血小板膜糖蛋白基因多态性与缺血性脑卒中

血小板膜糖蛋白是细胞黏附受体整合素家族的成员,在血小板黏附、聚集和血栓形成的过 程中起着关键作用。研究发现血小板膜糖蛋白基因多态性影响着GP Ia／Ⅱa、GP Ib-IX-V及GPⅡb／Ⅲa等 受体的功能,并可能是缺血性脑卒中的遗传危险因素。本文就血小板膜糖蛋白基因多态性的研究进展 及与缺血性脑卒中的关系作一综述。     

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲ a基因突变与脑血栓的关系

血小板糖蛋白（GP）是一种存在于血小板质膜表面的糖蛋白,在血小板活化和血栓形成过程中起关键作用。血小板膜上存在多种糖蛋白,其中GPⅡh／Ⅲa属于整合素家族黏附受体,是血小板膜含量最多的糖蛋白。GPⅡb／Ⅲa是纤维蛋白原的受体,参与血小板的聚集。GPⅡh／Ⅲa受体的基因突变影响血小板表面受体表达的数量与质量,从而影响血小板聚集。因此,GPⅡh／Ⅲa基因的突变与脑血栓疾病的发生、发展密切相关。研究其基因突变及其与脑血栓的关系将为脑血栓的早期诊断和防治提供分子遗传学基础。     

早产儿颅内出血与血小板参数变化及血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2基因多态性的相关性研究

目的探讨早产儿颅内出血（ICH）与外周血血小板参数变化的关系,分析血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2基因多态性与ICH的相关性。方法选择2005年5月至2007年5月在温州医学院附属育英儿童医院新生儿科住院的胎龄〈34周、出生体重〈1500g的早产儿为研究对象。按生后2周内头颅B超检查结果,分为ICH组和无ICH组。ICH组根据ICH分度结果分为轻度（Ⅰ和Ⅱ度）和重度ICH（Ⅲ和Ⅳ度）亚组。人选患儿在入院第2天检测血小板各项参数,采用PCR及限制性内切酶分析法检测血小板膜糖蛋白GPIbctHPA～2基因多态性。各组等位基因比例采用Hardy-Weinberg平衡检验。结果ICH组纳入68例,其中轻度ICH亚组53例,重度ICH亚组15例;无ICH组纳入75例。ICH组PLT和平均血小板体积（PCT）显著低于无ICH组,P〈0．05;重度ICH亚组较轻度ICH亚组上述指标下降更显著,P〈0．05。ICH组58／68例、无ICH组65／75例成功进行了血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2基因多态性检测。ICH组血小板膜糖蛋白GPIbclHPA_2的各基因型比例为：1Tr77．6％（45／58例）,TM17．2％（10／58例）,MM5．2％（3／58例）;M基因频率为13．8％（16／116频次）;无ICH组为,ITr89．2％（58／65例）,TM10．8％（7／65例）,MM0;M基因频率为5．4％（7／130频次）。两组M基因频率差异有统计学意义。轻度ICH亚组与重度ICH亚组M基因频率差异无统计学意义（12．5％ vs 20．0％）。ICH组和无ICH组各基因型比例符合Hardy—Weinberg遗传平衡。含有M等位基因患儿PLT和PCT显著低于无M等位基因患儿。结论①ICH早产儿存在血小板参数异常现象;②血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2基因多态性与早产儿ICH发生的关联性值得更细化的研究;③血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2M等位基因可能与早产儿ICH的严重程度无关。     

血小板膜糖蛋白Ia基因807nt多态性与急性心肌梗死的关系研究

目的通过检测急性心肌梗死患者及对照人员的血小板膜糖蛋白（GP Ia）基因807nt多态性,探讨该多态性与急性心肌梗死发病的关系。方法血小板膜糖蛋白Ia基因807nt多态性分析：（1）碘化钾法提取人基因组DNA。（2）多聚酶链反应（PCR）扩增目的基因片段。（3）酶切产物经2%琼脂糖凝胶电泳分离后,紫外灯下检测酶切结果。（4）SPSS11.5软件分析数据。结果（1）急性心肌梗死组血小板膜糖蛋白Ia基因807nt处T等位基因频率显著高于对照组。（2）急性心肌梗死组血小板膜糖蛋白Ia基因807ntTT＋TC基因型频率显著高于对照组。（3）在血小板膜糖蛋白Ia基因807ntTT＋TC和CC基因型之间,高血压病和糠尿病的发病率无显著性差异。（4）在血小板膜糖蛋白Ia基因807nt TT＋TC和CC基因型之间,空腹血糖、血清甘油三脂浓度无显著性差异。（5）急性心肌梗死患者平均甘油三脂水平显著高于对照组。结论（1）血小板膜糖蛋白Ia基因807nt处T等位基因可能是急性心肌梗死发病的独立遗传性危险因素。（2）血小板膜糖蛋白Ia基因807nt多态性可能与高血压病、糖尿病的发病及糖代谢等无关。     

抗血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体的原核表达及其生物活性

目的：研制抗血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa Fab抗体。方法：通过问接免疫荧光试验和血小板聚集抑制试验，选取鼠源抗血小板糖蛋白Ⅱb／Ⅲa单克隆抗体(mAb P140)。从分泌该mAb的杂交瘤细胞株(P140)中，克隆到抗体轻链基因和重链Fd段基因，构建原核表达重组质粒p3MH／P140x-Fd，并在XLI-Blu菌株中进行表达。采用钴亲和层析法对P140 Fab抗体进行纯化，用SDS-PAGE、ELISA和Western blot等方法，对P140 Fab抗体进行检测，并通过血小板聚集抑制试验，观察P140 Fab抗体的抗栓活性。结果：SDS-PAGE和Western blot表明，纯化的P140Fab抗体的相对分子质量(Mr)约为47000。ELISA的结果显示，P140 Fab抗体可与人血小板特异性结合。在体外ADP诱导的血小板聚集试验中，P140 Fab抗体对血小板聚集的抑制作用成剂量依赖性，IC50的平均值为16．85mg/L。结论：成功地研制出具有抗栓活性的抗血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa的Fab抗体。     

血小板特异性抗体及HLA抗体引起血小板输注无效的研究

目的分析血小板输注无效（PTR）患者血小板同种抗体,并对其HPA及HLA-Ⅰ类抗原进行基因分型,探讨血小板输注无效与血小板同种抗原／HLA—Ⅰ类抗原相关性。方法应用ELISA方法对17例血小板输注无效患者血清中的血小板抗体进行检测;运用PCR—SSP方法,采用HPA分型试剂盒检测血小板同种抗原7个抗原系统HPA-1、2、3、4、5、6、15,以及HLA分型试剂盒对HLA—A／B抗原进行基因分型。结果6名患者单独表达HLA抗体,4名患者表达血小板特异性糖蛋白抗体,3例HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体共同表达．其中以GPⅡb／Ⅲa为主。对17例患者HPA系统和HLA-Ⅰ类抗原基因分型,发现HPA-3系统中a的基因频率高达0．676,b为0．324;HLA—A＊02、HLA—A＊24、HLA—A＊11和HLA—B＊60、HLA—B＊13、HLA—B＊46多见。结论HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体表达引起血小板输注无效,了解胛R与HPA／HLA—Ⅰ类抗原的相关性对指导临床血小板配合性输注具有重要意义。     

血小板无力症与GPⅡb-Ⅲa分子缺陷

血小板膜糖蛋白GPⅡb-Ⅲa复合物是在血小板粘附聚集过程中起重要作用的粘附分子受体,能结合纤维蛋白原、VWF等多种粘附蛋白.GPⅡb-Ⅲa质或量的缺陷导致血小板无力症,根据GPⅡb-Ⅲa缺陷程度分为Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ型,临床表现为出血时间延长,聚集反应明显减弱.GPⅡb-Ⅲa的研究已进入分子水平,对其发病机制也有较深的了解.     

人类血小板同种抗原相关的膜糖蛋白基因多态性研究

目的 探讨人类血小板同种抗原(human platelet alloantigen,HPA)-1～17w相关的血小板膜糖蛋白基因多态性.方法 以自行设计的PCR引物特异性扩增HPA-1～17w相关的血小板膜糖蛋白基因片段,PCR产物经酶切纯化后直接进行DNA序列分析,根据序列特征确定HPA基因型和相应膜糖蛋白基因多态性.结果 通过对112名随机汉族个体的糖蛋白基因序列分析,发现13个新的单核昔酸多态性位点和1个微卫星重复序列.其中ITGB3基因上的2个变异位点1333G/A和1960G/A引起膜糖蛋白GPⅢa的V419M和E628K氨基酸改变.结论 膜糖蛋白基因具有多态性位点,可能引起膜糖蛋白结构的改变,同时可能影响现有部分HPA基因分型方法的准确性.

Abstract：

Objective To investigate the polymorphisms of platelet membrane glycoprotein genes related to human platelet alloantigen (HPA)-1 to 17w. Methods The DNA segments of platelet membrane glycoprotein genes related to HPA-1 to 17w were amplified using author' s designed primers. The amplification products were purified and directly sequenced to identify the HPA genotype and glycoprotein gene polymorphisms. Results Thirteen new single nucleotide polymorphisms (SNPs) and a micro-satellite sequence were found in the glycoprotein genes from the 112 random samples, in which two SNPs (1333G/Aand 1960G/A) in ITGB3 gene result in two amino acid change (V419M and E628K) on glycoprotein GPⅢ a.Conclusion New variants in platelet membrane glycoprotein genes were identified, which may lead to structure change of platelet membrane glycoprotein and affect the accuracy of partial HPA genotyping method.     

血小板无力症的流式细胞术分析方法

板膜糖蛋白(glycoprotein, GP)Ⅱb/Ⅲa属整合素家族, 是纤维蛋白原受体, 介导血小板的聚集.GPⅡb/Ⅲa复合物质的数量不够和质量缺陷都可导致血小板聚集功能障碍, 并导致产生患血小板无力症(Glanzmann′s thrombasthenia, GT)[1].检测血小板膜上GPⅡb/Ⅲa复合物的缺陷, 可从分子水平诊断GT.本文介绍一种用荧光单抗标记血小板, 通过流式细胞术分析诊断GT的方法.     

血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa受体拮抗剂RGDS肽类作为抗栓剂的研究

位于纤维蛋白原上的ＲＧＤ肽片段是血小板糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ复合物的识别位点，两者的结合是血栓形成的最后共同通路。合成的ＲＧＤ肽类物质作为血小板糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受体拮抗剂，有效地抑制血小板粘附、聚集与阻止血栓形成，对于心脑血管疾病的防治具有重要的潜在临床应用价值。     

细胞间黏附分子-1基因多态性与疾病易感性

细胞间黏附分子-1(ICAM-1)属于免疫球蛋白超家族成员之一，是一种细胞表面单链糖蛋白，它表达于多种细胞表面，通过识别其受体LFA-1、MAC-1、P150、P95介导细胞-细胞间的黏附，参与多种炎症反应及免疫过程。不同种族和地区研究证实ICAM-1基因多态性与人类多种疾病相关。     

精-甘-天冬-丝氨酸四肽对大鼠主动脉内皮剥脱术后血小板活化的影响

目的和方法：在大鼠主动脉球囊内皮剥脱模型上,于术后３、１０、２１ｄ观察在体和体外孵育血小板活化及应用血小板膜糖蛋白（ＧＰ）Ⅱｂ／Ⅲａ受体拮抗剂精－甘－天冬－丝氨酸（ＲＧＤＳ）肽对其活化的影响。结果：球囊剥脱术后大鼠的血小板聚集明显增强,蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性明显增高,环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）活性明显降低,血小板膜活化的ＧＰⅡｂ／Ⅲａ受体密度明显增高,均以３ｄ组最为明显。应用ＲＧＤＳ肽体外孵育,可明显逆转上述改变。结论：血小板膜活化的ＧＰⅡｂ／Ⅲａ受体的变化,可能是内皮剥脱时介导血小板活化的关键途径。     

血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa受体拮抗剂RGDS肽类作为抗…

位于纤维蛋白原上的ＲＧＤ肽片段是血小板糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ复合物的识别位点，两者的结合是血栓形成的最后共同通路。合成的ＲＧＤ肽类物质作为血小板糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受体拮抗剂，有效地抑制血小板粘附，聚集与阻止血栓形成，对于心脑血管疾病的防治具有重要的潜在临床应用价值。     

慢性ITP患者血小板膜表面GPⅣ、GPⅤ特异性自身抗体的测定

目的：检测慢性ITP患者血小板膜表面GPⅣ、GPⅤ特异性自身抗体。方法：应用改良直接MAIPA(单克隆抗体俘获血小板抗原技术)检测血小板膜糖蛋白(GPⅣ、GPⅤ)特异性自身抗体。结果：慢性ITP患者血小板洗脱液中GPⅣ特异性和GPⅤ特异性自身抗体的阳性率分别为6．3％和4．8％。结论：血小板膜GPⅣ、GPⅤ分子是慢性ITP自身抗体的靶抗原，但多与GPⅡb／Ⅲa或GPⅠb自身抗原共存。     

人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体的研制及其对血小板聚集功能的影响

目的:构建人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPIⅡb/Ⅲa)Fab噬菌体抗体库,筛选抗GPⅡb/Ⅲa特异性的噬菌体抗体,并对其功能进行研究.方法:取血小板膜糖蛋白抗体(抗GPⅡIb/Ⅲa)阳性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾细胞,采用噬菌体抗体库技术构建人源性抗GPⅡb/Ⅲa Fab噬菌体抗体库,以表达GPⅡb/Ⅲa的CHO123细胞筛选抗体库,并以ELISA法检测噬菌体抗体;用Western blot对抗体进行鉴定,并测定其与血小板抗原的结合;观察筛选到Fab抗体对血小板聚集的影响.结果:筛选出2株能够与血小板膜GPⅡb/Ⅲa特异性结合的Fab抗体,其序列与人免疫球蛋白轻、重链可变区序列具有高度同源性,表达纯化的Fab抗体能抑制血小板聚集.结论:成功地从人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体库筛选出特异性识别GPⅡb/Ⅲa,具有抑制血小板聚集作用的人源性抗体.     

假性血小板减少症分析前的质量控制

假性血小板减少症（pseudothrombocytopenia,PTCP）是由于在EDTA（枸橼酸盐、肝素等）作为抗凝剂的前提下出现的免疫介导的血液中冷抗血小板自身抗体,使血小板互相聚集现象,这种EDTA依赖的冷抗血小板自身抗体直接作用于血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa上,同时,这种与血小板结合的自身抗体Fc端可与单核细胞或淋巴细胞膜上Fc受体结合,     

细胞间黏附分子-1基因多态性与疾病易感性

细胞间黏附分子-1(ICAM-1)属于免疫球蛋白超家族成员之一,是一种细胞表面单链糖蛋白,它表达于多种细胞表面,通过识别其受体LFA-1、MAC-1、P150、P95介导细胞-细胞间的黏附,参与多种炎症反应及免疫过程。不同种族和地区研究证实ICAM-1基因多态性与人类多种疾病相关。     

高剪切场诱导血小板活化和聚集机制的研究进展

剪切诱导血小板聚集(shear-induced platelet aggregation,SIPA)是动脉血栓的重要成因。在高剪切流场下血小板由膜表面膜糖蛋白(GP Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ和GP Ⅱb／Ⅲa)与血浆中的von Willebrand因子(vWF)介导发生活化、黏附和聚集。但在低剪切流场却观察不到这种现象,因而SIPA现象是生化因素和力学因素的耦合作用的结果。作者以介导血小板聚集的蛋白质分子为线索综述了近年来有关SIPA机制的研究成果,并提出从力学环境与生化反应的耦合关系入手研究SIPA现象触发机制是今后值得深入的研究方向。     

GPⅡb/Ⅲa和FAK在血小板信号转导中的作用

GPⅡb/Ⅲa是血小板膜上最重要的糖蛋白,不但参与血小板的黏附、聚集反应,同时介导血小板的信号转导,在维持血小板正常功能中起关键作用.近几年对GPⅡ b/Ⅲa介导的双向信号转导过程的研究有了较大进展,其中信号转导分子--黏着斑激酶在信号转导中所起的重要作用也日益引起人们的重视.     

血小板膜糖蛋白Ⅳ的基础与临床

血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP Ⅳ)与溶酶体结合膜蛋白(LIMP Ⅱ)同属于一类新基因家族。近年,血小板膜GP Ⅳ的cDNA克隆成功,使人们对它的分子结构和基因结构特征有了清楚的认识。血小板膜GP Ⅳ主要参与血小板的粘附、聚集和信号传导功能,而血小板膜GP Ⅳ的质或量异常,可能与某些疾病的发生、发展有一定的关系。