雷公藤内酯醇抑制脂多糖诱导的PC-12细胞COX-2的表达

 目的　了解雷公藤内酯醇(TP)对PC-12细胞增殖和表达环氧化酶-2(COX-2)及合成前列腺素E₂ (PGE₂ )的影响 ,探讨TP应用于痴呆治疗的可能机制。方法　采用神经生长因子 (NGF)诱导培养PC-12细胞 ,用不同浓度的TP(0,0.28×10^-6,2.8×10^-6,2.8×10^-6mol·L^-1)预处理后 ,加或不加脂多糖(LPS),分别用氚-胸腺嘧啶核苷(³H-TdR)掺入法、竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)、半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)法、细胞酶联免疫法及蛋白免疫印迹 (Western-blot)法检测PC-12细胞的增殖活性、细胞培养上清液中PGE² 的水平、细胞COX-2mRNA及蛋白表达水平。同时提取各组细胞蛋白 ,测定其核转录因子 (NF-κB)活性。结果　TP对LPS诱导的PC-12细胞的COX-2mRNA ,蛋白表达 [空白对照与不同浓度下分别为[(0.34±0.12 )×10^-6,(1.92±0.26)×10^-6,(1.78±0.32)×10^-6,(1.14±0.22)×10^-6,(0.48±0.14 )×10^-6mol·L^-1,P <0.01]及PGE₂ 的合成 [分别为(2.28±0.32)×10^-6,(32.86±6.23)×10^-6,(31.28±5.44)×10^-6,(18.43±3.92)×10^-6,(4.18±1.79)×10^-6mol·L^-1,P<0.01]具有不同程度的抑制作用,与TP浓度(0～28×10^-6mol·L^-1)呈明显正相关性(分别为r=0.94和r=0.92),且对LPS激活的PC-12细胞的核转录因子NF-κB活性有明显的抑制作用[分别为(0.16±0.08)×10^-6,(1.39±0.18)×10^-6,(1.09±0.14)×10^-6,(0.52±0.15)×10^-6,(0.28±0.09)×10^-6mol·L^-1,P<1.01]。实验未观察到TP对PC-12细胞增殖的影响。结论TP可显著抑制LPS诱导的PC-12细胞COX-2细胞COX-2的表达及其产物PGE₂的合成,这种作用可能通过TP抑制PC-12细胞核转录因子NF-κB活性而实现。     

雷公藤内酯醇对AA大鼠脊髓和背根神经节中iNOS,SP表达的影响

目的:观察不同剂量雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠的镇痛效应,及相应节段脊髓背角和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、P物质(substance P,SP)表达的影响,探讨TP对类风湿性关节炎(RA)镇痛作用的可能机制。方法:选用SD大鼠50只,随机分成正常组(A组)、模型组(B组)、TP低(C组)、中(D组)、高(E组)剂量治疗组。除A组外,每组大鼠右后足跖皮内注入0.1 mL弗氏完全佐剂造模。造模后14 d,C,D,E组大鼠采取不同剂量(C组0.1 mg·kg-1,D组0.2 mg·kg-1,E组0.4 mg·kg-1)TP腹腔注射给药,每天1次,连续给药9 d之后检测50%机械痛阈(mechanical withdraw threshold,MWT),用免疫组织化学方法检测腰5(L5)脊髓背角和DRG节段中iNOS,SP的表达变化情况。结果:B组大鼠50%MWT显著低于A组(P<0.01),经过TP治疗后,C,D,E组热痛阈显著高于B组(P<0.01),TP可显著提高AA大鼠MWT,呈一定的量效关系;免疫组化结果表明,B组iNOS,SP阳性表达水平显著升高(P<0.01),而C,D,E组大鼠L5节段脊髓背角和DRG中iNOS,SP阳性表达水平显著低于B组(P<0.01),呈一定的量效关系。结论:TP对AA具有良好镇痛作用;TP可抑制AA大鼠脊髓背角和DRG中iNOS,SP的表达,这可能是TP产生镇痛作用机制之一。     

复方苦参汤对溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中iNOS和COX-2蛋白表达的影响

目的:观察复方苦参汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠模型结肠黏膜诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶2(COX-2)蛋白的作用机制.方法:将20只BALB/c小鼠随机分为4组:正常组、模型组、复方苦参汤组和美沙拉嗪组,每组5只.先适应性喂养1周,在第8天,除正常组外,其余3组分别予3％葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮用1周制...     

HPLC法测定雷公藤内酯醇生物贴中雷公藤内酯醇

目的建立雷公藤内酯醇生物贴的质量标准,雷公藤内酯醇生物贴中雷公藤内酯醇的定量测定方法。方法雷公藤内酯醇生物贴经甲醇超声提取。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(3∶7),检测波长为220 nm。结果雷公藤内酯醇在5~120μg/mL,线性关系良好(r=0.9981)。平均回收率96.5%(n=9)。RSD3%。结论本方法重现性好,灵敏度高。     

雷公藤内酯醇抑制佐剂性关节炎组织NO生成的实验研究

目的:探讨雷公藤内酯醇对佐剂性关节炎大鼠病变关节组织iNOS表达和NO含量的影响。方法:在建立大鼠佐剂性关节炎模型基础上,给予不同剂量雷公藤内酯醇后,检测关节肿胀度和病变关节组织NO含量,观察病变关节组织病理损害程度和iNOS免疫组织染色结果。结果:与模型组比较,3个雷公藤内酯醇治疗组关节肿胀度和病变关节组织NO含量明显减少,病变关节组织的病理损害明显改善,iNOS免疫阳性细胞积分光密度显著减少。结论:雷公藤内酯醇可抑制佐剂性关节炎大鼠病变关节组织iNOS表达从而减少病变关节组织NO含量。     

雷公藤内酯醇对小鼠腹腔激活巨噬细胞释放一氧化氮的影响

目的探讨雷公藤内酯醇(TP)抗炎及免疫抑制作用的机制。方法以 Criess 试剂检测 TP 对小鼠腹腔激活巨噬细胞在不同剂量和不同时间段一氧化氮(NO)分泌的影响。结果在1～10μg/ml 范围内,TP 对腹腔激活巨噬细胞 NO 产生具有明显抑制作用(P<0.01),呈剂量和时间依赖性,且无细胞毒性。结论 TP 能有效抑制小鼠腹腔液中激活巨噬细胞 NO 生成,提示 TP 的抗炎及免疫抑制作用与抑制 NO 的生成有关。     

银杏内酯对大脑中动脉阻塞大鼠脑内iNOS表达的影响

目的:观察银杏内酯对大脑中动脉阻塞大鼠脑内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法:采用颈内动脉线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,对使用银杏内酯、尼莫地平、银可络的大鼠进行神经行为评分,筛选造模成功大鼠进行SABC染色.结果:模型组缺血侧脑组织iNOS大量表达,银杏内酯高、中剂量给药组缺血侧脑组织iNOS阳性细胞表达明显减少.结论:银杏内酯可抑制缺血脑组织iNOS的表达,具有减轻缺血后脑损害的作用.     

雷公藤内酯醇对Caco-2细胞紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的 研究雷公藤内酯醇(Triptolide,TL)对人结直肠腺癌细胞Caco-2紧密连接蛋白(Zonula Oc-cludens 1,Z0-1)表达的影响.方法 在Caco-2细胞建立肠黏膜屏障体外模型的基础上,通过荧光定量PCR、Western Blot和免疫荧光分析紧密连接蛋白ZO-1的表达变化.结果 与对照组相...     

雷公藤内酯醇半合成衍生物对人结肠癌细胞系荷瘤小鼠肿瘤抑制作用的研究

目的:观察和评价雷公藤内酯醇的半合成衍生物(MC002)对人结肠癌HCT-8小鼠模型的肿瘤抑制作用。方法:用BALB/C裸小鼠接种人结肠癌HCT-8瘤株造成小鼠肿瘤模型,以MC002对荷瘤小鼠的相对肿瘤增殖率、瘤重、抑瘤率为指标评价MC002对小鼠的抑瘤作用。结果:MC002各剂量组瘤体积明显小于模型对照组,瘤重均显著降低,在1.5mg.kg^-1、1.0mg·kg^-1给药10次后T/C%均小于40%(P<0.05),且具有量效关系。结论:MC002能有效抑制人结肠癌HCT-8荷瘤小鼠体内肿瘤生长。通过深入研究MC002有可能发展成为一种新型抗癌药。     

雷公藤氯内酯醇研究进展

雷公藤氯内酯醇是从雷公藤值物中分离得到的环氧二萜内酯化合物，足雷公藤中的主要活性物质，本文从生源、半合成、药理等三个方面对该化合物进行全面介绍。     

牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠脑诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的：探讨牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠脑诱导型一氧化氮合酶(Inducible Nitric Oxide Synthase,iNOS)表达的影响。方法：静脉注射内毒素1.5mg／lg、腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GaIN)100mg／kg造成内毒素休克模型,免疫组化方法检测iNOS在脑区的表达。结果：内毒素组iNOS阳性细胞分布于大脑皮质、纹状体、脑干、小脑等。而牛珀至宝微丸能明显降低内毒素所致iNOS表达,二者间比较,差异有显著性。结论：牛珀至宝微丸治疗内毒素休克脑损伤与下调iNOS表达相关。     

龙胆苦苷对炎症靶点iNOS和COX-2抗炎活性研究

目的 本文旨在从中药材黄管秦艽中分离出高纯度龙胆苦苷化合物，并通过其对炎症靶点的抑制作用来考察其抗炎活性。方法 采用HPLC、IR、NMR和MS等方法对龙胆苦苷的纯度及分子结构进行了鉴定，并通过体内、体外及分子对接实验考察其抗炎活性。结果 体外实验以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象，考察不同浓度的龙胆苦苷对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞产生NO以及释放炎症因子PEG2及1L-6的抑制状况，结果表明，龙胆苦苷能够明显抑制NO及炎症因子PEG2、1L-6产生和释放。体内实验以KM小鼠为研究对象，利用二甲苯致小鼠耳肿胀实验考察龙胆苦苷对急性炎症的抑制活性，结果发现龙胆苦苷能有效的抑制小鼠耳肿胀且抑制率达34.17%。分子模拟对接实验发现龙胆苦苷中的糖片段能够与炎症靶点COX-2及iNOS中的氨基酸以氢键的形式有效的结合，进而通过对二者的抑制作用表现出其生物活性。结论 龙胆苦苷是一种潜在的且对炎症靶点COX-2及iNOS具选择性的抑制剂，具有良好的抗炎活性。     

复智胶囊对血管性痴呆大鼠脑组织海马区 诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:观察复智胶囊对血管性痴呆大鼠的作用及脑组织海马区诱导型一氧化氮合酶表达的影响,探讨复智胶囊治疗血管性痴呆的疗效和机制。方法:60只SPF大鼠随机分为4组,每组15只,采用双侧颈总动脉结扎的方法制备血管性痴呆大鼠模型,然后分别为复智胶囊组ig复智胶囊液3.0 g.kg-1,安理申组ig安理申液0.05 mg.g-1,假手术组和模型组均ig生理盐水10 mL.kg-1,均1次/d,连续给药4周后进行行为学分析和脑组织海马区诱导型一氧化氮合酶表达的测定。结果:行为学实验显示,模型组大鼠学习成绩(2 min内寻找平台的时间)与记忆成绩(在2 min内跨越平台及其他3个象限相应平台位置次数)下降;各给药组大鼠的学习成绩与记忆成绩均有提高(P<0.05或P<0.01)。病理形态学显示,与假手术组相比,模型组海马区诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达明显增高,复智胶囊组及安理申组均可抑制iNOS表达水平增加,复智胶囊组抑制作用更为明显。结论:复智胶囊对血管性痴呆大鼠有明显改善作用。其作用机制之一可能与通过抑制iNOS活性的反应性增强来实现的。     

酒大黄对动脉粥样硬化兔血脂和NO 及主动脉iNOS表达的影响

目的:探讨酒大黄对实验性动脉粥样硬化(AS)兔血脂、血清一氧化氮(NO)含量及主动脉诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法:将健康雄性新西兰兔32只随机分为4组(n=8):空白对照组(N组)、AS模型组(M组)、酒大黄低剂量组(L组)和酒大黄高剂量组(H组),常规高脂饮食建立动脉粥样硬化模型。治疗给药12周,全自动生化分析仪检测血清脂蛋白的表达水平,硝酸还原酶法检测家兔血清NO水平,免疫组织化学法检测主动脉组织iNOS蛋白表达,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测兔主动脉组织iNOS mRNA的表达。结果:12周末与模型组相比,酒大黄低、高剂量组血清总胆固醇(TC),低密度脂蛋白(LDL),血清NO含量明显下降(P<0.01或P<0.05),高密度脂蛋白(HDL)明显升高(P<0.01),酒大黄高剂量组甘油三脂(TG)水平显著降低(P<0.01)。主动脉组织iNOS组化染色及iNOS mRNA的表达均明显减弱(P<0.01或P<0.05)。结论:酒大黄干预能抑制AS兔主动脉iNOS及其mRNA的过度表达,减少NO的产生,降低血脂,有利于延缓动脉粥样硬化进程。     

Inhibition of Inducible Nitric Oxide Synthase and Cyclooxygenase‐2 Expression by Phenolic Compounds from Roots of Rhododendron mucronulatum

The roots of Rhododendron mucronulatum Turzaninov have been used in Oriental traditional medicine for the treatment of dysuria, fever, increase of digestive activity and tonics in China and Korea. Activity guided isolation of the roots of Rhododendron mucronulatum Turzaninov has led to the isolation of three flavonoids, one flavan 3‐ol and one proanthocyanidin. Chemical investigation of the 80% Me₂CO extract from the roots of Rhododendron mucronulatum led to the isolation and identification of five compounds: taxifolin (1), taxifolin 3‐O‐β‐d ‐glucopyranoside (2), quercetin 3‐O‐α‐l ‐arabinofuranoside (3), (‐)‐epicatechin (4), procyanidin B‐3 (5). To investigate the antioxidative and antiinflammatory effects of these compounds, their 1,1‐diphenyl‐2‐picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activities and the protein levels of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase‐2 (COX‐2) in LPS‐stimulated HaCaT cells were also quantified by western blotting and their end products, nitric oxide (NO) and prostaglandin E₂ (PGE₂), respectively. Compounds (1–5) showed potent DPPH radical scavenging compared with positive controls (l ‐ascorbic acid). Also, compounds 1 and 2 dose‐dependently inhibited the expressions of inflammatory mediators, NO and PGE₂, suggesting they are promising candidates as antiinflammatory agents. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

琥珀散对子宫内膜异位症大鼠NO及NOS作用研究

目的：探讨琥珀散治疗子宫内膜异位症（EMs）的作用机理。方法：采用夹尾刺激加自体子宫内膜移植法建立病证结合的气滞血瘀型EMs大鼠模型。随机分为模型组、治疗组（琥珀散高剂量组、琥珀散中剂量组、琥珀散低剂量组）和孕三烯酮组,分别灌胃给药,4周后处死。比色法检测血清一氧化氮（NO）含量和一氧化氮合酶（NOS）活性,酶联免疫法检测血浆前列腺素2α（PGF2α）水平,光镜下观察子宫内膜形态学变化。结果：①琥珀散高、中剂量组可降低模型鼠血清NO含量、NOS活性和血浆PGF2α水平,与模型组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）;与孕三烯酮组相比,差异均无统计学意义（P〉0.05）;琥珀散低剂量组可降低模型鼠NO含量,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。②模型组大鼠在位内膜腺体数量多,腺腔完整,异位内膜出现类似于在位子宫内膜的结构。治疗组大鼠在位内膜变化不明显,异位内膜体积偏小,腺体减少,腺上皮呈不同程度的萎缩。孕三烯酮组大鼠在位、异位内膜均见腺体数目少,腺腔缩小,腺上皮细胞萎缩。结论：琥珀散可以降低EMs大鼠血清NO、NOS及血浆PGF2α水平,这可能是琥珀散有效抑制异位病灶种植、生长,缓解盆腔疼痛的作用机理之一。     

芪红合剂含药血清对体外培养人外周血内皮祖细胞NO及NOS的影响

目的观察芪红合剂含药血清对人外周血内皮祖细胞（EPCs）一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）的影响,探讨其对人外周血内皮祖细胞的保护机制。方法12只雄性Wistar大鼠随机分为芪红合剂组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）和对照组,制备含药血清和空白血清。采集健康成人外周血,分离单核细胞,体外培养7d后,收集贴壁细胞,激光共聚焦显微镜及流式细胞仪鉴定正在分化的EPCs,加入含不同浓度芪红合剂药物血清及空白血清的M199培养基孵育24h,将其在倒置荧光显微镜下计数,硝酸还原酶法测定NO,化学比色法测定NOS。结果芪红合剂药物组的血清NO水平和NOS活性明显高于空白血清对照组（P〈0.05）,并且呈剂量依赖性。结论芪红合剂可能通过增加EPCsNOS活性,促进NO分泌,防止血管内皮损伤及动员血管内皮祖细胞修复损伤血管来发挥血管内皮保护作用。     

罗勒胶囊对大鼠移植性肝癌经肝动脉化疗栓塞术后 骨桥蛋白和诱导性一氧化氮合酶表达的影响

目的:观察罗勒胶囊对大鼠移植性肝癌经肝动脉化疗栓塞术(TACE)后细胞中骨桥蛋白(OPN)和诱导性一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探讨罗勒胶囊对肝肿瘤乏氧微环境的影响及意义。方法:建立大鼠移植性肝癌模型,10 d后将造模成功的大鼠随机分为5组。对TACE+生理盐水组和TACE+罗勒胶囊高、中、低剂量组4组大鼠进行TACE,并分别给予生理盐水10 mL.kg-1.d-1和罗勒胶囊300,150,75 mg.kg-1.d-1ig,对非TACE对照组大鼠只进行开腹操作,不进行TACE。给药10d后取出移植性肝癌病理标本,免疫组化法检测肿瘤组织中OPN和iNOS表达情况。结果:瘤重:行TACE的4组大鼠与非TACE组比较均明显减轻(P<0.05),TACE+罗勒胶囊高剂量组较TACE+生理盐水组显著减轻(P<0.05);OPN和iNOS阳性表达率:TACE+生理盐水组与非TACE组比均显著升高(P<0.01);TACE+罗勒胶囊高、中剂量组较TACE+生理盐水组显著降低(P<0.01);TACE+罗勒胶囊高剂量组较TACE+罗勒胶囊中、低剂量组阳性表达率低(P<0.01)。结论:中药罗勒胶囊能改善肝肿瘤局部的乏氧微环境并促进细胞凋亡,使TACE后肿瘤组织中OPN和iNOS表达降低,抑制大鼠移植性肝癌TACE术后肿瘤的复发。     

大鼠实验性脾虚证结肠电-机械活动及其与一氧化氮合酶的关系

目的:研究脾虚证大鼠结肠运动、电活动、体表结肠电活动和结肠神经型一氧化氮合酶(nNOS)改变及四君子汤加味治疗后变化。方法:计算机采集分析系统记录和分析结肠电活动、运动和体表电活动信号;用免疫组织化学方法显示结肠神经细胞和神经纤维内 nNOS。结果:结肠肌层中 nNOS 阳性神经细胞和神经纤维增多,运动频率降低。加味四君子汤治疗后各指标基本恢复至正常水平。体表结肠电活动与慢波的峰值频率相关性比较中,正常组、治疗组相关性皆明显高于其他各组。结论:在脾虚状态下,结肠环行肌运动频率降低,容易造成溏便;nNOS 增加对运动频率降低有影响,但机体仍存在调节稳态的机制。加味四君子汤对脾虚证结肠动力紊乱有一定调理作用。     

慢性鼻炎鼻黏膜中一氧化氮合酶表达与中医证型相关性研究

目的:研究通过比较正常对照组(鼻中隔偏曲患者)和慢性鼻炎中医各证型患者下鼻甲黏膜中一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的表达,以探讨NOS表达与慢性鼻炎中医各证型间的相关性。方法:取符合诊断标准的慢性鼻炎患者及鼻中隔偏曲患者的部分下鼻甲,并将慢性鼻炎组患者按照中医辨证分为肺虚邪滞(气虚证)和气滞血瘀(血瘀证)两型,应用免疫组织化学方法,观察内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在正常对照组和慢性鼻炎气虚组、慢性鼻炎血瘀组下鼻甲黏膜中的分布和表达。结果:HE染色显示:慢性鼻炎组表层上皮细胞增厚,基底膜增厚,腺体增生,血管扩张,而正常组无此表现。eNOS免疫组化显示阳性染色为棕黄色,正常鼻黏膜和慢性鼻炎鼻黏膜均有表达,主要集中于表层上皮细胞、腺体上皮细胞胞质中,血管内皮细胞胞浆中也有少量表达;iN0S免疫组化则显示慢性鼻炎表层上皮细胞、腺体上皮细胞、血管内皮细胞胞质,部分炎性细胞呈阳性反应;而正常鼻黏膜iNOS i无此表达。每张切片在高倍镜下随机取5张图片,经过图像分析及SPSS11.5统计显示,慢性鼻炎组和正常对照组eNOS表达无明显差异,慢性鼻炎组iNOS表达高于正常组,慢性鼻炎组中血瘀组iNOS表达高于气虚组。结论:正常人鼻黏膜中存在NOS的表达,eNOS在正常鼻黏膜和慢性鼻炎患者鼻黏膜中均有表达,运用统计方法计算显示三者间无明显差异;慢性鼻炎鼻黏膜中iNOS表达明显高于正常,提示iNOS在慢性鼻炎发病机制中有重要作用,可能与慢性鼻炎的黏膜水肿、增生、腺体分泌有关。慢性鼻炎组中血瘀组iNOS表达高于气虚组,且两者间存在相关性,提示iNOS一定程度上对中医辨证有一定参考意义。