CD40配体刺激人外周血来源B细胞的长期培养及增殖活化

目的 建立外周血来源B细胞体外长期培养体系,观察培养过程中B细胞的增殖活化及抗原提呈功能.方法 利用重组人可溶性CD40配体(sCD40L)刺激人外周血B细胞的长期培养过程中,流式细胞技术检测B细胞DNA周期及B细胞表面CD80、CD86、主要组织相容复合物(MHC)Ⅰ类及Ⅱ分子的表达状况;观察B细胞增殖情况及B细胞活化后表面分子的表达.采用乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)-异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗原多肽与B细胞共孵育,检测B细胞对抗原多肽的负载能力.结果 人外周血B细胞在sCD40L培养体系中可长期培养达50 d,在此期间,B细胞绝对计数增加近10倍,外周血B细胞比例由8.21%增高到70.67%,活化的B细胞高表达CD80、CD86、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ,并可负载HBV核心抗原肽.结论 sCD40L培养体系可在体外长期培养人外周血B细胞,并使B细胞增殖活化,具有抗原提呈细胞的特征.     

人类脐带血间充质干细胞的培养及鉴定

目的对人类脐带血中的有核细胞进行分离培养及鉴定,观察能否得到间充质干细胞。方法抽取人类脐带静脉血,进行细胞分离和培养,并进行荧光激活细胞分析。结果脐带血中间充质干细胞与骨髓中的类似,其外表呈纤维样;流式细胞术鉴定结果表明这种细胞能表达CD29、CD44、CD90、CD95、CD105、CD166以及MHCⅠ(组织相容性抗原复合体Ⅰ),但不能表达CD14、CD34、CD40、CD45、CD80、CD86、CD117、CD152以及MHCⅡ(组织相容性抗原复合体Ⅱ);并且具有分化成骨细胞和脂肪细胞的潜能。结论可以从人类脐带血中成功分离培养得到间充质干细胞。     

非小细胞肺癌DNA含量与CD44和Fas表达的相关性研究

目的　观察转移相关基因CD44和Fas蛋白在肺癌中的表达及与DNA含量的关系。方法　应用流式细胞术对 40例肺癌患者手术新鲜标本中CD44和Fas蛋白表达及DNA含量进行检则 ,并与正常对照组 (n =2 5 )和肺部良性病变组 (n =2 0 )进行对比研究。结果　肺癌组Fas表达低于正常对照组和肺部良性组 ,CD44表达和DI值高于正常对照组和肺部良性组 ,正常对照组中CD44和Fas表达及DI值与良性病变组相比差异均无显著性。Ⅰ +Ⅱ期肺癌组织中Fas的表达高于Ⅲ +Ⅳ期 ,Ⅰ +Ⅱ期CD44表达水平和DI值则低于Ⅲ +Ⅳ期 ,中高分化与低分化之间CD44、Fas表达和DI值差异有显著性 ,肺癌伴淋巴结转移者其CD44表达高于不伴淋巴结转移者 ,Fas表达和DI值与有无淋巴结转移无明显的相关性。随着肺癌细胞DI值不断升高 ,Fas表达逐渐降低 ,与DI值呈负相关 (r =-0 44 3 ,P <0 0 1) ;CD44表达则逐渐升高 ,呈正相关 (r =0 64 6,P <0 0 1)。在CD44、Fas ;表达及DI值与肺癌临床参数的研究中 ,发现CD44、Fas表达和DI值与患者的年龄、性别、肿瘤大小和病理类型均无明显的相关性。结论CD44、Fas表达及DNA含量在肺癌发生、发展和转移过程中起着共同调节作用 ,可作为预测肿瘤转移潜能的指标     

树突状细胞在细菌、原虫感染免疫中的作用

树突状细胞(DC)是专职抗原提呈细胞(APC)，广泛分布于全身各个组织器官。微生物感染机体后，不成熟DC经模式识别受体(如Toll样受体，TLR)识别微生物抗原并成熟，其吞噬活性下降，而细胞表面分子(如MHC．Ⅰ、Ⅱ类分子)、共刺激分子(CD40、CD80、CD86、CD54)、黏附分子以及细胞因子(IL-12、IL-10、IFN-α)表达增强，能有效地刺激初始性T细胞的     

树突状细胞在肿瘤免疫治疗中的应用

肿瘤的主动免疫治疗近年来一直是肿瘤治疗研究的热点。随着人们对免疫应答、T细胞活化机制认识的逐渐深入,抗原递呈细胞对肿瘤相关抗原(tumorassociatedantigenTAA)俘获、加工以及激活T细胞,从而启动抗肿瘤免疫反应越来越受到重视。树突状细胞(dendriticcellsDCs)起源于骨髓CD34 造血干细胞,是目前已知体内抗原递呈能力最强的抗原递呈细胞。它们特征性地高水平表达与抗原递呈有关的主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类和Ⅱ类分子,并高水平表达刺激分子CD80(B7 -1)、CD86(B7-2)、CD40、CD50等以及某些粘附分子,其本身也可以产生多种细胞因子如干扰素α(IFN -α)、白介素12(IL -12)、肿瘤坏死因子(TNF)等。DCs介导免疫反应的途径主要有:1.DC摄取、加工抗原,再转运至细胞内主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类和Ⅱ类分子富含区,形成MHC -肽复合体,在细胞表面表达并激活T细胞,CD8 细胞毒T细胞被MHC -Ⅰ类复合物分子激活,CD4 辅助T细胞被MHC -Ⅱ类复合物激活。2.DC可以自身分泌或诱导其他细胞分泌IL -12、白介素15(IL -15)等...     

老年慢性特发性血小板减少性紫癜患者淋巴细胞凋亡蛋白的表达

目的 从细胞凋亡的角度探讨老年慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)的发病机制。方法 用流式细胞仪检测了8例老年人慢性ITP患者治疗前后T淋巴细胞(CD3 )、B淋巴细胞(CD19 )Fas蛋白和Fas-L蛋白的表达。结果 治疗前T淋巴细胞的Fas蛋白表达明显低于正常(P<0.01),Fas-L蛋白表达明显高于正常(P<0.01);B淋巴细胞的Fas和Fas-L蛋白表达与正常对照相比差异无显著性意义。经治疗血小板恢复正常的患者T淋巴细胞的Fas蛋白表达上调和Fas-L蛋白表达下调,与治疗前相比差异有极显著性意义,与正常对照相比差异无显著性意义。结论 治疗前老年慢性ITP患者体内Fas/Fas-L途径介导的T淋巴细胞凋亡异常,经治疗后T淋巴细胞的Fas蛋白表达上调,有助于抗原活化的B淋巴细胞的凋亡。     

退变腰椎间盘组织中细胞凋亡及相关基因Fas和Fas-L表达的研究

目的:探讨细胞凋亡和凋亡相关基因Fas,Fas—L在腰椎间盘退变中的作用。方法:采用原位DNA片段末端标记和免疫组织化学方法,检测40例退变腰椎间盘组织及10例正常腰椎间盘组织细胞凋亡状态及凋亡相关基因Fas和Fas—L蛋白的表达。结果:40例退变腰椎间盘组织凋亡指数(AI)均值为70.51,Fas蛋白阳性细胞百分比为60.69％,Fas-L蛋白阳性细胞百分比为56.13％;10例正常腰椎间盘组织AI均值为20.02％,Fas蛋白阳性细胞百分比为10.02％,Fas-L蛋白阳性细胞百分比为10.45％。两组间AI均值、Fas蛋白表达及Fas—L蛋白表达差异均有显著性意义(P<0.05)。Fas和Fas—L表达越强,凋亡细胞数越多。结论:Fas,Fas-L蛋白均参与了腰椎间盘组织中细胞凋亡的调节,可能在腰椎间盘退行性变发生和发展中发挥重要作用。     

高能X线诱导胃癌种植瘤Fas表达上调及细胞凋亡的实验研究

目的　研究X线能否诱导胃癌细胞Fas表达及细胞凋亡变化 ,以了解胃癌中电离辐射、细胞凋亡及Fas表达之间的联系。方法　建立胃癌细胞系SGC - 790 1(低分化腺癌 )裸小鼠原位种植瘤模型 ;随机将 2 1只模型鼠分为未照射组和两个照射组 (每组 7只 ) ,对两个照射组行X线 (6MV ,2 0Gy)局部照射 ,分别于照射后 2 4、4 8h处死动物 ;采用免疫组化染色技术及TUNEL法 ,分别检测未照射组及照射组胃癌细胞的Fas表达状态及细胞凋亡的变化。结果　 (1)照射后 2 4h胃癌组织的凋亡指数 (AI)及Fas表达标记指数 (LI)明显高于未照射组 (P <0 .0 1) ;(2 )照射后 4 8h胃癌组织的AI及LI与未照射组比较 ,无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;(3)AI、LI变化趋同 ,具有正相关性(P <0 .0 1)。结论　胃癌组织存在凋亡受抑现象 ,X线能诱导胃癌细胞凋亡及Fas表达上调 ;且X线诱导胃癌细胞凋亡可能是X线诱导Fas表达上调的结果     

EGCG对人肺癌细胞NCI-H1975和NCI-H520细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系增殖凋亡、周期的作用机制.方法 对数生长期NSCLC细胞系NCI-H1975和NCI-H520,分为空白对照组(0 mol/LEGCG)和不同剂量(20、40、80、160、320 mol/L) EGCG组,分别处理作用24、48、72 h,CCK-8法检测细胞凋亡率;细胞流式细胞术检测细胞凋亡和周期;Western blot检测细胞周期、凋亡相关蛋白表达及NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路变化;细胞分为:Control siRNA组、EGFR siRNA组和EGFRsiRNA+EGCG组,采用siRNA转染技术,分析下调EGFR对NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路的影响.结果 分组的相应浓度EGCG组NCI-H1975和NCI-H520细胞的增殖显著降低(P＜0.05),同时G1/G0细胞比例增高,G1/S期细胞比例下降(P＜0.05),CyclinD1、CyclinE、CDK6蛋白表达降低(P＜0.05),但对CDK4无明显影响(P＞0.05),同时细胞凋亡增多,Cleaved caspase 3和Cleaved caspase 9蛋白表达上调(P＜0.05).P-P65、Bcl2、P-EGFR、P-AKT蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,但对P-ERK没有明显的影响.而EGCG+EGFR siRNA组,相比于EGFR siRNA组,明显降低各蛋白的表达,升高Bax蛋白(P＜0.05).结论 EGCG下调NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路抑制NCI-H1975和NCI-H520细胞增殖、促进凋亡,并阻断细胞周期.     

CD_(34)~+细胞Fas抗原表达与疾病相关性的研究进展

Fas抗原(又称为CD95或Apo-1)是一种肿瘤坏死因子受体,它可与配体或抗体交联后激发一种能够导致细胞凋亡的信号转导级联反应。在正常造血过程中,CD34+造血干细胞表面并不表达Fas抗原。大量国内外研究发现,当CD3+4细胞表面发生Fas抗原的异常表达时,则与许多造血和非造血疾病的发生、发展密切相关,本文就CD3+4细胞表面Fas抗原的表达与某些疾病相关性予以综述。     

CD40配体对套细胞淋巴瘤细胞系增殖的影响

套细胞淋巴瘤（MCL）是一种表达CD5的非霍奇金B细胞淋巴瘤,以中等大小B细胞侵入外套层为特征。CD40L与CD40间的相互作用对B细胞的增殖与分化有重要意义。对于不同阶段的B细胞,CD40L的刺激可产生抑制或诱导分化的作用。在本次研究中,利用SP49和SP53这两个套细胞淋巴瘤细胞系对CD40L反应作了研究。与表达CD40L的鼠淋巴细胞混合培养后,BrdU结合的SP49及SP53细胞减少了1/2～1/3,而BrdU结合的对照细胞系（包括Ramos,BJAB and BALL-1）无反应或增加。抗CD40L抗体在0～20 ng/ml时能封闭CD40L对SP49细胞增殖的抑制作用。这些结果提示CD40L在活体内可能对MCL增殖有抑制作用。     

CD40配体诱导小鼠B淋巴瘤细胞分化抑制因子3下调表达的研究

目的：研究CD40配体（CD40L）对小鼠未成熟B淋巴瘤细胞（WEHI-231细胞）分化抑制因子3（Id3）表达的影响。方法：用RT-PCR技术从WEHI-231细胞总RNA中扩增小鼠Id3（mid3）cDNA，将其亚克隆至p3FLAG-CMV-10载体；以p3FLAG-Id3-CMV-10为模板，用PCR扩增3FLAG—Id3融合基因，将其亚克隆至逆转录病毒载体pMX—CITE／IRES—EGFP中；通过脂质体转染技术将重组逆转录病毒载体（pMX-3FLAG—Id3-EGFP）转染Phoenix-ecotropic包装细胞系；将pMX-3FLAG-Id3-EGFP逆转录病毒转导WEHI-231细胞，转导48h后的WEHI-231细胞与CD40L／NIH333和NIH333细胞共培养24～48h。转导细胞经有限稀释法建立ndd3基因稳定转染细胞系。mlar3基因稳定转染细胞与CD40L／NIH333和NIH333细胞共培养24h后，用Western blot法检测3FLAG-mid3融合蛋白的表达。结果：pMX-3FLAG-Id3-EGFP转导WEHI-231细胞后，EGFP阳性细胞比例随时间呈下降趋势；单独用培养液培养或与NIH333细胞共培养的pMX-3FLAG-Id3-EGFP／WEH1-231细胞，24～48h后，EGFP阳性细胞率呈逐渐下降趋势；而与CD40L／NIH333细胞共培养的pMX-3FLAG-Id3-EGFP／WEHI231细胞，EGFP阳性细胞率基本保持不变。稳定表达3FLAG-Id3融合蛋白的WEHI-231细胞与CD40L／NIH313和NIH333细胞共培养24h后，Western blot结果显示，CD40L刺激可明显抑制3FLAG—Id3-EGFP／WEHI-231中Id3的表达。结论：CD40L可能通过对Id3的降解而缓解Id3诱导的细胞生长抑制作用。     

CD40信号对肺癌细胞化疗敏感性影响的实验研究

目的　观察激发CD4 0分子对肺癌细胞的化疗敏感性影响。方法　以肺癌细胞株A5 4 9和SPC A 1为研究对象 ,以可溶性CD4 0配体 (sCD4 0L)及激发型CD4 0单克隆抗体 5C11处理A5 4 9和SPC A 1细胞 ,采用四氮唑盐(MTT)比色法比较CD4 0激发前后化疗药物顺铂 (DDP)或丝裂霉素 (MMC)对细胞增殖的影响 ,免疫荧光标记和流式细胞术测定激发CD4 0分子前后化疗药物对肺癌细胞的杀伤作用。结果　激发CD4 0分子可增强DDP及MMC对CD4 0表达肺癌细胞株A5 4 9增殖的抑制率 (P <0 .0 5 )以及增强DDP及MMC对该细胞株的杀伤效应 (P <0 .0 5 ) ;而CD4 0不表达细胞株SPC A 1经sCD4 0L或 5C11处理不能产生类似的作用。结论　激发CD4 0信号可引起CD4 0表达肺癌细胞A5 4 9对化疗药物DDP及MMC的敏感性增加 ,可能在肺癌的治疗中具有潜在的应用价值。     

CD40、CD40L和sCD40在B细胞恶性血液肿瘤中的作用

CD40、CD40L和sCD40作为重要的信号分子,在诱导抗原呈递细胞、T细胞的活化与肿瘤免疫中发挥着重要作用.该文探讨这三种分子在急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤等疾病中的发病机制,以及多种CD40结合药物,如CD40L三聚体（CD40LT）、CD40单抗和CD40L阳性细胞目前作为免疫治疗药物在血液肿瘤治疗中的临床意义.     

协同刺激分子CD28/B7及CD40/CD40L在哮喘特异性免疫治疗中的作用

目的探讨协同刺激分子CD28／B7—1、CD28／B7—2及CD40／CD40L在哮喘发病中的作用及在特异性免疫治疗前后表达水平的变化。方法选择30例哮喘患者为实验组,30例健康人群为对照组。采用流式细胞仪方法比较两组间T、B淋巴细胞表面CD28／B7—1、B7—2及CD40／CD40L的表达及与血清总IgE水平的相关性,以及哮喘患者特异性免疫治疗前后T、B淋巴细胞表面CD28／B7—1、B7—2及CEl40／CEl40L的表达水平。结果与健康人群相比,哮喘患者CD28、CD40L、B7—2及CD40表达水平均增高。血清总IgE水平与T淋巴细胞表达CD40L水平呈正相关。特异性免疫治疗6个月后,哮喘患者T、B淋巴细胞表达的CD28／B7—2及CD40／CD40L水平均有所下调,但均未达正常水平。结论协同刺激分子CD28／B7—2及CD40／CD40L表达水平的上调在哮喘发病中可能起重要作用,特异性免疫治疗能下调哮喘患者CD28／B7-2及CD40／CD40L的表达水平,并可能由此间接下调血清总IgE水平,起到相应的治疗作用。     

系统性红斑狼疮患者Fas和CD40L表达的初步研究

目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者凋亡调节蛋白受体Fas及共刺激分子CD40L的表达情况及其相互之间的调节。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测SLE患者和正常人血清sFas和sCD40L的水平并分析两者之间的相关性;同时分离10例SLE患者和10例正常对照的外周血淋巴细胞：①将细胞培养48 h后,采用流式细胞仪检测T细胞亚群表面Fas及CD40L的表达情况;②在培养过程中分别加入抗FasL抗体阻断Fas信号及抗CD40L抗体阻断CD40L信号后,观察T细胞亚群表面CD40L及Fas的表达。结果①SLE患者血清sFas和sCD40L平均水平分别为4.18μg/L和5.87μg/L,显著高于正常对照组2.27μg/L和2.31μg/L,且SLE患者血清sFas活动期高于稳定期（P〈0.01或P〈0.05）;sFas、sCD40L水平与SLEDAI（疾病活动指数）之间存在一定的正相关性（r=0.688,r=0.253,P均〈0.05）,但sFas与sCD40L水平之间未显示明显相关（r=0.201,P〉0.05）。②经细胞培养后,SLE患者CD4（＋）和CD8（＋）T细胞表面Fas表达增加,与正常对照组比较,差异有显著性（P〈0.01或P〈0.05）;SLE患者CD4（＋）和CD8（＋）T细胞表面CD40L表达增加,与正常对照组比较,差异有显著性（P均〈0.05）。③SLE患者CD4（＋）及CD8（＋）T细胞上Fas与CD40L表达均呈正相关关系（r=0.311和r=0.517,P均〈0.05）。④加入抗FasL抗体阻断后,CD4（＋）和CD8（＋）T细胞表面CD40L表达下降,与阻断前比较,差异有显著性（P〈0.05）;加入抗CD40L抗体阻断后,CD4（＋）和CD8（＋）T细胞表面Fas表达与阻断前比较差异无显著性（P〉0.05）。结论SLE患者血清sFas和sCD40L水平升高且呈正相关关系;T细胞亚群表面Fas及CD40L高表达且呈正相关关系;T细胞上Fas的表达调控CD40L的表达。说明凋亡调节蛋白Fas及共刺激分子CD40L可能共同参与SLE的发病过程。     

CD_(40)在胃癌中的研究进展

CD40是肿瘤坏死因子受体超家族成员之一,与其配体CD40L结合,参与细胞免疫及体液免疫,而且还可起到直接的治疗作用。CD40在胃癌患者中也有不同程度的表达,与胃癌的侵袭、转移等生物学行为相关,参与胃癌的发生发展。CD40信号的激发能增加胃癌细胞株对化疗的敏感性,甚至促进其凋亡。鉴于此,人们基于CD40的肿瘤疫苗、单克隆抗体、小分子化合物等胃癌生物治疗手段开展了广泛研究。     

非诺贝特对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞CD40表达和基质金属蛋白酶活性的抑制作用

目的研究非诺贝特对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)CD40表达和基质金属蛋白酶(MMP)活性的作用。方法应用RT-PCR和流式细胞仪分别检测非诺贝特对TNF-α诱导的HUVECs的CD40mRNA和细胞表面CD40表达的影响;用明胶酶谱法测定TNF-α对HUVECs的MMP-2、MMP-9活性的影响以及非诺贝特对它们的作用。结果非诺贝特在5×10-5,1×10-4和2×10-4mol/L的浓度范围内能显著降低CD40mRNA和细胞表面CD40的表达(P<0.01),以1×10-4mol/L的非诺贝特的效果最为明显;浓度为2×10-4mol/L时,非诺贝特并没有进一步降低CD40mRNA和细胞表面CD40的表达。非诺贝特能抑制TNF-α诱导的HUVECs中MMP-2和MMP-9活性的增加。结论非诺贝特能降低TNF-α诱导的HUVECs的CD40表达,并且能抑制TNF-α诱导的HUVECs中MMP-2和MMP-9活性的增加。     

CD_(40)/CD_(40)L与冠状动脉粥样硬化性心脏病的研究进展

随着对CD40/CD40L及可溶性CD40L生物学功能的了解,近年来人们逐渐认识到CD40/CD40L在动脉粥样硬化形成及斑块破裂中的重要作用,阻断CD40/CD40L信号转导对防治冠状动脉粥样硬化性心脏病具有重要的理论和实用价值。本文综述CD40/CD40L与冠状动脉粥样硬化性心脏病及其防治的相关研究进展。     

细胞因子对人单核/巨噬细胞表达CD40和CD40L的影响

目的：探讨细胞因子在γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF）和白介素-1（IL-1）对人单核/巨噬细胞表达CD40和CD40L的影响。方法：应用RT-PCR方法半定量测定CD40和CD40LmRNA含量,流式细胞技术检测细胞表面CD40和CD40L表达水平。结果：IFN-γ,TNF和IL-1既增加CD40和CD40LmRNA表达,又能诱导单核/巨噬细胞表面CD40和CD40L高表达,而抗氧化剂VitE能下调细胞因子引起的CD40和CD40L表达,但作用不完全,结论：细胞因子（IFN-γ,TNF和IL-1）能刺激单核/巨噬细胞高表达CD40和CD40L,这种作用可被VitE部分抑制。