氧反常心肌线粒体呼吸功能变化及丹参酮Ⅱ_A磺酸钠的影响

健康雄性新西兰家兔28只,随机分为四组:正常对照组,缺氧组、氧反常组、DS-201氧反常组。离体心脏灌流造成心肌缺氧、氧反常模型。分离心肌线粒体,分光光度法测定线粒体内膜呼吸酶——琥珀酸脱氢酶(SDH)和细胞色素氧化酶(CCO)活力;氧电极法测定线粒体呼吸耗氧量,呼吸底物分别采用谷氨酸加苹果酸或琥珀酸。     

呼吸链的电子漏路径和线粒体的超氧自由基代谢及其生物学意义

吸入机体的氧气 90 %以上在线粒体中被还原 ,呼吸链是执行这一功能的实体。呼吸链如同一条电子传递链 ,它的底物端有两个脱氢酶直接氧化三羧循环中的底物并将电子经泛醌传递给细胞色素链 ,细胞色素链的氧端是细胞色素氧化酶 ,它直接催化还原氧成水的反应。呼吸链电子传递还原氧的过程与ＡＴＰ酶催化ＡＤＰ +Ｐ→ＡＴＰ的过程相偶联共同完成线粒体合成ＡＴＰ的能量代谢 ,这是近半个世纪以来生物能力学研究的主题。近年来人们发现呼吸链传递电子并不像是一条绝缘很好的导线 ,而是在呼吸链的底物端 (泛醌区 )和氧端 (细胞色素ｃ)都有漏电现象。…     

硫化氢对线粒体损伤后氧化呼吸链影响的研究进展

探讨硫化氢对线粒体损伤后氧化呼吸链的影响。已有研究证实,硫化氢在线粒体损伤后有保护氧化呼吸链,稳定细胞色素C氧化酶活性及氧化磷酸化反应的作用,进而保证ATP的生成。通过对比国内相关研究,就硫化氢对线粒体损伤后氧化呼吸链的影响,归纳其作用机制,为今后硫化氢的进一步研究提供相关的理论基础。     

细胞色素氧化酶的DAB法与Nadi反应的比较

细胞色素氧化酶存在于细胞线粒体的内膜上 ,是电子传递链中的酶 ,它的活性往往作为细胞内氧化代谢的指标 ,也是线粒体的标志酶之一[1] 。早期常用经典的Ｎａｄｉ反应即吲哚酚蓝法显示细胞色素氧化酶 ,现在广泛使用ＤＡＢ法。这两种方法的特异性如何 ,有何优劣 ,未见有详细的报道 ,因此 ,我们进行了两种方法的比较研究。1　材料和方法选用Ｗｉｓｔａｒ大鼠 1只 ,用乙醚麻醉后断头处死 ,取心、肝、肾组织用液氮骤冷 ,做恒冷箱切片 ,切片厚 7μｍ ,分别进行Ｎａｄｉ反应和ＤＡＢ法显示细胞色素氧化酶 ,并做对照切片 ,同时做ＨＥ染色以观察组织…     

重新评价细胞色素C在细胞死亡中的作用

大部分调控细胞死亡的蛋白都有一个与细胞死亡不相关的重要功能，细胞色素c也不例外。在正常细胞中，细胞色素c是唯一位于线粒体膜间隙，并与线粒体内膜松弛结合的正铁血红蛋白，在氧化呼吸链复合物Ⅲ和Ⅳ之间发挥传递电子作用。当细胞凋亡时，细胞色素C的亚细胞定位和功能完全改变。     

糖尿病胃轻瘫大鼠胃肠道线粒体DNA COX基因及表达变化的意义

目的　研究糖尿病胃轻瘫大鼠胃肠道线粒体DNA细胞色素氧化酶基因及蛋白表达变化及对酶功能的影响。方法　Wistar大鼠 6 0只 ,随机分为胃轻瘫组(链脲菌素 6 0mg Kg ,腹腔注射 ) ,对照组 (腹腔注射等量的生理盐水 ) ,2月后通过记录胃电活动及胃排空和肠道传输速度 ,确定胃轻瘫模型成立。免疫组化、电镜观察Cajal间质细胞分布及超微结构变化 ,采用RT PCR法检测胃肠道mtDNACOXI、COXIImR NA的表达变化 ,采用Westernblot法检测胃肠道线粒体COXI、COXII蛋白的表达变化 ,紫外分光光度法测定COX活性。结果　胃轻瘫组胃肠道组织 5分…     

高脂血症小鼠脑缺血再灌注后脑组织线粒体功能降低

脑缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)损伤与细胞能量代谢障碍密切相关,细胞内线粒体酶是保证细胞产生ATP的重要因素。线粒体酶活性下降可直接干扰细胞呼吸链的电子传递,阻碍三羧酸循环的进程,影响细胞能量代谢。本实验观察了高脂血症小鼠脑IR后30 d内不同时期脑海马组织琥珀酸脱氢酶(SDH)和细胞色素氧化酶(CCO)活力以及线粒体ATP合成速率的变化,旨在探讨能量代谢障碍在脑IR损伤中所起的作用。1材料与方法1·1仪器和试剂:日本产UV-120-C2型分光光度计,美国产Waters-840型高效液相色谱仪。SDH、CCO活力测定试剂盒、ATP生成速…     

COX6c在疾病中差异表达及临床意义的研究进展

细胞色素c氧化酶(COX)是线粒体电子传递链的终末酶复合物,它在细胞的氧化磷酸化过程中起到了非常重要的调节作用。COX由13个亚基组成,其中细胞色素c氧化酶亚基6c(COX6c)是由细胞核基因组编码在核糖体中翻译后经过不同途径转运至线粒体最终形成COX复合体。近年来许多研究发现COX6c在家族性高胆固醇血症、慢性肾脏疾病、糖尿病、乳腺癌、前列腺癌、子宫平滑肌瘤、滤泡性甲状腺癌等多种疾病出现表达异常。其机制可能与组织损伤性疾病中细胞的氧化磷酸化途径有关。文章对COX6c在非肿瘤损伤性疾病和损伤性疾病中的表达差异分别作一综述。     

丹参对失血性休克大鼠心肌线粒体内膜损伤的治疗作用

本文研究了出血性休克时鼠心肌线粒体内膜呼吸链电子传递的变化和丹参注射液的灌注治疗。失血性休克４ｈ时，鼠心肌线粒体ＮＡＤＨ呼吸链和琥珀酸呼吸链电子传递活性明显下降。丹参治疗能明显改善鼠心肌线粒体二条呼吸链的电子传递活性：ＮＡＤＨ－Ｃｏ．Ｑ还原酶，ＮＡＤＨ－Ｃｙｔ．Ｃ还原酶，琥珀酸－Ｃｙｔ．Ｃ还原酶和细胞色素氧化酶活性皆恢复至假处理组水平的９０％以上，琥珀酸－Ｃｏ．Ｑ还原酶也明显恢复，上述酶皆与假处理     

细胞色素P-450混合功能氧化酶系统

前言细胞色素P-450酶系是位于细胞中内质网膜上的一种氧化酶系,其组成中有细胞色素P-450,后者的结构与血红蛋白相似,具有以Fe为中心的血红素,酶系中的其他酶则以黄素为其辅基。细胞色素P-450的功能与线粒体内膜上的细咆色素氧化酶相近,此氧化     

氧化呼吸链在精子运动中的作用研究

目的 探讨精子运动的能量供应机制。方法 采用计算机辅助精子分析（ＣＡＳＡ）和组织化学、生物化学方法,检测人精子用氧化呼吸链阻断剂ＫＣＮ卵育前后,运动状态和细胞色素氧化酶活性。结果 用ＫＣＮ孵育后精子细胞色素氧化酶活性被完全阻断。然而,精子运动速度参数和运动状态参数无显著改变。结论 在氧化呼吸链阻断后,精子仍能维持基本正常地运动,表明精子运动的供能尚有其他来源。     

HBV X基因对成人肝细胞HL-7702线粒体功能的影响

目的:研究HBV X基因与线粒体COXⅢ基因相互作用以及对线粒体功能的影响. 方法:将HBV X基因真核表达载体pCDNA3-X及空载体pCDNA3转染成人肝细胞HL-7702细胞, 经过2周G418筛选, 获得稳定表达的新细胞株, 分别命名为HL-7702/HBx和H-7702/pcDNA3, RT-PCR和Western blot方法证实HBV X基因在HL-7702/HBx细胞内的稳定表达.抽提细胞总RNA进行半定量RT-PCR及分离细胞线粒体进行Western blot检测COX Ⅲ表达水平变化, 并通过酶动力学方法检测线粒体细胞色素氧化酶活性.结果:重组质粒pcDNA3-X转染后经G418筛选, RT-PCR和Western blot分析结果显示HL-7702-HBx细胞能够稳定表达HBV X基因.RT-PCR和Western blot结果发现HBV X基因下调COX Ⅲ蛋白表达而不影响mRNA水平表达.酶动力学检测发现线粒体细胞色素C氧化酶活性降低.结论:HBV X基因通过转录后水平调节COX Ⅲ表达, HBx通过与COXⅢ相互作用抑制线粒体细胞色素氧化酶活性.     

中药乳浆大戟抑制人胃癌多药耐药细胞增殖迁移侵袭和诱导凋亡的研究

本文旨在研究中药乳浆大戟抑制多药耐药人胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用,以及诱导细胞凋亡的作用及其作用通路。用不同浓度的乳浆大戟提取液处理人胃癌多药耐药SGC7901/ADR细胞,MTT试验观察细胞增殖抑制情况,Hochest33528染色荧光显微镜观察凋亡细胞核形态并测定凋亡指数,流式细胞术测定细胞凋亡率,Transwell法检测细胞迁移能力和侵袭能力,分光光度法检测caspase-3和caspase-9的酶活性表达,Western blotting检测细胞色素c的亚细胞分布。结果发现,乳浆大戟提取液对人胃癌多药耐药SGC7901/ADR细胞有明显的增殖抑制作用,该作用具有时间和浓度依赖性。乳浆大戟提取液处理的人胃癌多药耐药SGC7901/ADR细胞,凋亡指数和凋亡率均比对照组显著升高,并有时间和剂量依赖性;但添加了caspase酶抑制剂的细胞,凋亡指数没有明显上升。Transwell法检测显示,乳浆大戟提取液处理后的SGC7901/ADR细胞,迁移能力和侵袭能力显著下降。分光光度法检测发现,乳浆大戟提取液处理后的SGC7901/ADR细胞中,caspase-3和caspase-9表达均增加,与对照组有明显差异。Western blotting检测显示,细胞色素c在线粒体中的分布下降,在细胞质中的分布上升(即细胞色素c从线粒体向细胞质逸出)。研究表明,乳浆大戟提取液具有抑制人胃癌多药耐药SGC7901/ADR细胞增殖、抑制细胞迁移侵袭和诱导细胞凋亡的作用;乳浆大戟提取液诱导细胞凋亡的作用有细胞色素c、caspase-9和caspase-3的参与,提示内源性或线粒体凋亡通路。     

脑缺血再灌后大鼠脑线粒体呼吸功能和呼吸酶活性的变化

本文通过对大鼠全脑缺血ZOmin及缺血后再灌1h、6h、48h、4d、7d（每组10／只）脑线粒体呼吸控制率变化的研究和对各组大鼠（每组5只）脑线粒体呼吸链的标志酶琥珀酸脱氧酶、细胞色素氧化酶的酶组织化学的观察，从亚细胞结构来探讨脑缺血再灌流损伤的规律和机制。用丙酿酸钠和苹果酸钠作底物测得各组脑线粒体在有ADP刺激（呼吸三态）和无ADP刺激（呼吸四态）下的氧气消耗及呼吸控制率（呼吸三态／呼吸四态）的数据见表1。用图象分析仪测得各组酶染颗粒面积见表2。线粒体的内膜是细胞呼吸和产能的主要场所。在脑缺血和再灌期，线粒体的损…     

糖尿病大鼠肝过氧化物酶体脂肪酸β-氧化的初步研究

目的:观察糖尿病大鼠肝过氧化物酶体脂肪酸β-氧化的变化。方法:以链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型，通过透射电镜观察肝脏过氧化物酶体数量和形态学的改变，采用分光光度法和荧光光度法分析参与过氧化物酶体脂肪酸β-氧化的多种酶活性的改变。结果:糖尿病大鼠血清甘油三酯高于对照组，高密度脂蛋白胆固醇低于对照组；肝脏过氧化物酶体数量多于对照组，脂酰CoA氧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶体脂肪酸β-氧化活性显著大于对照组。结论:糖尿病大鼠肝过氧化物酶体脂肪酸β-氧化增强，与糖尿病状态下脂质代谢紊乱有关。     

显示细胞色素氧化酶的组织化学方法及其应用

细胞色素氧化酶(简称CO)广泛分布于各利动植物细胞内,并与线粒体紧密结合,为线粒体特有的标志酶,在细胞的有氧呼吸中起重要作用。因此,用组织化学方法显示CO活性,可观察线粒体,测定其数量,了解细胞氧化代谢的程度。     

失血性休克时大鼠肝线粒体内膜的损伤

本文研究失血性休克时鼠肝线粒体内膜呼吸链电子传递活性和细胞色素含量的改变。结果表明失血性休克引起线粒体电子传递活性不断下降：休克２ｈＮＡＤＨ－细胞色素ｃ还原酶显著低于假处理组；休克了３ｈＮＡＤＨ－Ｃｏ．Ｑ还原酶，琥珀酸－Ｃｏ．Ｑ还原酶，琥珀酸－细胞色素ｃ还原酶以及细胞色素氧化酶均明显低于假处理组，并随休克进程不断降低。另外，休克２ｈ肝线粒体细胞色素ｃ含量明显减少，而细胞色素ａ、ｂ、ｃ１在休克４ｈ也     

失血性休克与线粒体损伤及药物保护

本文就失血性休克时线粒体损伤,损伤机理及药物保护的研究进展作一概述.以进一步探讨线粒体损伤在失血性休克发病中的作用及防治措施.一、失血性休克时线粒体损伤主要表现为(1)线粒体超微病理改变动物实验已证实,失血性休克时可使心肌、肝脏、肠、胰腺线粒体肿胀、空泡、嵴减少和消失、部分线粒体膜不完整、数量减少等病理改变.(2)线粒体功能障碍表现为线粒体呼吸抑制;线粒体氧化磷酸化有关酶活性的抑制;线粒体离子调节功能的抑制;线粒体内膜脂类组成发生改变;线粒体DNA及mRNA表达的改变.线粒体发生上述一系列的功能障碍,最终导致ATP形成极度减少,细胞能量代谢衰竭.二、失血性休克致线粒体损伤的可能机理(1)溶酶体的释放是线粒体损伤原因之一,体外实验表明溶酶体酶对线粒体的呼吸、酶活性、Ca2+转运能力均具抑制作用.(2)缺氧与氧利用障碍失血性休克时线粒体氧化磷酸化功能障碍除了与组织低灌流性缺氧有关,可能与线粒体内膜呼吸链电子传递活性下降致使氧利用能力降低直接有关.(3)细胞酸中毒,细胞酸中毒时会严重抑制线粒体呼吸功能,尤其是对NADH呼吸链的抑制.(4)线粒体内膜损伤,线粒体氧化磷酸化功能取决于线粒体内膜结构的完整.而内膜损伤会丢失呼吸链的组分及酶的辅助因子,最终影响呼吸链的正常运行.(5)抑制剂或解偶联剂,机体组织内FFA、甲状腺素等能使线粒体氧化磷酸化解偶联.在失血性休克或缺血缺氧等病理情况下组织内FFA明显升高,从而抑制线粒体的呼吸功能.(6)钙超载失血性休克后H+-ATP酶活性的降低与线粒体内Ca2+含量呈显著负相关,表明线粒体H+-ATP酶活性损伤程度与线粒体内Ca2+超载的程度有密切关系.(7)氧自由基氧衍生的自由基参与了失血性休克时的线粒体损伤.氧自由基与线粒体膜上的不饱和脂肪酸反应,产生脂质过氧化物(主要是丙二醛),后者或直接损伤线粒体膜,使其通透性增加;或与溶酶体释放的酶蛋白相互作用,发生交联反应,降低膜流动性,损伤溶酶体,使其中的酶得以释放,激活,间接损伤线粒体.三、失血性休克诱导线粒体损伤的药物保护(1)糖皮质激素,它能直接稳定线粒体膜,或通过稳定溶酶体膜抑制酸性水解酶的释放而间接保护线粒体,也可能是通过改善微循环而保护线粒体.(2)钙通道阻止剂如维拉帕米、硫氮卓酮具有抗失血性休克和保护线粒体的作用.可能是通过升高MAP,从而改善各器官组织血液供应,减少缺血损伤和通过钙通道阻滞作用,阻止失血性休克所致的钙内流,减轻细胞内Ca2+超载,避免了线粒体内Ca2+的过度积聚,从而保护线粒体的功能.(3)钙增敏剂,新型钙增敏剂哒嗪酮能延缓线粒体Ca2+超载的进程,减轻线粒体H+-ATP酶活性的损伤程度,保护失血性休克大鼠肝线粒体.(4)莨菪类药物,这类药物中的盐酸莨菪碱、溴丁基东莨菪碱及氢溴酸樟柳碱已被报道具有抗大鼠失血性休克、保护线粒体的作用.(5)外原性SODSOD能清除自由基,直接或间接地稳定线粒体膜,改善细胞呼吸功能,增加能量供给,从而促使休克细胞走上良性循环.(6)丹参通过改善微循环,对抗氧自由基的反应性损伤,抑制钙内流,改善线粒体的氧化代谢,恢复组织细胞的能量供应而发挥其治疗作用.(7)人参皂甙可通过抗自由基和抑制Ca2+内流而保护失血性休克鼠心肌线粒体.(8)川芎嗪具有清除氧自由基,降低脂质过氧化反应,减轻氧自由基介导的线粒体膜结构与功能的损害,从而保护线粒体.总之,失血性休克对组织细胞线粒体的损伤是非常明显的,其损伤机理是复杂的.鉴于线粒体在细胞生命活动中特殊的功能和地位,进一步阐明线粒体的损伤机理,探索和发现具有抗失血性休克、保护线粒体的药物,无疑在防治"不可逆”性休克的理论与实践中具有重要意义.     

新城疫病毒对BGC-823胃癌细胞线粒体的影响

目的 探讨新城疫病毒对BGC-823胃癌细胞线粒体结构和三磷酸腺苷(ATP)酶活性等功能的影响.方法 应用电子显微镜观察、线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性变化测定、罗丹明123染色法测定细胞线粒体膜电位及Western Blot测定细胞色素C等方法 进行分析.结果 新城疫病毒感染肿瘤细胞线粒体结构破坏,线粒体Na+-K+ATP酶、Ca2+-ATP酶活性较对照组显著下降(P<0.01).线粒体膜电位及细胞色素C显著下降(P<0.01).结论 对线粒体结构及功能的影响可能是新城疫病毒杀伤BGC-823胃癌细胞的机制之一.     

一氧化氮合酶激活参与烧伤后Ca~(2 )介导的心肌线粒体损伤

目的 :探讨线粒体一氧化氮合酶 (mtNOS)在严重烧伤早期心肌线粒体损害中的作用。方法 :复制30 %TBSAⅢ°烧伤大鼠模型 ,取正常及伤后 1、3、6、12、2 4h大鼠心肌分离线粒体 ,测其呼吸功能、Ca2 浓度 ([Ca2 ]m)及细胞色素c氧化酶、mtNOS活性。结果 :①伤后 1h心肌线粒体呼吸控制率 (RCR)显著高于正常组 ,但 3、6、12、2 4h明显低于正常组 ,Ⅲ态呼吸速率 (ST3 )变化与RCR平行 ,ST4 仅于伤后 3h明显升高 ;②伤后各时点 [Ca2 ]m 均明显高于正常组 ,尤以 3、6h为甚 ,而mtNOS活性于伤后 3、6、12、2 4h显著高于对照组 ,细胞色素c氧化酶活性于伤后 3、6、12、2 4h显著低于正常组 ;③伤后mtNOS活性与 [Ca2 ]m 呈明显正相关 ,相关系数为 0 8945 (P <0 0 5 ) ,RCR与mtNOS活性呈显著负相关 ,相关系数为 - 0 934 7(P <0 0 5 )。结论 :伤后 [Ca2 ]m 升高激活mtNOS ,可能参与严重烧伤早期心肌线粒体损害。