铅镉影响肾上腺皮质细胞分泌功能的机制与途径

目的：了解铅、镉对肾上腺皮质细胞份泌功能的直接毒作用及可能的介导途径。方法原代分离培养的豚鼠肾上腺皮质细胞,分别以0．00、6．25、12．50、25．00、50．00和100．00μmol/L氯化镉（CdCl2)和0．00、12．50、25．0、50．00和100．00μmol/L醋酸铅（PbAc)处理细胞,在不同孵育时间（30－240min)分别测定培养液皮质醇水平,并观察不－磷酸腺苷（cAMP)与皮质醇分泌的相关性。结果6．25－100．00μmol/LCdCl2引起细胞皮质醇分泌水平降低,呈现明显的剂量－效应关系,且与时间具有协同抑制效应。12．50－100．00μmol/LPbAc对皮质醇分泌的毒效应呈低剂量轻度抑制、高度量回复正常的双相反应,表现为皮质醇水平在低剂是降低（12．50和25．00μmol/L）,而高剂量略升高（100．00μmol/L）,且随时间延长其效应愈为明明。cAMP随CdCl2剂量增加而降低,具有剂量－效应关系,其变化与CdCl2抑制皮质醇分泌具有相关性;而PbAc随cAMP的作用则表现为低剂量轻微抑制、高剂量升高,且与皮质醇分泌的变化相似。结论：在促肾上腺皮质激素存在下,CdCl2可直接抑制皮质醇的合成分泌,PbAc对细胞份泌皮质醇功能的毒效应呈低剂量轻微抑制,高剂量回复正常,其至诱导的双相反应,cAMP作为第二信使可能参与皮质醇的合成,CdCl2,PbAc可能过cAMP-PKA途径介导其对激素分泌的毒效应。     

纳米二氧化钛与醋酸铅联合诱导人胚肝细胞氧化应激作用

[目的]研究纳米二氧化钛（TiO2）与醋酸铅（PbAc）联合作用于人胚肝细胞（L-02）,对细胞内活性氧（ROS）、氧化应激作用及细胞活性的影响。[方法]以1．000mg／LPbAc和10．000、1．000、0．100、0．010、0．001mg／LTi02单独以及1．000mg／LPbAc及前述浓度Ti02混合处理L-02细胞24h,以体积分数为0．1％二甲基亚砜为阴性对照,30gmol／LH2O2为阳性对照。用噻唑蓝法检测细胞毒性,采用流式细胞术检测胞内ROS水平,检测谷胱甘肽（GSH）与超氧化物歧化酶（SOD）以评价细胞内抗氧化物质水平。[结果]与阴性对照、PbAc染毒组及其他浓度TiO。染毒组相比,10．000mg／LTi02染毒组细胞活力明显降低（P〈0．05）。与阴性对照、PbAc染毒组和其他浓度混合物染毒组相比,10．000mg／L混合物染毒组细胞活性明显降低（P〈0．05）;1．000、0．100mg／L混合物染毒组细胞活力也明显低于阴性对照组（P〈0．05）。与阴性对照、PbAc染毒组相比,各浓度混合物染毒组细胞ROS水平均明显增加（P〈0．05）.与阴性对照相比,1．000至0．010mg／L混合物染毒组细胞GSH水平均明显升高（P〈0．05）,0．100、0．010mg／L混合物染毒组细胞SOD活性也明显升高（P〈0．05）。[结论]本研究条件下,低剂量纳米TiO2和PbAc共同作用于L-02,可增加活性氧水平,同时诱导细胞增加GSH和SOD水平以自我保护;随着染毒剂量升高,ROS水平明显增加,抗氧化能力下降,导致细胞活力下降。     

多氯联苯和苯并（a）芘联合作用对HepG2细胞CYPA1和微核的影响

目的探讨多氯联苯（PCBs）153通过诱导P450酶活力对苯并（a）芘【B（a）P】遗传毒性的影响。方法PCB153设3个剂量组（1、10、100μmol／L），B（a）P设1个剂量组（50μmol／L），DMSO为溶剂对照组，3-甲基胆蒽（3-MC）为阳性对照组。以不同浓度的PCB153（1、10、100μmol／L）染毒HepG2细胞48h后再与B（a）P联合染毒24h。通过荧光分光光度法测定HepG2细胞CYP1A1酶活力（EROD）。同时采用胞质分裂阻滞法微核试验（CBMNT）分析细胞的微核，计算微核率和核分裂指数（NDI）。结果与溶剂对照组相比，1、10、100μmol／L的PCB153和50μmol／L的B（a）V单独染毒均可诱导EROD活力增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。与溶剂对照组比较，100μmol／L的PCBl53和50μmol／L的B（a）V可诱导微核率显著升高，差异有统计学意义（P〈0．01）。与B（a）V单独染毒组比较，B（a）V和PCB153联合染毒时，EROD活力和微核率均显著升高，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。与溶剂对照组比较，100μmol／L的PCB153和50μmol／L的B（a）V及所有联合染毒组均使HepG2细胞NDI明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论PCB153对B（a）P的遗传毒性作用具有一定的促进作用，这种促进可能与PCB153诱导P450酶活力有关。     

肝细胞生长因子对铅致人肾小球系膜细胞损伤的保护效应的机制

目的初步探讨肝细胞生长因子（HGF）防护铅处理致人肾小球系膜细胞（HMC）损伤的作用机制。方法将HMC分为对照组（C组）、Pb10μmol／L组和HGF＋Pb10μmol／L组,在6、12、24、48h分别通过噻唑蓝（MTY）法检测细胞存活率和用流式细胞仪检测凋亡率;实时荧光定量一PCR检测各组细胞中Caspase-3的表达水平。结果MTr检测结果显示。Pb10pμmol／L组HMC在6、12、24、48h细胞生长存活率均显著低于HGF＋Pb10μmol／L组（P〈0．01）;流式凋亡检测结果显示,HMC在10μmol／L醋酸铅染毒6、12、24和48h后,HGF＋Pb10μmol／L组在各个时间点细胞凋亡率显著低于Pb10μmol／L组（P〈0．01）。实时荧光定量-PCR检测结果显示,在HMC铅染毒48h后,HGF＋Pb10μmol／L组Caspase-3的表达量显著低于Pb10μmol／L组（P〈0．01）。结论铅促进HMC细胞的凋亡,而HGF通过降低Caspase．3的表达抑制HMC的凋亡,从而发挥对铅致HMC细胞损伤的保护作用。     

白藜芦醇对小鼠前脂肪细胞凋亡及细胞周期的影响

目的研究白藜芦醇（Res）对小鼠前脂肪细胞凋亡及细胞周期的影响及其机制。方法分别用25、50、75、100μmol／L的Res干预小鼠前脂肪细胞24、48、72h,并设0μmol／LRes为阴性对照组（每组设3个复孔,重复3次）。全自动倒置荧光显微镜观察细胞的形态学变化、细胞增殖．毒性检测试剂盒检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞凋亡与细胞周期。结果形态学上．经50μmol／LRes干预48h后的小鼠前脂肪细胞具有典型凋亡形态学改变。细胞增殖-毒性检测发现,0、25、50、75、100μmol／LRes干预24h细胞增殖率分别为100％、（97．00±1．00）％、（91．00±2．65）％、（90．67±2．52）％和（86．00±3．61）％;干预48h细胞增殖率分别是100％、（86．67±2．52）％、（76．00±2．00）％、（34．33±2．08）％和（30．33±2．52）％;干预72h,细胞增殖率分别是100％、（82．00±2．65）％、（65．67±3．06）％、（21．00±3．61）％和（16．33±3．21）％。偏相关分析结果显示细胞增殖率与干预时间、Res浓度均呈负相关关系（r=-0．72、-0．83,均P〈0．01）。0、25、50、75、100μmol／LRes干预24h,G0／G1期的细胞比例分别为（27．23±2．63）％、（39．03±2．74）％、（80．20±5．15）％、（87．97±3．12）％和（90．80±2．08）％;S期的细胞比例分别为（72．43±2．99）％、（63．93±6．90）％、（19．80±5．15）％、（12．20±2．86）％和（9．20±2．08）％,2个细胞周期的50、75、100μmol／LRes干预组与阴性对照组之间的细胞比例差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。0、25、50、75、100μmol／LRes干预48h,细胞凋亡率分别为（2．90±0．10）％、（5．40±3．81）％、（8．23±4．24）％、（29．77±6．18）％和（27．23±3．17）％;细胞坏死率分别为（7．50±0．87）％、（12．00±4．89）％、（12．27±3．81）％、（12．67±6．13）％和（20．73±2．64）％,100μmol／L的干预组的细胞调亡率、坏死率与阴性对照组的差异均具有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）,其他各组与阴性对照组的差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论在一定的剂量范围内（0～100μmol／L）,Res可能抑制小鼠前脂肪细胞生命周期并促进其凋亡。     

染料木黄酮对HepG2细胞胆固醇代谢和SREBP-2通路的调控作用

目的探讨染料木黄酮（Gen）对HepG2人肝癌细胞胆固醇代谢和SREBP-2通路的调节作用。方法体外培养HepG2细胞,将HepG2细胞在含有0、0．01、0．10、1．00、10．00、50．00、100．00μmol／LGen的培养液内分别培养24、48、72h后,用MTT法检测细胞增殖活性。用分别含0、0．01、1．00、10．00、50．00μmol／LGen的完全培养液培养HepG2细胞24h,收集细胞,分别进行细胞内总胆固醇（TC）含量检测、实时荧光定量PCR检测细胞低密度脂蛋白受体（ldlr）、3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（hmgcr）基因的mRNA表达和蛋白印迹法检测核转录因子SREBP-2的表达。结果0．01、0．10、1．00、10．00、50．00、100．00μmol／LGen分别作用于HepG2细胞24h,0．01、0．10、1．00μmol／LGen组细胞增殖率高于溶剂对照组（均P〈0．05）;作用48、72h,1．00、10．00、50．00、100．00μmol／LGen组细胞增殖率均低于溶剂对照组（均P〈0．05）。1.00、10．00、50．00μmoL／LGen与HepG2细胞共同孵育24h,HepG2细胞内TC水平分别为（1．81±0．15）、（2．29±0．17）、（2．88±0．08）mmol／L,均高于对照组[（1．44±0．17）mmol／L],且随着Gen浓度升高,呈增加趋势（R2=0．48,P〈0．01）;各Gen实验组的hmgcr和ldlr基因的mRNA表达水平随着Gen浓度升高而升高（R2分别为0．53、0．79,均P〈0．01）。1．00、10．00、50．00μmol／LGen组蛋白表达灰度值均高于对照组（均P〈0．01）。结论染料木黄酮能够调节细胞内胆固醇的代谢,其作用机制可能与调控SREBP-2通路有关。     

乙二醛致大鼠淋巴细胞DNA损伤的实验研究

予大鼠腹腔注射不同剂量（12．5、25．0和50．0mg／kg）的乙二醛后16h采血,分离淋巴细胞,做单细胞凝胶电泳实验。另分离正常大鼠淋巴细胞,加入不同浓度（0、0．25、0．50和1．00mmol／L）的乙二醛孵育1h,做单细胞凝胶电泳实验。结果显示,（1）大鼠腹腔注射25．0和50．0mg／kg的乙二醛,淋巴细胞拖尾率与彗尾长均明显高于对照组（P〈0．05）;各剂量组间比较,差异有显著性（P〈0．05）。（2）体外染毒0．50和1．00mmol／L乙二醛,大鼠淋巴细胞拖尾率与彗尾长均高于对照组,且各剂量组间差异有显著性（P〈0．05）。提示腹腔注射25．0和50．0mg／kg及体外染毒0,50和1．00mmol／L乙二醛可致大鼠淋巴细胞DNA损伤,且随着染毒剂量增加,DNA损伤加重。     

应用胞质分裂阻滞微核细胞组学法评价三溴乙酸的遗传毒性

[目的]应用胞质分裂阻滞微核细胞组学方法[cytokinesis-block micronucleus cytome（CBMN-cyt）assay]评价三溴乙酸的遗传毒性。[方法]以小鼠淋巴瘤（L5178Y）细胞为受试细胞,分为2组。一组暴露于终浓度分别为0（阴性对照）、7．81、15．62、31．25、62．50、125．00、175．00、250．00μg／mL的三溴乙酸溶液24h,采用噻唑蓝比色法（MTF法）检测细胞毒性,并计算半数致死浓度（medianlethaldose,LC50）;另一组暴露于终浓度分别为0（阴性对照）、31．25、62．50、125．00、175．00μg／mL的三溴乙酸溶液24h,并设阳性对照（终浓度为0．10μg／mL丝裂霉素C）,采用CBMN-cyt试验检测遗传毒性。[结果]与阴性对照组相比,31．25、62．50,125．00,175．00,250．00μg／mL三澳乙酸染毒组L5178Y细胞的存活率均较低,差异有统计学意义（P〈0．05）;且随着三溴乙酸染毒浓度的升高,L5178Y细胞的存活率呈明显的下降趋势（尸〈0．01）。三溴乙酸对该细胞的LC50为135．7μg／mL。与阴性对照比较,125．00、175．00μg／mL三溴乙酸染毒L5178Y细胞的微核率均升高,各浓度三溴乙酸染毒L5178Y细胞的核质桥率也均升高,差异有统计学意义（P〈0．05）;而各浓度三溴乙酸染毒L5178Y细胞的核芽率和核分裂指数（nucleusdividedindex,NDI）无显著改变。Pearson相关分析显示,随着三溴乙酸染毒剂量的升高,L5178Y细胞的微核率、核质桥率、核芽率均呈明显的上升趋势（P〈0．01）。[结论]三溴乙酸的遗传毒性,可能与染色体损伤、DNA错误修复、染色体重组或端粒末端融合损伤有关。     

镉致腺垂体-肾上腺皮质凋亡机制研究

目的观察CdCl2作用后腺垂体．肾上腺皮质系统凋亡情况及半胱天冬酶-9的表达变化。方法48只雄性SD大鼠随机分为4组，即对照组、CdCl2低剂量组（1．0mg／kg）、中剂量组（2．0mg／kg）、高剂量组（4．0mg／kg）。经口灌胃染毒．每周5d，连续6周。染毒结束后分离腺垂体和肾上腺皮质进行透射电镜观察、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡、半胱天冬酶原。9mRNA（procaspase-9mRNA）表达、半胱天冬酶-9（caspase-9）表达。结果电镜检查可见凋亡细胞早期形态学变化；中、高剂量组腺垂体和肾上腺TUNEL阳性细胞的平均灰度值和procaspase-9 mRNA阳性细胞相对灰度值均为对照组的1．2倍以上（P〈0．05）；蛋白印迹（western boltting）结果显示，随着染毒剂量的增加，垂体-肾上腺系统caspase-9表达逐渐增强（P〈0．01）。结论CdCl2可诱发腺垂体一肾上腺皮质细胞凋亡，在此过程中caspase-9及其酶原mRNA表达呈现出与凋亡较为一致的趋势。     

Nec-1对铝作用下神经细胞活力及凋亡、自吞噬基因的影响

[目的]研究坏死性抑制剂Necrostatin-1（Nec-1）对铝（Al）作用下的神经细胞活力及凋亡、自吞噬基因的影响。[方法]体外原代培养小鼠神经细胞,通过2mmol／LAl3＋作用于神经细胞制造铝损伤模型,加入不同剂量的Nec-1,用细胞活力检测（CCK-8）和逆转录．聚合酶链反应（RT．PCR）的方法观察Nec-1对染铝神经细胞的作用。[结果]细胞活力检测：以2mmol／LAl3＋染毒组作为对照,30μmol／LNec-1组的细胞活力与对照组比较,差别有统计学意义（P〈0．05）,60、90μmol／LNec-1组与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）.RT-PCR结果：2mmol／LAl3＋染毒组caspase-3基因的表达为0．98±0．120,而Nec-160μmol／L组和Nec-190μmol／L组caspase-3的表达分别为0．50±0．077和0．44±0．050,同对照组相比,两组caspase-3的表达均下降（P〈0．01）。2mmol/LAl3＋染毒组的LC3-Ⅱ基因的表达为1,82±0．047,而60μmol／LNec-1组和90μmol／LNec-1组的LC3．口表达分别为1．00±0．022和0．97±0．035,同对照组相比,两组LC3-Ⅱ的表达均呈下降（P〈0．01）。[结论]Nec-1可使铝作用下的神经细胞活力上升,并使神经细胞的自吞噬和凋亡基因表达下降。     

氯化镉诱发肾上腺皮质细胞凋亡与蛋白激酶B活力的关系

目的 了解氯化镉(CdCl2)诱发肾上腺皮质细胞凋亡的发生与蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)活力变化的关系.方法 体外分离培养豚鼠肾上腺皮质细胞,以蛋白因子添加素V和碘化丙啶联合标记,流式细胞仪检测,观察CdCl2诱发细胞凋亡的特征;采用免疫沉淀-化学发光法测定PKB/Akt活力.结果 6.25～100.00 μmol/L剂量CdCl2处理肾上腺皮质细胞2 h,细胞凋亡发生率随剂量增加而增加,25.00 μmol/L及更高剂量组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);回归分析表明,CdCl2剂量与凋亡发生率呈剂量-效应关系.以50.00 μmol/L CdCl2处理细胞,细胞凋亡发生率随时间的延长而增加,CdCl2作用15 min～4h,平均凋亡率为5.58%-73.08%,其中1、2、4h时间点与对照相比,差异有统计学意义(P＜0.05);CdCl2处理时间与凋亡发生率呈时间-效应关系.6.25～200.00 μmol/L剂量CdCl2处理30 min,显示CdCl2可引起肾上腺皮质细胞PKB/Akt表达降低,在一定剂量范围内呈线性关系.结论 CdCl2诱发肾上腺皮质细胞凋亡的同时引起细胞内PKB/Akt表达水平的降低.     

镉诱导大鼠腺垂体细胞凋亡及与p38 MAPK&ERK1/2途径介导机制关系的初步研究

目的了解CdCl2对腺垂体的损伤以及细胞凋亡发生与p38MAPK、ERK12表达的关系,为了解镉致腺垂体毒作用的分子机制提供科学依据。方法采用健康雄性SD大鼠进行整体试验(n=12),分别每天经口灌胃给予0、1.0、2.0、4.0mgkgbwCdCl2,6周后取腺垂体进行指标检测;离体试验采用酶解分离大鼠之原代腺垂体细胞,分别以0、1.56、3.12、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μmolLCdCl2处理,收获细胞进行检测;特异性阻断剂阻断凋亡效应的试验采用2.65μmolLp38MAPK的特异阻断剂SB203580或10μmolLERK12激酶的特异阻断剂U0126处理细胞,然后以3.12μmolL或100.00μmolL的CdCl2处理细胞后进行相应的检测。检测指标包括:TUNEL法和流式细胞术等检测凋亡。结果整体实验和离体实验结果均显示CdCl2以剂量依赖方式诱导腺垂体细胞发生凋亡(P<0.05);特异性阻断剂效应的研究结果显示2.65μmolLSB203580和10μmolLU0126对TUNEL阳性细胞的相对灰度和凋亡细胞率均有一定的影响。结论在一定的剂量条件下,CdCl2影响腺垂体激素分泌水平,并导致发腺垂体细胞凋亡,MAPKs家族成员p38MAPK和ERK12激酶通路在凋亡发生过程中可能发挥一定的作用。     

百草枯对体外培养小鼠胚胎神经干细胞增殖的影响

[目的]观察百草枯（paraquat,PQ）对体外培养小鼠胚胎神经干细胞增殖活力的影响。[方法]取10．5d小鼠胚胎进行体外神经干细胞原代培养,对培养细胞进行形态学观察、特异性蛋白质免疫细胞化学染色鉴定;用终浓度为0．00、0．10、1．00、10．00、100．00、1000．00μmol／L的PQ处理神经干细胞24h后,采用阿尔玛蓝细胞增殖与细胞毒检测法（AlamarBlue法）测定细胞相对存活率,分析不同浓度PQ对神经千细胞增殖的影响。用终浓度为0．00、0．10、1．00、10．00、50．00、100．00μmol／L的PQ处理神经干细胞24h后,用活性氧荧光定量法（DCFH—DA法）检测细胞内活性氧（ROS）水平。[结果]免疫细胞化学检测结果显示,培养的细胞可以表达神经干细胞（NSCs）特异性蛋白;经诱导分化后的细胞可以表达神经细胞特异性蛋白;Alamar Blue法检测结果表明,与对照组相比,当PQ≥100．00gmol／L时,细胞存活率明显降低;并伴随染毒浓度的升高而进一步降低（P〈0．05）。ROS检测结果表明,与对照组相比,当PQ≥10．00μmol／L时,细胞内ROS水平明显提高。[结论]培养的神经细胞具备神经干细胞的基本特征;PQ可引起细胞内ROS水平的升高,并抑制神经干细胞的增殖,且存在剂量依赖性。     

镉致脾淋巴细胞功能抑制与细胞凋亡的关系

目的 采用体外作用的方式观察氯化镉引起的脾淋巴细胞功能抑制与镉诱导的细胞凋亡之间的关系。方法 在实验中选择了3．10、6．25、12．50、25．00、50．00μmol／L共5个浓度的氯化镉,在体外与小鼠淋巴细胞共育不同时间后,采用MTT颜色反应法观察淋巴细胞转化,用DNA凝胶电泳法及流式细胞仪法检测细胞凋亡。结果 25．00和50．00μmol／L氯化镉对小鼠脾淋巴细胞的转化功能产生明显抑制作用,并有剂量．反应关系,这两个浓度的氯化镉对淋巴细胞转化功能的抑制率：刀豆蛋白A刺激组分别为50％和78％,脂多糖刺激组分别为39％和55％;同时12．50-50．00μmol／L氯化镉可诱导脾淋巴细胞发生凋亡,流式细胞仪检测结果为30％-60％。在较高浓度下氯化镉还可以引起细胞存活率下降,并且氯化镉诱导细胞凋亡的作用与其抑制脾淋巴细胞功能的作用相比,作用时间短、作用浓度低。结论 氯化镉在体外可能以诱导细胞发生凋亡作为其抑制脾淋巴细胞功能的一种机制。     

奋斗呐对印鼠客蚤毒杀效果观察

目的为筛选出优质高效的杀蚤剂，在现场实验的基础上，观察奋斗呐对印鼠客蚤的实验室毒效。方法药膜法。结果（1）当药物浓度在12．50mg/L以上时，KT50在7min以内：12．50、25．00、50．00、100．00mg／L的KT50分别为6．19、6．14、5．06和4．64min；（2）当药物浓度为100．00mg／L时，24h死亡率为100％；（3）100．00mg／L浓度药膜在室温和普通湿度下存放120d后，仍可使100％的试蚤死亡。结论奋斗呐5％可湿性粉剂毒力强，气味小，对人畜较为安全，残效时间长，可在控制家鼠鼠疫灭蚤中使用。     

氯化镉诱发肾上腺皮质细胞凋亡与应激活化蛋白激酶活性的 …

目的 了解氯化镉诱发肾上腺皮质细胞凋亡的发生及应激活化蛋白激酶（ＳＡＰＫ）活性的变化。方法 体外分离培养豚鼠肾上腺皮质细胞,以蛋白因子添加素Ⅴ和碘化丙啶联合标记,流式细胞仪检测,观察氯化镉诱发细胞凋亡的特征;采用免疫沉淀－化学发光法测定ＳＡＰＫ活性。结果 ６．２５～２００．００μｍｏｌ／Ｌ剂量氯化镉处理２ｈ,凋亡细胞百分率随剂量增加而增加,平均为９．９０％、１５．４７％、３３．６７％、５３．７０％     

JNK信号通路在二甲基肿酸所致人胚肺成纤维细胞DNA损伤与凋亡中的作用

[目的]探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路在二甲基胂酸（DMA）所致人胚肺成纤维（HELF）细胞DNA损伤与凋亡中的作用。[方法]以0、2．5、5、10和20μmol／LDMA处理HELF细胞48h后，检测HELF细胞生长、DNA损伤、细胞凋亡、JNK磷酸化水平；并用20μmol／LJNK抑制剂SP600125预处理30min后，再用DMA处理HELF细胞48h，观察上述指标变化情况。[结果]10和20μmol／LDMA对HELF细胞生长产生明显抑制作用（P〈0．05）；2．5、5、10和20μmol／LDMA引起HELF细胞γ-H2AX表达水平明显增强（P〈0．05），并具有一定剂量-效应关系（经直线相关分析，r=-0．982，P〈0．05）；5、10和20μmol／LDMA引起HELF细胞断裂，caspase3表达水平明显增强（P〈0．05），呈一定剂量-效应关系（经直线相关分析，r=0．945，P〈0．05）；5、10和20μmol／LDMA处理HELF细胞48h后，JNK磷酸化的表达水平明显增加（P〈0．05），呈现一定剂量-效应关系（经直线相关分析，r=0．988，P〈0．05）；JNK抑制剂SP600125能明显降低10、20μmol／LDMA的生长抑制作用（P〈0．05）；JNK抑制剂SP600125可明显阻滞DMA所致HELF细胞对DNA损伤和诱导的凋亡作用（P〈0．05）。[结论]DMA可引起HELF细胞DNA损伤和凋亡；在此过程中JNK信号通路激活起到正调控作用。     

亚砷酸钠对人皮肤角质形成细胞MGMT基因组蛋白乙酰化及转录与表达的影响

[目的]了解不同剂量亚砷酸钠（NaAsO2）对人皮肤角质形成细胞（HaCaT细胞）中O^6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）基因组蛋白乙酰化调控、mRNA转录及蛋白表达的影响。[方法]以25．00、12．50、6．25、3．13μmol／LNaAsO2重复间隔处理HaCaT细胞72h（NaAsO2处理24h,隔天再次用NaAsO2进行相同的处理,重复处理3次）。定量染色质免疫沉淀技术（Q-ChIP）检测MGMT基因转录调控区（CHIP1、CHIP2区域）及MGMT基因编码区（CHIP3区域,对照区域）组蛋白乙酰化修饰水平;实时荧光定量PCR（Q-PCR）和免疫印迹分析分别检测MGMT基因的mRNA转录和蛋白表达。设不染毒的HaCaT细胞为空白对照（0．00μmol／L）,人表皮鳞癌细胞株A431为阳性对照。[结果]0．00、3．13、6．25、12．50、25．00μmol／LNaAsO2处理细胞中,MGMT基因转录调控区CHIP1区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为176．68±8．50、175．71±18．14、161．26±16．28、146．23±24．00和82．64±33．87,差异有统计学意义（F=28．809,P〈0．05）;组蛋白H4乙酰化水平分别为183．59±11．98、180．84±24．10、166．52±5．48、156．87±10．64和103．42±7．04,差异有统计学意义（F=36．493,P〈0．05）。CHIP2区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为171．11±16．54、167．55±8．97、156．51±8．59、135．88±16．55和82．01±3．96,差异有统计学意义（F=49．626,P〈0．05）;组蛋白H4乙酰化水平分别为117．23±16．21、143．29±10．59、135．87±7．44、105．48±7．56和78．79±6．92,差异有统计学意义（F=25．438,P〈0．05）。编码区CHIP3区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为37．53±6．23、35．57±5．85、40．81±4．45、42．18±1．23和41．87±5．71,差异无统计学意义（F=2．341,P〉0．05）;组蛋白H4乙酰化水平分别为40．78±2．42、38．56±4．66、39．47±2．88、33．13±3．48和31．48±4．99,差异无统计学意义（F=3．027,P〉0．05）。MGMT基因mRNA转录相对表达量分别为1．19829±0．15997、1．51831±0．18054、1．42522±0．18039、1．01454±0．09679和0．88772±0．02000,差异有统计学意义（F=37．359,P〈0．05）;MGMT蛋白相对表达量分别为1．06619±0．06124、1．17447±0．06475、0．84883±0．05701、0．47163±0．02334和0．24034±0．01443,差异有统计学意义（F=20．687,P〈0．05）。[结论]砷通过导致MGMT基因转录调控区组蛋白去乙酰化,抑制MGMT基因mRNA转录及蛋白表达,是砷致皮肤损害的重要机制之一。