硼替佐米联合伊马替尼诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的研究硼替佐米（BOR）单独或联合伊马替尼（IM）对慢性粒细胞性白血病（CML）急变期细胞株K562凋亡的影响并探讨其可能的机制。方法不同浓度的BOR、IM处理K562细胞,于12、48、72h分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测细胞增生活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;反转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测LivinmRNA的表达。结果MTT和流式细胞仪结果显示BOR单药可以抑制K562细胞增生,诱导其凋亡,并且能够增强IM对细胞的杀伤作用。RT-PCR结果显示BOR或IM可以下调LivinmRNA的表达,联合作用后,LivinmRNA的水平明显降低。结论BOR单药或联合IM可以诱导K562细胞的凋亡,其机制可能与下调LivinmRNA的表达有关,两药联合具有协同作用。     

敲除CIAPIN1基因提高白血病K562细胞对伊马替尼的敏感性

目的： 探讨靶向干扰细胞因子诱导凋亡抑制因子1 （cytokine induced apoptosis inhibitor 1,CIAPIN1）基因表达后慢性 粒细胞性白血病K562细胞对伊马替尼的敏感性。 方法 ：构建靶向CIAPIN1基因的shRNA干扰载体;使用实时定量PCR、West- ern blotting以及免疫荧光评价CIAPIN1-shRNA组（CIAPIN1-shRNA转染）和scramble-shRNA组（scramble-shRNA转染K562细 胞）干扰效率;伊马替尼（imatinib）处理两组K562细胞后,MTT法检测其增殖能力,集落形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细 胞术和Western blotting检测细胞周期、凋亡及凋亡相关蛋白的变化。 结果： shRNA干扰可有效抑制CIAPIN1表达,CIAPIN1- shRNA组的CIAPIN1 mRNA表达量为scramble-shRNA组的(29.74±4.03)%、CIAPIN1蛋白表达量前者为后者的(21.57±2.18)%。 CIAPIN1表达下调能显著抑制伊马替尼对K562细胞的增殖和克隆形成,CIAPIN1-shRNA+imatinib组的细胞克隆形成数为 （15.60±1.03）个/视野,克隆半径为（2.63±0.55）μm,均小于scramble-shRNA+imatinib组（P<0.05或P<0.01）。CIAPIN1-shRNA+ imatinib组的细胞G1期细胞比例比scramble-shRNA+imatinib组明显增多,S期细胞比例较scramble-shRNA+imatinib组明显减少 （均P<0.01）。CIAPIN1-shRNA+imatinib组K562细胞凋亡率明显增加（P<0.01）。敲除CIAPIN1能抑制细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Bcl-xl、Bcl-2、Mcl-1表达,诱导细胞内细胞凋亡相关蛋白p21、Bid、Bim表达,且与伊马替尼具有协同作用。 结论： CIAPIN1表 达下调可明显提高K562细胞对伊马替尼的敏感性,该作用主要通过阻滞K562细胞周期及诱导凋亡相关蛋白表达实现。     

重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体逆转慢性粒细胞白血病细胞对伊马替尼耐药的机制研究

目的:探讨重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（CPT）逆转慢性粒细胞白血病（CML）细胞伊马替尼耐药的相关机制。方法:选择2016年至2020年内蒙古医科大学附属医院就诊的5例CML患者，分别采集初诊和伊马替尼耐药状态下的肝素化骨髓血标本，分离单个核细胞。初诊时采集的单个核细胞依次命名为A1~E1，伊马替尼耐药后采集的单个核细胞分别命名为A2~E2。使用人CML野生型K562细胞株（K562-W），采用低浓度伊马替尼小剂量逐步加量的方法，获得伊马替尼耐药的K562细胞（K562-R）。采用20 μg/L CPT培养K562-R细胞，设为CPT-K562-R细胞组。CCK-8法检测细胞对伊马替尼的半数抑制浓度（ IC50）。采用K562-W、K562-R细胞构建CML移植瘤裸鼠模型，将裸鼠分为K562-W、K562-R、CPT-K562-R移植瘤组，三组均经口灌注伊马替尼，CPT-K562-R组同时皮下注射CPT；比较三组裸鼠移植瘤在伊马替尼治疗前、治疗4周后的肿瘤体积，以及三组裸鼠的存活时间。蛋白质印迹法检测CML患者骨髓单个核细胞、K562细胞株及其移植瘤组织中酪氨酸蛋白激酶受体B4（EphB4）、髓细胞白血病蛋白1（Mcl-1）蛋白水平的变化。 结果:5例CML患者A2~E2细胞中EphB4蛋白表达水平均较A1~E1细胞增高（均 P<0.01）。K562-W、K562-R、CPT-K562-R细胞对伊马替尼的 IC50分别为（0.160±0.015）mg/L、（5.450±0.460）mg/L、（0.300±0.035）mg/L，差异有统计学意义（ F＝390.65， P<0.01）。K562-W组细胞中EphB4、Mcl-1蛋白均呈低水平表达（0.54±0.02和0.70±0.08）；K562-R组细胞中EphB4、Mcl-1蛋白表达水平升高（3.04±0.11和2.88±0.04）；CPT-K562-R组细胞中EphB4、Mcl-1蛋白表达水平下降（0.57±0.03和0.38±0.04）。伊马替尼治疗前，K562-W、K562-R和CPT-K562-R移植瘤组裸鼠移植瘤体积差异无统计学意义（ F＝0.39， P＝0.68），提示裸鼠移植瘤成瘤均衡；伊马替尼治疗结束后三组移植瘤体积差异有统计学意义（ F＝26.16， P<0.01）。K562-W、K562-R和CPT-K562-R移植瘤组裸鼠存活时间分别为（18.5±3.3）d、（10.0±2.4）d、（17.5±1.6）d，差异有统计学意义（ F＝20.45， P<0.01）。K562-W移植瘤组中EphB4、Mcl-1蛋白均呈低水平表达（0.55±0.06和0.67±0.06）；K562-R移植瘤组中EphB4、Mcl-1蛋白表达水平升高（1.95±0.08和6.21±0.53）；CPT-K562-R移植瘤组中EphB4、Mcl-1蛋白表达水平下降（0.59±0.04和0.37±0.04），且接近K562-W移植瘤组的水平。 结论:CPT可能通过抑制EphB4、Mcl-1表达，增强CML对伊马替尼的敏感性，这可能是一种伊马替尼治疗靶向通路。     

RNA干扰和伊马替尼杀伤K562细胞效果的比较

目的比较RNA干扰（RNAi）和伊马替尼（imatinib）杀伤K562细胞的效果。方法设计有效的bcr—abl干扰shRNA序列，利用基因工程技术插入到干扰载体构建RNAi质粒。测序鉴定正确的RNAi质粒转染K562细胞，48h后荧光显微镜观察转染效率。RT—PCR技术检测K562细胞中bcr—abl表达水平。同时，伊马替尼作用K562细胞。利用凋亡分析、MTT增生实验和磷酸化的酪氨酸蛋白含量检测来评估RNAi和伊马替尼作用效果。结果与伊马替尼一样，RNAi使K562细胞凋亡增强，增生减少，磷酸化的酪氨酸蛋白含量减少。结论RNAi达到伊马替尼杀伤K562细胞的效果，有望在临床用于治疗慢性髓细胞白血病（CML）患者，尤其是那些对伊马替尼等化疗药物不敏感的CML患者。     

低剂量地西他滨联合伊马替尼对K562细胞的增殖抑制作用

 目的　研究低剂量地西他滨（DAC）联合伊马替尼（IM）对K562细胞株的增殖抑制作用及对bcr-abl表达的影响。方法　单药及两药联合后,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察药物对K562细胞株的增殖抑制作用,流式细胞术检测药物对K562细胞株早期凋亡率及细胞周期,巢式反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量检测药物对K562细胞株bcr-abl mRNA表达。结果　DAC与IM单药对K562细胞的抑制作用呈浓度时间依赖性。两药联合用药抑制作用较单药组明显（F＝43.947、165.580、321.193、296.101,均P＜0.05）,24、 48、72 h各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（F＝202.759、168.457、417.538,均P＜0.05）。DAC及IM单药作用药物对K562细胞株均使G1期细胞明显增多,IM 0.2 μmol／L作用于K562细胞株48 h可见6.7 %早期凋亡细胞,IM 0.2 μmol／L联合DAC 4 μmol／L早期凋亡细胞增加至8.4 %。bcr-abl mRNA表达水平降低,DAC 4 μmol／L作用48 h后可降低K562细胞中bcr-abl mRNA表达（约14 %）,IM 0.2 μmol／L降低约40 %,联合用药表达量明显降低（约60 %）。联合用药组与单药组比较差异有统计学意义（F＝71.981,P＜0.05）。结论　DAC 对K562细胞的增殖抑制作用与细胞周期阻滞、诱导凋亡及降低bcr-abl mRNA表达有关,两药联合可显著抑制K562细胞增殖。     

K562多药耐药细胞系中肿瘤干细胞样细胞对伊马替尼耐药机制的初步研究

 目的 进一步阐明一些高表达P-糖蛋白（P-gp）的慢性粒细胞白血病细胞对伊马替尼耐药的机制。方法 经过对K562细胞系长期的足叶乙苷（VP16）诱导和克隆筛选,建立一株耐药细胞系K562／VP16;利用干细胞高效能将Hoechst 33342 荧光染料泵出细胞的特性,采用流式细胞术,从K562／VP16细胞系中分选出一小群细胞,即边缘细胞（SP）,称为K562／VP16 SP细胞,并初步探讨其抗伊马替尼的机制。结果 bcr／abl和abl 蛋白在K562细胞、K562／VP16 SP细胞及非K562／VP16 SP细胞（non-SP K562／VP16）中的表达水平差异无统计学意义;P-gp在K562细胞中不表达,在K562／VP16 SP及non-SP K562／VP16细胞中均高表达且表达水平一致;与non-SP K562／VP16细胞比较,K562／VP16 SP细胞对伊马替尼的耐药性更强,并且这种抗性几乎不能被多种多药耐药逆转剂逆转;另外,体内外实验显示,K562／VP16细胞的致瘤性几乎全部来源于K562／VP16 SP细胞。结论 bcr／abl基因的扩增、过度表达和多药耐药基因及其蛋白表达产物P-gp的高表达,可能不是白血病细胞产生对伊马替尼临床耐药的重要机制;白血病细胞对伊马替尼具有一定的抗性,可能与数量极少的白血病干细胞有直接的关系。因此,这类数量极少的干细胞样的肿瘤细胞应当成为有效治疗肿瘤的靶细胞。     

硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562/G01增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

Objective To explore the effect of proteasome inhibitor bortezomib (BOR) on proliferation inhibition and apoptosis in imatinib-resistant chronic myeloid leukemia cell line K562/G01. Methods MTT assay was used to observe the effect of growth inhibitory of cells; flow cytometry was used to detect cell cycle and apoptosis. Results K562/G01 cells was not sensitive to imatinib,1C50 values of imatinib to K562 and K562/G01 cells was (20.09±1.38) and (0.54±0.13) μmol/L,respectively; BOR could inhibit proliferation in K562/G01 cell,peaked at 48 h,and IC50 value of BOR to K562/G01 was (23.10±2.71) nmol/L. G2/M phase cell cycle arrest and significant apoptosis peak could be seen by flow cytometry with increased in the concentration and action time of BOR. Conclusion BOR can inhibit proliferation and induce apoptosis in imatinib-resistant K562/G01 cell,the mechanism may be related to cell cycle G2/M phase arrest.     

硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562/G01增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

Objective To explore the effect of proteasome inhibitor bortezomib (BOR) on proliferation inhibition and apoptosis in imatinib-resistant chronic myeloid leukemia cell line K562/G01. Methods MTT assay was used to observe the effect of growth inhibitory of cells; flow cytometry was used to detect cell cycle and apoptosis. Results K562/G01 cells was not sensitive to imatinib,1C50 values of imatinib to K562 and K562/G01 cells was (20.09±1.38) and (0.54±0.13) μmol/L,respectively; BOR could inhibit proliferation in K562/G01 cell,peaked at 48 h,and IC50 value of BOR to K562/G01 was (23.10±2.71) nmol/L. G2/M phase cell cycle arrest and significant apoptosis peak could be seen by flow cytometry with increased in the concentration and action time of BOR. Conclusion BOR can inhibit proliferation and induce apoptosis in imatinib-resistant K562/G01 cell,the mechanism may be related to cell cycle G2/M phase arrest.     

六亚甲基二乙酰胺对K562细胞作用的实验研究

目的：研究六亚甲基二乙酰胺（HMBA）体外对K562细胞的抑制增殖、诱导凋亡和促进分化的作用。方法：MTT法检测不同浓度HMBA对于K562细胞的增殖抑制率;流式细胞仪（FCM）检测HMBA对于K562细胞周期分布的影响;Annexin V／PI染色方法检测HM—BA诱导K562细胞凋亡的作用;通过瑞氏染色、联苯胺染色和FCM检测分化抗原研究K562细胞分化情况。结果：HMBA可以抑制K562细胞增殖,1、2、3和4mmol／L对K562细胞增殖抑制率分别为21．97％、36．05％、41．56％和47．59％;HMBA可以阻滞K562细胞周期,主要表现为G0／G1期的阻滞;HMBA诱导K562细胞凋亡的作用不明显,4mmol／L的HMBA对K562细胞诱导凋亡率〈5％;HMBA处理后,瑞氏染色显示K562细胞有一定程度的成熟表现,联苯胺染色基本为阴性;K562细胞膜表面CD11b、CD14、CD68和胞质内溶茵酶抗原的表达在HMBA处理前后均为阴性。结论：HM—BA可以抑制K562细胞的增殖,提示具有一定的治疗作用;HMBA对K562的作用机制和阻滞细胞周期有关,诱导凋亡不是主要作用机制;HMBA有促进K562细胞分化的迹象,但分化方向和机制有待进一步研究。     

K562细胞硫氧还蛋白还原酶活力测定及其抑制剂体外抗白血病的初步研究

 目的　探讨慢性粒细胞白血病（CML）细胞株K562中硫氧还蛋白还原酶（TrxR）的活力及其新型抑制剂乙烷硒啉（BBSKE）体外抗白血病作用。方法　应用胰岛素还原法检测K562细胞株及健康人骨髓单个核细胞中TrxR的活力。运用CCK-8法测定BBSKE对K562细胞的增殖抑制率。应用激光共聚焦显微镜、琼脂糖凝胶电泳以及Annexin Ⅴ-FITC／PI双标记流式细胞术观察BBSKE的抗白血病作用。结果　K562细胞中TrxR的活性明显高于健康人骨髓单个核细胞,10 μmol／L BBSKE与K562细胞作用24 h,激光共聚焦显微镜可见典型的细胞凋亡表现,琼脂糖凝胶电泳后可见典型的DNA“梯”条带出现,流式细胞术检测凋亡率为（10.28±2.74）%;10 μmol／L BBSKE对CML患者原代细胞有诱导凋亡的作用,凋亡率为（5.70±0.48）%。结论　慢性粒细胞白血病细胞株K562中TrxR活力高于健康人骨髓单个核细胞,BBSKE有抑制TrxR活力、抑制K562细胞增殖和诱导凋亡的作用,是治疗CML潜在的有效药物。     

反义寡核苷酸对K562细胞增殖和端粒酶活性的影响

 目的　研究靶向封闭端粒酶反转录酶（hTERT）mRNA的反义硫代寡核苷酸（ASPSODN）对K562细胞目的基因的抑制及其对端粒酶活性及细胞增殖周期和凋亡的影响 。方法　ASPSODN转染到人类红白血病细胞株K562,采用MTT法、酶联免疫吸附（ELISA）法和流式细胞术（FCM）检测K562细胞的增殖、端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期的改变,RT-PCR检测hTERT mRNA的表达。结果　0.6 μmol／L的ASPSODN（0.42±0.16）能明显下调hTERT表达（P＜0.05）,端粒酶相对活性降至52 %;MTT法检测显示明显抑制K562细胞增殖活性;FCM显示细胞凋亡率为10.31 %,PI染色显示细胞被阻止在G1／G0期,S期及G2／M期的细胞减少,但无特征性的凋亡峰。结论　ASPSODN靶向 hTERT 能特异性抑制K562细胞hTERT mRNA的表达,明显下调端粒酶活性,抑制K562细胞增殖,并通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞凋亡。     

土木香内酯通过调节细胞周期相关蛋白的表达抑制慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/ADR增殖

目的 研究土木香内酯对慢性粒细胞白血病(CML)耐药细胞株K562/ADR增殖、周期分布以及周期相关蛋白的影响.方法 选用0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μmol/L土木香内酯作用K562/ADR细胞12、24、48 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测土木香内酯对K562/ADR细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测土木香内酯对K562/ADR细胞周期分布的影响,Western blot检测周期相关蛋白的表达.结果 土木香内酯能够显著抑制K562/ADR细胞增殖,半数抑制浓度为5.0 μmol/L.流式细胞术检测结果显示,不同浓度(0、2.5、5.0、7.5 μmol/L)的土木香内酯能够使K562/ADR细胞周期阻滞在G2/M期,G2/M期细胞比例由(15.8±1.7)％分别提高到(21.0±2.4)％、(26.4±2.7)％、(30.1±3.9)％(P＜0.05).土木香内酯能够明显降低CDK1、CyclinB1的表达,上调周期抑制蛋白p21的表达.此外,土木香内酯能够有效地抑制bcr-abl融合蛋白的表达水平.结论 土木香内酯可能通过调节细胞周期相关蛋白的表达介导K562/ADR细胞G2/M期阻滞,抑制细胞的增殖.     

重楼皂苷D对人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖的抑制作用及其机制

目的 探讨重楼皂苷D对人慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖的抑制作用及其机制.方法 选用浓度为0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.2、2.4μmol/L重楼皂苷D作用于K562细胞24 h,用CCK-8法检测重楼皂苷D对K562细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测重楼皂苷D对K562细胞凋亡以及细胞周期分布的影响;Western blot方法检测相关蛋白的表达.结果 重楼皂苷D可显著抑制K562细胞增殖,24 h的半数有效抑制浓度(IC50)为(0.9±0.1)μmol/L.流式细胞术检测结果显示,浓度为0.9μmol/L重楼皂苷D作用于K562细胞12、24 h后,细胞早期凋亡率较对照组的(2.05±0.45)%分别提高到(11.46±1.51)%、(28.87±2.35)%,差异有统计学意义(F=38.637,P<0.05).重楼皂苷D能够显著下调bcl-2、CDK1、cyclin B1、bcr-abl融合蛋白的表达,上调Bax、细胞色素C、活化的caspase-3以及p21的表达(均P<0.05).此外,重楼皂苷D能够将细胞周期阻滞在G2/M期(F=42.355,P<0.05).结论 重楼皂苷D能够明显抑制慢性粒细胞白血病K562细胞增殖,其作用机制可能是诱导细胞凋亡及促进细胞周期阻滞.     

2-甲氧基雌二醇对白血病细胞K562增生、凋亡及细胞周期的影响

 目的 探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对体外培养的慢性粒细胞白血病（CML）急变期细胞系bcr-abl（+）K562细胞增生、凋亡及细胞周期的影响。方法 将不同浓度和作用时间的2-ME与K562细胞共同培养，采用相差显微镜观察细胞的形态学变化；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测2-ME对K562细胞增生的抑制作用；流式细胞术分析2-ME对K562细胞凋亡及细胞周期的影响。结果 1~ 16μmol／L浓度的2-ME在24、36、48及60 h均可明显抑制K562细胞增生，并在一定范围内呈时间和剂量依赖性；2-ME作用后G0／G1期细胞增加，并伴随细胞凋亡峰和凋亡率的升高。结论 2-ME可抑制K562细胞增生，诱导其凋亡，为2-ME的临床应用提供实验依据。     

Anti-Proliferative Effects of Dendrophthoe pentandra Methanol Extract on BCR/ABL-Positive and Imatinib-Resistant Leukemia Cell Lines

Background: Imatinib mesylate, a tyrosine kinase inhibitor specifically targeting the BCR/ABL fusion protein, induces hematological remission in patients with chronic myeloid leukemia (CML). However, the majority of CML patients treated with imatinib develop resistance with prolonged therapy. Dendrophthoe pentandra (L.) Miq. is a Malaysian mistletoe species that has been used as a traditional treatment for several ailments such as smallpox, ulcers, and cancers. Methods: We developed a resistant cell line (designated as K562R) by long-term co-culture of a BCR/ ABL positive CML cell line, K562, with imatinib mesylate. We then investigated the anti-proliferative effects of D. pentandra methanol extract on parental K562 and resistant K562R cells. Trypan blue exclusion assays were performed to determine the IC50 concentration; apoptosis and cell cycle analysis were conducted by flow cytometry. Results: D. pentandra extract had greater anti-proliferative effects towards K562R (IC50= 192 μg/mL) compared to K562 (500 μg/ mL) cells. Upon treatment with D. pentandra extract at the IC50. concentration: K562 but not K562R demonstrated increase in apoptosis and cell cycle arrest in the G2/M phase. Conclusion: D. pentandra methanol extract exerts potent anti-proliferative effect on BCR/ABL positive K562 cells.     

氯化镧对人白血病细胞系K562生长的影响

 目的 了解稀土氯化镧（LaCl3）对白血病细胞系K562生长和凋亡的影响,为临床应用LaCl3治疗白血病提供理论依据。方法 用MTT法鉴定LaCl3对K562细胞生长增生的影响;显微镜下观察细胞形态的变化,流式细胞术及TUNEL法鉴定细胞凋亡情况;流式细胞术分析细胞周期的变化。半固体琼脂糖培养法观察LaCl3对正常骨髓细胞形成粒－巨噬细胞集落的影响。结果 在所研究的浓度范围内,随着LaCl3浓度升高,K562细胞生长抑制率增高、凋亡率增加,呈剂量依赖性关系。随着作用时间延长,1 mmol／L LaCl3对细胞的抑制率增高、凋亡率增加,呈时间依赖性关系;K562细胞G0／G1期细胞百分率升高而S期细胞百分率下降。0.1及0.5 mmol／L LaCl3显示出对正常骨髓祖细胞有轻度刺激增生效果,而较高浓度（1.5～2.0 mmol／L）,正常骨髓祖细胞形成集落数下降且含有较多巨噬细胞,集落细胞形态正常,没有显示凋亡形态。结论 在所研究浓度范围内,稀土LaCl3能抑制K562细胞生长并且诱导细胞凋亡,呈剂量及时间依赖性关系;但对正常骨髓造血细胞的影响还有待于进一步研究。     

辐射诱发肿瘤细胞增殖抑制和凋亡的相关研究

目的 探讨不同辐射敏感性的肿瘤细胞受照后G2/M期阻滞和凋亡发生的关系。为提高肿瘤放射治疗效果提供理论依据。方法 以人早幼粒白血病细胞株HL-60、人T淋巴细胞性白血病细胞系CEM和人红白血病细胞系K562细胞为对象，采用形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等方法检测细胞周期的改变和凋亡的发生。结果 辐射敏感的HL-60和CEM细胞受照后首先发生G2/M期阻滞，然后在阻滞退出过程中或之后发生凋亡；辐射耐受的K562细胞受照后只发生G2/M期阻滞，不发生凋亡；照射并加入咖啡因（CAF），抑制3种细胞的G2/M期阻滞，促进凋亡；照射并加入佛波酯（TPA），增加HL-60和CEM细胞的G2/M期阻滞，抑制凋。结论 辐射诱发肿瘤细胞的凋亡与G2/M期阻滞有关，用药物调控G2/M期阻滞可影响辐射所致的凋亡。     

过表达DACT1对白血病K562细胞生物学行为的影响及机制

目的:研究过表达DACT1对白血病K562细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法:用Attractene Transfection试剂在K562细胞中转染DACT1质粒,使其在细胞中过表达,应用CCK-8法、流式细胞术检测过表达DACT1对K562细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。Western blot法检测过表达DACT1后凋亡相关蛋白的变化。结果:过表达DACT1能够抑制K562细胞集落形成,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,使细胞发生G0/G1期阻滞。同时可使促凋亡蛋白Bax、caspase-3及caspase-9表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少。结论:过表达DACT1可以抑制白血病K562细胞增殖并诱导其凋亡,干扰其增殖周期,可能具有潜在的抑癌作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白有关。     

Imatinib and bortezomib induce the expression and distribution of anaphase-promoting complex adaptor protein Cdh1 in blast crisis of chronic myeloid leukemia

Anaphase promoting complex cofactor Cdh1 plays a critical role in tumor suppression and genomic stability in cancer. However, its role in chronic myeloid leukemia (CML) remains unclear. We treated both wild-type and imatinib-resistant K562 cells with imatinib or nilotinib and bortezomib, respectively. The siRNAs of Cdh1 and Skp2 were designed and transiently transfected with HiPerFect transfection reagent into CML cells. Expression of Cdh1-Skp2-p27 pathway proteins were detected by Western blotting. Cell cycle, cell apoptosis and cellular morphology were detected by flow cytometry and Wright staining. Our study revealed that Cdh1 was expressed at lower levels in imatinib-resistant CML blast crisis (BC) patients than imatinib-sensitive ones. Moreover, imatinib and bortezomib induced cell cycle quiescence or arrest, upregulation and nuclear relocation of Cdh1 in CML cells. Furthermore, nilotinib and bortezomib resulted in upregulation of Cdh1 in imatinib-resistant CML cells. Conversely, Cdh1 silencing resulted in stabilization of Skp2 and Cdc20, subsequently promoting G1-S transition and formation of multinucleated cells. Our study shows that TKIs and bortezomib can regulate the cell cycle and cell apoptosis via regulation of the expression and redistribution of Cdh1 in CML-BC, which sheds light on the orchestration of crosstalk between TKIs and bortezomib in imatinib-resistant CML-BC. Additionally, Cdh1 tends to play an important role in maintenance of genomic stability, the detailed mechanisms deserve further study.