氯沙坦对动脉粥样硬化兔斑块稳定性的影响

摘要：目的观察氯沙坦对动脉粥样硬化(AS)兔斑块中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、巨噬细胞数量的影响,探讨其稳定AS斑块的可能机制。方法应用球囊扩张腹主动脉加高脂饮食建立AS兔模型,将16只雄性新西兰大白兔随机分为2组,每组8只。模型组:饲喂含1％胆固醇高脂饲料;氯沙坦组:饲喂含1％胆固醇高脂饲料加氯沙坦25mg/(kg·d),连续用药4个月。免疫组化法检测AS斑块中MMP-3的蛋白表达水平及巨噬细胞在AS斑块中的阳性面积;电镜观察两组AS斑块超微结构变化;实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测AS斑块中MMP-3 mRNA的表达。结果免疫组化显示,氯沙坦组与模型组相比MMP 3蛋白表达显著减少(P＜005),巨噬细胞在AS斑块中的数量明显降低(P＜0.05);MMP-3 mRNA的表达明显减少(P＜0.05)。结论氯沙坦可通过下调MMP.3的水平,减少斑块内巨噬细胞的数量来稳定AS斑块。     

MMP-9在ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块的表达及高脂饮食影响

目的研究基质金属蛋白酶9(MMP-9)在载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因敲除C57BL/6J小鼠[ApoE(-/-)]主动脉粥样硬化斑块中的表达及高脂饮食对其影响,分析其与动脉粥样硬化不稳定斑块的关系。方法16只30周龄ApE(-/-)小鼠,随机分成高脂饮食组[Ch-ApoE(-/-)]和普通饮食组[ApoE(-/-)],8只正常C57BL/6J小鼠为对照组予高脂饮食,喂养4个月后分离主动脉。HE、Masson三色法染色观察小鼠主动脉粥样斑块,免疫组织化学分析斑块内MMP-9及巨噬细胞的表达。结果两组ApoE(-/-)均有明显的动脉粥样硬化,为不稳定斑块,斑块内巨噬细胞表达过量,且MMP-9表达增强。Ch-ApoE(-/-)组动脉硬化及MMP-9表达强于ApoE(-/-)组,两者有统计学意义。结论动脉粥样硬化不稳定斑块与MMP-9的表达密切相关,高脂饮食可加重不稳定斑块。     

血府逐瘀汤对动脉粥样硬化大鼠MMP-9及TIMP-1的影响

目的研究血府逐瘀汤对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）大鼠动脉斑块基质金属蛋白酶9（MMP-9）及组织抑制物1（TIMP-1）的影响。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、模型组、血府逐瘀汤组,对照组给予正常饲料,模型组给予高脂饲料,血府逐瘀汤组给予高脂饮食同时给予该药干预。12周后,处死大鼠,取主动脉免疫组化法观察主动脉斑块内MMP-9和TIMP-1的表达水平。结果血府逐瘀汤组MMP-9的表达较模型组明显减少（P〈0.05）,TIMP-1表达明显升高（P〈0.05）。结论血府逐瘀汤可以通过下调动脉粥样硬化大鼠动脉斑块内MMP-9的表达,升高TIMP-1表达,起到防治动脉粥样硬化和稳定斑块的作用。     

基质金属蛋白酶3在小鼠颈动脉粥样硬化斑块中的表达

目的:研究基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP-3)在小鼠颈动脉粥样硬化斑块中的表达,分析其与动脉粥样硬化斑块的关系。方法:21只28周龄载脂蛋白E基因(apolipoprotein E,ApoE)敲除小鼠随机分成对照组(7只),阿托伐他汀钙组(7只),麝香保心丸组(7只),均给予高脂饮食,喂养12周后检测血清MMP-3,并分离各组小鼠颈动脉,通过免疫组化分析斑块内MMP-3的表达。结果:与对照组比较,阿托伐他汀钙组血清MMP-3降低(P<0.01),麝香保心丸组血清MMP-3降低不明显。两组均能降低斑块内MMP-3的表达,且有统计学意义(P<0.05)。结论:动脉粥样硬化发展过程中,MMP-3起到重要作用,阿托伐他汀钙和麝香保心丸的治疗可减少斑块内胞外基质的降解,具有稳定斑块的作用。     

小鼠动脉粥样硬化发展不同阶段巨噬细胞表型变化研究

目的:探讨动脉粥样硬化的形成(脂质条纹)和发展(进展的复合斑块)不同阶段巨噬细胞不同表型(Phenotype)的变化及表达。方法:将SD小鼠20只喂以高脂饮食,每隔2周分别处死10只,取全部主动脉观察斑块的组织形态学变化和斑块的稳定性,以了解动脉粥样硬化的发生、发展过程,此外用免疫组化法(Immunochemistry)重点观察斑块内巨噬细胞的分型情况。结果:1随着动脉粥样硬化发展,斑块面积明显增加。2CD_4~+随着动脉粥样硬化发展明显增加;而CD_8~+无明显变化;3巨噬细胞M1表型在动脉粥样硬化的发展明显增加,M_2表型在不同阶段变化不明显。结论:M_1/M_2比例失衡,动脉粥样硬化斑块的发展相关。     

普罗布考联合辛伐他汀对颈动脉粥样硬化斑块作用的临床研究

目的:探讨普罗布考联合辛伐他汀对颈动脉粥样硬化斑块的影响及作用.方法:入选180例首次确诊颈动脉粥样硬化斑块患者,随机分为联合治疗组(普罗布考500mg/d,辛伐他汀20 mg/d)和单药治疗组(辛伐他汀20 mg/d),共观察24周.分别于治疗前后检测两组血脂水平,并用彩色多普勒超声检测颈动脉内中层厚度、颈动脉内膜粥样斑块面积.结果:治疗24周后,两组治疗前后对血脂水平和颈动脉粥样斑块内中膜厚度以及斑块面积均有改善明显,无严重不良反应;联合治疗组对于血脂水平和内中膜厚度以及斑块面积的改善程度较单药治疗组更明显.结论:普罗布考联合辛伐他汀对血脂及颈动脉粥样硬化治疗作用明显,安全性高.     

MMP-13在家兔动脉粥样硬化斑块中表达的研究

目的:研究高脂血症家兔的动脉粥样硬化斑块中基质金属蛋白酶-13的表达,为进一步探讨动脉粥样硬化发病机制提供形态学依据.方法:将24只健康雄性新西兰白兔随机分为两组:(1)空白对照组(正常组)8只,每天给予普通饲料;(2)阳性对照组(模型组)16只,每天给予普通饲料 1g胆固醇 15%猪油.16周末所有实验用兔麻醉处死,各组行主动脉粥样硬化病理形态学观察,包括大体形态学观察、光镜观察.根据形态学特点再分成稳定斑块和不稳定斑块,通过免疫组化对斑块内的病变进行定量分析.结果:S-P免疫组化可见模型组中基质金属蛋白酶-13在粥样斑块中平滑肌细胞及泡沫细胞中的细胞核上呈阳性表达,而正常血管壁表达阴性.在稳定性斑块与不稳定性斑块对比中发现,MMP-13在不稳定斑块中表达明显较稳定斑块要高.结论:MMP-13在AS不稳定斑块中较稳定斑块阳性表达明显,显示MMP-13与AS斑块的不稳定性有密切联系.     

高脂饮食诱导APOE和LDLR基因敲除鼠AS斑块形成的分子病理学特征

目的 观察在高脂饮食务件下,载脂蛋白E(ApoE)和低度密度脂蛋白受体(LDLR)基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块形成的病理学特征与基质金属蛋白酶(MMP-2,9)和Mac-3表达水平.方法 用C57BL/6J小鼠普通饮食作对照,用ApoE基因敲除和LDLR基因敲除两种小鼠,每种分为普通饮食和高脂饮食两组,8只/组.连续喂养120d后,分离获得各组小鼠主动脉,用Masson染色,油红O染色法观察小鼠动脉粥样斑块病理形态学变化,用免疫组织化学检测AS斑块内炎症以及基质金属蛋白酶(MMP-2,9)表达水平,用免疫双荧光抗体法分析AS斑块巨噬细胞和平滑肌细胞内MMP-9表达的差异.结果 与普通饮食的基因敲除鼠比,高脂饮食的ApoE和LDLR基因敲除鼠的动脉粥样硬化斑块显著增大,炎性细胞增多,纤维帽中基质纤维成分减少,纤维帽形状变薄和大量中性脂滴沉积.其中,以ApoE基因敲除鼠的最为严重.AS斑块形成大小与Mac-3表达水平和炎症细胞增加呈正相关.斑块内MMP-9表达在巨噬细胞内占50%～70%,在平滑肌细胞内占30%.结论 高脂饮食可加重ApoE和LDLR基因敲除小鼠AS斑块形成和Mac-3表达及炎症细胞增加,MMPs水平亦相应增加,其病变呈现出不稳定性斑块特征.     

益肾活血胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠血清oxLDL及动脉粥样硬化斑块稳定性的影响

目的:探讨益肾活血胶囊与动脉粥样硬化斑块稳定性的关系。方法:将32只载脂蛋白E基因敲除(apoE-KO)小鼠随机分为对照(C)组,益肾活血胶囊大、小剂量(YSHXH、YSHXL)组,辛伐他汀(S)组,应用ELISA法测定小鼠血清oxLDL,油红O(oil-red O)染色观察斑块内脂质含量,应用免疫组化法测定巨噬细胞在斑块内的浸润水平。结果:YSHXH组及S组与C组比较血清oxLDL显著下降(3.91±2.62 vs 3.90±2.63 vs 16.07±5.50μg/ml,P<0.01),斑块内脂质含量明显减少,巨噬细胞浸润明显降低。YSHXL组与C组比较上述指标没有明显差异(P>0.05)。结论:大剂量益肾活血胶囊能降低apoE-KO小鼠血清oxLDL,减少斑块内脂质含量,减少巨噬细胞在斑块内的浸润,对动脉粥样硬化斑块具有稳定作用。     

补肾活血方对动脉粥样硬化斑块稳定性相关机理研究

目的：通过单纯高脂血症喂养法诱导建立新西兰兔的动脉粥样硬化模型（AS模型）,观察补肾活血方对动脉粥样硬化斑块（AS斑块）中炎症因子MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-12、CD40蛋白表达的变化以及对NF-κB活化的影响,探讨补肾活血方对高脂血症所致AS的防治作用及对AS斑块稳定性影响。方法：实验动物新西兰兔分别以特制的高脂喂养造模,诱发造模动物动脉粥样硬化（AS）病变,利用免疫组织化学染色方法观察家兔主动脉AS斑块中炎症因子MMPs、CD40蛋白表达水平,NF-κB活化情况并探索其相互关系。结果：（1）AS动物模型建立,实验动物兔均成功复制了AS模型。两种模型动物中均可见明显的AS斑块,呈点状或片状的乳白色隆起,多位于主动脉窦至主动脉弓段,AS兔模型中胸、腹主动脉病变也较明显。对照组未见AS病变,内膜光滑且管壁弹性好。（2）补肾活血方对兔模型AS斑块中MMPs、CD40、NF-κB蛋白表达的影响：补肾活血方可抑制或下调斑块MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-12的表达,其中对MMP-2、MMP-3作用最明显（P〈0.05）;补肾活血方可明显抑制CD40表达（P〈0.01）;补肾活血方也可抑制NF-κB表达,但因组内差异大而无统计学意义。（3）MMPs、CD40、NF-κB蛋白表达相关性的比较：模型组中,MMP-1与MMP-2,MMP-8与MMP-9、MMP-12,MMP-2与CD40,NF-κB与CD40的相关系数分别为0.935、0.809、0.942、0.833、0.886,均呈正相关且达到显著相关水平（P〈0.05）。另外,MMP-1与CD40,MMP-3与MMP-8、MMP-9、MMP-12的相关系数分别为0.675、0.737、0.628、0.731,呈现出弱相关,但无显著性差异。结论：（1）补肾活血方对MMPs蛋白表达均有抑制或下调作用,对MMP-2、MMP-3蛋白作用最强。（2）补肾活血方可降低炎症因子CD40、NF-κB的表达,具有一定的抗炎作用。（3）MMPs、CD40、NF-κB间存在一定的相关性,推断补肾活血方抗AS、稳定?     

血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1对THP-1单核巨噬细胞源泡沫细胞MMP-9表达的影响及辛伐他汀的干预作用

目的 探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的THP-1单核/巨噬细胞源泡沫细胞(THP-1 monocyte derived macrophages)基质金属蛋白酶-9（MMP-9）基因表达的影响及辛伐他汀的干预作用。 方法 利用不同浓度的ox-LDL（10、20、50、100?mg/L）诱导THP-1单核/巨噬细胞源泡沫细胞，然后分别用LOX-1受体阻断剂多聚肌苷酸（ Poly I）及辛伐他汀（simvastatin）进行干预，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测LOX-1、MMP-9mRNA的表达水平。 结果 THP-1单核/巨噬细胞经ox-LDL诱导后LOX-1、MMP 9mRNA表达显著增加，与对照组比较差异具有统计学意义（P<0.05），并与ox-LDL在10～50?mg/L浓度范围内呈现剂量-效应关系（P<0．05）。100?mg/L　ox LDL与细胞共同培养时LOX-1、MMP-9mRNA表达下降可能与高浓度ox LDL对细胞的毒性作用有关。预先用Poly I封闭细胞表面部分LOX-1，再加入50mg/L　ox-LDL培养, 与未加阻断剂组比较， LOX-1、MMP 9mRNA表达均减少，差异具有统计学意义（P<0.05）。100μmol/L辛伐他汀加入50mg/L ox LDL共同进行细胞培养， LOX-1、MMP-9mRNA表达与未干预组比较显著下调，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 ox-LDL上调THP-1单核/巨噬细胞LOX-1、MMP-9mRNA表达。LOX-1作为ox-LDL的特异性受体，可介导ox-LDL致巨噬细胞源泡沫细胞MMP-9mRNA表达增加，使动脉粥样硬化斑块中细胞外基质的降解增强，斑块趋于不稳定。辛伐他汀可以通过下调细胞LOX-1 mRNA的表达减少MMP-9 mRNA的分泌，这或许是他汀类药物发挥非调脂抗炎作用稳定斑块的机制之一。     

辛伐他丁减少Connexin43表达和兔粥样硬化斑块形成

目的:证明辛伐他丁可以通过减少缝隙连接蛋白43(Connexin43, Cx43)的表达影响粥样斑块的形成及稳定性. 方法:高脂饲料喂养建立粥样硬化模型,治疗组给予辛伐他丁口服,活体内的Cx43和巨嗜细胞检测使用免疫组织化学方法,培养平滑肌细胞的Cx43检测使用免疫印记方法,Cx43的半定量使用计算机图像处理. 结果:药物干预的培养细胞和模型治疗组中Cx43的表达均明显减少,斑块的组成中,炎症细胞减少50%,胶原纤维平滑肌细胞含量增加. 结论: Cx43介导的细胞间通讯在粥样硬化形成中起重要作用,同时辛伐他丁减少Cx43的表达可以增加斑块的稳定性,Cx43成为动脉粥样硬化治疗中一个新的治疗靶点.     

辛伐他汀对大鼠心肌梗死后MMP-2,9 mRNA表达的影响

目的 :观察辛伐他汀对大鼠心肌梗死 (MI)后心肌基质金属蛋白酶 2 ,9(MMP 2 ,9)mRNA表达的影响。方法 :结扎大鼠左冠状动脉前降支 (LAD)制成急性心肌梗死模型 ,随机分为 3组 :分别为辛伐他汀干预组(MI S)、心肌梗死对照组 (MI C)和假手术组 (sham)。 4周后 ,RT PCR法检测左心室梗死区及非梗死区心肌MMP 2和MMP 9mRNA表达的情况。结果 :大鼠MI4周后左心室心肌MMP 2和MMP 9mRNA表达较假手术组明显升高 (P <0 .0 5 ) ,辛伐他汀组上述指标较梗死对照组显著降低 (P <0 .0 5 ) ,但仍高于假手术组 (P <0 0 5 ) ,三组血脂无显著性差异。结论 :辛伐他汀减少大鼠心肌梗死 4周后左心室心肌MMP 2和MMP 9mR NA表达 ,此改变不依赖其降脂作用。     

内脏脂肪素对巨噬细胞MMP-9的作用及其机制探讨

目的 研究内脏脂肪素（visfatin）对巨噬细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的作用及其机制。方法体外诱导THP-1单核细胞转化为巨噬细胞。为明确visfatin对MMP-9的作用,细胞分为两组：①巨噬细胞+visfatin 12 h组;②巨噬细胞+visfatin24 h组,两组的visfatin的质量浓度均为：0（对照组）、50、100、200、400 ng/mL。采用RT-PCR和Western blotting测定MMP-9基因和蛋白表达,明胶酶谱法检测MMP-9的活性。为明确visfatin对MMP-9的作用机制,细胞分为五组：①巨噬细胞未加刺激组（对照组）;②巨噬细胞+ MAPK p38、ERK1/2、JNK信号通路抑制剂预处理1 h后加visfatin（200 ng/mL）24 h组;③巨噬细胞+过氧化物酶体增殖剂活化受体（PPARγ）天然及人工配体/ RXR配体预处理1 h后加visfatin（200 ng/mL）24 h组;④巨噬细胞+visfatin（200 ng/mL）24 h组（Vis200组）;⑤巨噬细胞+visfatin（200 ng/mL）刺激不同时间组（5、10、15、30、60 min）。Western blotting检测MMP-9蛋白和PPARγ蛋白表达及visfatin刺激下巨噬细胞p38、ERK1/2、JNK MAPK磷酸化水平。结果 Visfatin能促进MMP-9基因及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,同时增强了MMP-9的活性（P<0.01）。p38 MAPK、ERK1/2 MAPK通路抑制剂及RXR配体抑制visfatin对MMP-9表达具有上调作用;visfatin能促进p38 MAPK和ERK1/2 MAPK的磷酸化,但不影响PPARγ蛋白的表达。结论 Visfatin增加了巨噬细胞炎症因子的表达,该作用与p38 MAPK和ERK1/2MAPK信号通路有关;RXR可能参与了该过程。     

通心络血清对U937单核巨噬细胞MMP-9及TIMP-1表达与分泌的影响

目的 探讨通心络含药血清对U937单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶-9及金属蛋白酶组织抑制因子-1表达与分泌的影响.方法 通过喂养高脂饲料,建立兔动脉粥样硬化模型后,予通心络药液及辛伐他汀药液灌胃,获得含药血清.分别予不同浓度含药血清培养U937单核细胞源巨噬细胞24h,应用逆转录聚合酶链式反应检测基质金属蛋白酶-9及金属蛋白酶组织抑制因子-1 mRNA的表达,以及应用酶联免疫吸附试验检测基质金属蛋白酶-9及金属蛋白酶组织抑制因子-1蛋白的分泌.结果 通心络含药血清呈剂量依赖性抑制U937单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶-9mRNA的表达与分泌,而对金属蛋白酶组织抑制因子-1 mRNA的表达与分泌未见影响.结论 通心络可能通过抑制单核巨噬细胞基质金属蛋白酶-9的表达与分泌,而起到稳定斑块的作用.     

Apo-E基因敲除小鼠中MMP-9的表达研究

目的 通过观察Apo-E(-/-)小鼠主动脉根部血管MMP-9的表达情况,进一步了解MMP-9与动脉粥样硬化斑块形成过程的相关性.方法 本实验采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链技术对MMP-9在基因敲出小鼠动脉中的表达进行研究.结果 正常小鼠冠状动脉中MMP-9有微量表达,动脉粥样硬化斑块中检测到MMP-9 mRNA和MMP-9蛋白的表达明显增高.结论 MMP-9可能参与小鼠动脉粥样硬化病变过程,并在小鼠主动脉根部血管壁斑块中表达增高.     

黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变软骨细胞MMP-1和MMP-3 mRNA表达的影响

目的:观察黄芪甲苷对原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞的金属蛋白酶-1和金属蛋白酶-3mRNA表达影响,初步探讨黄芪甲苷防治膝骨关节软骨退变的作用机制。方法:原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞,用第三代细胞进行试验。将5个不同浓度的黄芪甲苷,分别作用于关节软骨细胞4、8、24、48、72h后,采用Real Time-PCR法检测细胞中金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶-3(MMP-3)的mRNA表达。结果:黄芪甲苷浓度为25~100mmol/L,作用于退变关节软骨细胞24~72h时,软骨细胞MMP-1 mRNA的表达量与对照组比较显著降低。黄芪甲苷浓度为50~100mmol/L,作用于退变关节软骨细胞48~72h时,软骨细胞MMP-3 mRNA的表达量显著低于对照组。结论:黄芪甲苷可延缓膝骨关节炎关节软骨细胞的退变,抑制软骨细胞MMP-1和MMP-3mRNA的表达可能是其作用机制之一。     

辛伐他汀对家兔主动脉粥样硬化斑块血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察辛伐他汀对动脉粥样硬化斑块血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:雄性纯种新西兰大白兔,采用高脂肪、高胆固醇饲料喂饲构建主动脉粥样硬化(AS)模型,并随机分为辛伐他汀组(n=10)和单纯高脂饮食组(n=6);另有一组动物喂饲普通饲料作为空白对照组(n=8).采用免疫组织化学方法,观察3组动物AS斑块VEGF的表达情况.结果:辛伐他汀组和单纯高脂饮食组AS斑块VEGF阳性信号强度均显著高于空白对照组(P＜0.05);辛伐他汀组VEGF阳性信号强度又显著低于单纯高脂饮食组(P＜0.05).结论:提示辛伐他汀可一定程度稳定斑块,延缓AS的进程.