抗人滋养细胞单克隆抗体的制备及其免疫生物学特性鉴定

研制抗人滋养细胞单克隆抗体并分析其免疫生物学特性。方法采用滋养细胞免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠;用细胞ＥＬＩＳＡ法鉴定ｍＡｂ的特异性;用补体依赖的溶细胞作用测定ｍＡｂ的细胞毒性。结论利用细胞免疫法所获该组ｍＡｂ所针对的抗原表位,可能是诱发免疫性流产的滋养细胞膜特异性抗原。     

抗环孢菌素A单克隆抗体的制备和特性鉴定

目的:制备环孢菌素A(CsA)的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:采用光化学反应制备CsA全抗原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法克隆,以ELISA法对杂交瘤细胞的稳定性和mAb的特性进行鉴定。结果:获得1株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞4E1-C4-E12,细胞培养上清效价、腹水效价分别为1∶200和1∶105,为IgG1类,可特异性识别CsA,与其类似物CsC、CsD交叉反应率为13.3%、21.5%。结论:成功地制备了针对CsA的mAb,为进一步研制检测CsA的ELISA试剂盒奠定基础。     

抗人Fas单克隆抗体的制备及鉴定

Ｆａｓ／Ａｐｏ１／ＣＤ９５抗原的发现,始于对两株单克隆抗体（ｍＡｂ）的功能观察,即抗Ａｐｏ１ｍＡｂ和抗ＦａｓｍＡｂ〔１,２〕。由于二者都能识别细胞膜上ＣＤ９５蛋白抗原,且能诱导敏感细胞凋亡,才导致今天对Ｆａｓ抗原的生物医学研究。制备抗ＦａｓｍＡｂ对于Ｆａｓ抗原的深入研究,尤其是对Ｆａｓ抗原信号传导机制的阐明,以及生物医学应用都有重要的意义。本文利用Ｆａｓ＋的细胞作为免疫原,制备了１株鼠抗人ＦａｓｍＡｂ２Ａ１。１材料和方法１．１材料１．１．１细胞系Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞、Ｊｕｒｋａｔ人Ｔ淋巴…     

抗PAA合成肽单克隆抗体的制备与鉴定

抗ＰＡＡ合成肽单克隆抗体的制备与鉴定王振明吴轰（湖南医科大学附属第二医院中心实验室，长沙４１００１１）ＴＡＮＧＨｏｎｇ，ＪｉｎＳａｎ（ＺｙｍｅｄＬａｂ．ＩＮＣ，ｓｏｕｔｈｓａｎｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ９４０８０，ＵＳＡ）以组织病理形态学法，检测肿...     

抗rhNDPK-A单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。 方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb的特异性 ;间接ELISA检测mAb的腹水效价、亲和常数 ,并进行表位分析。结果 :获得 6株可分泌特异性mAb的抗rhNDPK A的杂交瘤细胞系 2D9、8C7、13E2、15D9、15E3和 2 0D9,Ig亚类均为IgG1;其效价为 1× 10 -4～5× 10 -6;亲和常数为 4 .5× 10 -9～ 2 .8× 10 -10 mol/L ;共有3个抗原表位。结论 :获得抗rhNDPK A的mAb ,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件     

抗豌豆白蛋白1b单克隆抗体的制备与特性鉴定

豌豆白蛋白1b(peaalbumin1b,PA1b)最初从豌豆种子中分离获得[1],后来从大豆中也分离到其同源物-豆类胰岛素[2],二者均为含37个氨基酸的单链肽,第3、7、15、20、22、32位的氨基酸均为半胱氨酸。其三级结构也已研究清楚,属于富含半胱氨酸的肽类家族,因其具有潜在的新型抗生素特性和抗艾兹病毒特性而备受关注[3]。PA1b在牛胃液中能够保持完整的结构[4],水煮后仍能够保持其生物学活性[5]。是一种可杀灭谷类象鼻虫,对人和环境没有危害的昆虫毒剂。也能促进细胞的分裂[6],对损伤组织的生长具有明显的促进作用。豆类胰岛素是一种7S的碱性球蛋白(b…     

抗破伤风类毒素单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗破伤风类毒素单克隆抗体,并对其进行鉴定.方法:用破伤风类毒素免疫BALB/c小鼠,经细胞融合及筛选,将阳性杂交瘤细胞株扩大培养后免疫BALB/c小鼠,收获的腹水用Protein G柱纯化;对获得的单克隆抗体进行鉴定,对杂交瘤细胞株进行稳定性检测.结果:筛选出5株稳定分泌抗破伤风类毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株...     

抗HBeAg单克隆抗体的制备及初步鉴定

为获得能替代抗ＨＢｅＡｇ多克隆酶标记抗体做ＥＬＩＳＡ，我们用纯化的ＨＢｅＡｇ阳性血清，免疫Ｂａ１ｂ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术，获得８株能稳定分泌小鼠抗ＨＢｅＡｇｍＡｂ的杂交瘤细胞。对其特性进行了初步鉴定，并就这些单克隆抗体（ｍＡｂ）在ＥＬＩＳＡ反应中的特性进行了分析。１　材料和方法１－１　材料　ｅ抗原阳性的人血清经亲和层析纯化的ＨＢｅＡｇ，由本室收集并纯化。Ｂａ１ｂ／ｃ小鼠，购自上海西普尔－必凯实验动物有限公司。小鼠Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞，由中国科学院上海细胞生物学研究所提供。１－２　杂交瘤细胞株的…     

抗GST单克隆抗体的制备和鉴定

ＰＧＥＸ4Ｔ是原核表达系统中常用的表达载体,其表达产物为目的蛋白(肽段)与谷胱甘肽转硫酶(ＧＳＴ)所形成的融合蛋白。本文制备了抗ＧＳＴ的单克隆抗体(ｍＡｂ),为上述融合蛋白的辅助检测、鉴定和纯化奠定了基础。1　材料和方法11　ＧＳＴ抗原　利用基因重组技术制备的Ｇ...     

抗重组人血管生长素单克隆抗体的制备及鉴定

制备不同类型抗重组人血管生长素的单克隆抗体,为进一步研究抗ｒｈＡＮＧ抗体对ＡＮＧ的中和作用以及对ＡＮＧ依赖型肿瘤的抑瘤实验打下基础。方法：利用杂交瘤技术以ｒｈＡＮＧ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,制备二株,能够稳定分泌抗ｒｈＡＮＧ抗体的杂交,并对上清进行、双扩散,免疫印迹等鉴定。     

抗早孕因子单克隆抗体的制备与鉴定

目的建立分泌抗EPF(Early pregnancy factor,早孕因子)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化单抗并鉴定.方法用本实验室已纯化的早孕和肿瘤源性EPF作为抗原刺激Balb/c小鼠,用免疫后的小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞(NS-1)融合,经4次克隆化,获得可稳定分泌抗EPF单克隆抗体的细胞株,注入Balb/c小鼠腹腔制备腹水型单抗,Protein-A亲和层析纯化,SDS电泳和Western-blot等方法分析纯化结果.结果融合后获得一株稳定分泌抗EPF抗体的细胞株(C3D11),克隆化后,获得稳定分泌抗EPF单克隆抗体的细胞株,将增殖后的细胞注射Balb/c小鼠腹腔获得腹水型单抗,以亲和层析法纯化,SDS-PAGE分析显示纯化后去掉了大部分杂蛋白,免疫印迹分析抗体纯度较高,与抗原匹配性良好.结论本研究制备的EPF单克隆抗体为特异性抗EPF抗体.     

高亲和力抗IBDV单克隆抗体的产生与免疫学鉴定

目的：生产高亲和力的抗ＩＢＤＶ不同抗原决定簇的单克隆抗体,为ＩＢＤ的快速检测准备试剂。方法：用ＩＢＤＶ抗原诱导Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生最强最适当的反应,将免疫脾细胞与ＮＳＯ瘤细胞融合,通过对大量的杂交细胞培养上清进行检测和鉴定,筛选出分泌高亲和力单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果：获得分泌高亲和力单克隆抗体的杂交瘤２１株,其中４株ＹＮＺ－１、ＹＮＺ－１２、ＹＮＺ－１８和ＹＮＺ－２６的间接ＥＬＩＳＡ效价分别为     

雪卡毒素单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备雪卡毒素的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以雪卡毒素类似物莫能菌素为半抗原,分别采用混合酸酐法将其与载体牛血清白蛋白(BSA)偶联合成免疫抗原M-BSA,碳二亚胺法与卵清白蛋白(OVA)偶联合成包被抗原M-OVA。以M-BSA免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤。以自制雪卡毒素提取物为竞争抗原,间接竞争ELISA法筛选稳定分泌雪卡毒素抗体的特异性细胞株。小鼠体内诱生腹水,辛酸硫酸铵沉淀法进行纯化。采用抗体亚型鉴定试剂盒鉴定所得抗体的亚型,间接竞争ELISA法鉴定抗体的特异性和交叉性。结果获得3株稳定分泌抗雪卡毒素抗体的杂交瘤细胞株1D5、2G11、3G11,其Ig亚型均属于IgG1亚型。交叉反应结果表明3株单克隆细胞产生的抗体除与莫能菌素有较高的交叉反应外,与其他雪卡毒素类似物均无明显交叉反应。结论成功筛选到了分泌雪卡毒素抗体的细胞株,为雪卡毒素免疫分析方法的进一步研究奠定基础。     

C-myc单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备与鉴定鼠抗C-myc蛋白单克隆抗体。方法利用C-myc蛋白做免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA法筛选、有限稀释法克隆、单克隆抗体Ig亚型鉴定,获得2株能够稳定分泌抗C-myc特异性抗体的杂交瘤细胞株,再将杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔诱使小鼠产生腹水。结果获得2株可稳定分泌抗C-myc抗体的杂交瘤细胞株,命名为SHH-1H11,SHH-2A9,Ig亚型分别为IgG1亚类和IgM。细胞培养上清效价分别为1:10240、1:5 120;小鼠腹水效价分别为1:64 000、1:32 000。结论制备的C-myc单克隆抗体仅与C-myc蛋白反应,与其他蛋白没有交叉反应,表明获得的单克隆抗体的特异性很高。     

阻断型抗人IgE单克隆抗体的制备及其表位分析

目的 利用基因重组抗原免疫小鼠,制备抗人IgE单克隆抗体,研究其特异性和功能.方法 用表达的重组人IgE-Fc免疫BLAB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,以间接ELISA法筛选杂交瘤上清.用ELISA阻断分析鉴定其生物学功能;通过丙氨酸突变扫描分析确定其抗原表位.结果 利用杂交瘤技术获得了1株抗人IgE的单克隆抗体178,它具有IgE抗体特异性反应,其识别的抗原表位位于IgE与其受体结合的关键部位.经鉴定其具有体外阻断IgE与其受体结合的活性.结论 利用基因重组抗原制备了1株抗人IgE的单克隆抗体178,此单克隆抗体具有体外阻断IgE与其受体结合的生物活性.     

杀虫剂西维因单克隆抗体的研制及鉴定

目的 制备特异性的西维因单克隆抗体。方法 合成了西维因的半抗原并对其进行了结构鉴定，将半抗原与牛血清白蛋白和卵清蛋白共价偶联分别制备免疫抗原和包被抗原。再将免疫的Balb／c小鼠脾脏细胞与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞融合，建立一株分泌西维因单克隆抗体的杂交瘤细胞。分析该杂交瘤细胞的染色体，并以间接酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测了单克隆抗体免疫球蛋白的类型及其与西维因的亲和性和特异性。结果 杂交瘤细胞的平均染色体数目为98条，它分泌IgG1亚类的单克隆抗体；该单克隆抗体与西维因的亲和性较高(IC50=52ng，mL)而与西维因结构类似物的交叉反应很小。结论 本实验成功的制备了西维因特异性的单克隆抗体，为其ELISA方法的建立提供了条件。     

抗鸡蛋卵类黏蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定鼠抗鸡蛋主要过敏原卵类黏蛋白的单克隆抗体。方法利用鸡蛋卵类黏蛋白(ovm)为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。采用半固体培养基法和有限稀释法相结合的方法快速筛选获得稳定分泌的特异性杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。利用双抗体夹心ELISA法检测食品中的鸡蛋过敏原。结果获得4株可稳定分泌鼠抗卵类黏蛋白的单克隆抗体,分别命名为1G8,2H5,3A7,4G4,其Ig亚型均为IgG1。且4株单抗效价均在10-8以上。ELISA和Western blotting分析表明该4株单抗均能特异性识别卵类黏蛋白,并且建立双抗体夹心ELISA的方法可以准确的检测出食品中鸡蛋过敏原的存在。结论成功制备了4株高效价的鼠抗卵类黏蛋白的单克隆抗体,为建立卵类黏蛋白检测及纯化方法奠定了基础,也可为食品中鸡蛋过敏原的检出提供依据。     

猪胸膜肺炎放线杆菌单克隆抗体的制备与鉴定

目的：建立抗血清1型猪胸膜肺炎放线杆菌（APP-1）脂多糖（LPS）的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后建立该菌的分型诊断技术奠定基础。方法：腹腔注射APP-1标准株的甲醛固定抗原免疫BALB/c小鼠,ELISA检测血清中LPS抗体滴度并选择值最高的小鼠用于细胞融合,且于融合前3天加强免疫1次。常规方法进行融合,HT、HAT培养液选择培养融合后的细胞,ELISA检测细胞培养上清中的LPS抗体,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法克隆传代。结果：获得3株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其小鼠腹水单克隆抗体效价1∶16000～1∶32000。结论：已成功建立3株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其产生的单克隆抗体与呼吸道其它常见致病菌及APP-3,5,7,9,型无交叉反应。     

抗博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备并鉴定鼠抗博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体。方法重组核蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤并进行有限稀释法克隆和亚克隆,建立分泌抗核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化单克隆抗体并进行效价测定和特异性鉴定。结果建立了1株能稳定分泌抗核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2F6E8,重链为IgG2a,轻链为κ。ELISA法测得腹水的效价高达1∶32 000以上。Western-blot和间接免疫荧光实验证实该单克隆抗体能特异性结合重组核蛋白及天然核蛋白。结论成功制备了效价高、特异性好的抗核蛋白单克隆抗体,为建立博尔纳病病毒血清免疫学检测方法奠定了基础。