去甲斑蝥素和紫杉醇联合诱导白血病细胞K562凋亡

目的探讨去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)和紫杉醇(paclitaxel,PTX)联合诱导白血病细胞K562凋亡的效应及机制。方法采用流式细胞术分析细胞凋亡和线粒体膜电位;采用免疫印迹技术检测细胞内凋亡相关信号分子Bim、Bax和Bcl-2表达。结果 7.5μmol/L NCTD单独作用可诱导(2.6±0.7)%白血病细胞K562发生凋亡;0、2.5、5和10nmol/L的PTX诱导细胞凋亡的百分率分别为(0.8±0.3)%(、4.7±1.9)%(、7.2±2.6)%和(9.4±2.9)%;而NCTD(7.5μmol/L)与PTX联合作用(2.55、和10 nmol/L)后,细胞凋亡率分别增高至(8.5±2.2)%(、19.3±3.1)%和(23.4±4.1)%。药物联合后Bim和Bax表达增强,而Bcl-2表达减少。结论 NCTD通过线粒体途径凋亡信号的转导,增强PTX诱导K562细胞凋亡的效应。     

MC002诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡及其作用机制

目的与雷公藤内酯醇（PG490）进行比较,观察雷公藤内酯醇衍生物MC002对人喉癌Hep-2细胞体外增殖的抑制作用及其分子机制。方法以MC002和PG490分别处理人喉癌细胞Hep-2,采用噻唑蓝比色法（MTT）检测药物对Hep-2细胞的增殖抑制作用并计算IC50值;利用软琼脂克隆形成实验观察细胞的锚定非依赖性生长能力;选用Hoechst33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化;用ROS检测试剂盒分析药物对细胞活性氧水平的影响;以实时荧光定量PCR技术（Realtime-PCR）检测细胞凋亡相关因子Bcl-2及Bax mRNA水平的表达变化。结果 MC002及PG490均对体外培养的人喉癌Hep-2细胞有增殖抑制作用,且具有剂量依赖性,IC50值分别为183.58nmol/L和119.35nmol/L,而且两种药物可以抑制细胞的锚定非依赖性生长能力;此外,MC002及PG490可以降低ROS水平,并且使凋亡相关因子BaxmRNA表达上调,Bcl-2mRNA表达下调。结论 MC002具有与PG490相同的作用,可以抑制人喉癌细胞株Hep-2的生长,诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关因子Bcl-2、Bax及ROS的表达有关。     

吸入性损伤对小鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的探讨细胞凋亡、促凋亡基因和凋亡抑制基因在吸入性损伤发生的作用及意义。方法以小鼠烟雾吸入性损伤为模型，应用RT—PCR和TUNEL技术，观察其损伤后肺组织中Bcl-2和Bax基因mRNA表达及细胞凋亡的变化。结果小鼠烟雾吸入性损伤后肺组织Bcl-2和Bax的表达增加，细胞凋亡指数升高，与对照组相比，差异有非常显著性（P〈0．01）。结论提示细胞凋亡可能参与了吸入性损伤肺组织的病理形成过程。     

白英水提物诱导人卵巢癌A2780细胞bcl-2基因表达的影响

目的：观察白英水提物诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用,初步探讨其分子机制。方法：常规方法制备白英水提物,体外培养人卵巢癌A2780细胞,MTT法提示其有较强的体外抑制A2780细胞作用。采用半定量RT—PCR法检测凋亡相关基因bcl-2表达。实验组设白英水提物12．5、25．0、50．0mg／ml 3种浓度,以顺铂（25．0μg／ml）为阳性对照组。结果：白英水提物对A2780细胞增殖有抑制作用,且呈明显的量效关系,半定量RT—PCR法检测显示bcl-2 mRNA表达下调,诱导其发生凋亡。结论：白英水提物对A2780细胞有较强的增殖抑制和诱导凋亡作用,其诱导A2780细胞凋亡的分子机制可能与下调bcl-2基因表达有关。     

调控Cox-2基因表达与食管癌细胞放射敏感性机制的初步探讨

目的 通过调控环氧合酶-2(Cox-2)基因表达来探讨影响食管癌细胞放射敏感性的机制.方法 通过构建C ox-2特异性siRNA,转染EC9706细胞,调控细胞内Cox-2表达,检测不同辐射剂量后MMP-2 、Bcl-2 mRNA、AKT蛋白和磷酸化AKT的表达,以及观察集落形成、细胞增殖、细胞凋亡、体外细胞侵袭能力,结果采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 2和4 Gy照射后,上调组Bcl-2 mRNA表达量升高(F=3.36、4.32,P＜0.05);下调组MMP-2 mRNA表达量降低(F=3.86、8.09,P＜0.05),Bcl-2 mRNA表达量降低(F=3.73、5.64,P＜0.05),Bax mRNA表达量升高(F=7.03、7.42,P＜0.05).而各组细胞总AKT蛋白和磷酸化AKT蛋白印迹呈现上调组最强印迹,下调组最浅印迹.下调组细胞随照射量的增加凋亡率上升陡度最大,且差异有统计学意义(F=317.40,P＜0.05).G0～G1期细胞比例逐渐升高,S和G2～M期细胞比例逐渐降低,细胞增殖抑制率明显升高,体外侵袭实验穿透细胞数下降陡度最大.结论 调控C ox-2基因表达影响食管癌细胞放射敏感性的机制可能是,下调细胞内Cox-2 mRNA表达继而下调MMP-2、Bcl-2 mRNA表达,上调Bax表达,导致肿瘤细胞的侵袭及转移能力的降低,促进其向G0 ～G1期细胞转换,诱导细胞凋亡.同时使AKT和磷酸化AKT(pAKT)水平下降,影响PI3 K/Akt信号转导途径降低其放疗抗拒的能力.     

Ox-LDL诱导人肾小球系膜细胞凋亡在慢性肾炎中的作用

目的 :探讨氧化低密度脂蛋白 (Ox-LDL)诱导肾小球系膜细胞凋亡的调控机制及其在慢性肾炎中的作用。方法 :通过人肾小球系膜细胞体外培养 ,采用原位末端标记和DNA凝胶电泳检测低浓度的Ox -LDL (0、 2 5、 5 0、10 0 μg/ml)对系膜细胞凋亡的影响 ,免疫组化维生素E干预前后Ox-LDL对系膜细胞Bax/Bcl- 2表达的影响 ;按血浆LDL水平 ,把有不同程度肾小球硬化的慢性肾炎患者肾标本分为LDL正常组和LDL升高组 ,分别采用DNA原位末端标记和免疫组化 ,检测肾小球细胞凋亡及Bax/Bcl- 2蛋白表达。结果 :低浓度Ox-LDL (0～ 10 0 μg/ml)以剂量依赖方式促进肾小球系膜细胞凋亡 ,并使肾小球系膜细胞Bax的蛋白表达呈时间 -剂量依赖性增加 ,P <0 0 1,Bcl- 2的蛋白表达轻度升高后呈时间 -剂量依赖性下降 ,P <0 0 1,导致Bax/Bcl- 2比值增大 ;维生素E干预后这种变化不明显 ,P >0 0 5。LDL升高组肾小球凋亡和Bax蛋白表达明显增加 ,P <0 0 1;Bcl- 2变化不明显 ,P >0 0 5 ,血LDL水平与肾小球硬化指数、凋亡指数、Bax/Bcl- 2比值有显著正相关关系。结论 :Ox -LDL能诱导肾小球系膜细胞凋亡 ;Bax/Bcl- 2比值上升可能是Ox -LDL诱导肾小球系膜细胞凋亡的重要机制 ;脂质异常可能是导致肾小球硬化中细胞减少的重要原因     

NF-kB抑制与X射线诱导的人非霍奇金淋巴瘤细胞凋亡的研究

目的 探讨NF-kB p65对X射线诱导人非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma,NHL)细胞凋亡的作用及其调控机制.方法 以NF-kB p65抑制剂quinazoline (QNZ)处理人NHL细胞.将NHL细胞株Namalwa、Ramos和Raji细胞分为空白对照组、单纯照射组(IR)和X射线+QNZ实验组( IR+ QNZ),采用Annexin-V染色方法检测肿瘤细胞凋亡水平的变化,采用Western blot方法检测各细胞株中Survivin及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3的表达水平;应用实时定量PCR方法检测Survivin mRNA水平.结果 应用流式细胞仪检测凋亡细胞百分比,结果显示,QNZ处理后进行照射与单纯照射组相比凋亡细胞明显增加,且具有药物浓度依赖性(t=2.93～12.52,P＜0.05),Western blot法检测结果显示,电离辐射可显著增加人NHL细胞中Survivin蛋白的表达.而应用1、10和50 nmol/L QNZ处理人NHL细胞24 h后进行照射,可显著下调电离辐射所诱导的NHL细胞中的Survivin蛋白表达.随药物浓度增加其作用更为明显(t=3.29～ 16.72,P＜0.05).同时凋亡相关蛋白Bcl-2表达减低,而Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值明显降低,与单纯照射组相比,差异有统计学意义(t =6.20 ～9.91,P＜0.05).预处理QNZ后射线诱导的3种NHL细胞Survivin mRNA均不同程度下降.结论 抑制NF-kB能够增加X射线诱导的NHL细胞凋亡,其机制可能与下调Survivin蛋白表达水平及对凋亡相关蛋白Bcl-2家族的调节有关.     

红芪多糖诱导肺腺癌细胞凋亡与Bax/Bcl-2表达的研究

目的:探讨红芪多糖对A549细胞凋亡及Bax/Bcl-2 mRNA表达的影响。方法:MTT法检测红芪多糖对A549细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测红芪多糖对A549细胞凋亡的影响,RT-PCR法检测红芪多糖对A549细胞Bcl-2、Bax mRNA表达的影响。结果:不同浓度的红芪多糖对肺腺癌细胞生长均有抑制作用,抑制率与浓度呈正相关;不同浓度红芪多糖均可诱导A549细胞凋亡,并呈现浓度依赖性;不同浓度红芪多糖均可降低Bcl-2蛋白的表达,相应提高Bax蛋白的表达,呈浓度依赖性。结论:红芪多糖可抑制A549细胞生长,并诱导其凋亡,且可能通过调节细胞内Bax和Bcl-2的表达从而诱导A549细胞凋亡。     

新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂对结肠癌细胞的增殖抑制作用

目的：观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor, HDACi）JZ004对结肠癌细胞系HCT-8和HT-29细胞增殖的影响,并初步探讨其抗癌机制。方法用不同浓度JZ004分别处理HCT-8和HT-29细胞, MTT法检测细胞的增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期停滞、细胞凋亡;若丹明（rhodamine）123和二氯二氢荧光素二乙酸酯（ DCFH-DA）测定细胞线粒体跨膜电位及活性氧（ reactive oxygen species ,ROS）产生的变化;免疫印迹法检测细胞内乙酰化组蛋白H3、p21、细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）4、Bcl-2、Mcl-1、Bax等相关蛋白的表达水平。结果MTT结果显示,JZ004对结肠癌细胞系的增殖有明显抑制作用,其抑制效果与时间、剂量呈正相关;流式分析结果显示,细胞凋亡率随JZ004浓度提高而增加;JZ004处理72 h后,p21表达水平上调,CDK4蛋白表达下调,细胞周期停滞于G0／G1期而抑制细胞的生长,细胞内ROS产生增多,且线粒体跨膜电位显著下降,促凋亡蛋白Bax的表达呈上调趋势,而抑凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1表达则受到抑制。结论 JZ004作为一种新型的HDACi对结肠癌细胞具有明显的抑制生长和诱导凋亡作用,凋亡诱导机制可能与Bcl-2家族蛋白表达水平变化有关。提示JZ004具有成为结肠癌临床化疗药物的潜能。     

丁酸钠对肝癌Hep G_2细胞株Bcl-2表达的影响

目的：研究丁酸钠（NaB）引起HepG2细胞凋亡的作用及其分子机制。方法：用不同浓度丁酸钠处理HepG2细胞后，用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测Bcl-2mRNA的表达丰度；Hochest3342核染色后观察HepG2细胞核凋亡形态的变化；原位切口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果：丁酸钠在mRNA水平明显抑制Bcl-2基因的转录；荧光显微镜下可见丁酸钠处理后细胞核出现高度凝聚、边缘化，并可见凋亡小体出现；TUNEL法证明出现细胞凋亡。结论：丁酸钠通过下调Bcl-2的转录和表达，诱导肝癌HepG2细胞的凋亡。     

氨基胍、黄芩苷对糖尿病大鼠组织非酶糖化及视网膜细胞凋亡的影响

目的研究非酶糖化、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax与糖尿病视网膜病变（DR）的关系,探讨非酶糖化抑制剂氨基胍和具有非酶糖化抑制作用的中药黄芩苷干预治疗,对DR的治疗作用。方法雄性Wistar大鼠40只,随机平均分为4组,正常对照组、糖尿病组、糖尿病氨基胍（100mg／kg·d）治疗组、糖尿病黄芩苷（150mg／kg·d）治疗组,腹腔注射链脲佐菌素（60mg／kg）诱发糖尿病。16周后,处死大鼠,分离主动脉,测定组织非酶糖化,观察视网膜Bcl-2、Bax的表达,电镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果①与正常对照组相比,糖尿病组非酶糖化明显升高（P〈0．001）,氨基胍治疗组、黄芩苷治疗组较糖尿病组非酶糖化明显降低（P〈0．01）,而血糖无明显变化;②糖尿病组视网膜Bcl-2蛋白表达明显减少、Bax蛋白表达明显增加．氨基治疗组、黄芩苷治疗组的Bcl-2蛋白表达明显增加、Bax蛋白表达较糖尿病组明显减少;③透射电镜下见糖尿病视网膜组神经节细胞呈典型的凋亡形态学改变,氨基胍治疗组、黄芩苷治疗组大鼠组织细胞凋亡改变明显减轻。结论①非酶糖化通过调节Bcl-2,Bax蛋白的表达诱导细胞凋亡,而参与DR的发生与发展;②非酶糖化抑制剂通过抑制非酶糖化,调节Bax、Bcl-2的表达抑制细胞凋亡,延缓DR的发展;③黄芩苷对非酶糖化抑制作用与典型非酶糖化抑制剂氨基胍相似,且价格低、副作用少,值得临床推荐应用。     

酪氨酸代谢物对肺癌细胞增殖、周期及化疗药物敏感性的影响

目的 探讨4种酪氨酸代谢物对肺癌细胞增殖、周期及化疗药物敏感性的影响.方法 不同浓度的酪氨酸代谢物——酪氨酸、4-羟苯丙酮酸(HPPA)、尿黑酸(HGA)、延胡索酸(FA)分别处理A549细胞,通过高内涵实时监测肺癌细胞的增殖,流式细胞仪检测肺癌细胞周期的变化及对化疗药物的敏感性,Western印迹检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果 4种酪氨酸代谢物对A549细胞的增殖及周期均无影响.HGA可降低吉非替尼(Gefitinib)诱导的A549细胞凋亡,抑制Bax表达,同时上调Bcl-2的表达水平;FA则可增加其诱导的A549细胞凋亡,促进Bax表达,同时下调Bcl-2的表达水平.酪氨酸和HPPA对Gefitinib诱导的细胞凋亡均无明显影响.结论HGA与FA可调节肺癌细胞化疗药物的敏感性,揭示了酪氨酸代谢通路对肺癌细胞的调控作用,为肿瘤代谢异常的研究奠定了基础.     

重离子辐射对人外周血T淋巴细胞生物学性能的影响

目的研究重离子对人外周血T淋巴细胞增殖、凋亡等生物学性能的影响并探讨其机制,为肿瘤放射治疗的辐射防护提供实验依据和基础。方法 Ficoll分离法分离人外周血T淋巴细胞,采用12C重离子束坪区照射,照射样品能量为70 MeV、LET=29 keV/μm,照射剂量为1.0和2.0 Gy,剂量率为0.5 Gy/min。分别于照射后12、24h,RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2,Bax,Caspase3,Caspase8和Caspase9的表达;于照射后24、48 h,CCK8法检测细胞增殖能力;于照射后24、48 h,采用AnnexinV-PE/7-AAD、AnnexinV-FITC/PI法检测凋亡发生,并采用RT-PCR检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase3的表达。结果重离子照射可明显抑制人外周血T淋巴细胞的增殖,随着剂量增大,抑制作用更加明显。同时,重离子照射可促进T淋巴细胞的凋亡,特别是对于晚期凋亡的诱导作用（P〈0.01）。RT-PCR检测结果显示,重离子辐射可抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进促凋亡蛋白Bax和Caspase3的表达（P〈0.01）。结论重离子辐射可显著影响抑制T淋巴细胞的增殖并促进其凋亡。     

二氢青蒿素抑制结肠癌细胞株HCT-116并诱导凋亡的实验研究

目的：研究二氢青蒿素（Dihydroartemisinin,DHA）对人结肠癌HCT-116细胞的体外抑制并诱导凋亡,并探讨其作用机制。方法：以不同浓度的DHA作用于体外培养的HCT-116细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测细胞生长抑制率;应用流式细胞仪进行周期分析检测细胞凋亡情况;用Western Blotting法,检测不同浓度的DHA作用于肿瘤细胞时,凋亡相关蛋白Bcl-2,bax,cleavad-PARP表达情况。结果：在DHA作用后,HCT-116细胞生长受到明显抑制,IC50（半抑制浓度）值为14.18μmol/L。并呈一定的量效和时效依赖关系。流式细胞仪检测亚二倍体（sub-G0）比例增高;Western-Blotting检测药物处理细胞后Bcl-2表达水平下调,而Bax、cleavad-PARP表达水平明显上调。结论：DHA能抑制HCT-116细胞的生长增殖并诱导细胞发生凋亡。     

人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞诱导凋亡作用

目的探讨人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞的诱导凋亡作用。方法用浓度梯度Rg3处理Hela细胞,用流式细胞仪方法检测细胞凋亡及细胞周期的变化,用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、bax表达。结果 10、20、40 mg/L Rg3作用Hela细胞24 h后的凋亡率分别为(5.6±1.4)%、(10.3±2.7)%、(21.2±4.9)%,均高于对照组(P<0.01);同时随着Rg3浓度的增加,G2/M期细胞比例升高,Bcl-2表达明显降低,bax基因表达明显升高(P<0.01)。结论 Rg3能将Hela细胞阻滞在G2/M期,通过上调bax和下调Bcl-2表达诱导肿瘤细胞凋亡。其作用呈浓度依赖性。     

染料木黄酮联合5-FU对结肠癌HCT-116细胞株增殖及凋亡的影响

目的探讨染料木黄酮联合5-氟尿嘧啶对HCT-116细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法经不同浓度的Gen和(或)5-FU处理HCT-116细胞后,用MTT法检测细胞的生长抑制效应;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化情况;RT-PCR检测Suvivin表达水平。结果 Gen与5-FU联合应用后能明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞发生S期阻滞,均较对照组和单用药组作用增强,并且下调了Suvivin的mRNA表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Gen可抑制结肠癌HCT-116细胞的增殖,将细胞阻滞于S期,并诱导细胞的凋亡,与5-FU联合应用具有显著协同效应,其机制可能与下调Suvivin表达有关。     

生长分化因子11对高糖环境中人甲状腺乳头状癌K1细胞凋亡的影响

 目的 探讨生长分化因子11(growth differentiation factor 11,GDF1)对高糖环境中人甲状腺乳头状癌K1细胞凋亡的影响。方法 将人甲状腺乳头状癌K1细胞分为3组:对照组(Vehicle)、高糖组(HG)和GDF11组(HG+GDF11;GDF11)。各组细胞培养3 d后,流式细胞术检测细胞凋亡率,western blot检测凋亡相关蛋白Bax与Bcl-2的蛋白水平,实时荧光定量逆转录PCR检测核转录因子E2相关因子(nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2)的转录表达,活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内的ROS水平。结果 与对照组相比,高糖环境中K1细胞的凋亡率降低,Bcl-2/Bax蛋白表达比升高,Nrf2基因表达上调,细胞内ROS水平下降;而GDF11干预显著提高高糖环境中K1细胞的凋亡率,降低Bcl-2/Bax蛋白表达比,下调Nrf2基因转录表达,并提高细胞内的ROS水平。结论 GDF11可能通过提高高糖环境中K1细胞内的氧化应激反应促进细胞凋亡。