联用Plackett-Burman与Box-Behnken设计控制青黛制备过程中靛玉红的生成

目的:筛选出青黛炮制过程中显著影响靛玉红生成的因素,优化最佳水平组合,确定生成靛玉红的最佳工艺。方法:以鲜叶产靛玉红的质量分数(mg·g-1)为指标,采用Plackett-Burman设计,Box-Behnken设计效应面分析等统计学方法,筛选出显著影响因素及最佳水平组合。结果:青黛的浸泡、打靛工艺确定为浸泡前不除蜡、浸泡液pH7、溶剂用量-鲜叶质量(mL∶g)15、浸泡不避光、浸泡48h、温度60℃、通气时间180min、加氨水调节打靛前pH至10.5。结论:系统考察了青黛炮制过程中各个影响因素对产生的有效成分靛玉红的影响,使工业化生产控制靛玉红的生成变为现实,为进一步研究青黛炮制原理奠定了基础。     

青黛炮制浸泡发酵环节微生物群落结构与吲哚类成分转化研究

马蓝叶的浸泡发酵是青黛炮制的重要环节,主要目的在于促进靛蓝、靛玉红前体物质的合成、内源性酶以及其他有效成分的溶出,但忽略了微生物在发酵过程的作用。该研究基于16S扩增子测序和生物信息学分析技术对青黛浸泡发酵与石灰打靛过程微生物群落结构变化进行研究,并对发酵液中的靛蓝、靛玉红、靛红、色胺酮、吲哚苷等成分进行含量测定,研究微生物与主要成分变化的关联关系。结果表明,随着发酵的进行,微生物多样性逐渐下降,尤其是打靛后微生物多样性降至最低。变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门是发酵过程主要的优势群落,且随着发酵的进行,微生物结构不断变化,变形菌门随着发酵时间增加,相对丰度逐渐降低,打靛后降至最低;厚壁菌门相对丰度升高,拟杆菌门先下降后升高。青黛中有效物质的含量也表现出了不同的规律,随着发酵的进行吲哚苷含量逐渐下降,靛蓝呈现先上升后下降趋势,靛玉红、靛红呈现先下降后上升趋势,色胺酮含量逐渐升高,这可能与微生物在不同成分的合成过程所扮演的作用有关。该研究初步阐明了微生物在浸泡发酵过程中的重要作用,为青黛炮制工艺过程的控制与高质量青黛饮片的制备提供了科学依据。     

古今青黛饮片形式的变化:靛花与粗靛质量的系统对比研究

青黛的药用历史悠久,其加工炮制过程具有特殊性及复杂性。明代以前,药用青黛取打靛形成的顶层泡沫状物的干燥品“靛花”,现代生产工艺将打靛形成沉淀物“粗靛”除杂干燥后制得青黛成品,古今青黛饮片形式已经发生了重大的转变。因此,该文采用现代分析技术对粗靛与靛花进行质量对比研究。首先基于UPLC-Q-TOF-MS进行化学成分分析,HS-SPME/GC-MS/MS方法分析气味化学成分,测定粗靛和靛花中靛蓝、靛玉红、总灰分与水溶性浸出物的含量,无机成分组成,并且观察其微观形态及表面元素组成。最后通过脂多糖和2,4-二硝基苯酚致大鼠发热模型对靛花和粗靛的解热活性进行对比,发现靛花解热作用起效更快且药效更持久,而粗靛的解热作用不明显。该研究对青黛加工炮制工艺研究具有重要意义,为青黛的质量标准制定与现代炮制装备研制提供了参考。     

青黛炮制过程中靛蓝定向生成的工艺设计与优化

目的筛选出青黛炮制过程中显著影响靛蓝生成的因素,优化最佳水平组合,确定生成靛蓝的最佳工艺。方法应用HPLC法测定粗靛中靛蓝;并以鲜叶产靛蓝的量(即靛蓝的转移率)为指标,采用Plackett-Burman设计,Box-Behnken设计效应面分析等统计学方法,筛选出显著影响因素及最佳水平组合。结果青黛的浸泡、打靛工艺确定为浸泡前不除蜡,浸泡液pH 3.5,溶剂用量与鲜叶质量比例为13,避光、浸泡24 h,温度25℃,通气时间30 min,加氨水调节打靛前pH值至9。结论系统地优化了青黛浸泡、打靛环节的工艺,阐明了青黛炮制过程中各个影响因素对有效成分靛蓝的影响,为炮制原理的研究奠定了基础。     

甘草—青黛药对配伍的增溶作用研究

目的：青黛难溶,与甘草配伍以增加其在水中的溶解度,提高药液中青黛有效成分的含量及生物利用度。 方法：将甘草与青黛、甘草酸分别与靛蓝和靛玉红、柠檬酸与青黛进行配伍,均以HPLC法分别测定各实验中靛蓝、靛玉红的含量。 结果：青黛与生、炙甘草配伍,溶液中靛蓝和靛玉红的含量均明显增多,但炙甘草较生甘草的低约30%左右;将甘草酸单铵盐直接与靛蓝、靛玉红分别按比例混合,测得两者含量均显著增多,约增溶4~8倍左右,且2:1为最佳比例;青黛配伍不同比例柠檬酸,溶液中靛蓝和靛玉红含量无明显变化。 结论：甘草配伍青黛到达了增溶的目的;甘草酸起主要作用,是以其表面活性进行增溶;同时为中药药对配伍应用找到了一定的理论依据。     

甘草-青黛药对配伍的增溶作用考察

目的:考察青黛-甘草药对配伍的增溶效果。方法:将甘草与青黛、甘草酸分别与靛蓝和靛玉红、柠檬酸与青黛进行配伍,采用HPLC测定各试验品中靛蓝、靛玉红的含量。结果:青黛与生、炙甘草配伍,溶液中靛蓝和靛玉红的含量均明显增多,炙甘草较生甘草约低30%;将甘草酸单铵盐直接分别与靛蓝、靛玉红按比例混合,两者含量均显著增多,约增溶4～8倍,其中2∶1为最佳比例;青黛配伍不同比例柠檬酸,溶液中靛蓝和靛玉红含量无明显变化。结论:甘草配伍青黛可达到增溶目的,甘草酸起主要作用,为中药药对配伍应用提供理论依据。     

基于色度分析原理的青黛有效成分含量与其色度值的相关性分析

目的:研究青黛粉末外观颜色及其提取液颜色与靛蓝、靛玉红含量的相关性。方法:采用HPLC法测定27批青黛中靛蓝、靛玉红的含量,采用分光测色仪测定青黛粉末及提取液的色度值L~*,a~*,b~*。运用SPSS 20.0软件对青黛有效成分含量与其色度值进行相关性及多元线性回归分析。结果:感官评定青黛粉末外观颜色结果表明,随着粉末颜色加深,分光测色仪测定粉末和提取液的明亮度(L~*)降低、红-绿色度(a~*)升高。相关性分析表明,靛蓝含量与青黛粉末L~*呈负相关(P0.01),相关性系数为-0.520;与a~*呈正相关(P0.01),相关性系数为0.567。靛玉红含量与青黛粉末、提取液的L~*呈负相关(P0.01),相关性系数分别为-0.635,-0.580;与a~*呈正相关(P0.01),相关性系数分别为0.706,0.493。结论:青黛粉末外观颜色较深者,其靛蓝、靛玉红含量较高;青黛粉末L~*,a~*与靛蓝、靛玉红含量的相关性比提取液的相关性大;青黛粉末颜色与靛蓝、靛玉红含量具有显著相关性,为青黛快速鉴别方法提供参考依据;采用分光测色仪测定青黛色度值的方法具有稳定性、科学性和可靠性。     

青黛中靛玉红提取方法的研究

目的:探讨从青黛提取较高纯度靛玉红单体的方法。方法:用乙酸乙酯从青黛中提取靛玉红,然后比较提取液在硅胶柱和氧化铝柱的行为。结果:选用硅胶柱分离青黛中的靛玉红,经HPLC测定,靛玉红纯度达98.3%。结论:利用较简单的实验路线,从青黛中得到较高纯度的靛玉红单体。     

北京地区青黛药材商品质量调查及分析

目的调查北京地区14种青黛商品,进行含量测定,并分析影响青黛质量的主要因素。方法按《中国药典》2010版方法测定青黛中靛蓝和靛玉红的含量。结果 14种青黛商品中靛蓝平均含量为2.031%,靛玉红含量为0.066 7%。结论目前市场上青黛药材商品质量存在很大差异,一些样品的靛蓝、靛玉红含量无法达到药典规定的指标。     

不同药物配伍与不同基质对甘石青黛膏经皮吸收的影响

目的建立甘石青黛膏透皮实验中靛蓝及靛玉红的测定方法,考察甘石青黛膏全方与拆方,以及不同基质下靛蓝及靛玉红的体外经皮渗透行为,探讨不同药物配伍与不同基质对其透皮效果的影响。方法采用Franz扩散池,以离体鼠皮为屏障,用高效液相色谱法测定接受液中靛蓝及靛玉红的量;考察全方与拆方、凡士林基质以及橄榄油基质下靛蓝及靛玉红的透皮特性。结果全方组的透皮速率和累计渗透量均大于拆方组,且差异有统计学意义(P0.05);橄榄油基质对软膏中靛蓝的渗透效果较凡士林基质明显,而二者对靛玉红的影响没用显著性差异。结论不同药物配伍与不同基质对甘石青黛膏中靛蓝及靛玉红的透皮吸收均有影响。     

大青叶及其3种类似品中靛蓝、靛玉红含量测定及其指纹图谱初步研究

目的：测定大青叶及其3种类似品中靛蓝、靛玉红的含量,并建立指纹图谱以评价药材质量。方法：采用HPLC建立含量测定方法和指纹图谱的分析条件,比较国内不同产地的大青叶及其3种类似品共17批样品中靛蓝和靛玉红的含量,并计算其HPLC指纹图谱相似度。结果：总体上,蓼蓝中靛蓝含量高于菘蓝,而靛玉红含量低于菘蓝,马蓝和路边青均没有检测到靛蓝和靛玉红。另外,17批样品中,不论是同品种还是不同品种间靛蓝和靛玉红或指纹图谱都有很大的差异。结论：上述方法可有效区分4种称为“大青叶”的商品,并为大青叶药材的质量评价提供了科学依据。     

HPLC法测定马蓝根、茎、叶中靛玉红、靛蓝的含量

目的:建立HPLC法测定不同地区、不同采收期马蓝根、茎、叶中靛玉红、靛蓝的含量,为规范种植马蓝和重新确定南板蓝根药用部位提供基础研究资料。方法:用C18柱,以甲醇-水(75∶25)为流动相,在289 nm处测定。结果:靛玉红、靛蓝线性范围分别为3.875~23.25μg/m l、3.05~18.3μg/m l。回收率分别为96.9%,RSD=3.5%,n=5(靛玉红);96.6%,RSD=2.8%,n=5(靛蓝)。结论:非花果期、花期、果期马蓝的根、茎、叶中靛玉红、靛蓝的含量依次递减;同一株马蓝根、茎、叶中靛玉红、靛蓝的含量依次递增。     

大青叶及其3种类似品中靛蓝、靛玉红含量测定及其指纹图谱初步研究

目的:测定大青叶及其3种类似品中靛蓝、靛玉红的含量,并建立指纹图谱以评价药材质量.方法:采用HPLC建立含量测定方法和指纹图谱的分析条件,比较国内不同产地的大青叶及其3种类似品共17批样品中靛蓝和靛玉红的含量,并计算其HPLC指纹图谱相似度.结果:总体上,蓼蓝中靛蓝含量高于菘蓝,而靛玉红含量低于菘蓝,马蓝和路边青均没有检测到靛蓝和靛玉红.另外,17批样品中,不论是同品种还是不同品种间靛蓝和靛玉红或指纹图谱都有很大的差异.结论:上述方法可有效区分4种称为"大青叶"的商品,并为大青叶药材的质量评价提供了科学依据.     

Indigo naturalis upregulates claudin-1 expression in human keratinocytes and psoriatic lesions

Ethnopharmacological relevance

Indigo naturalis is used in traditional Chinese medicine to treat various dermatoses. Our previous clinical studies showed that indigo naturalis is an effective treatment for psoriasis. Herein, the capabilities of indigo naturalis extract and its derivatives to increase claudin-1 expression and tight junction (TJ) function in human keratinocytes and psoriatic lesions were further studied.

Materials and methods

Claudin-1 expression in psoriatic plaques with or without indigo naturalis treatment was analyzed by immunohistochemical methods. In primary human keratinocytes, the expression of claudin-1 was analyzed by fluorescent immunostaining, a real-time RT-PCR, and Western blot analysis. The effect of indigo naturalis on TJs was evaluated by measuring the transepithelial electrical resistance (TEER) and paracellular tracer flux.

Results

The indigo naturalis extract upregulated mRNA and protein expressions of claudin-1 and function of TJs in primary human keratinocytes in concentration-dependent manners. Its main components, indirubin, indigo, and tryptanthrin, exerted synergistic effects on upregulating TJ functions in primary human keratinocytes. In addition, indigo naturalis increased the activity of protein kinase C (PKC), and a known potent PKC inhibitor, Ro318220, attenuated the indigo naturalis-induced claudin-1 expression. Significantly, restoration of claudin-1 was observed in healed psoriatic lesions after indigo naturalis treatment.

Conclusions

Indigo naturalis upregulates claudin-1 expression and restores TJ function in keratinocytes. Our data also suggest that indirubin, indigo, and tryptanthrin have a synergistic effect on TJ function.     

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS和HPLC-DAD法研究不同干燥方式对马蓝叶化学成分的影响

目的 研究阴干、晒干、真空冷冻干燥、热风干燥4种干燥方式对马蓝Baphicacanthus cusia叶化学成分的影响,寻找差异成分,并建立HPLC-DAD同时定量分析5种吲哚类生物碱成分的方法,以期为建立规范的马蓝叶干燥方式提供理论依据。方法 利用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS对4种干燥处理的马蓝叶进行定性分析,并结合热图聚类分析（heat map clustering analysis,HCA）、主成分分析（principal component analysis,PCA）和正交偏最小二乘-判别分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA）筛选差异成分。结果 共鉴定出67个共有化合物。HCA和PCA将阴干和热风干燥归为一类。OPLS-DA筛选出14个差异成分,多为生物碱类,且呈现出不同的变化规律。HPLC-DAD结果表明,不同干燥方式马蓝叶中的5种吲哚类生物碱含量存在明显差异。其中,热风干燥样品的靛蓝含量最高,靛玉红含量最低;阴干样品的靛红、色胺酮、靛玉红含量最高。结论 不同的干燥方式对马蓝叶的品质有明显影响。热风干燥和晒干有利于吲哚苷水解合成靛蓝,但靛红和靛玉红的含量较低。而阴干和真空冷冻干燥样品的靛蓝含量较低,而靛玉红含量较高。阴干和热风干燥能显著提高马蓝叶药效成分的总含量。建议在初加工马蓝叶时使用阴干或热风干燥,为进一步探究马蓝叶的产地加工方式提供了数据支持,同时也为评估马蓝叶的质量提供了技术支持。     

青黛作用于急性幼粒细胞白血病的可视化“药靶蛋白模型”分析

目的:目前青黛已是治疗急性幼粒细胞白血病(APL)的临床有效药物,但其分子机制与物质基础仍不明确。基于此本研究构建青黛与APL可视化药靶蛋白模型,以探究青黛作用于APL的分子机制。方法:通过GEO数据库检索APL微阵列芯片分析APL差异表达基因,使用TCMSP数据库筛选青黛活性成分,结合PubChem和SwissTargetPrediction匹配活性成分的靶基因并进行富集分析。String用于挖掘并构建APL可视化蛋白互作数据,将其读入Cytoscape,通过Centiscape实现网络拓扑分析。综合APL差异表达基因,通过Sybyl与青黛活性成分构建药靶蛋白模型。结果:筛选出3张APL微阵列芯片,164个差异表达基因,9种青黛活性成分,541个靶基因,这些靶点较多地参与细胞凋亡、药物结合、癌症途径、慢性粒细胞白血病等,这些都在APL中起重要作用。拓扑分析显示ELANE,CTSS为核心基因,将其与青黛9种活性成分进行药靶蛋白模型预测,显示靛玉红和靛蓝与核心基因结合度最佳。结论:APL是受多基因调控的复杂疾病,而青黛成分中靛玉红和靛蓝可通过结合ELANE,CTSS作用于APL的发生发展。     

基于成分“敲出法”结合表面性质分析探究青黛低润湿性的关键影响因素

目的采用成分"敲出法"结合表面元素分析法探究青黛低润湿性的关键影响因素,为调控改变青黛表面润湿性提供科学依据。方法以N,N-二甲基甲酰胺为溶媒,采用超声法分别提取0～5次,每次提取30 min,滤过,干燥,制得6种有机物含量差异明显的青黛粉末。采用HPLC法测定6种青黛中靛蓝与靛玉红的含量,测定接触角、表面自由能及其分量、粒度,进行表面形貌及表面元素分析、红外光谱分析等指标,采用相关分析法探讨青黛有机物含量与润湿性的关系。结果 HPLC结果显示,随着提取次数的增加,靛蓝含量从3.320%下降至0.112%,靛玉红含量从0.120%下降至0.006%,在纯水中的接触角从53.56°下降至34.84°,表面自由能的极性分量从24.880 mJ/m2增加至38.701 mJ/m2,非极性分量变化不大,表面自由能总量从46.523 mJ/m2增加至62.240 mJ/m2。扫描电镜显示青黛表面的颗粒物逐步消失,表面变得光滑平整;能谱仪Mapping扫描显示,N元素逐步减少,Ca、Si元素略有增加;粒度分布、红外光谱变化不大;相关性分析显示,靛蓝、靛蓝与靛玉红含量之和与接触角呈显著正相关,含量越高,润湿性越差。结论青黛有机物被敲出后,接触角、表面自由能极性分量与表面自由能总量显著增大,润湿性增加。附着于青黛表面的有机物是导致其低润湿性的关键影响因素,采用粉体表面改性技术改善其亲水性应针对有机物展开。     

青黛治疗溃疡性结肠炎的机制研究进展

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种与自身免疫相关的慢性非特异性肠道炎症性疾病,中医认为UC的病理性质为本虚标实,病理因素主要包括湿、热、瘀、毒等,青黛有清热解毒、凉血消斑之效,作为复方制剂的重要成分之一,被长期用于UC的口服或局部治疗中。近年来研究者采用青黛单药及其主要成分口服或纳肛治疗UC亦取得良好效果,并针对其作用机制开展了大量研究。本文主要归纳总结了近年来青黛及其有效成分提取物(靛玉红、靛蓝、色胺酮)等治疗UC的机制研究。