小鼠病毒性心肌炎细胞凋亡相关蛋白的表达

目的 探讨嗜鼠心肌Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ Ｂ３病毒（ＣＶＢ３ｍ）诱导的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠病毒性心肌炎（ＶＭＣ）细胞凋亡的机制。方法 给ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹腔接种０．１ｍｌ１００ＴＣＤ５０ＣＶＢ３ｍ，感染后批断脊处死小鼠，应用双重荧光染色技术、原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和共聚焦显微镜对小鼠心肌细胞凋亡及部分相关蛋白表达进行检测。结果 ＣＶＢ３ｍ可诱发小鼠ＶＭＣ。感染病毒后９～１２ｄ病变达到高峰，检出率达１     

TGF—β1表达与小鼠病毒性心肌炎细胞凋亡的关系

本实验通过给ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹腔接种柯萨奇Ｂ－３ｍ病毒（ＣＶＢ３ｍ）诱发病毒性心肌炎（ＶＭＣ）感染病毒９ｄ后，ＶＭＣ检出率９３．３３％，应用原位末端标记法（Ｔ／ＶＮＥＬ）及免疫组化技术检测发现，７６．６７％感染病毒鼠心肌中发现凋亡细胞，７３．３３％，有ＴＧＦ－β１的表达，二者之间分布区域一致，提示细胞凋亡可能参与ＣＶＢ３ｍ诱导的ＶＭＣ的发生，发展，而ＴＧＦ－β１可能参与ＶＭＣ细胞凋亡的调控。     

NO与小鼠病毒性心肌炎发生发展的关系

目的 探讨ＮＯ在小鼠病毒性心肌炎发生发展中的作用。方法 建立柯萨奇病毒Ｂ３（ＣＶＢ３）病毒性心肌炎ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠模型及ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹腔巨噬细胞（Ｍφ）培养体系。酶法测定小鼠心肌及Ｍφ分泌ＮＯ含量;免疫组化法检测心肌ｉＮＯＳ;微量滴定法测定心肌内感染性病毒;ＲＴ－ＰＣＲ法检测心肌病毒ＲＮＡ;ＴＵＮＥＬ法检测凋亡细胞;光镜、电镜检查心肌损伤状况。结果 （１）小鼠心肌内ＮＯ于ＣＶＢ３感染后７～３０     

NO与小鼠病毒性心肌炎心肌损伤的关系

目的 嗜鼠心肌Ｃｏｘａｃｋｉｅ Ｂ３病毒（ＣＶＢ３ｍ）可诱导ＢＬＡＢ／Ｃ小鼠病毒性心肌炎（ＶＭＣ）。探讨自由基一氧化氮（ＮＯ）与ＶＭＣ心肌损伤的关系。方法 给ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹腔接种０．１ｍｌ１００ＴＣＤ５０ＣＶＢ３ｍ,感染后分批断脊处死小鼠。应用双重荧光染色技术、原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和共聚焦显微镜对小鼠心肿中细胞凋亡、ＮＯ相关合成酶（ＮＯＳ１、ＮＯＳ２和ＮＯＳ３）及其降解产物（Ｎｉｔｒｏ     

应用嗜鼠心肌CoxsackieB3病毒反复感染致BALB／c小鼠心肌损伤

应用嗜鼠心肌ＣｏｘｓａｃｋｉｅＢ３病毒（ＣＶＢ３ｍ）给ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠重复腹腔注射，连续３次，间隔３０天，末次注射后１０天处死小鼠。光学显微镜检查发现，小鼠心肌可见不同时期的病灶（坏死灶、瘢痕），心肌损伤检出率达１００％。应用ＴＵＮＥＬ法检测发现，８２．５０％感染组鼠心肌中可见散在心肌细胞凋亡，与对照组（２３．０８％）比较，Ｐ＜０．０１，有极显著性差异。提示ＣＶＢ３ｍ重复感染可致ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠慢性心肌损伤，心肌细胞凋亡参与心肌损伤的发生与发展。     

小鼠病毒性心肌炎与心肌细胞凋亡的关系

实验通过给５周龄ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹腔接种Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ Ｂ３ｍ病毒（ＣＶＢ３ｍ），诱发小鼠急性病毒性心肌炎（ＶＭＣ），感染病毒９天后处死小鼠，利用光镜、电镜及原位末端标记法对心肌组织进行检测，结果显示：ＶＭＣ检出率为９３．３３％，心肌细胞凋亡阳性率为８０．００％，凋亡细胞多分布于心内膜下、心外膜下心肌组织，血管内皮细胞和坏死病灶周围，提示细胞凋亡可能是小鼠ＶＭＣ的发病机制之一。     

细胞凋亡与骨髓增生异常综合征疾病演变的关系

目的探讨骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）骨髓细胞凋亡特征及其病理学意义。方法用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ），ＤＮＡ梯子和体外培养等方法对３８例ＭＤＳ患者骨髓单个核细胞（ＢＭＭＣ）凋亡进行研究。结果ＭＤＳ患者ＢＭＭＣ的ＴＵＮＥＬ凋亡细胞阳性指数（ＰＩ）为２０．１９％±１１．０７％，显著高于正常人、ＭＤＳ转化的白血病、急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）及缺铁性贫血（ＩＤＡ）组，（Ｐ＜０．００１和Ｐ＜０．０１）。ＴＵＮＥＬ和ＣＤ４１碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶免疫酶标法（ＡＰＡＡＰ）双标记证明ＭＤＳ骨髓病态小巨核细胞发生了凋亡。动态观察１０例ＭＤＳ患者，转为白血病后凋亡细胞ＰＩ值显著下降，尚未转为白血病患者随病情恶化凋亡呈下降趋势。７例ＭＤＳ患者ＢＭＭＣ体外培养后，晚期ＰＩ（ＬＰＩ）显著增高，３例出现ＤＮＡ梯子，ＡＭＬ和ＩＤＡ组ＬＰＩ未见明显升高，未出现ＤＮＡ梯子。结论ＭＤＳ骨髓细胞凋亡过度与演变和转为白血病有关。原位检测细胞凋亡可作为监测ＭＤＳ预后指标     

Coxsackie B3病毒诱导人心肌细胞凋亡

体外培养胎儿心肌细胞，待细胞贴壁成层时接种Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ Ｂ３病毒（ＣＶＢ３），２４小时后收集细胞。应用电镜、ＤＮＡ凝胶电泳分析及原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测发现，感染病毒心肌细胞每视野均有７０％以上呈阳性染色，ＤＮＡ凝胶电泳出现“梯状带”；对照细胞呈现阳性染色者每视野不超过５％，ＤＮＡ凝视电泳只见一条正常基因组ＤＮＡ带。实验结果提示，ＣＶＢ３可诱导体外培养人心肌细胞的凋亡。     

化疗药物对肺癌细胞凋亡诱导作用的研究

目的探讨化疗药物鬼臼乙叉甙（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ，Ｖｐ１６）及中成药得力生对肺癌细胞凋亡的诱导作用。方法采用电镜、ＤＮＡ电泳、ＴＵＮＥＬ原位末端标记和流式细胞术（ＦＣＭ）检测凋亡细胞。结果Ｖｐ１６及得力生在一定的作用时间与剂量下均能诱导小细胞肺癌和腺癌细胞的凋亡，凋亡细胞有典型的形态学改变及ＤＮＡ梯形带形成，ＦＣＭ检测凋亡细胞处于低ＤＮＡ含量位置（ＰｒｅＧ１峰），ＴＵＮＥＬ荧光染色能将凋亡细胞的形态与定量计数结合起来。结论Ｖｐ１６及得力生均能成功诱导肺癌细胞凋亡，此种诱导作用呈药物作用浓度及时间依赖性     

细胞凋亡与小鼠病毒性心肌炎发生发展的关系

通过对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹腔接种ＣＶＢ３ｍ后３，６，９，１２，１５，３０天批随机处死小鼠，取心脏进行检测发现，感染后９－１５天，病毒性心肌炎检出率可达９２．３０％。感染后３－９天，心肌中可分离出病毒，而病毒核酸可持续存在于感染后３个。应用电镜，原位末端标记法及免疫组化法检测发现：ＶＭＣ鼠心肌中可见心肌细胞和血管内皮细胞凋主ＴＧＦ－β１和Ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。     

病毒性心肌炎小鼠辅助性T淋巴细胞17亚群的变化

目的 观察病毒性心肌炎小鼠不同时间点辅助性T淋巴细胞17(Th17)亚群的变化,探讨其在病毒性心肌炎发病中的作用.方法 用Balb/c小鼠建立柯萨奇病毒B3(CVB3)心肌炎小鼠模型(实验组),对照组注射等量磷酸盐缓冲液,在注射的第0、7、14、21、28和42天苏木精-伊红染色观察心肌病理改变并计算心肌病理积分,流式细胞仪检测小鼠脾脏Th17细胞亚群的比例(Th17/CD4+).结果 实验组7 d亚组小鼠心肌组织病理积分(1.8±0.5)高于0 d亚组,14 d亚组病理积分在实验组各亚组中最高(2.8±0.4),从21 d亚组起病理积分开始低于14 d亚组,实验组各亚组与对照组相应时点亚组比较差异均有统计学意义(P均<0.05).实验组7 d亚组小鼠脾Th17/CD4+[(2.23±0.89)%]高于实验组0 d亚组,28 d亚组脾Th17/CD4+最高[(5.00±0.81)%],42 d亚组脾Th17/CD4+[(2.35±0.35)%]低于实验组28 d亚组,与对照组相应时点亚组比较差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 病毒性心肌炎小鼠中存在Th17细胞,其可能参与了病毒性心肌炎的炎性过程.     

病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的检测及意义

目的 研究病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌细胞凋亡及其意义。方法 实验用TUNEL法结合电镜观察小鼠接种VMC病毒后3、5、7、9、15、35天心肌细胞凋亡情况。结果 发现小鼠在接种VMC病毒后的3、5、7、9、15、35天各时点凋亡心肌细胞数目较正常对照组明显增加(P<0.01)。小鼠在接种病毒后7～9天,电镜下心肌细胞可见凋亡。结论VMC中存在异常的心肌细胞凋亡现象,心肌细胞凋亡可能参与了VMC的发病。     

病毒性心肌炎心肌超微结构及细胞凋亡的电镜观察

目的研究病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌超微结构改变及细胞凋亡的形态学变化。方法本实验在接种柯萨奇病毒B3(CVB3)建立VMC动物模型的基础上,用光学显微镜及电子显微镜观察心肌细胞的病变及心肌细胞凋亡。结果研究发现实验组小鼠在接种病毒5 d后光镜或电镜下可见心肌病变及炎细胞浸润,7~9 d病变达高峰,35 d时病变基本恢复。VMC小鼠在接种病毒后7~9d,电镜下可见心肌细胞呈凋亡样改变,并可见凋亡小体。结论实验组小鼠在接种CVB3后可引起VMC,VMC中存在异常的心肌细胞凋亡现象。     

白细胞介素-17A调节转化生长因子β1对病毒性心肌炎小鼠心肌纤维化的影响

目的 在小鼠病毒性心肌炎（viral myocarditis,VMC）心肌纤维化的发展过程中,观察白细胞介素-17A（interleukin-17A,IL-17A）是否通过调节转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）参与心肌纤维化.方法 IL-17A基因敲除（IL-17A-deficient,IL-17A-/-）Balb/c小鼠和野生型（wild-type,WT） Balb/c小鼠分别按电脑随机数字表法分为4组,腹腔注射TCID50为10-5的柯萨奇病毒B3 （coxsackie virus B3,CVB3） 0.1 mL培养液建立小鼠VMC模型,于注射病毒后第0、14、28和42天处死小鼠,然后无菌取心脏组织,苏木素-伊红和Masson染色观察心肌组织形态学,并分别计算心肌病理积分和胶原容积积分（CVF）.实时荧光定量聚合酶链反应检测心肌组织TGF-β1mRNA的表达;酶联免疫吸附测定法检测心肌组织TGF-β1蛋白的表达水平.结果 WT小鼠的心肌纤维化随着VMC的病程发展不断加重,TGF-β1于14 d表达显著升高,28 d和42 d后逐渐下降,但仍高于正常水平,差异有统计学意义（P＜0.05）.与同时点WT小鼠相比,IL-17A-/-小鼠心肌组织的心肌纤维化程度明显减轻,TGF-β1mRNA和蛋白的表达水平明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 IL-17A参与VMC的心肌纤维化过程,并可能通过调节TGF-β1的表达而参与这一过程.     

慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及Fas基因、FasL（Fas蛋白配体）的变化

目的　本实验将探讨腹主动脉缩窄所致慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡与Fas及Fas蛋白配体 (FasLigand ,FasL)基因表达的变化 ,揭示二者与心力衰竭发展过程的关系。方法　以腹主动脉缩窄法建立大鼠慢性心力衰竭模型。 3 0只大鼠随机分成假手术组、手术左室代偿性肥厚组 (简称肥厚组 )及手术心衰组。采用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)观察发生心衰的大鼠和同期仅左室肥厚而未发生心衰的大鼠的心肌细胞凋亡情况 ,同时以免疫组化ABC显色法分别检测Fas与FasL蛋白水平变化 ,以逆转录聚合酶链反应法检测Fas基因mRNA的表达改变 ,从而探讨心肌组织中Fas基因的蛋白与mRNA表达水平与心肌细胞凋亡的关系以及二者在心衰发展过程中的作用。结果　假手术组心肌中仅有少许心肌细胞凋亡 ,实施手术的代偿性肥厚组与心衰组大鼠均有心肌细胞凋亡发生 ,但心衰组心肌细胞凋亡的数目明显高于对照组。大鼠经腹主动脉缩窄术后 4周 ,左室肥厚而未发生心衰的大鼠其心肌组织Fas蛋白阳性染色指数明显高于假手术组 ,但Fas配体蛋白阳性染色指数与假手术组间无显著性差异 ;而发生心衰的大鼠其心肌组织Fas及Fas配体蛋白阳性染色指数明显高于肥厚组 ,差异有显著性意义 (P <0 0 5)。与假手术组和肥厚组相比     

曲美他嗪对病毒性心肌炎小鼠的保护作用及其机制

目的:观察曲美他嗪对M株柯萨奇病毒B3(CVB3m)感染的病毒性心肌炎小鼠的保护作用并探讨其可能作用机制。方法:以CVB3m诱导的病毒性心肌炎Balb/c小鼠模型为研究对象。201只清洁级近交系4～6周龄雄性Balb/c小鼠随机分成5组。正常对照小鼠20只(正常组);病毒性心肌炎小鼠55只(心肌炎组);喂养曲美他嗪10 mg/(kg.d)的正常小鼠20只(药物对照组);喂养曲美他嗪10 mg/(kg.d)的病毒性心肌炎小鼠53只(低剂量治疗组);喂养曲美他嗪20 mg/(kg.d)的病毒性心肌炎小鼠53只(高剂量治疗组)。观察各组血清中肌钙蛋白I(cTnI)水平、血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的变化以及心肌组织中Fas mRNA表达水平的变化。结果:小鼠感染CVB3m后第7天及第14天,与正常组及药物对照组比较,心肌炎组、低剂量治疗组和高剂量治疗组血清cTnI水平、MDA含量显著升高,SOD含量显著降低,Fas mRNA的表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠感染CVB3m后第7天,与心肌炎组比较,低剂量治疗组和高剂量治疗组血清cTnI水平显著降低,MDA含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),与心肌炎组及低剂量组比较,高剂量治疗组SOD含量显著升高,Fas mRNA的表达显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。感染CVB3m后第14天,与心肌炎组比较,低剂量治疗组和高剂量治疗组血清cTnI水平、MDA含量显著降低,SOD含量显著升高,Fas mRNA的表达显著减少,差异有统计学意义(P<0.05),与低剂量治疗组比较,高剂量治疗组上述指标变化更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:曲美他嗪能够减少病毒性心肌炎中心肌细胞的损害。其机制可能与其抗氧化作用以及通过下调Fas mRNA水平抑制心肌细胞凋亡有关。     

Altered expression of Bag-1 in Coxsackievirus B3 infected mouse heart

OBJECTIVE: The mechanisms by which Coxsackie B viruses cause myocarditis or dilated cardiomyopathy are not well understood. This study examined changes in the expression of cardiac genes resulting from Coxsackievirus B3 (CVB3) infection of mice. METHODS: Mice (five per group) were experimentally infected with CVB3 or mock-infected with diluent. Altered expression of genes was initially identified by cDNA array, and confirmed by semiquantitative RT-PCR, western blot and immunohistochemistry. RESULTS: Forty-two up-regulated or down-regulated genes were observed in cDNA arrays carrying 588 known mouse genes. Among these, one down-regulated gene, Bag-1, known to be involved in inhibition of apoptosis and modulation of chaperone activity, was investigated further. Semiquantitative RT-PCR showed that Bag-1 expression was down-regulated by up to 30% in virus-infected mouse heart on day 7 compared to the mock-infected. Cell fractionation and western blot analysis confirmed that Bag-1 isoform p32 was predominant in the cytoplasm of mouse myocardium and down-regulated at 4 days or 7 days after CVB3 infection. In contrast, Bag-1 isoform p50 appeared to increase in the nuclear fraction of mouse heart at 7 days after infection. Down regulated expression and distribution of Bag-1 protein or evidence of apoptosis in the infected mouse heart was demonstrated by immunostaining or histochemistry (TUNEL assay), respectively. CONCLUSION: CVB3 infection induced differential expression of Bag-1 in cytoplasmic and nuclear fractions of mouse heart and apoptosis. This may be important in the pathogenesis of enterovirus heart muscle disease.     

病毒性心肌炎小鼠白细胞介素17和γ干扰素双阳性细胞的变化

目的 观察病毒性心肌炎(VMC)小鼠不同时间点白细胞介素17和γ干扰素双阳性细胞(IL-17 +/IFN-γ+细胞)的变化,探讨其在VMC发病中的作用.方法 雄性Balb/c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3( CVB3)建立VMC小鼠模型(VMC组),对照组注射等量磷酸盐缓冲液,在注射的第0、1、2、3、4和6周苏木精-伊红染色观察心肌病理改变并计算心肌病理积分,流式细胞仪检测小鼠IL-17+/IFN-γ+细胞占CD4+T细胞的比例.结果 VMC组小鼠心肌组织病理积分于第1周升高(1.8±0.5),第2周达到最高(2.8±0.5),第3周开始逐渐降低,VMC组各时点与对照组相应时点比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).VCM组小鼠各时点脾IL-17+/IFN-γ+细胞维持在低水平,与对照组相应时点比较差异均无统计学意义(P均＞0.05),Spearman相关性分析显示IL-17+/IFN-γ+细胞与心肌病理积分无显著相关(P＜0.05).结论 VMC小鼠中存在少量IL-17 +/IFN-γ+细胞,但可能与VMC的炎性过程无关.