血清饥饿和表皮生长因子上调人肝癌细胞表皮生长因子受体的研究

目的探讨血清饥饿以及EGF对人肝癌细胞EGFR表达的影响。方法用免疫组化方法研究血清饥饿、5ng／mlEGF和25ng／EGF对人肝癌细胞EGFR表达的影响。结果撤血清培养组、5ng／mlEGF和25ng／mlEGF刺激组人肝癌细胞EGFR的表达阳性细胞分别为(5.66±0.86)％、(10.67±1.26)％和(16.83±1.66)％,与正常对照组(1.81±0.75)％相比较差异显著(P<0.01),EGF刺激组比血清饥饿组明显增高(P<0.01)、25ng／mlEGF组比5ng／mlEGF组增高(P<0.01)。结论血清饥饿和EGF能明显增强人肝癌EGFR的表达,且EGF上调EGFR表达的作用具有剂量依赖效应。     

表皮生长因子对人肝癌细胞EGFR/DNA表达的影响

目的 探讨表皮生长因子(EGF)对人肝癌细胞EGFR／DNA表达的影响。方法 采用双参数流式细胞免疫荧光技术检测。结果 EGF短时间内上调肝癌细胞EGFR及DNA表达，随时间延长表现出下调作用。两种相对立的作用呈时间依赖性；结论 EGFR表达的变化可能是EGF对肝癌细胞表现出两种相对立作用的机理之一。     

EGFR反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段对人肝癌细胞中血管内皮生长因子mRNA表达的研究

目的：探讨表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段对人肝癌细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）基因表达的影响。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法,以次黄嘌吟磷酸核糖转移酶（hypoxanthine phosphoribosyltransferase．HPRT）为内标．分析从1．6～3．2μmol／L浓度的EGFR反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段在84h时对人肝癌细胞VEGF基因mRNA表达水平的影响。结果：EGFR反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段有明显的抑制人肝癌细胞表达VEGF的作用．且这种抑制作用随着EGFR反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段浓度的增高而加强。结论：EGFR反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段能抑制人肝癌细胞VEGF基因的表达．为肝癌的抗血管治疗提供了新的途径和方法．     

表皮生长因子对人绒毛膜促性腺激素分泌的影响及其受体在滋养层细胞中的表达

目的：探讨表皮生长因子（EGF）,表皮生长因子受体（EGFR）在胚胎发育过程中的作用。方法：应用免疫组织化学的方法对滋养层细胞EGFR表达进行定位,定量分析,同时观察不同浓度的EGF对体外培养绒毛组织分泌人绒毛膜促性腺激素（HCG）的影响。结果：EGFR在不同孕期滋养层细胞表达的强度不同,其中孕早期较妊娠中期,晚期表达强,平均A值高,而在孕早期不同阶段EGFR的表达也有差异,妊娠4－6周,7－9周滋养层细胞表达低于10－12周,EGF具有促进体外培养的绒毛组织分泌HCG的功能,且随浓度增加而分泌功能增强,当EGF浓度为100ng／ml时,HCG的分泌量达到峰值,EGF浓度达到200ng/ml时,HCG的分泌量不再增加。结论：EGFR在不同孕期滋养层细胞表达的强度不同,与妊娠期间孕妇体内HCG的浓度变化具有一致性;EGF在一定范围内具有促进滋养细胞分泌HCG的功能,由于EGFR在滋养层细胞上表达的数量是一定的,当EGF饱和了EGFR所有结合位点HCG分泌不再增加,所以EGF,EGFR可能是通过影响滋养层细胞HCG的分泌来调节胚胎的发育。     

表皮生长因子对人肝癌细胞EGFR/DNA表达的影响

目的探讨表皮生长因子(EGF)对人肝癌细胞EGFR/DNA表达的影响. 方法采用双参数流式细胞免疫荧光技术检测. 结果EGF短时间内上调肝癌细胞EGFR及DNA表达,随时间延长表现出下调作用.两种相对立的作用呈时间依赖性. 结论EGFR表达的变化可能是EGF对肝癌细胞表现出两种相对立作用的机理之一.     

鼻内糖皮质激素对鼻息肉组织中EGF和EGFR表达的影响

目的：探讨鼻内应用糖皮质激素对鼻息肉组织中表皮细胞生长因子（EGF）和表皮细胞生长因子受体（EGFR）表达的影响。方法鼻息肉患者42例,随机分为激素组（布地奈德鼻喷雾剂128μg/次,2次/d,疗程12周）和对照组（生理盐水喷鼻,2次/d,疗程12周）,每组21例,采用鼻息肉内镜评分评估鼻息肉治疗效果,同时采用免疫组织化学染色方法检测两组鼻息肉组织中EGF和EGFR的表达情况。结果与对照组比较,激素组鼻息肉内镜评分下降（P〈0.05）,黏膜上皮细胞EGF [（0.15±0.04） vs （0.24±0.06）]的表达减少（P〈0.05）,EGFR的表达无差异无统计学意义（P〉0.05）。结论糖皮质激素能抑制鼻息肉黏膜上皮细胞EGF的表达,对EGFR的表达无影响,这可能是其治疗鼻息肉的作用机制之一。     

丹参酮ⅡA对人肝癌SMMC-7721细胞EGF及其受体表达的影响

目的:观察丹参酮ⅡA对人肝癌SMMC-7721细胞EGF及其受体表达的影响.方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,经不同浓度丹参酮ⅡA作用后,用MTT法检测细胞增值;流式细胞仪及Hoechst33342染色荧光显微镜观察细胞凋亡;免疫细胞化学SP法及灰度测定表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及其受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达;放射免疫法检测EGF含量.结果:丹参酮ⅡA对肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性,以0.5 μg/ml作用终浓度抑制效果最明显,其48 h的抑制率为72.5%,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);流式细胞仪检测显示:0.5 μg/ml丹参酮ⅡA作用后,随时间的延长,凋亡率逐渐升高,48 h达高峰,随后逐渐下降[24 h,48 h,72 h凋亡率分别为(4.06±0.27)%、(7.58±0.56)%、(5.23±0.13)%],与对照组比较,各处理组都有显著性差异(均P<0.01);Hoechst33342染色可见凋亡细胞皱缩,核染色质浓缩,核碎裂,亦可见典型的凋亡小体;免疫细胞化学SP法显示:随着丹参酮ⅡA作用浓度的增大,EGF及EGFR表达下调,其0.5 μg/ml组48 h的高表达率分别为10%,20%,灰度值分别为181.52±1.63,179.37±1.59,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);放射免疫法显示:丹参酮ⅡA作用组细胞培养上清液中EGF含量明显下降.结论:丹参酮ⅡA可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的细胞增殖,促进其凋亡,此作用可能与细胞内EGF及EGFR表达下调有关.     

EGF对人舌鳞癌细胞株MMP-3表达的影响

目的：探讨EGF对人舌鳞癌细胞株MMP-3表达的影响及其机制。方法：对体外培养的人舌鳞癌细胞株用重组人表皮生长因子（rhECF）作为刺激因子,采用半定量RT-PCR和Western Blot方法测定癌细胞中MMP-3mRNA和蛋白含量变化。结果：与未处理组相比,用不同浓度（0．1,1,10ng／m1）EGF处理舌鳞癌细胞后MMP-3表达随浓度的增加而增加,酪氨酸激酶抑制剂Genistein（10μg／ml）能够抑制EGF对癌细胞MMP-3表达的诱导作用。结论：EGF通过酪氨酸激酶通路诱导口腔癌细胞MMP-3的表达。     

表皮生长因子、雌二醇及其受体与肝癌分期的关系及意义

目的对不同分期肝癌组织表皮生长因子（EGF）、雌二醇（E2）及其受体（EGFR、ER）进行检测,旨在探讨EGF、E2及其受体与肝癌分期的关系和意义。方法应用免疫组化S-P法检测40例不同分期肝癌组织EGF、EGFR、E2和ER表达,分析EGF、EGFR、E2和ER与肝癌分期的关系和意义。结果Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期肝癌EGF和EGFR阳性率逐渐增高,Ⅰ期阳性率明显低于Ⅱ期和Ⅲ期（P〈0.05）;I期、Ⅱ期、Ⅲ期肝癌E2、ER阳性率随肝癌进展逐渐降低;除Ⅰ期E2阳性率显著高于Ⅲ期（Fisher精确概率P=0.017）外,其于各组无显著性差异（P〉0.05）。结论 EGF、EGFR与E2和ER在不同分期肝癌表达不同,在肝癌发生、发展和转移中发挥不同作用。     

表皮生长因子受体信号通路调控人肝细胞癌细胞增殖分子机制的研究

目的:研究人肝细胞癌中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达及其细胞内信号转导通路,探讨EGFR在促进肿瘤细胞增殖中的作用.方法:用免疫组化实验检测癌组织中EGFR的表达;用EGF和AGl478处理人肝癌细胞HuH7;用Western blot法检测EGFR、p-EGFR、p-ERK蛋白表达;用WST法检测细胞增长率.结果:17例HCC患者癌组织中,EGFR的阳性表达率为100%;HuH7中EGFR的表达明显高于正常肝细胞HL-7702.外源性EGF(10μg/L)处理后,ERK和EGFR的磷酸化水平提高,同时细胞生长率提高9.2%,而此作用能被AG1478(20 μmol/L)阻断.结论:人肝细胞癌中,EGFR高表达,EGFR的激活主要通过受体磷酸化完成,活化的p-EGFR可能通过ERK/MAPK下游信号通路传递信息,调控人肝细胞癌的发生发展.     

表皮生长因子对小鼠前列腺细胞雌雄激素受体表达的影响

目的 分析外源性表皮生长因子（EGF）对小鼠前列腺细胞雌雄激素受体表达的影响,探讨EGF在前列腺增生发生中的可能作用。方法 实验采用雄性昆明小鼠60只,随机分为1μg,dEGF和2μg／dEGF处理组和对照组,每组20只。实验组和对照组动物分别给予不同剂量的EGF和蒸馏水皮下注射,每日1次,连续28d。采用FCM方法定量分析不同剂量EGF处理组和对照小鼠前列腺细胞雌雄激素受体阳性标记率和表达水平。结果 经EGF处理后,前列腺细胞雌激素受体阳性标记率和表达强度均明显升高（P〈0．01）,2μg／dEGF组雌激素受体表达强度明显高于1μg／dEGF处理组（P〈0．01）;EGF处理后前列腺细胞雄激素受体阳性标记率和表达强度均明显高于对照组（P〈0．05）,但不同剂量EGF处理对前列腺细胞雄激素受体表达的影响未见明显差异。结论 EGF可调控前列腺细胞雌雄激素受体高表达,可能在前列腺增生的发生中发挥一定作用。     

TGFα—PE40对人胰腺癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨基因重组转化生长因子α-绿脓杆菌外毒素融合蛋白（TGFα-PE40,简称TP40）对人胰腺癌细胞生长的导向抑制作用。方法 用免疫组化LSAB法检测人胰腺癌SW－1990细胞表皮生长因子受体（EGFR）的表达,用结晶紫染色法和3H－亮氨酸掺入法检测TP40对SW01990细胞生长及蛋白质合成的抑制,用过量被生长因子（EGF）竞争拮抗TP40的细胞毒作用。结果 SW－1990细胞免疫组化显示出大量棕黄色的EGFR阳性染色。TP40浓度为1－100ng/ml时,对SW－1990细胞生长及蛋白质合成呈剂量依赖性抑制。过量EGF能完全拮抗TP40的细胞毒作用。结论 人胰腺癌SW－1990细胞能高水平地表达EGFR,重组TP40对SW－1990细胞生长具有较强的抑制作用,作用部位为细胞的EGFR。     

表皮生长因子与其受体在鼻息肉上皮中的表达

目的探讨表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFR)在鼻息肉上皮中的表达及其意义。方法收集鼻息肉标本25例,正常下鼻甲黏膜组织10例,采用免疫组化及实时荧光定量PCR技术,观察EGF与EGFR在鼻息肉和正常下鼻甲黏膜组织中的表达情况。结果与正常下鼻甲黏膜组织相比,EGF及EGFR的mRNA水平在鼻息肉组织中的表达下降。在免疫组化染色中,EGF及EGFR主要表达在上皮的基底层细胞,而且在鼻息肉中的表达下降。结论 EGF及EGFR在正常鼻黏膜组织上皮的发生与修复中有着重要的作用。EGF及EGFR在鼻息肉中蛋白水平与mRNA水平表达的下降表明在鼻息肉中上皮修复功能的下调或缺失可能导致或促进鼻息肉的发生。     

表皮生长因子及其受体mRNA在肺癌组织中的表达

目的:探讨肺癌组织中表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFR)mRNA的表达水平和临床意义.方法:采用半定量RT-PCR技术检测30例肺良性疾病、55例原发性肺癌及癌旁肺组织中EGF、EFGR mRNA的表达水平.结果:非小细胞肺癌(NSCLC)组织EGF mRNA表达阳性率为72.92%,EGFR阳性率为77.08%;肺良性病变肺组织EGF阳性率为6.67%,EGFR阳性率为13.33%;7例小细胞肺癌(SCLC)均无EGF、EGFR mRNA阳性表达.在NSCLC中,距癌组织3 cm以内癌旁肺组织EGF阳性率为77.08%,EGFR阳性率为79.17%;6 cm以远正常肺组织为10.42%.NSCLC组织、癌旁肺组织mRNA含量明显高于良性肺疾病、远癌正常肺组织(P＜0.01).结论:肺癌组织EGF、EGFR mRNA表达水平显著高于良性疾病肺组织,检测EGF、EGFR mRNA有助于肺部良恶性疾病的鉴别诊断.     

阿霉素肾病大鼠表皮生长因子及其受体的表达

目的研究阿霉素肾病大鼠肾组织中表皮生长因子(EGF)及其受体EGFR的表达分布以及表达量与尿蛋白之间关系。方法选择第5天、14天、28天作为动态观察的时点,同期设立正常对照。采用荧光定量RT-PCR、免疫组织化学及计算机图像定量分析EGF mRNA以及EGF、EGFR蛋白在肾组织的表达,同时测定24 h尿蛋白定量。WT1和EGFR双重免疫组化确定EGFR在肾小球内确切细胞定位。结果阿霉素注射后第5天,EGFmRNA即较正常增高,28 d明显增高并高于5 d和14 d。正常对照组EGF阳性细胞主要分布于远曲小管和髓袢,阿霉素组EGF还在集合管和近曲小管上表达;EGF阳性表达范围和强度随尿蛋白增加而增加;EGFmRNA表达量以及EGF在肾小管中的表达强度与24 h尿蛋白量呈正相关。肾小管上皮细胞广泛表达EGFR,阿霉素组EGFR在小管表达均高于正常,但组间各时点差异无显著性;随尿蛋白增加EGFR在肾小球内表达逐渐增多。EGFR在肾小球和肾小管中的表达强度均与24 h尿蛋白量呈正相关。WT1和EGFR双重免疫组化显示阿霉素肾病组EGFR可在足突细胞上表达,正常组则无。结论阿霉素肾病大鼠的肾小球脏层上皮有EGFR的表达。EGF/EGFR可能参与了阿霉素肾病的发病过程以及蛋白尿的形成。     

EGF对一膜表面稳定表达EGFR细胞系生物学特性的影响

目的探讨表皮生长因子(ep iderm al growth factor,EGF)对一膜表面稳定表达表皮生长因子受体(EGF receptor,EGFR)细胞系CHO-EGFR-GFP1生物学特性的影响。方法采用台盼蓝染色计数活细胞数观察不同浓度EGF刺激48 h后细胞增殖情况;PI染色一步法流式细胞仪检测不同浓度EGF刺激48 h和100 ng/mL EGF刺激不同时间细胞周期改变以及细胞凋亡,Ho-echst 33258染色观察细胞凋亡;流式细胞术测定GFP(green fluorescent prote in,绿色荧光蛋白)平均荧光强度判定EGFR表达水平的变化。结果低浓度的EGF可促进CHO-EGFR-GFP1细胞增殖,而高浓度EGF刺激则引起CHO-EGFR-GFP1细胞失去黏附、细胞周期阻滞、促进细胞凋亡以及抑制细胞增殖;高浓度EGF以一种剂量依赖性方式同时上调EGFR的表达和引起细胞凋亡。结论不同浓度EGF对CHO-EGFR-GFP1细胞生长特性影响不同,高浓度EGF刺激引起肿瘤细胞失去黏附可能是导致肿瘤细胞容易脱落、发生转移的机制之一。     

AAV-HGFK1抑制EGFR磷酸化拮抗大肠癌细胞生长

目的：研究腺相关病毒‐肝细胞生长因子K1（AAV‐HGFK1）对KRAS、BRAF野生型和突变型大肠癌细胞株的生长影响。方法选择人源的细胞株 KRAS和BRAF野生的SW48,KRAS突变的 Lovo ,KRAS突变且不表达表皮生长因子受体（EGFR）的SW620,BRAF突变的HT29,实时荧光定量PCR（RT‐PCR）测定EGFR基因转录水平,分别用5×104 vg/细胞的腺相关病毒（AAV）感染以上细胞株,荧光显微镜和流式细胞仪测定AAV‐EGFP感染率。加入或不加表皮生长因子（EGF）的情况下,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测EGFR、磷酸化EGFR（p‐EGFR）和β‐actin ,四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法测细胞增殖。结果Lovo和 HT29高表达EGFR ,而SW48表达EGFR较低,加入EGF促进了以上3种细胞的 EGFR磷酸化,AAV‐HGFK1抑制EGFR磷酸化,从而显著降低其增殖。EGF对SW620增殖无显著影响,但AAV‐HGFK1感染抑制了胎牛血清培养的SW620细胞。结论 AAV‐HGFK1可能直接作用于EGFR ,抑制其磷酸化从而阻断EGF促进细胞增殖,并可能通过其他通路对KRAS或BRA F基因野生或突变的大肠癌细胞都有抑制作用。     

EGFR信号通路调控结肠癌Caco-2细胞侵袭转移的分子机制

目的探讨EGFR信号通路与人结肠癌Caco-2细胞增殖和侵袭转移的关系及其调控分子机制。方法采用MTT法和Boyden小室体外侵袭实验检测Caco-2细胞增殖和体外侵袭能力;采用RT-PCR方法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2基因转录水平;采用W estern b lot法检测P-EGFR和P-ERK蛋白表达。结果外源性EGF(10μg/L)增加P-EGFR和P-ERK蛋白表达同时使24 h细胞生长率提高了23.35%(P<0.01),使过膜细胞数由(208±3)上升到(241±5)(P<0.01)。当用AG1478(20μmol/L)和PD98059(40μmol/L)分别阻断EGFR和ERK/MAPK后,EGF作用消失,Caco-2细胞生长明显抑制(P<0.01),但无时间效应关系;Caco-2细胞体外侵袭力明显减弱(P<0.01)。RT-PCR测定显示,EGF能增加Caco-2细胞MMP-2、MMP-9 mRNA的表达和减少TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达;而AG1478能逆转EGF的作用,使MMP-2、MMP-9 mRNA的表达下降,TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达上升,结果MMP-2/TIMP-2比值和MMP-9/TIMP-1比值均下降(P<0.01)。结论EGFR-ERK/MAPK信号通路通过改变基质金属蛋白酶和其抑制剂mRNA比值调控人结肠癌细胞侵袭转移能力。     

鼠萎缩性胃炎表皮生长因子及其受体表达

目的 :探讨表皮生长因子 (EGF)与萎缩性胃炎的关系。方法 :应用放射免疫法和免疫组化 En vinsion技术检测 2 0例萎缩性胃炎和 2 0例正常 SD大鼠血清 EGF及胃粘膜组织 EGFR水平。结果 :萎缩性胃炎大鼠血清EGF水平为 (0 .14 9± 0 .0 2 )μg/ L ,EGFR表达的阳性率为 80 % ,较正常大鼠组 [(0 .0 4 3± 0 .0 0 3)μg/ L和 0 % ]明显增高 (P<0 .0 1)。结论 :实验性萎缩性胃炎大鼠体内有高水平 EGF/ EGFR表达。EGF/ EGFR可能参与了萎缩性胃炎的发生、转化过程。     

EGFR反义RNA的转染对人类鼻咽癌CNE－2细胞EGFR的表达下调及恶性表型的抑制

目的 利用反义RNA抑制靶基因表达的策略，下调EGFR的表达而探讨对人类低分化鼻咽癌CNE-2细胞的恶性表型的抑制性效应。方法 将人EGFR的N-端1．35kb片段反向构建人逆转录病毒表达载体pLXSN中，并用脂质体介导转染人鼻咽癌CNE-2细胞，G418筛选并分离阳性克隆，将两个EGFR反义cDNA转染的克隆细胞命名为CNE-2／AS4和CNE-2／AS8，而空载体转染的细胞命名为CNE-2／pLXSN。125I-EGF配体结合分析细胞膜上EGFR的表达，台盼蓝染色法测定细胞生长的改变，并用软琼脂集落形成实验检测细胞转化，最后，将筛选的各组阳性克隆细胞分别注射人裸鼠皮下，不同时间观察肿瘤生长的抑制改变及肿瘤的转移状况。结果配体结合实验结果显示。两个选择的克隆CNE-2／AS4和CNE-2／AS8细胞表面EGFR的数量分别较未转染细胞CNE-2下降18％、45％，表明EGFR反义RNA的表达下词了细胞膜上EGFR的表达；同时，EGFR反义RNA表达的CNE-2细胞生长速率和软琼脂生长能力也较对照组细胞明显降低。注射入裸鼠皮下后，EGFR反义RNA表达的阳性克隆细胞表现出肿瘤生长减慢。淋巴结和肺转移能力也明显降低。结论这些实验结果提示EGFR反义cDNA转染的CNE-2细胞能下调：EGFR的过量表达并部分抑制鼻咽癌的恶性表型，这为进一步阐明：EGFR在鼻咽癌的发生、演化中的功能作用提供了有用的工具。