细胞24 h.主要观察指标:骨髓基质细胞向神经干细胞诱导分化情况,细胞内铁的鉴定,菲立磁-多聚赖氨酸复合物标记对细胞增殖或分化的影响.结果:骨髓基质细胞诱导后可见少量细胞的胞体变圆变大,突起缩短,随时间延长,圆形细胞逐渐增多,部分聚集成簇、成球,FITC荧光染色示巢蛋白呈阳性表达.普鲁士蓝染色结果显示99%以上骨髓基质细胞的胞质内出现细小的蓝色铁颗粒.在含菲立磁-多聚赖氨酸复合物的培养基中,骨髓摹质细胞可继续增殖和分化,但增殖分裂后细胞质内铁颗粒数量较增殖前有所减少,经鉴定部分为神经元特异性烯醇化酶阳性细胞.结论:菲立磁-多聚赖氨酸复合物可在体外高效标记骨髓基质细胞,且标记后细胞的活性、增殖和分化能力不受影响.     

兔骨髓间充质干细胞的Gd-DTPA标记及MRI体外示踪

目的探讨兔MSCs磁性标记及MRI体外示踪的可行性。方法培养分离兔MSCs,以PEI-FluoR为载体,体外对MSCs进行双标记。标记后行荧光镜、电镜观察及生物学性状检测。应用1.5TMRI仪,对标记细胞进行SE序列T1WI及T2WI扫描及T1-mapping测量T1时间,并观察MRI上能显示标记MSCs的最小数目及标记后正常传代后MRI监测的持久性。结果MSCs双标记后,标记效率为80%,细胞内可见荧光物质,电镜下Gd颗粒位于胞浆内。标记后24h内标记细胞与未标记细胞间台盼蓝拒染率、标记后5d内标记细胞与未标记细胞的MTT吸光度值差异无统计学意义。标记细胞凋亡指数为0.40%,未标记细胞为0.19%。未标记及标记细胞T1WI平均信号强度及T1时间分别为2166±167、(2445±21)ms,3162±350、(1404±129)ms(t=6.91、29.87,P<0.005)。体外MRI上可监测到最低1×104个标记细胞,并可持续显示第3代标记细胞。结论应用多聚胺载体对兔MSCs进行Gd-DTPA及荧光双标记安全、有效;MRI能示踪体外双标记的干细胞。     

Gd-DTPA标记骨髓间质干细胞在脊髓损伤模型中的磁共振示踪研究

目的 探讨用钆-二乙烯三胺五乙酸(Gd-DTPA)标记大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)用于细胞示踪的可行性.方法 用jetPEITM-FluoF结合Gd-DTPA形成顺磁性颗粒,标记MSCs,电镜观察标记情况,并用MTT法测定标记细胞的活力.对标记的细胞进行体外和大鼠脊髓内磁共振成像(MRI).结果 Gd-DTPA可高效标记MSCs,同时对MSCs生长无影响.体外及MSCs移植大鼠脊髓损伤模型MRI T1wI均显示,标记细胞呈高信号强度.结论 Gd-DTPA成功标记的MSCs在体外和大鼠脊髓组织内均可检测到明显的MRI信号强度改变.Gd-DTPA可以用于MSCs标记的MRI示踪.     

间充质干细胞多模态示踪方法的应用

目的 合成具备MR显像和基因传输功能的纳米载体,探讨载体对间充质干细胞（MSCs）的基因传输功能及其联合生物发光成像（BLI）和MRI对MSCs双模态示踪的能力。方法 合成三元共聚物聚乙二醇-聚天冬氨酸（聚乙烯亚胺）-超顺磁性氧化铁纳米颗粒载体（PAI/SPION）;利用凝胶阻滞实验分析载体携带质粒（pDNA）的能力;电位及粒度测定仪测量载体复合pDNA后的粒径和电位;采用大鼠股骨骨髓分离培养MSCs;采用流式细胞仪、激光共聚焦显微镜评估PAI/SPION/pDNA对MSCs的基因转染效率;联合BLI和MRI双模态示踪MSCs。结果 成功合成了载体PAI/SPION。氨基与质粒磷酸根的摩尔比（N/P）=3.0时,PAI/SPION可完全复合pDNA。N/P=12时,粒径趋于稳定,为（74.8±8.1）nm,电位为（12.2±1.5）mV,载体对MSCs的基因转染率为（71.2±2.3）%。激光共聚焦显微镜下,胞浆内可见大量表征PAI/SPION的绿色荧光和表征pDNA的红色荧光,且MSCs生物发光强度最高,T2^*WI标准化信号强度最低。结论 本研究成功合成了MRI可视的基因传输载体PAI/SPION;载体可高效传输pDNA至大鼠MSCs,且可成功联合BLI和MRI双模态示踪MSCs。     

9.4T MRS观察人脐带间充质干细胞代谢特征

目的 利用9.4T高分辨力MRS检测人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的水溶性及脂溶性提取物,明确其频谱代谢特征。 方法 培养获取hUCMSCs,利用甲醇/氯仿/水一次性提取细胞的水溶性及脂溶性代谢物,使用9.4T MR检测提取物的氢质子频谱,并定量计算谱线中主要代谢物的浓度。 结果 hUCMSCs的水溶性与脂溶性提取物具有不同的频谱特征,水溶性提取物频谱中的主要代谢峰有乳酸、醋酸、苏氨酸、谷氨酸、肌酸、肌醇及胆碱复合物等,脂溶性谱线中主要代谢峰为长/短链脂肪酸等。 结论 MRS能反映细胞的生理状态,综合分析两类提取物的频谱特征能更全面地获取间充质干细胞的代谢信息。     

骨髓间充质干细胞治疗兔膝RA模型软骨损伤的MRI评价

目的：用骨髓间充质干细胞治疗兔早期类风湿关节炎,运用MRI测量软骨厚度,观察前后改变,评价治疗效果。方法：选取42只新西兰大白兔,用卵蛋白造模,造模第4周（治疗前）取6只兔行MR和病理检查以对照,余36只兔随机分为RA模型组和BMSCs治疗组,每组18只,两组于治疗后1、2、3个月分别选取6只兔行MR和病理检查。对病变膝关节的软骨厚度进行MRI测量及病理学评分,并对数据进行统计学分析。结果：RA组经1、2、3个月后,软骨厚度变薄,病理学评分增加。BMSCs治疗组治疗1、2、3个月后,关节软骨厚度恢复,病理学评分减低。MRI测量数据和病理学评分有相关性。结论：MRI可用于评价BMSCs治疗早期类风湿关节炎关节软骨的改变。     

9.4TMR波谱检测间充质干细胞成骨分化代谢特征的研究

目的 研究间充质干细胞向成骨细胞分化的高分辨MR波谐（MRS）代谢特征。材料与方法 培养获取间胎儿脐带充质干细胞,建立体外诱导音充质干细胞向成骨细胞分化的模型,利用甲醇/氯仿获取细胞代谢提取物,经后处理后利用9.4T高分辨率MRS检测代谢提取物频谱特征。     

用于高场MRS研究的人脐带间充质干细胞代谢物提取方法选择的优化

目的 从代谢物提取效率及9.4 T MRS对不同提取物检测敏感性差异的角度分析比较离体频谱研究中常用的代谢物提取方法,对提取方法的选择进行一定的优化.方法 　培养获取人脐带间充质干细胞,利用高氯酸(perchloric acid,PCA)提取细胞水溶性代谢物,利用甲醇/氯仿(methanol-chloroform,M/...     

人骨髓间质干细胞PKH 26荧光标记技术

目的 建立一种PKH26体外荧光标记人骨髓间质干细胞（MSCs）的方法。方法 培养人骨髓间质干细胞，按PKH26标记程序进行标记后培养，采用激光共聚焦显微镜、流式细胞分析，观察标记后人MSCs生长状态、荧光强度变化和传代培养效果。应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）等方法观察标记细胞的生物学功能。结果 标记后MSCs呈红色荧光，标记率达100％，体外连续传代培养7代后，荧光标记细胞荧光强度逐渐减弱，荧光标记细胞百分比逐渐减低。PKH26标记MSCs的生长形态、生长活力、nucleostemin、三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）基因表达及体外诱导分化能力等生物学特性不发生改变。结论 PKH26荧光标记人MSCs是一种有效、实用的方法，该方法对MSCs转归、可塑性及MSCs移植治疗研究具有重要的价值。