钙通道在心房颤动时表达及功能变化的研究进展

细胞内钙超载在心房颤动(AF)的发生和维持中的作用被广泛关注。AF时快速心房率引起细胞内钙超载,细胞内钙通道的表达和功能改变,使AF维持。T型钙通道参与基础钙的调节,而心肌收缩时,L型钙通道在钙释放过程中起到触发作用。收缩期胞浆内90%的Ca2+由SR上的RyR2释放;舒张期胞浆内70%～75%的Ca2+由SR上的Ca2+-ATP酶摄取贮存。本文对AF时L型、T型钙通道以及SR上RyR2和Ca2+-ATP酶的表达和功能变化进行概述,为AF的防治提供更多的理论依据。     

心房颤动患者右心房L型钙通道变化同心肌细胞结构改变的关系

目的：探讨心房颤动（房颤）的发生、房颤转复后窦性心律的维持与相关细胞结构和超微结构变化的关系.方法：53例心外科手术患者,其中窦性心律者26例（窦律组）,房颤患者27例（房颤组）.术前行超声心动图检查.手术中取右心房组织,石蜡包埋制作病理切片,HE染色后测定细胞直径.电镜检查超微结构变化.提取组织mRNA,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定L-钙通道α1亚基的基因转录水平.结果：同窦律组比较,房颤组L-钙通道α1亚基mRNA水平降低,细胞直径增加,心肌出现不同程度的肌溶解现象.细胞直径同心房大小呈正相关,L-钙通道α1亚基mRNA水平与细胞直径呈负相关.结论：L-型钙通道α1亚基表达变化同房颤后细胞结构改变有关.     

氯沙坦对急性心房颤动心房肌L型钙离子通道的影响

目的探讨氯沙坦对家兔急性心房颤动模型的心房肌L型钙离子通道的影响。方法家兔30只随机分为0．9％氯化钠溶液起搏（NSP）组、氟沙坦起搏（LP）组。观测每组基础状态、快速心房起搏时心房有效不应期（AERP）及心房肌L-型钙通道的电流密度（ICa-L）进行统计学处理。结果快速起搏8h后NSP组AERP的下降较LP组显著,差异有统计学意义（P〈0．05）;LP组较NSP组心房肌ICa-L差异无统计学意义（P〉0．05）;但其标准差显著降低（P〈0．05）。结论氯沙坦可以抑制快速心房起搏引起AERP缩短及心房肌ICa-L离散度增加,从而减轻心房颤动（AF）的电重构。     

雷米普利对舒张眭心力衰竭大鼠心房肌L型钙通道的影响．

目的观察雷米普利对舒张性心力衰竭（DHF）大鼠模型心房肌细胞L型钙通道的影响。方法腹主动脉缩窄术建立DHF大鼠模型,随机分为DHF组及雷米普利大、中、小剂量组,另设对照组。全细胞膜片钳检测心房肌细胞L型钙通道电流（ICa—L）;RT—PCR检测L型钙通道上Cav1.2mRNA的表达;Western blot检测钙调控相关蛋白LTCC的表达。结果与对照组比较,DHF组大鼠心房肌细胞ICa—L电流密度峰值、Cav1.2mRNA表达及钙调蛋白LTCC的表达明显降低（P〈0．05）;与DHF组比较,雷米普利组心房肌细胞ICa—L电流密度峰值明显增加、Cav1-2mRNA及钙调控蛋白LTCC的表达增加（P〈0．05）,且剂量越大增加越明显。结论雷米普利能上调舒张性心力衰竭大鼠心房肌ICa—L电流密度峰值,增加Cav1.2mRNA及钙调控蛋白LTCC的表达,对DHF大鼠有治疗作用．其机制与调控心房肌细胞L型钙通道的功能有关。     

电压依赖性钙通道的α2δ亚基和疾病及药物靶点的关系

目的介绍电压依赖性Ca2 通道(Cav)的亚单位之一α2δ的结构和功能以及与疾病的关系。方法对近期文献进行综述。结果电压依赖性Ca2 通道由5个亚单位组成。α2δ亚基由α2与δ亚基联接,共同对组成通道孔道的α1亚基进行辅助,以调解外钙内流。介绍了α2δ亚基的结构和在体内的分布,以及与疾病的关系(尤其是癫痫、偏头痛和神经源性疼痛)。gabapentin类药物是α2δ1和α2δ2亚基的小分子配体,通过α2δ亚基起治疗作用。结论α2δ亚基与疾病有关联,也是电压依赖性钙通道的分子靶点,值得进一步研究。     

铅对小鼠海马[Ca2+]的影响及L型钙通道的作用

目的　探讨铅对分离的小鼠海马细胞内游离钙的影响及其及L型钙通道的作用。方法　采用低浓度胰蛋白酶消化法分离小鼠海马细胞 ,并以莹光指标剂 (Fura 2 )作Ca2 荧光探针 ,用双波长荧光法测定海马细胞 [Ca2 ] i。结果　铅可致分离的小鼠海马细胞 [Ca2 ] i 升高 [由静息时的 (2 0 3 4± 10 86)nmol L升至 (4 2 3 3± 19 2 6)nmol L] ,而不论胞外是否有钙 ;铅可抑制钾诱发海马细胞 [Ca2 ] i 升高 ,尼莫地平可加强这种抑制作用 ,而BayK864 4则可部分消除这种抑制作用。结论　铅可致分离的小鼠海马细胞 [Ca2 ] i 升高作用与胞内钙库释放有关 ;铅的抑制钾诱发海马细胞 [Ca2 ] i 升高作用与其抑制L型钙通道有关。     

心肌肽素对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

目的研究心肌肽素对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响,探讨心肌肽素在离子通道水平的药理作用机制。方法用急性酶解分离法获得豚鼠心室肌细胞,标准的全细胞膜片钳技术记录L型钙电流(ICa-L)。结果心肌肽素1、5、10、50、100、500 mg.L-1使豚鼠心室肌细胞ICa-L分别增加(5±4)%、(21±5)%、(30±5)%、(55±8)%、(76±11)%、(80±9)%,半最大效应浓度(EC50)为(18±6)mg.L-1。心肌肽素50 mg.L-1使ICa-L激活时间(TTP)从(6.7±0.9)m s缩短为(5.9±0.7)m s(P<0.01);使ICa-L电流密度-电压曲线下移,但激活电压、峰电压和I-V曲线的形状不变;激活曲线向负电压方向变化,半数激活电压从(-4.3±0.4)mV减少至(-8.6±0.4)mV(P<0.05);不影响稳态失活曲线和稳态失活后恢复曲线。结论心肌肽素浓度依赖性增强豚鼠心室肌细胞ICa-L。     

芍药苷对大鼠心肌细胞L钙通道的阻断作用

目的　在单个大鼠心肌细胞上 ,研究芍药苷对L型钙通道的阻断作用。方法　采用全细胞膜片钳技术。结果　芍药苷浓度依赖性阻断ICa ,L,其IC50 为 387μmol·L- 1 。应用 40 0 μmol·L- 1 芍药苷后 ,ICa,L最大电流幅度下降 51 % ,但I U曲线的形态和反转电位没有变化 ,激活曲线也没有明显的改变 ;失活曲线向较负电压的方向偏移约 8 3mV ,通道从失活中恢复的时间明显延长 ,由给药前的 (96± 1 7)ms增至 (1 85± 2 8)ms ;芍药苷的阻断作用没有显示出频率依赖性。结论　芍药苷对心肌细胞ICa ,L有阻断作用     

电压门控钙通道α2-δ亚基配体治疗纤维肌痛综合征的研究进展

纤维肌痛综合征(FMS)是一种以全身慢性广泛性疼痛为特征的临床常见疾病,严重影响着患者的身心健康.药物治疗是目前纤维肌痛综合征综合治疗模式的重要组成部分,近年研究证实,电压门控钙通道α2-δ亚基配体(VGCCα2-δL)对于该病的治疗具有广阔的应用前景.本文将对VGCCα2-δL治疗纤维肌痛综合征的研究现状进行综述,旨...     

鸡背根神经节及脊髓中钙通道α2亚基的表达-背根神经节中其与calbindin—D28k共存研究

目的观察鸡脊髓及背根神经节（DRG）中钙离子通道α2（CCα2）亚基的免疫学表达,并观察在DRG中CCα2与calbindin-D28k（CB）的共表达的相互关系。方法通过免疫组织化学,观察了鸡背根神经节中表达情况,利用图像分析系统对VDCC-α2δ-1亚单位免疫阳性和阴性神经元数量和细胞面积进行测量,统计出不同大小细胞的构成比。结果在脊髓背角Ⅰ、Ⅱ层和背内侧束（Ⅱ）内,CCα2δ亚基免疫阳性呈点状样分布于神经终末之中。在DRG神经元中,约72％的神经细胞呈CCα2免疫阳性,其中小型至中型神经元占免疫阳性神经元的88％。约75％的CCα2免疫阳性神经元与CB共存,其中大部分（90％）神经元是小、中型神经元。结论CCα2主要表达于伤害性神经元中,并在DRG伤害性感觉神经元中,伤害性信息的传递可能与细胞的Ca^2＋调节机制,即通过CCα26亚基的Ca^2＋内流和细胞内CB的Ca^2＋结合活性这两种因素有关。     

钙调蛋白激酶在L型钙通道“run-down”现象发生及恢复过程中的作用

目的;研究钙调蛋白激酶（CaMKⅡ）在钙通道“run-down”现象发生及恢复过程中的作用机制。方法：用酶分离单个豚鼠心室肌细胞,利用膜片钳单通道技术,在细胞膜面内向外的模式下,诱发L型钙通道“run-down”现象。制备活性钙调蛋白激酶（CaMKⅡ αT286D）,记录并分析它在L型钙通道“run—down”现象中的影响。结果：在细胞膜面内向外的钳制模式下1分钟后,细胞内液中加入CaMK ⅡαT286D（1-30μM）,仅使钙通道活性恢复2-10％。但发现CaMKⅡ αT286D可消除CaM对钙通道“run-down”现象恢复作用的时间依存性。在CaMKⅡ αT286D和CaM共同存在条件下,记录到第5分钟的钙通道活性（158．1&#177;62．2％）几乎等同于第1分钟的（148．4&#177;55．5％）。制备CT-1,即含豚鼠Cav1．2通道蛋白C末端1509．1789氨基酸的一个GST融合蛋白。Pull-down实验结果显示,CT-1经CaMKⅡ αT286D处理后,CaM的亲和力高于未经磷酸化或去磷酸化处理的亲和力。结论：CaMKⅡ介导的L型钙通道磷酸化调节了CaM对钙通道的亲和力,延长了CaM对钙通道“run-down”现象恢复作用时间,是“run-down”现象的一个重要调节因子。     

2型糖尿病患者血小板膜表面CD40L及sCD40L的表达及其意义

目的 探讨2型糖尿病患者药物干预前后血浆可溶性共信号分子(CD40L)、血小板膜表面CD40L表达的变化以及与代谢指标、血管并发症之间的关系.方法 采用ELISA法、免疫荧光及流式细胞术检测24例单纯2型糖尿病(单纯糖尿病组)、26例糖尿病合并颈动脉病变患者(合并大血管病变组)及28例正常人(对照组)血浆可溶性CD40L (sCD40L)、血小板膜表面CD40L分子,同时检测血糖、糖化血红蛋(HbA1c)、胰岛素(Ins)及颈动脉中内膜厚度(IMT),采用胰岛素增敏剂噻唑烷二酮类(马来酸罗格列酮)进行药物干预,并对部分指标进行相关性分析.结果 单纯糖尿病组尤其是合并大血管病变组,血浆sCD40L、血小板膜表面CD40L分子较对照组明显增高(P＜0.01),且与餐后2-h血糖、HbA1c、INS及IMT呈正相关.药物干预后,sCD40L、血小板膜表面CD40L分子较治疗前明显下降(P＜0.01).结论 高血糖及高胰岛素可能通过激活CD40L参与介导炎症反应和血小板的异常活化,从而参与动脉粥样硬化的发生、发展;噻唑烷二酮类药物具有潜在的抗炎、抗动脉粥样硬化和免疫调节作用.     

miRNA在2型糖尿病胰腺中的表达

目的 探讨糖尿病胰腺组织miRNA的表达变化.方法 链脲佐菌素(STZ)40 mg/kg腹腔注射+高脂高糖饲料喂饲健康雄性SD大鼠,成模(测血糖≥16.7 mmol/L)后4周,取胰腺组织常规抽提总RNA,采用含有2340种miRNA的芯片检测系统进行miRNA表达谱差异分析.结果 模型组miRNA表达谱中异常表达(2倍以上)的miRNA共有37个.其中,17个表达上调,20个表达下调.结论 在大鼠糖尿病模型中,部分胰腺miRNA的表达发生明显变化,提示miRNA可能参与糖尿病诱发的调节作用.     

盐酸关附甲素对大鼠心室肌细胞膜L型钙通道(ICa-L)的影响

目的研究盐酸关附甲素对正常大鼠心室肌细胞L型钙离子通道(ICa-L)的影响.方法应用膜片钳全细胞记录法,记录关附甲素对ICa-L的作用并对通道动力学进行初步评价.结果关附甲素呈浓度依赖性阻滞ICa-L,在25,125,250和1 000μm01·L-1时ICa-L峰值电流密度(去极化至0 mV时)分别减少为用药前的81.76%,77.54%,76.46%和64.77%(P＜0.05).关附甲素使ICa-L的Ⅰ-V曲线上移,但不改变其激活电位、峰值电位.关附甲素呈轻度使用依赖性阻滞ICa-L,对ICa-L静息态有阻滞作用.关附甲素对ICa-L激活曲线无明显影响,但使ICa-L失活后再激活的恢复时间常数(τ)延长,有作用于ICa-L的失活态的可能.结论因为关附甲素产生明显ICa-L阻滞的浓度远大于临床浓度,其对ICa-L的阻滞作用可能不是抗心律失常的主要作用机制.关附甲素呈浓度依赖性阻滞ICa-L,其作用于L型钙通道的静息态,也有可能作用于失活态.     

β-arrestins 在 2 型糖尿病中的多功能信号调节作用

β-arrestins不仅仅是GPCR（G-protein-coupled receptor,GPCR）信号通路的负性调控者,也是很多信号分子中重要的衔接蛋白.尽管在分子信号介导中β-arrestins经常会被提到,然而在胰岛素受体信号通路中却涉及的比较少,但是最近的研究结果却显示与原先的观点有所不同.该文就β-arrestins在调节与2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）相关的胰岛素作用、炎症信号通路以及其他细胞信号通路中所扮演的角色作一综述.     

转化生长因子β1在合并2型糖尿病乳腺癌患者癌组织中的表达及临床意义

目的通过检测合并2型糖尿病乳腺癌患者癌组织中转化生长因子β1(TGF-β1)的表达变化,探讨其在合并2型糖尿病乳腺癌患者癌组织发生、发展的作用。方法应用免疫组织化学(immunohistochemistry)方法分别检测单纯乳腺癌患者(单纯癌组)及合并2型糖尿病乳腺癌患者(糖癌组)癌组织石蜡标本中TGF-β1的表达变化情况。结果单纯乳腺癌及合并2型糖尿病乳腺癌癌组织中TGF-β1光密度值分别为0.29±0.02,0.35±0.01,差异有统计学意义(t=3.06,P<0.01)。结论 TGF-β1参与了合并2型糖尿病乳腺癌患者癌组织的发生发展,可能是乳腺癌合并糖尿病预后不良的重要指标之一。     

穿孔膜片钳方法记录L型钙通道及脱氢紫堇碱对其影响的研究

目的比较全细胞膜片钳和穿孔膜片钳方法记录大鼠心室肌细胞L型钙通道电流随时间经过的变化差异,并观察脱氢紫堇碱对L型钙通道的影响。方法采用全细胞膜片钳和穿孔膜片钳方法记录急性分离的大鼠心室肌细胞L型钙通道电流。结果采用全细胞膜片钳法记录到的L型钙通道电流峰值在15 min内衰减了(34±23)%(n=10),采用穿孔膜片钳方法记录到的L型钙通道电流峰值15 min内仅衰减了(2.7±3.4)%(n=9);采用穿孔膜片钳方法能够记录到人参皂苷Re(100μmol.L-1)的抑制效应,而采用全细胞膜片钳方法产生的电流衰减几乎完全掩盖了人参皂苷Re的效应。脱氢紫堇碱(10,100μmol.L-1)能够抑制L型钙通道的电流峰值,抑制率分别为(9±7.5)%(n=5);(28.6±8.5)%(n=5)。结论穿孔膜片钳方法较全细胞膜片钳方法在对L型钙通道电流记录方面更具稳定性和准确性,脱氢紫堇碱能够浓度依赖性的抑制L型钙通道。     

重组小鼠CK2α亚基在大肠杆菌中的表达、纯化及活性测定

目的　研究重组小鼠CK2α亚基在大肠杆菌中的表达 ,并进行纯化和活性的测定。方法　将已构建成功的小鼠蛋白激酶CK2α亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,产物依次进行DE 5 2、P11磷酸纤维素和肝素 Sepharose柱层析分离 ,SDS PAGE银染。结果　重组质粒转化表达菌经IPTG诱导后出现一分子量为 4 2ku蛋白过度表达 ,表达蛋白约占菌体总蛋白的 30 6 %。从2 87mg可溶性蛋白质中得到 4 7mg纯化蛋白。SDS PAGE银染显示纯化的蛋白为单一蛋白带。纯化的CK2α和 β亚基等摩尔分子混合可组成有完全活性的全酶。重组的CK2全酶的性质和功能与该酶的已知特性一致。结论　重组蛋白是小鼠蛋白激酶CK2α亚基     

L型钙通道介导垂体腺苷酸环化酶激活肽38对大鼠胰岛素分泌的促进作用及其机制研究

目的研究垂体腺苷酸环化酶激活肽38(PACAP38)对大鼠胰岛素分泌的影响及其机制。方法 (1)将大鼠胰岛和胰岛细胞分为4组:正常组(2.8 mmol·L^-1葡萄糖)、模型组(8.3 mmol·L^-1葡萄糖)和低,高2个剂量实验组(模型组+1,10 nmol·L^-1 PACAP38),测定不同干预下的胰岛素分泌量。(2)将大鼠胰岛和胰岛细胞分为5组:正常组、模型组、高剂量实验组、阿折地平(L型钙通道阻滞药)组(模型组+0.1μmol·L^-1阿折地平)和联合组(阿折地平组+高剂量实验组),用胰岛素分泌实验和钙成像技术分别检测阿折地平干预下胰岛素分泌量和β细胞内Ca^2+浓度(F-F0值)水平。结果 (1)正常组、模型组和低、高2个剂量实验组的胰岛素分泌量分别为(86.74±4.05),(165.63±5.26),(175.03±5.21)和(209.28±4.13)μu·mL^-1,模型组与正常组相比,胰岛素分泌量明显增加,差异有统计学意义(P<0.01);高剂量实验组与模型组相比,胰岛素分泌显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)正常组、模型组、高剂量实验组、阿折地平组和联合组的胰岛素分泌量分别为(46.93±4.58),(79.11±8.02),(135.65±3.68),(72.78±7.95),(78.51±5.13)μu·mL^-1;这5组的Ca^2+浓度分别为3.00×10^-2±0.12,6.57×10^-2±0.35,1.40×10^-1±0.46,7.71×10^-2±0.42,8.00×10^-2±0.43,上述指标:模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);高剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001);联合组与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001);阿折地平与模型组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 PACAP38通过作用于L型钙通道,使β细胞内Ca^2+浓度升高,最终促进胰岛素分泌。