UVB对系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞自噬相关转录组学的影响

目的检测中波紫外线(UVB)照射对系统性红斑狼疮(SLE)患者的外周血单个核细胞(PBMC)自噬相关mRNA表达的影响并验证。方法分离15例SLE患者和15例正常对照的PBMC,各分为UVB照射组和未照射组,照射UVB后培养24 h,提取细胞总RNA,使用RNA-Seq测序,筛选出各组间自噬相关差异性表达mRNA,并通过qPCR及Western blot对部分基因(ATG7、p62/SQSTM1)的表达情况进行验证。结果RNA-Seq显示SLE患者未照射UVB组(SLE-C组)和正常人未照射UVB组(NC-C组)相比,共有266个基因上调,85个基因下调;SLE患者照射UVB组(SLE-UVB组)和正常人照射UVB组(NC-UVB组)相比,共有318个基因上调,146个基因下调;GO功能富集分析显示差异基因与自噬小体组装、巨自噬的正性调节、巨自噬的调节等有关。对ATG7和p62进行RT-qPCR和Western blot验证,结果显示ATG7和p62在SLE-UVB组的表达水平较SLE-C组和NC-UVB组高,与RNA-Seq的变化趋势一致。结论获得SLE患者PBMC照射UVB前后的自噬相关mRNA表达数据,为进一步阐明UVB对SLE发病的影响提供了理论基础。     

带状疱疹患者外周血CD4+ T淋巴细胞及皮损组织中自噬水平的检测

【摘要】 目的 观察带状疱疹患者外周血CD4+ T淋巴细胞、皮损组织表皮中自噬蛋白表达的变化及皮损组织表皮细胞中自噬囊泡的生成情况,探讨水痘-带状疱疹病毒感染与细胞自噬之间的关系。方法 选取2017年12月至2018年12月在解放军南部战区总医院皮肤科就诊的35例带状疱疹患者,男20例、女15例,年龄18 ~ 79（59.23 ± 9.27）岁,疼痛时间（5.14 ± 2.28） d,出疹时间（3.45 ± 1.77） d。流式细胞仪检测患者外周血CD4+ T淋巴细胞中自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）、Beclin-1、p62的表达,30例健康成人作为对照组。获取12例带状疱疹患者的皮损组织,免疫组化检测表皮中LC3B、Beclin-1、p62的表达,透射电镜观察表皮细胞中自噬囊泡的生成,以同一患者皮损周围未受累皮肤组织作为对照。组间比较采用两独立样本t检验。结果 带状疱疹患者外周血CD4+ T淋巴细胞中LC3B、Beclin-1阳性表达率（61.23% ± 7.61%、35.84% ± 4.22%）明显高于对照组（36.56% ± 4.27%、15.34% ± 1.89%;t = 15.75、24.56,均P < 0.01）,而p62阳性表达率（5.75% ± 0.67%）明显低于对照组（10.03% ± 1.15%,t = 18.65,P < 0.01）。12例带状疱疹患者皮损组织表皮中LC3B、Beclin-1的表达明显高于周围正常皮肤组织,而p62的表达明显低于周围正常皮肤组织（t = 2.86、4.58、2.43,均P < 0.05）。透射电镜观察示,12例带状疱疹患者皮损区表皮细胞中有较多包饶着病毒颗粒的自噬囊泡生成,皮损区自噬囊泡计数明显高于周围正常皮肤（t = 9.67,P < 0.01）。结论 带状疱疹患者外周血CD4+ T淋巴细胞与皮损组织表皮中自噬水平升高。     

女性尖锐湿疣患者皮损B细胞淋巴瘤-2、生存素表达及其预后相关性

目的探究女性尖锐湿疣患者皮损中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、生存素(Survivin)表达水平及与预后相关性。方法选取2018年3月至2019年12月西北妇女儿童医院诊治的108例女性尖锐湿疣患者作为研究对象。获取其皮损组织为观察组,另选取同期西北妇女儿童医院皮肤科收治的102例健康女性的外阴正常组织为对照组。检测两组Bcl-2、Survivin蛋白表达情况及Bcl-2、Survivin mRNA表达水平;采用Pearson法分析Bcl-2与Survivin mRNA表达相关性;分析复发组和无复发组Bcl-2、Survivin表达差异;用Logistic回归模型分析患者治疗后复发的影响因素。结果观察组Bcl-2、Survivin蛋白高表达率及mRNA表达水平高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);观察组Bcl-2与Survivin mRNA表达水平呈正相关(P0.05);复发组Bcl-2、Survivin蛋白高表达率及mRNA表达水平高于未复发组,差异具有统计学意义(P0.05);HPV分型、T淋巴细胞亚群组成及Bcl-2、Survivin表达是女性尖锐湿疣复发的独立影响因素(P0.05)。结论女性尖锐湿疣Bcl-2、Survivin呈高表达,两者相互作用,对治疗后复发有一定影响。     

不同预后尖锐湿疣组织中Toll样受体3、9的表达

目的探讨不同预后尖锐湿疣(CA)患者皮损局部Toll样受体3(TLR3)和Toll样受体9(TLR9)表达定位及TLR3 mRNA、TLR9 mRNA的表达情况.方法免疫组化SP法及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测10例CA复发者、14例CA无复发者及10例包皮组织中TLR3及TLR9表达情况.结果 TLR3、TLR9在无复发CA皮损中表达以棘层、颗粒层为主;在复发组CA皮损中表达以基底层、棘层为主.无复发组CA组织中TLR3mRNA表达较对照组及复发组均明显升高(P<0.01、P<0.05),TLR9mRNA较对照组明显升高(P<0.05),较复发组差异无统计学意义.结论表皮TLR3及TLR9的表达部位和表达量的改变可能与CA预后有关,TLR3的影响可能更大.     

不同预后尖锐湿疣组织中Toll样受体3、9的表达

目的探讨不同预后尖锐湿疣(CA)患者皮损局部Toll样受体3(TLR3)和Toll样受体9(TLR9)表达定位及TLR3 mRNA、TLR9 mRNA的表达情况.方法免疫组化SP法及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测10例CA复发者、14例CA无复发者及10例包皮组织中TLR3及TLR9表达情况.结果 TLR3、TLR9在无复发CA皮损中表达以棘层、颗粒层为主;在复发组CA皮损中表达以基底层、棘层为主.无复发组CA组织中TLR3mRNA表达较对照组及复发组均明显升高(P<0.01、P<0.05),TLR9mRNA较对照组明显升高(P<0.05),较复发组差异无统计学意义.结论表皮TLR3及TLR9的表达部位和表达量的改变可能与CA预后有关,TLR3的影响可能更大.     

不同预后尖锐湿疣组织中Toll样受体3、9的表达

目的探讨不同预后尖锐湿疣(CA)患者皮损局部Toll样受体3(TLR3)和Toll样受体9(TLR9)表达定位及TLR3 mRNA、TLR9 mRNA的表达情况.方法免疫组化SP法及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测10例CA复发者、14例CA无复发者及10例包皮组织中TLR3及TLR9表达情况.结果 TLR3、TLR9在无复发CA皮损中表达以棘层、颗粒层为主;在复发组CA皮损中表达以基底层、棘层为主.无复发组CA组织中TLR3mRNA表达较对照组及复发组均明显升高(P<0.01、P<0.05),TLR9mRNA较对照组明显升高(P<0.05),较复发组差异无统计学意义.结论表皮TLR3及TLR9的表达部位和表达量的改变可能与CA预后有关,TLR3的影响可能更大.     

尖锐湿疣组织中的细胞凋亡与TRAIL受体的表达

目的　探讨尖锐湿疣患者皮损中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)受体DR4,DR5的表达情况及其与细胞凋亡之间的相关性。方法　应用逆转录-聚合酶链反应 (RT PCR)检测 30例尖锐湿疣患者皮损中DR4,DR5mRNA的水平,并设 15例正常皮肤组织作对照;原位末端标记法(TUNEL)检测皮损中角质形成细胞的凋亡。结果　尖锐湿疣组织标本DR4,DR5mRNA的平均水平分别为 0. 98±0. 20, 1. 18±0. 16,与正常皮肤组织相比显著升高(P<0. 05);凋亡指数与DR4,DR5的水平有显著相关性(P<0. 05)。结论　DR4,DR5在尖锐湿疣组织中表达,并与病毒感染细胞的凋亡相关,可能在TRAIL/TRAIL R系统诱导病毒感染细胞凋亡中发挥重要作用。     

Western blot检测C/EBPβ蛋白在寻常型银屑病皮损中的表达

目的:检测C/EBPβ蛋白在寻常型银屑病皮损中的表达水平。方法:收集15例寻常型银屑病患者皮损和10例正常对照组皮肤组织标本,提取总蛋白,采用Western blot技术检测两组组织中C/EBPβ蛋白的表达水平,采用Pearson相关性分析评估C/EBPβ蛋白表达水平与患者PASI评分的相关性。结果:寻常型银屑病患者皮损中C/EBPβ蛋白表达水平(0.84±0.41),明显低于正常对照组(1.15±0.26),差异有统计学意义(t=2.12,P<0.05)。Pearson相关性分析显示C/EBPβ蛋白表达量与患者PASI评分呈负相关性(r=-0.66,P<0.05)。结论:C/EBPβ蛋白在寻常型银屑病皮损中表达下调,为后续深入研究C/EBPβ蛋白在银屑病发病机制中的作用奠定了基础。     

Foxp3在尖锐湿疣皮损中的表达及其意义

目的:检测Foxp3在尖锐湿疣皮损中的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学EnVision法检测Fnxp3在25例尖锐湿疣组织、14例正常包皮中的表达。结果:①尖锐湿疣组织Foxp3淋巴细胞阳性率显著高于正常包皮组织(P<0.01)。②尖锐湿疣组织中Foxp3^+淋巴细胞表达率与皮损大小(r=0.587,P<0.01)、个数(r=0.469,P<0.05)及病程(r=0.491,P<0.05)呈正相关。结论:Foxp3^+淋巴细胞可能在尖锐湿疣的免疫逃逸中发挥重要作用。     

尖锐湿疣患者皮损Toll样受体4、9和C型凝集素受体的表达

目的探讨初发和复发尖锐湿疣(CA)患者皮损中TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达及意义.方法采用免疫组化SP法检测30例初发CA皮损、30例复发CA皮损和20例正常人皮肤(包皮)中TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达及分布.结果初发CA皮损和复发CA皮损中TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达水平均显著高于正常包皮组织(P<0.001),且集中分布于基底层和棘层细胞.TLR4、TLR9和DC-SIGN三者在初发CA皮损和复发CA皮损中的表达差异均无统计学意义(三者均P>0.05).TLR4、TLR9与DC-SIGN的表达均呈正相关性关系.结论 TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达增强可能在CA的发病和复发过程中起到一定作用.     

尖锐湿疣患者皮损Toll样受体4、9和C型凝集素受体的表达

目的探讨初发和复发尖锐湿疣(CA)患者皮损中TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达及意义.方法采用免疫组化SP法检测30例初发CA皮损、30例复发CA皮损和20例正常人皮肤(包皮)中TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达及分布.结果初发CA皮损和复发CA皮损中TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达水平均显著高于正常包皮组织(P<0.001),且集中分布于基底层和棘层细胞.TLR4、TLR9和DC-SIGN三者在初发CA皮损和复发CA皮损中的表达差异均无统计学意义(三者均P>0.05).TLR4、TLR9与DC-SIGN的表达均呈正相关性关系.结论 TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达增强可能在CA的发病和复发过程中起到一定作用.     

尖锐湿疣患者皮损Toll样受体4、9和C型凝集素受体的表达

目的探讨初发和复发尖锐湿疣(CA)患者皮损中TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达及意义.方法采用免疫组化SP法检测30例初发CA皮损、30例复发CA皮损和20例正常人皮肤(包皮)中TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达及分布.结果初发CA皮损和复发CA皮损中TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达水平均显著高于正常包皮组织(P<0.001),且集中分布于基底层和棘层细胞.TLR4、TLR9和DC-SIGN三者在初发CA皮损和复发CA皮损中的表达差异均无统计学意义(三者均P>0.05).TLR4、TLR9与DC-SIGN的表达均呈正相关性关系.结论 TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达增强可能在CA的发病和复发过程中起到一定作用.     

氧化应激下黑素细胞自噬相关基因差异表达分析

目的 探讨过氧化氢(H2O2)对黑素细胞自噬的影响及可能的调节机制.方法 取对数生长期健康人黑素细胞,分为空白对照组(不予任何处理)、阳性对照组(100 nmol/L西罗莫司处理)和实验组(体积分数为10-7～10-3的H2O2处理),处理4h后,使用CCK8法、流式细胞仪分别检测各组黑素细胞活性及凋亡率.吖啶橙染色检测自噬小泡,透射电镜下观察自噬小体,Western印迹检测自噬特异性蛋白Beclin 1、微管相关蛋白轻链3B(LC3B).最后采用包含84个自噬相关基因的RT2 Profiler PCR Array筛选自噬相关的差异表达基因.结果 黑素细胞分别经10-3、5×104、10-4、5×10-5、10-5、5×10-6、10-6H2O2处理后,细胞增殖活性及凋亡率与空白对照组相比差异均有统计学意义(F值分别为286.95、301.23,均P＜0.05),且随H2O2体积分数升高,增殖活性降低,凋亡率升高.除5×l0-6 H2O2组分别与10 5、10-6 H2O2组间相比细胞凋亡率差异无统计学意义外,上述各H2O2组间两两比较,黑素细胞增殖活性及凋亡率差异均有统计学意义(P＜0.05).吖啶橙染色及电镜观察发现,10-5 H2O2、10-6 H2O2和西罗莫司处理的黑素细胞中有自噬小体形成.Western印迹显示,10-5H2O2、10-6H2O2和西罗莫司组黑素细胞Beclin 1表达量和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比率均较空白对照组显著升高(P＜0.05).RT2 Profiler PCR Array结果显示,与空白对照组相比,10-5 H2O2组、10-6H2O2组和西罗莫司组中ATG12、ATG3、ULK1、PIK3CG、PTEN、PIK3C3表达均显著上调,EIF2AK3表达显著下调;10-5 H2O2组和西罗莫司组mTOR表达显著下调,ULK2表达显著上调;10-6H2O2组mTOR表达未发生明显改变,AMPK、JNK1表达显著上调.结论 体积分数为10-5和10-6的H2O2均能有效诱导黑素细胞自噬,可能与影响相关信号分子表达相关.     

iNOS、CD34、PCNA在肛周尖锐湿疣皮损中的表达及其意义

目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)在尖锐湿疣(CA)中的表达及皮损中细胞增殖和血管增生的相关性。方法:采用免疫组化方法检测了17例尖锐湿疣组织及10例正常包皮组织中iNOS、CD34、增殖性细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达。结果:(1)CA皮损中iNOS表达较其在正常人表皮中的表达显著增强(P<0.05),正常人表皮中仅基底层弱阳性表达,而CA皮损区iNOS表达为基底层至角质层下方。(2)CA皮损真皮乳头微血管数较正常人表皮显著增多(P<0.05)。(3)CA皮损中iNOS的表达水平与PCNA标记指数(PCNAlabelindex,PLI)、血管密度计数(microvesseldensity,MVD)均呈显著正相关(R=-0.5910,P<0.01;R=-0.782,P<0.05)。结论:iNOS在尖锐湿疣皮损中表达异常,高水平的iNOS表达可能促进尖锐湿疣细胞增殖及真皮乳头血管形成,参与其发病。     

尖锐湿疣皮损中人β防御素(HDB)-2,3及LL-37的表达

目的:检测尖锐湿疣患者皮损中抗菌肽HBD-2、HBD-3及LL-37 mRNA的表达。方法:应用逆转录(RT-PCR)方法检测56例尖锐湿疣患者皮损和30名正常人皮肤组织中HBD-2、HBD-3及LL-37 mRNA的表达。结果:与正常人皮肤组织相比,尖锐湿疣患者皮损中HBD-2、HBD-3及LL-37 mRNA的表达水平明显升高(P0.05)。结论:尖锐湿疣患者皮损中HBD-2、HBD-3及LL-37mRNA表达水平的上调可能与尖锐湿疣患者局部产生免疫防御有关。     

沉默miR-23a对中波紫外线诱导成纤维细胞自噬的作用研究

目的探讨沉默mi R-23a对中波紫外线(UVB)诱导成纤维细胞自噬的作用。方法将成纤维细胞分为空白对照组、UVB光老化组、mi R-23a沉默组、UVB光老化+mi R-23a沉默组。吖啶橙染色检测细胞自噬,Western印迹检测自噬相关蛋白LC3-B及p62的表达水平。结果空白对照组与UVB光老化组吖啶橙染色荧光定量分别为(39.34±1.15)%、(32.22±1.40)%,2组间差异有统计学意义(P0.05);UVB光老化+mi R-23a沉默组吖啶橙染色荧光定量为(43.72±0.95)%,与UVB光老化组相比,差异有统计学意义(P0.05)。与空白对照组相比,UVB光老化组自噬相关蛋白p62表达量升高,LC3-Ⅰ转化为LC3-Ⅱ减少,2组间差异有统计学意义(P0.05);与UVB光老化组相比,UVB光老化+mi R-23a沉默组p62表达量下降,LC3-Ⅰ转化为LC3-Ⅱ增多,2组间差异有统计学意义(P0.05)。结论 UVB辐射可致成纤维细胞自噬水平下降,而沉默mi R-23a可抑制UVB诱导所致的自噬水平下降。     

寻常型银屑病患者皮损中miRNA-34a及其靶基因Notch1的表达及意义

目的:探讨miRNA-34a及其靶基因Notch1在寻常型银屑病患者皮损中的表达水平及意义。方法:实时荧光定量PCR法检测22例寻常型银屑病患者皮损组织及10例正常人皮肤组织中miRNA-34a的表达水平。采用免疫组化EnVision法检测51例寻常型银屑病患者(包括上述22例患者)和29例正常人(包括上述10例正常人)皮损组织中miRNA-34a可能的靶基因Notch1的表达情况。结果:miRNA-34a在寻常型银屑病患者皮损组织中的表达水平为0.162±0.186,高于正常皮肤组织中的表达水平(0.028±0.029),银屑病组为正常对照组的5.786倍,两组比较,差异有统计学意义(t=2.22,P<0.05);Notch1在寻常型银屑病组织中主要为表皮全层细胞质表达,阳性表达率为76.47%(39/51),而在正常皮肤组织中阳性表达率为13.79%(4/29),两者差异有统计学意义(χ~2=29.22,P<0.05)。结论:miRNA-34a在寻常型银屑病皮损组织中的表达高于正常人皮肤组织,其可能通过调控靶基因Notch1参与寻常型银屑病的发病机制。     

新疆维吾尔族寻常性银屑病患者皮损中转录因子GATA3的表达及意义

目的:探讨JAK-STAT信号转导通路中转录因子GATA3在新疆维吾尔族寻常性银屑病患者皮损组织中的表达水平及其意义。方法:分别提取6例新疆维吾尔族寻常性银屑病患者皮损组织(银屑病组)和5例新疆维吾尔族正常人皮肤组织(正常对照组)的总RNA,反转录合成cDNA,用RT2 profiler PCR Array检测JAK/STAT信号通路相关基因的mRNA表达水平,通过在线软件对数据进行分析,并采用免疫组化方法检测45例银屑病组和21例正常对照组中GATA3蛋白水平的表达情况,并进行相关分析。结果:新疆维吾尔族银屑病患者皮损组织与正常人皮肤组织对比,共有17个表达差异2倍以上且P0.05的基因,其中GATA3 mRNA在银屑病组皮损组织中的表达水平比正常对照组表达水平下降。GATA3蛋白在正常对照组中为表皮全层细胞核表达,在银屑病组皮损组织中表达量均较正常对照组明显降低(P0.001)。结论:GATA3在新疆维吾尔族寻常性银屑病患者皮损表皮中表达明显下调,提示GATA3可能在新疆维吾尔族银屑病发病机制中发挥作用。     

126例进展期寻常型银屑病患者血清和皮损中IL-33表达水平的检测

目的:探讨进展期寻常型银屑病(PsV)患者血清和皮损中IL-33表达水平及其临床意义。方法:纳入2018年1月-2019年1月我院126例PsV患者作为PsV组,45例健康体检者作为对照组,分析并比较两组研究对象血清IL-33表达水平的差异;纳入3例行脂肪瘤切除患者,比较PsV患者皮损组织和脂肪瘤患者正常皮肤组织中IL-33蛋白表达水平的差异。PsV患者血清IL-33表达水平与PASI评分的相关性、在不同临床特征中的差异、影响因素的统计分析分别采用Pearson相关分析、单因素分析和Logistic回归分析。利用受试者操作特征(ROC)曲线探讨血清IL-33水平在鉴别PsV和对照组、轻度和中重度PsV患者的临床效能。结果:与对照组[(40.65±12.21) pg/mL]相比,PsV组患者血清IL-33表达水平[(98.37±20.85) pg/mL]明显升高(t=17.51,P0.01)。中重度PsV患者皮损组织中IL-33蛋白表达相对灰度值(16.56±4.18)明显高于轻度PsV组(9.28±1.04)和脂肪瘤患者正常皮肤组织(5.64±1.45),且差异有统计学意义(t值分别为7.56、11.04,P值均0.05);轻度PsV组患者皮损组织中IL-33蛋白表达相对灰度值亦明显高于脂肪瘤患者正常皮肤组织,差异有统计学意义(t=9.12,P0.05)。Pearson相关分析显示血清IL-33与PASI评分呈明显正相关(r=0.85,P0.01);PsV患者血清IL-33表达水平在BMI、病程及皮损严重程度上存在统计学差异;病程(OR=3.449)、PASI(OR=10.444)与PsV患者血清IL-33水平升高有关; ROC曲线结果发现,血清IL-33表达水平在鉴别进展期PsV与对照组、轻度和中重度进展期PsV的临床效能显著,AUC分别为0.945和0.870。结论:PsV患者血清及皮损中IL-33表达水平明显升高,IL-33可能参与了银屑病的发病机制。     

宫颈癌患者外周血LGR5水平与肿瘤增殖、侵袭基因表达的相关性

目的 探究宫颈癌患者外周血富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(LGR5)水平与肿瘤增殖、侵袭基因表达的相关性。方法 选取2019年4月至2020年4月宜宾市第一人民医院诊治的148例宫颈癌患者作为研究对象,分为早期组(Ⅰ期,n=35)、中期组(Ⅱ～Ⅲ期,n=75)和晚期组(Ⅳ期,n=38)。另选择同期进行宫颈检查的50例宫颈息肉患者作为对照组。比较四组LGR5蛋白及侵袭基因、增殖基因水平,采用Pearson相关性分析患者外周血LGR5水平与肿瘤增殖、侵袭基因表达的相关性。结果 早期组、中期组、晚期组的LGR5水平均显著高于对照组,且晚期组LGR5水平显著高于早期组、中期组,中期组LGR5水平显著高于早期组,差异具有统计学意义(P<0.05);早期组、中期组、晚期组的肿瘤组织增殖基因CD59、SRPX2、TBX2、NDRG3 mRNA表达量以及侵袭基因hnRNPH、caspase-8、PRPS2、Rab11 mRNA表达量均显著高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05);晚期组肿瘤组织增殖基因、侵袭基因表达量均显著高于早期组、中期组,中期组肿瘤组织增殖基因、侵袭基...