妊娠早期孕妇外周血中胎儿游离DNA的定量分析

目的对早孕期孕妇外周血中胎儿游离DNA行定量分析,以确定正常浓度范围,为实施无创性产前诊断提供科学依据.方法从孕早期50名孕妇外周血血浆中提取胎儿DNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction, FQ-PCR)技术检测其中的Y性别决定区(sex-determining region Y, SRY)基因.结果早孕期孕男胎的孕妇38名,32名SRY基因阳性,平均浓度为(149.25±1.96×59.17)拷贝数/ml,中位数为149.1拷贝数/ml.孕女胎的孕妇12名均为阴性.结论用实时荧光定量PCR的方法从早孕7、8、9w孕妇外周血浆中检测胎儿SRY基因,特异度100%,灵敏度84.21%.提示母体血浆中游离的胎儿DNA的定量分析在无创性产前诊断中有重要价值.     

甲基化荧光PCR定量检测母体循环中不同妊娠状态下胎儿maspin基因

目的依据孕妇血浆中存在游离胎儿DNA的理论,从孕妇外周血浆中分离出胎儿DNA并加以鉴定,预防X连锁遗传病患儿的出生。方法从孕早期、中期及晚期共80名孕妇外周血浆中分离胎儿DNA,采用实时荧光定量PCR（real- time fluorescence quantitative polymerase chain- reaction, FQ- PCR）方法对不同妊娠状态下孕妇外周血中游离的胎儿DNA（fDNA）进行定量分析,初步探讨游离fDNA在不同妊娠状态下的浓度变化,为尽早应用于临床提供科学依据。结果早孕组28例血浆标本中有25例检测到U—MASPIN基因,其平均浓度为57．82拷贝数／ml;中孕组20例血浆标本中均检测到U—maspin基因,其平均浓度为153．08拷贝数／ml;晚孕组32例血浆标本中均检测到U—maspin基因,其平均浓度为219．34拷贝数／ml,组间两两比较,差异有极显著意义（P〈0．01）。结论用实时荧光定量PCR的方法最早在孕72天的孕妇外周血浆中就可以检测到胎儿U－maspin基因,随孕周的增加,母血中胎儿DNA的量也在逐渐增加。实时荧光定量PCR技术在进行无创伤性产前性别诊断中有重要的价值。     

定量检测子痫前期孕妇血浆中超甲基化的RASSF1A基因

目的 探讨子痫前期孕妇血浆中超甲基化的Ras相关区域家族1A(ras association domain family 1A,RASSF1A)基因的水平变化及应用价值.方法 选择晚期妊娠子痫前期患者60例为实验组,其中轻度和重度子痫前期各30例;正常晚期孕妇60名为对照组.提取血浆游离DNA,经甲基化敏感的限制性内切酶处理,实时定量检测酶切前、后RASSF1A基因的浓度,同时检测β肌动蛋白(β-actin)基因以确保酶的完全消化.结果 子痫前期孕妇血浆中超甲基化的RASSF1A基因含量为正常妊娠组的3.31倍.轻、重度子痫前期患者浓度有差异,中位数分别为1659.00 copies/mL及2036.50 copies/mL(P<0.05).结论 子痫前期孕妇血浆中的超甲基化RASSF1A基因含量明显升高,且浓度水平与子痫前期的严重程度相关.     

荧光定量PCR检测孕妇外周血中游离胎儿DNA在子痫前期中的价值

目的探讨孕妇外周血中的游离胎儿DNA水平作为子痫前期预测指标的可能。方法普通PCR检测子痫前期孕妇22例和正常孕妇25例的血浆中Y染色体性别决定基因（SRY）,然后应用荧光定量PCR技术对有SRY基因表达者的胎儿DNA水平进行定量分析并比较子痫前期孕妇组和正常孕妇组胎儿DNA水平的差异。结果22例子痫前期患者及25例对照组中各有12例出现SRY阳性信号。子痫前期组的胎儿DNA水平明显高于正常对照组（P〈0.01）。结论孕妇外周血中的游离胎儿DNA可望作为预测子痫前期的指标之一。     

用实时荧光定量PCR方法检测母血中的胎儿SRY基因

目的　从孕妇外周血浆中分离出胎儿DNA ,并加以鉴定 ,预防X连锁遗传病患儿的出生。方法　从孕早期、中期共 3 0 0名孕妇外周血浆中分离胎儿DNA ,用实时荧光定量聚合酶链反应 (fluorescencequantitativepolymerasechainreaction ,FQ PCR)的方法检测其中的Y性别决定区 (sex determiningregionY ,SRY)基因。结果　孕早期怀男胎的孕妇 82名 ,70名SRY基因阳性 ,其平均浓度为 ( 5 8.82± 2 0 .90 )拷贝 /ml,中位数为 5 8.5 0拷贝 /ml。孕中期怀男胎的孕妇 90名 ,SRY基因均为阳性 ,平均为 ( 15 2 .0 8± 62 61)拷贝 /ml,中位数为 14 9.3 5拷贝 /ml。怀女胎的孕妇均为阴性。结论　用实时荧光定量PCR的方法最早在孕42天的孕妇外周血浆中就可以检测到胎儿SRY基因 ,随孕周的增加 ,母血中胎儿DNA的量也在逐渐增加。实时荧光定量PCR技术在进行无创伤性产前性别诊断中有重要的价值。     

手术终止妊娠对早孕妇女外周血中游离胎儿DNA的影响

目的检测在孕早期手术终止妊娠是否会对母体外周血浆中的胎儿DNA水平造成影响。方法选择孕6~9w妇女36例(自愿要求终止妊娠,无禁忌症,胎儿性别为男性),在其终止妊娠前后分别采取外周静脉血5m l,对其血浆中的游离胎儿DNA的SRY基因行荧光定量分析。结果在36例血浆标本中,术前有31例检测到胎儿DNA,术后全部检测到胎儿DNA。其浓度平均分别为62.40±21.70(31.80~128.00Eq/m l),101.04±37.40(58.20~209.70Eq/m l),术前与术后胎儿DNA含量有统计学差异(P<0.01)。结论①孕妇外周血中游离胎儿DNA最早在孕45天即可检测到。②外周血中游离胎儿DNA的水平在妊娠终止后很快升高。③孕妇外周血中的游离胎儿DNA很可能来源于母胎之间出血。     

母体循环中游离胎儿DNA的生物学特点与临产分娩的关系研究

目的依据孕妇血浆中存在游离胎儿DNA;的理论,从孕妇外周血浆中分离出胎儿DNA;并加以鉴定,探讨晚孕期和临产期母血中胎儿DNA;含量的变化及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitativepolymerase chain-reaction,FQ-PCR)方法对孕28-42周以及临产时80例孕妇血浆中胎儿DNA;的含量进行检测并比较,初步探讨游离fDNA;在不同妊娠状态下的浓度变化。结果孕28～31周组、孕32～35周组、孕36～42周组、临产组孕妇血浆中DNA;的含量拷贝数分别为(23034±25.52)、(480.08±55.47)、(600.82±70.47)、(1100.34±87.95)copys/mI。各组问孕妇外周血中胎儿DNA;的含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论随着孕期的进展,母血中胎儿DNA;的量也在逐渐增加,母血中胎儿DNA;含量的升高可能是分娩的诱因之一。     

妊娠各期母血中胎儿RASSF1A基因含量的测定

目的本文旨在分析确定妊娠早、中、晚各期母血中胎儿DNA的含量,从而为利用孕母血浆循环DNA进行病理性妊娠诊断研究奠定基础。方法收集746例不同孕期孕妇抗凝血,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术测定高甲基化RASSF1A基因含量,确定不同孕期孕周孕妇外周血浆中胎儿DNA含量。结果孕妇早、中、晚期孕组血浆胎儿DNA平均含量分别34.68±24.76copies/μL、204.03±124.91copies/μL、338.84±345.15 copies/μL,三组比较有显著性差异(P0.05)。孕妇血浆中的高甲基化RASSF1A水平随着孕周的增长而增高。最早可在7周检测到孕妇血浆中高甲基化RASSF1A基因,含量随妊娠的进程逐渐增加,且在分娩后三天内消失。10例健康未妊娠女性血浆均未检出高甲基化RASSF1A基因。结论用实时荧光定量PCR的方法可确定正常孕妇血浆中不同孕期孕周胎儿DNA的含量,为后续病理性妊娠诊断研究提供实验依据。     

母体循环中胎儿游离DNA的定量分析

目的依据孕妇血浆中存在游离胎儿DNA的理论，从孕妇外周血浆中分离出胎儿DNA并加以鉴定，预防x连锁遗传病患儿的出生。方法从孕早期、中期共78名孕妇外周血浆中分离胎儿DNA，用实时荧光定量聚合酶链反应（fluorescence quantitative polymerase chain reaction，FQ—PCR）的方法检测其中的Y性别决定区（sex—determining region Y，SRY）基因。结果孕早期怀男胎的孕妇28名，25名SRY基因阳性，其平均浓度为（58．82±25．22）拷贝／ml；孕中期怀男胎的孕妇20名，SRY基因均为阳性，平均为（152．08±62．61）拷贝／ml；怀女胎的孕妇均为阴性。结论用实时荧光定量PCR的方法最早在孕62天的孕妇外周血浆中就可以检测到胎儿SRY基因，随孕周的增加，母血中胎儿DNA的量也在逐渐增加。实时荧光定量PCR技术在进行无创伤性产前性别诊断中有重要的价值。     

子痫前期患者胎盘组织中尾加压素Ⅱ及一氧化氮的表达及意义

目的研究尾加压素Ⅱ（urotensin Ⅱ,UⅡ）及一氧化氮在子痫前期患者胎盘组织的表达情况及其与子痫前期发病的关系。方法采用RT-PCR方法检测45例子痫前期患者（轻度22例,重度23例）及20例正常晚期妊娠孕妇胎盘组织中UIImRNA的表达情况;同时用硝酸还原酶法检测子痫前期组孕妇与正常组孕妇胎盘组织中NO浓度。结果重度子痫前期患者胎盘组织UIImRNA（0.85±0.40）明显高于正常妊娠组（0.38±0.30）（P〈0.05）;轻度子痫前期患者胎盘组织UIImRNA（0.64±0.31）,与正常妊娠组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。轻、重度子痫前期患者胎盘组织NO浓度分别为114.42±6.52 u/mg、79.22±3.31 u/mg,均显著低于正常妊娠组241.36±13.24u/mg（P〈0.05）。结论子痫前期胎盘组织中尾加压素Ⅱ水平升高,NO浓度下降,可能在子痫前期的发病中起一定作用。     

Kinetics of SRY gene appearance in maternal serum: detection by real time PCR in early pregnancy after assisted reproductive technique

BACKGROUND: Fetal DNA circulating in maternal serum offers a possibility for non-invasive prenatal diagnosis but its kinetics during very early pregnancy is still unclear. In order to clarify this point, the studies on the kinetics of fetal DNA appearance in maternal serum were conducted on patients undergoing assisted reproduction. METHODS: Using a quantitative real time PCR assay, the presence of SRY gene sequences was evaluated in the serum of patients at the onset of pregnancy. RESULTS: Twenty-seven patients were originally studied but first trimester abortion occurred in five cases. Among the 22 ongoing pregnancies, ten were found to bear at least one male fetus and all sera from these women gave positive results for SRY gene detection. The SRY gene was found to be detectable as soon as day 18 after embryo transfer in one case and it had been found in the other nine patients by day 37. CONCLUSIONS: Fetal DNA is found in maternal serum even before the fetal circulation is established, which is highly suggestive that it is released, at least in part, from the trophoblast. Detection of fetal DNA in maternal serum very early in pregnancy may have clinical implications such as with the management of pregnant women carrying a fetus at risk for congenital adrenal hyperplasia.     

在孕9周前检测孕妇外周血中胎儿的性别

目的：评价使用孕妇外周血中的胎儿细胞和游离DNA进行无创伤性产前诊断的可能性。方法：研究对象为150名孕5－9周的孕妇。使用淋巴细胞分离液和3％的明胶分离胎儿细胞。使用荧光定量PCR（FISH）检测母血中胎儿细胞Y染色体的末端。同时使用巢氏PCR和荧光定量PCR（FQ-PCR)检测150名孕妇血浆中的胎儿SRY基因。结果：FISH,巢氏PCR以及FQ-PCR三种方法的敏感性分别为73.2％，78％和85.4％，特异性分别为96.2％，100％和100％。使用FISH，最早在孕49天检测到胎儿细胞，使用巢氏PCR和FQ-PCR最早在孕49天和42天检测到孕妇血浆中的胎儿游离DNA.结论：三种方法对无创伤性产前诊断都是适合的。但其中FQ-PCR因其检测时间较早而成为最优选择。     

孕妇外周血中胎儿短串联重复序列基因型的检测

目的探讨利用孕妇血浆中胎儿DNA进行遗传病产前基因诊断的可行性。方法应用9个具有高度多态性的短串联重复序列（short tandem repeat，STR）位点，以多重荧光PCR方法对10名健康孕妇孕早、中、晚期共30份血浆标本和非孕期血浆标本中DNA进行STR等位基因扩增。同时检测孕妇丈夫的外周血本，然后进行基因扫描及对照分析，判断胎儿父源性等位基因在孕妇血浆中的检出情况。结果10名孕妇均足月分娩，男婴3名，女婴7名。10名孕妇血浆中均检出胎儿父源性等位基因，即胎儿DNA。30份孕期血浆标本中有23份检出胎儿DNA，其中孕早期标本6份（6／10）；孕中期标本8份（8／10）；孕晚期标本9份（9／10）。7份标本未见到胎儿DNA。结论应用多重荧光PCR方法对孕妇血浆中DNA进行SFR多态化点的复合扩增，可获得男性和女性胎儿DNA信息，可用于无创伤性产前诊断。     

孕妇外周血中游离胎儿DNA的检测在早产预测中的价值

目的探讨孕妇外周血中的游离胎儿DNA检测的可行性及其水平变化在早产预测中的价值。方法普通PCR检测17例先兆早产孕妇和20例正常孕妇血浆中Y染色体性别决定基因(SRY),继应用荧光定量PCR技术对有SRY基因表达者的胎儿DNA水平进行定量分析并进一步比较早产孕妇组和正常孕妇组间DNA水平的差异。结果17例先兆早产患者及20例对照组中各有9例、10例出现SRY阳性信号。先兆早产组的胎儿DNA水平明显高于正常对照组(P<0.01)。结论孕妇外周血中的游离胎儿DNA可望作为预测早产的指标之一。     

妊娠期高血压疾病孕妇外周血中游离胎儿DNA的检测

目的探讨实时荧光定量PCR（RQ—PCR）检测孕妇外周血中胎儿游离DNA对预测及预防妊娠期高血压疾病的应用价值。方法选15例子痫前期孕妇及正常孕妇20例，用RQ—PCR法检测各例血浆中GAPDH及SRY水平，通过2^-△△ct法分析两组孕妇间的差异。结果22例孕男胎检出SRY21例，13例孕女胎均未检出，子痫前期组胎儿DNA水平明显高于正常组（P=0．009），两者比值为3．57。结论RQ—PCR法检测孕妇外周血中胎儿DNA可作为预测及预防妊高征的一种有效手段。     

孕妇血浆中游离胎儿DNA的检测与分析

目的 建立不依赖于胎儿性别和父本DNA、可适用于染色体数目异常和单基因遗传病的无创性产前诊断方法.方法 应用降落PCR和二次PCR扩增技术,联合检测41例正常孕妇(其中孕龄7 w 1例,14～20 w 39例,32 w 1例)血浆中游离胎儿DNA的SRY基因和D17S1293、D21S11、DXS8377等3个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)位点.SRY基因扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,STR位点扩增产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳并银染显色.结果 41例孕妇血浆DNA中均检出非母源性等位基因条带;联合SRY基因和X-STR位点鉴定胎儿性别,38例判断明确,3例不能明确判断性别.结论 检测孕妇血浆中的游离胎儿DNA,可快捷地获得男性胎儿和女性胎儿的父源性DNA信息,不仅适用于性连锁遗传疾病,而且适用于常染色体遗传疾病等的产前基因诊断.