金水鲜胶囊联合放射治疗对肺腺癌A549细胞抑制率和VEGF表达影响的研究

[目的]研究金水鲜胶囊联合放疗对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用,同时检测采用两者联合治疗对肺癌细胞分泌的VEGF蛋白及mRNA表达的影响。[方法]体外培养肺腺癌A549细胞,将处于对数期的A549细胞随机分为4组:空白对照组(NC)、金水鲜组(JSX)、放疗组(RT)以及金水鲜与放疗联合组(JSX+RT),其中联合组又按照时序不同分为3个亚组:先金水鲜后放疗组(JSX→RT),先放疗后金水鲜组(RT→JSX),同时金水鲜联合放疗组(JSX+RT)。MTT法计算细胞生长抑制率,ELISA法测定VEGF蛋白表达的含量,RT-PCR技术检测各处理组VEGFmRNA的表达变化。[结果]①与对照组相比,各处理组肺腺癌细胞的生长速度随时间的改变都受到不同程度的抑制,其中以JSX+RT组最为明显,RT组其次,JSX组抑制肺腺癌细胞的增殖程度不如其他两个实验组。JSX+RT组抑制细胞增殖程度与空白对照组、JSX组、RT组相比,均具有显著统计学差异(P<0.05)。②各处理组细胞表达的VEGF蛋白含量有所下降,其中JSX组及JSX+RT组在48h时VEGF蛋白表达量下降的作用明显,与空白对照组及RT组相比,差异有显著统计学意义(P<0.05)。③与空白对照组相比,各处理组VEGFmRNA的表达均表现出下降趋势,在48h时JSX组及JSX+RT组与空白对照组、RT组相比,差异有显著统计学意义(P<0.05),RT组与空白对照组相比,差异有明显统计学意义(P<0.05)。[结论]金水鲜联合放疗可显著抑制肺腺癌A549细胞增殖,下调VEGF蛋白以及mRNA的表达,间接降低新生血管的生成速度和数量,考虑为金水鲜胶囊在影响血管生成方面能增加放疗对肺癌的杀伤作用。     

瘦素对人肺腺癌A549细胞增殖及p-ERK1/2、VEGF表达的影响

 目的观察瘦素对人肺腺癌 A549 细胞增殖及p-ERK1/2、VEGF 表达的影响。初步探讨瘦素在促进肿瘤血管生成中的机制。方法 对人肺腺癌 A549 细胞采用细胞培养,MTT 法检测不同浓度瘦素对人肺腺癌A549细胞增殖影响,免疫组织化学法检测VEGF表达、Western blot 方法检测瘦素对p-ERK1/2、VEGF表达的影响。结果 在一定范围内,瘦素呈时间、剂量依赖性促进A549细胞的生长(P<0.05);与阴性对照组相比,不同浓度瘦素作用48h 后p-ERK1/2、VEGF 蛋白表达明显增加并具有剂量依赖性(P<0.05);p-ERK1/2和VEGF 之间呈正相关性(r=0.694,P<0.05)。结论 在体外瘦素对人肺腺癌A549 细胞有明显增殖作用,通过促进p ERK1/2和VEGF的表达,瘦素在促进肺癌血管的生长机制中可能具有一定作用。     

人参皂苷CK对人肺腺癌A549细胞株的增殖抑制作用及其机制

目的:探讨人参皂苷CK对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及其作用机制。方法:不同浓度的人参皂苷CK作用于人肺腺癌A549细胞株,MTT比色法测定细胞增殖抑制率;倒置显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡;ELISA法检测细胞内源性VEGF含量的变化。结果:人参皂苷CK对A549细胞增殖有抑制作用,其抑制作用呈浓度和时间依赖关系;倒置显微镜下可观察到细胞明显的形态学改变;流式细胞仪可检测到实验组细胞出现明显的凋亡峰,且细胞周期被阻滞在G0/G1期;实验组细胞培养液中的VEGF低于对照组(P＜0.05),且随着人参皂苷CK浓度增加和作用时间的延长,VEGF的含量降低(P＜0.05)。结论:人参皂苷CK可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并诱导其凋亡,并能抑制其内源性分泌VEGF。     

伊班膦酸钠治疗肺癌骨转移的临床研究

背景与目的: 骨骼是肺痛最常见的转移部位.骨转移的并发症如疼痛、功能障碍不仅会降低患者的生活质量,甚至会加快患者的死亡.基于上述情况,本文探讨伊班膦酸钠联合化疗治疗肺痛骨转移的临床作用.方法: 2006年6月-2007年6月共收治肿痛骨转移患者64例,随机分为两组:伊班膦酸钠联合化疗组和单纯化疗对照组.对比两组的疼痛缓解率、血清AKP、Ca2 和Scr的变化.结果: 研究组骨骼疼痛较对照组有明显缓解(有效率71.1%比42.3%)(P=0.006):研究组治疗后血清AKP和Ca<'2 >较治疗前有明显下降(P＜0.05);两组患者血清肌苷在治疗前后无明显改变(P＞0.05).结论: 伊班膦酸钠是安全、低毒性药物,其联合化疗有缓解肺癌骨转移疼痛和抑制骨转移的作用.     

唑来膦酸对LM8骨肉瘤细胞VEGF表达和分泌的影响

目的研究唑来膦酸对骨肉瘤LM8细胞株VEGF表达和分泌的影响。方法不同浓度的唑来膦酸处理LM8细胞,用RT-PCR法检测LM8细胞VEGFmRNA转录水平;免疫组化和ELISA法分别检测VEGF蛋白表达和分泌的水平。结果LM8细胞中均有VEGFmRNA转录,VEGF蛋白的表达和分泌;与对照组相比,唑来膦酸组(25μmol/L,50μmol/L)作用LM8细胞24h下调了VEGFmRNA转录,VEGF蛋白的表达和分泌,且对照组和各浓度组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论唑来膦酸可抑制骨肉瘤LM8细胞VEGF表达和分泌。     

Aurora A反义寡核苷酸对人肺癌细胞系A549细胞生长与细胞周期的影响

目的：探讨Aurora A基因表达的下调对肺癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法：用脂质体瞬时转染法介导Aurora A反义硫代磷酸寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotides,ASODN）处理肺腺癌A549细胞,RT-PCR及Western-blot方法检测Aurora A mRNA和蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期分布的变化,四氮唑盐法（MTT）检测转染前后细胞生长抑制率变化。结果：Aurora A反义寡核苷酸作用于A549细胞后,细胞的生长抑制率在一定范围内呈剂量和时间依赖性,其中48h的IC50值约为300nmol/L,在此浓度和时间下,Aurora A反义寡核苷酸可明显降低Aurora A mRNA和蛋白的表达,且细胞周期阻滞于G2/M期和S期。结论：下调Aurora A表达可抑制肺腺癌细胞系A549的增殖,同时导致细胞阻滞于G2/M期及S期。     

人肺癌A549细胞系肿瘤干细胞的筛选和鉴定

背景与目的肺癌干细胞是肺癌恶性表型的根源和潜在的治疗靶点,从人肺癌A549细胞株中分离肺癌干细胞,观察特异性干细胞标志物分子的表达,为进一步的干细胞研究提供试验基础。方法接种肺癌A549细胞株,经流式细胞术,特异性筛选分离肺癌干细胞,观察克隆形成能力、细胞增殖能力和体外致瘤能力的差别,并分别用RT-PCR和Westernblot的方法分析干细胞标志物分子CD133和ABCG2的表达。结果经过流式细胞仪成功分选了人肺腺癌A549细胞系SP细胞亚群,结果表明此SP细胞亚群约占A549细胞总数的5.93%,经维拉帕米处理后Hoechest33342阴性/弱阳性细胞含量下降为0.32%,SP细胞克隆形成能力,细胞增殖能力和体外致瘤能力均明显高于非SP细胞。RT-PCR和Westernblot结果发现,筛选分离的肺癌SP细胞群高表达干细胞标志物分子CD133和ABCG2。结论通过流式细胞术可以筛选分离高表达CD133和ABCG2分子的肺癌干细胞,可用于进一步的研究中。     

Gab2对人肺癌细胞A549侵袭能力影响及其机制的探讨

目的:探讨Grb2协同结合蛋白2(Grb2binding protein-2,Gab2)对人肺癌A549细胞体外迁移和侵袭的影响及其机制。方法:将质粒pGCsilencerU6/GFP/Neo-RNAi-Gab2#1、pGCsilencerU6/GFP/Neo-RNAi-Gab2#2和对照空载质粒转染到A549细胞中,建立Gab2低表达的siGab2/A549#1、siGab2/A549#2细胞和对照SCR/A549细胞。应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测小分子干扰RNA(siRNA)干扰Gab2表达后的基因和蛋白表达水平。趋化运动实验检测细胞的迁移能力;体外侵袭实验检测细胞的侵袭能力;蛋白质印迹法检测siRNA干扰Gab2表达后,A549细胞在胰岛素样生长因子-1(insulinlike growth factor-1,IGF-1)刺激下基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metal-loproteinase-9,MMP-9)的表达及磷酸化Akt(pAkt)、磷酸化人雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamy-cin,pmTOR)的活化情况。结果:siRNA干扰Gab2表达后,RT-PCR测定A549细胞Gab2mRNA相对表达量为1.340±0.009,Scr/A549细胞为1.201±0.074,siGab2#1/A549细胞为0.315±0.008,siGab2#2/A549细胞为0.289±0.007。蛋白印迹法检测A549细胞Gab2蛋白表达量为0.205±0.003,Scr/A549细胞为0.241±0.004,siGab2#1/A549细胞为0.128±0.002,siGab2#2/A549细胞为0.066±0.001。siGab2#2/A549细胞与A549细胞比较Gab2基因表达显著降低,t=168.032,P<0.001;Gab2蛋白表达也显著降低,t=64.352,P<0.001。siGab2#2/A549细胞的体外迁移和侵袭能力明显低于SCR/A549细胞,t值分别为5.101和10.812,P值分别为0.029和0.002。在IGF-1刺激下,siGab2/A549细胞的MMP-2、MMP-9蛋白的表达量不再有明显变化,t值分别为-2.051和-2.652,P值分别为0.054和0.064。siGab2/A549细胞中pAkt、pmTOR的活化也显著抑制。结论:Gab2可能通过调节Akt/mTOR信号通路,促进A549细胞的侵袭能力。     

TSA对肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的影响

目的：探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（trichostatin A，TSA）对A549肺腺癌细胞凋亡的影响。方法：Annexin V和Hoechst染色法检测细胞凋亡；流式细胞仪分析细胞周期；Western blot检测凋亡信号通路中caspas-8、caspase-9活化及多聚ADP核糖聚合酶（PARP）裂解情况。结果：TSA可诱导细胞凋亡，主要使细胞积聚在G2／M期，且呈浓度依赖性。Western blot检测表明TSA诱导了A549肺腺癌细胞caspase-8、caspase-9裂解活化及PARP裂解，且随TSA作用时间延长而逐步升高。结论：TSA诱导A549细胞凋亡中caspase-8、caspase-9介导caspas-3的活化，TSA通过caspase级联反应诱导A549细胞凋亡。     

伊班膦酸钠联合化疗对肺癌骨转移的临床疗效

目的观察伊班膦酸钠(艾本)联合化疗对肺癌骨转移的止痛效果和不良反应。方法将67例患者分为A、B两组,A组为伊班膦酸钠联合化疗组,B组为单用伊班膦酸钠组。结果A、B两组止痛有效率分别为79.4%和72.7%,差异无显著性(P>0.05)。结论伊班膦酸钠可与化疗联合应用治疗肺癌骨转移性疼痛,且安全有效。     

紫杉醇对人胰腺癌细胞株BxPC-3增殖抑制作用的研究

目的:通过体外实验探讨紫杉醇(paclitaxel,TAX)对人胰腺癌细胞株Bx-PC-3的增殖抑制作用。方法:人胰腺癌细胞株BxPC-3经过不同浓度的TAX作用不同时间后,在倒置显微镜下观察细胞形态学改变;用甲基噻唑基四唑试验(MTT)检测细胞抑制率;用流式细胞仪分析细胞周期变化。结果:TAX对人胰腺癌细胞株BxPC-3有明显的生长抑制作用,且呈剂量、时间依赖关系。流式细胞仪分析结果显示,BxPC-3细胞经过1000nmol/LTAX分别作用24和48h后,G2～M期细胞比例分别为(66.39±0.23)%和(48.49±1.47)%,明显高于对照组(8.67±2.32)%和(10.85±2.43)%,t值分别为49.41和26.49,P值均为0.000,提示存在G2～M期阻滞。结论:TAX可使人胰腺癌细胞株BxPC-3的生长受到抑制,BxPC-3细胞经过TAX作用后被阻滞于G2～M期。     

原花青素诱导人肺癌细胞A549凋亡作用研究

目的研究原花青素对人肺癌细胞株A549凋亡的影响并探讨其抗癌机制。方法以不同浓度的原花青素与人肺癌细胞株A549细胞共同培养,MTT法测定细胞增殖;Hoechst 33258/PI染色荧光显微镜下观察凋亡细胞形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳检测凋亡特异性梯状DNA条带;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3和Bcl-2表达的变化。结果原花青素可体外抑制肺癌A549细胞生长,抑制率呈浓度、时间依赖性,药物浓度达25 mg/L时作用48小时,A549细胞皱缩、细胞核碎裂成碎片,呈现典型凋亡改变;琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞典型的梯状DNA条带;Western blot检测结果显示,Caspase-9、Caspase-3蛋白表达量与药物浓度的增加呈增加趋势,Bcl-2与药物浓度呈负相关。结论原花青素能通过诱导细胞凋亡进而抑制人肺癌细胞增殖,其凋亡机制可能与线粒体通路有关。     

唑来膦酸对肺癌细胞生长抑制的观察及机制的初步研究

目的:研究唑来膦酸对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A-549生长抑制及诱导凋亡的作用。方法:用MTT法测定唑来膦酸、泰索帝及二药联合对肺癌细胞A-549的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率。结果:0·1~100μmol/L的唑来膦酸对肺癌细胞A-549均有抑制作用,首先表现为G1期阻滞,继而出现细胞凋亡,呈剂量、时间依赖性,并且与泰索帝联用可以提高细胞凋亡率。结论:唑来膦酸对肺癌细胞A-549具有明显抑制作用,且与泰索帝联用有协同作用,其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡来实现的。     

高温联合顺铂及多西他赛对肺腺癌A549细胞体外作用的研究

目的:研究高温联合顺铂(DDP)及多西他赛(TXT)对肺腺癌细胞株A549的体外作用.方法:不同处理因素作用于A549细胞后,应用四氮唑盐比色法(MTT法)测定细胞增殖情况,根据Veleriote法判断高温联合化疗药的作用效果;通过两药相互作用指数判断药物联合作用效果;流式细胞仪检测不同处理后细胞凋亡情况;光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态学变化.结果:高温和化疗药单独作用均对A549有生长抑制作用(P＜0.05);化疗药有剂量依赖关系;高温有温度依赖关系;高温与药物联合对细胞生长抑制作用强于单独高温组或单独化疗组(P＜0.01);DDP与高温联合为协同作用;TXT与高温联合为次加作用;DDP和TXT联合作用对细胞生长抑制为协同作用;42℃、DDP 2 μg/ml 和TXT 1μg/ml三者联合凋亡率明显高于其他处理组(P＜0.01);普通光镜和荧光显微镜下42℃、DDP 2 μg/ml 和TXT 1μg/ml三者联合凋亡细胞数较对照组和42℃组明显增多,细胞形态学变化明显.结论:DDP、TXT、高温三者体外联合作用对A549有明显的生长抑制和诱导凋亡作用.     

益生饮药物血清对A549人肺癌细胞株体外生长的影响

目的观察益生饮药物血清对A549人肺癌细胞株体外生长的影响。方法以不同浓度的益生饮药物血清培养人肺癌细胞A549,用MTT技术体外观察不同浓度益生饮药物血清对人肺癌细胞生长的影响。结果各组抑瘤率分别为：大剂量组41．18％,中剂量组33．16％,小剂量组25．67％,3种剂量组间差异显著（P〈0．01）。抑瘤率以大剂量组最高,为41．18％。结论益生饮药物血清对肺癌A549细胞体外生长有较好的抑制作用。     

高温联合顺铂及多西他赛对肺腺癌A549细胞体外作用的研究

目的：研究高温联合顺铂（DDP）及多西他赛（TXT）对肺腺癌细胞株A549的体外作用。方法：不同处理因素作用于A549细胞后,应用四氮唑盐比色法（MTT法）测定细胞增殖情况,根据Veleriote法判断高温联合化疗药的作用效果;通过两药相互作用指数判断药物联合作用效果;流式细胞仪检测不同处理后细胞凋亡情况;光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态学变化。结果：高温和化疗药单独作用均对A549有生长抑制作用（P〈0．05）;化疗药有剂量依赖关系;高温有温度依赖关系;高温与药物联合对细胞生长抑制作用强于单独高温组或单独化疗组（P〈0．01）;DDP与高温联合为协同作用;TXT与高温联合为次加作用;DDP和rr）（T联合作用对细胞生长抑制为协同作用;42℃、DDP2μg/ml和TXT1IXg／ml三者联合凋亡率明显高于其他处理组（P〈0．01）;普通光镜和荧光显微镜下42％、DDP2μg/ml和TXT1μg/ml三者联合凋亡细胞数较对照组和42℃组明显增多,细胞形态学变化明显。结论：DDP、TXT、高温三者体外联合作用对A549有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。     

托瑞米芬协同顺铂对人肺癌细胞株A549的影响

目的：研究托瑞米芬（TOR）对人肺腺癌细胞系A549的毒性作用及其与顺铂（DDP）联用的协同效应,探讨肺癌综合治疗的方向。方法：用MTT显色法检测TOR及与DDP联用后对A549细胞的毒性作用,测定其吸光度（A）值。用流式细胞仪检测细胞DNA含量,Western blot法检测p21蛋白表达。结果：TOR能直接抑制A549细胞的生长,≥5μmol/L的TOR可明显增强DDP的细胞毒性作用。TOR可加强DDP对S期、G2期及M期细胞的作用,且DDP＋TOR后p21蛋白表达增加。结论：≥5μmol/L的TOR与DDP联用对A549细胞具有显著的协同抗肿瘤效应。     

吉西他滨对非小细胞肺癌细胞放射增敏的实验研究

目的　研究低浓度吉西他滨对非小细胞肺癌细胞系A5 4 9(wtp5 3)的放射增敏作用、并探讨用药后最佳放射时间。方法　①以不同浓度的吉西他滨与A5 4 9细胞作用 2 4h ,MTT法选择生长抑制率≤ 10 %的药物浓度 (IC10 )。②将细胞分为对照组 (Ct)、单纯用药组 (Ch)、单纯照射组 (R1、R2 )、未弃药照射组 (CR)及弃药后照射组 (DCR1、DCR2 )。R1组行单纯60 Co2Gy照射 ;Ch组单纯用药 ;CR组及DCR1组均用IC10 浓度作用 2 4h ,CR组于 2 4h末、DCR1分别于弃药后 30min、1、3、6、12及 2 4h予60 Co2Gy照射。比较细胞存活分数 ,选择最佳弃药时间 (T)。③用IC10 药物浓度作用DCR2 2 4h ,于弃药后T时间经60 Co0 .5、1.0、2 .0、4 .0、6 .0、8.0Gy剂量照射 ,绘制细胞存活曲线 ;与R2 组 (同剂量单纯照射 )比较 ,计算增敏比 (D0 值比和Dq 值比 )。结果　IC10 浓度吉西他滨的放射增敏作用在弃药后 3h最为明显 [增敏比分别为 1.88(D0 值比 )、1.90 (Dq 值比 ) ];弃药 6h后与对照组比较差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;这种增敏作用在照射剂量较低时 ( 0 .5、1.0Gy)即已明显表现出来。结论　低浓度吉西他滨对离体非小细胞肺癌A5 4 9(wtp5 3)细胞系具有较好的放射增敏作用 ,且最佳照射时间为弃药后 3h。     

Klotho inhibits growth and promotes apoptosis in human lung cancer cell line A549

Background

Recently, the anti-tumor activity of N-myc downstream-regulated gene 2 (NDRG2) was shown decreased expression in clear cell renal cell carcinoma (CCRCC), but the role of the down-expression of NDRG2 has not been described.

Methods

The NDRG2 recombinant adenovirus plasmid was constructed. The proliferation rate and NDRG2 expression of cell infected with recombinant plasmid were mesured by MTT, Flow cytometry analysis and western blot.

Results

The CCRCC cell A-498 re-expressed NDRG2 when infected by NDRG2 recombinant adenovirus and significantly decreased the proliferation rate. Fluorescence activated cell sorter analysis showed that 25.00% of cells expressed NDRG2 were in S-phase compared to 40.67% of control cells, whereas 62.08% of cells expressed NDRG2 were in G1-phase compared to 54.39% of control cells (P < 0.05). In addition, there were much more apoptotic cells in NDRG2-expressing cells than in the controls (P < 0.05). Moreover, upregulation of NDRG2 protein was associated with a reduction in cyclin D1, cyclin E, whereas cyclinD2, cyclinD3 and cdk2 were not affected examined by western blot. Furthermore, we found that p53 could upregulate NDRG2 expression in A-498 cell.

Conclusions

We found that NDRG2 can inhibit the proliferation of the renal carcinoma cells and induce arrest at G1 phase. p53 can up-regulate the expression of NDRG2. Our results showed that NDRG2 may function as a tumor suppressor in CCRCC.     

腺病毒介导的FasL基因转移及对肺癌细胞生长和凋亡的影响

目的：探讨FasL基因对人肺癌的作用以及FasL基因治疗肺癌的可能性。方法：通过腺病毒载体介导FasL基因转移到低水平表达FasL的人肺腺癌细胞系A549,对FasL基因的表达、细胞生长的抑制和肿瘤生长模型的治疗效果进行分析。结果：外源性FasL基因在靶细胞高水平的表达显著抑制了A549的生长和集落形成，流式细胞仪检测显示细胞G1期阻滞并发生了凋亡。瘤内注射Ad-FasL对裸鼠体内移植瘤有一定的抑瘤作用。结论：FasL基因参与了肿瘤细胞凋亡的诱导，能抑制肺腺癌细胞的生长，因此本基础在肿瘤的基础治疗上有着广泛的应用前景。