短柱肖菝葜中的一个新口山酮苷

目的 对短柱肖菝葜Heterosmilax yunnanensis的化学成分进行研究。方法 应用多种色谱技术进行分离纯化,通过理化方法和波谱数据进行结构鉴定。结果 分离和鉴定出一种新化合物。结论 该化合物为1,3,6,7-四羟基-口山酮-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,命名为肖菝葜苷A (heterosmioside A)。     

菝葜中黄酮和二苯乙烯类成分的研究

目的 研究菝葜 Smilax china 的化学成分。方法 采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS柱色谱及半制备液相色谱等技术分离菝葜的化学成分,根据化合物的理化性质及波谱数据鉴定化合物的结构。结果 从菝葜中分离得到11个化合物,其中黄酮类成分7个：二氢山柰酚-5-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)、黄杞苷(Ⅱ)、异黄杞苷(Ⅲ)、双氢槲皮素-3′-O-葡萄糖苷(Ⅳ)、3,5,7,3′,5′-五羟基二氢黄酮醇(Ⅴ)、落新妇苷(Ⅵ)和槲皮素-3′-O-葡萄糖苷(Ⅶ);二苯乙烯类化合物4个： 白藜芦醇苷(Ⅷ)、 藨草素A (scirpusin A,Ⅸ)、 白藜芦醇(Ⅹ)和2,4,3′,5′-四羟基茋(Ⅺ)。结论 化合物Ⅳ～Ⅸ均为首次从该植物中分离得到;化合物Ⅸ的碳谱数据为首次报道。     

小果菝葜化学成分的研究

目的 研究小果菝葜Smilax davidiana的化学成分。方法 采用60%乙醇回流提取,大孔吸附树脂SP825、Sephadex LH-20、硅胶和ODS柱色谱,以及制备HPLC等方法进行分离纯化,并根据化合物的光谱数据鉴定其结构。结果 从小果菝葜中分离得到12个化合物,分别鉴定为白藜芦醇(Ⅰ)、反式白藜芦醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅱ)、顺式白藜芦醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅲ)、槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(Ⅳ)、3′-甲氧基-槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(Ⅴ)、儿茶素(Ⅵ)、表儿茶素(Ⅶ)、1′-O-苄基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅷ)、1′-O-苯乙基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅸ)、1′-O-苯乙基-β-D-呋喃芹菜糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅹ)、2,4,6-三羟基苯乙酮-2,4-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅺ)、3-甲基-正丁醇-1-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅻ)。结论 化合物Ⅴ、Ⅷ～Ⅹ和Ⅻ为首次从菝葜属植物中分离得到,化合物Ⅰ～Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ和Ⅺ为首次从该植物中分离得到。     

菝葜化学成分及其抗氧化活性的研究

目的 研究菝葜Smilax china的化学成分及其抗氧化活性.方法 采用硅胶、反相硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱法进行分离,NMR等波谱学方法进行结构鉴定;采用TEAC法对化合物单体的抗氧化活性进行测定.结果 从菝葜中分离得到了7个化合物和1个混合物.分别鉴定为:cinchonain Ib(Ⅰ)、catechin-(7,8-bc)-4β-(3,4-dihydroxyphenyl)-dihydro-2(3H)-pyranone(Ⅱ)、catechin-(5,6-e)-4β(3,4-dihydroxyphenyl)-dihydro-2(3H)-pyranone(Ⅲ)和catechin-(5,6-e)-4α-(3,4-dihydroxyphenyl)-dihydro-2(3H)-pyranone(Ⅳ)的混合物、二氢山柰酚(Ⅴ)、二氢槲皮素(Ⅵ)、儿茶素(Ⅶ)、棕榈酸(Ⅷ)、β-胡萝卜苷(Ⅸ);抗氧化实验结果表明,化合物Ⅰ～Ⅶ均具有较强的抗氧化活性.结论 化合物Ⅰ～Ⅳ、Ⅶ、Ⅷ为首次从该植物中分离得到.     

菝葜中黄酮和芪类成分的研究

目的：为阐明百合科植物菝葜的有效成分，对其根茎进行了化学成分研究。方法：运用层析手段和波谱方法分离并鉴定了5个酚性化合物。结果：它们的结构为二氢山奈酚(dihydrokaempferol,1)，3，5，4′—三羟基芪(3，5，4′-trihydroxystilbene,2)，3，5，2′，4′—四羟基芪(3，5，2′，4′-tetrahydroxystilbene,3)，二氢山奈酚3—O-α—L—鼠李糖等(黄杞苷，dihydrokaempferol 3-O-α-L-rhamnoside,engletin,4)，槲皮素4′—0-β—D—葡萄糖等(quercetin4′—O-β—D—glucoside,5)。结论：5个化合物均为首次从菝葜中得到，其中化合物1，4，5为首次从菝葜属植物中得到。     

菝葜抗炎有效部位群的效应成分研究

目的探讨菝葜抗炎有效部位群中落新妇苷、花旗松素、槲皮素、芦丁、白藜芦醇、黄杞苷、薯蓣皂苷、薯蓣皂苷元、菝葜皂苷元、甲基原薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、纤维薯蓣皂苷的体外抗炎活性与免疫调节作用,为诠释菝葜的药效物质基础提供依据。方法采用脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7模型,酶联免疫法(ELISA)检测12个单体成分对白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)释放的影响,考察其抗炎活性;采用CCK-8法检测各成分对小鼠脾淋巴细胞体外增殖水平及ELISA检测LPS刺激脾淋巴细胞后各成分对白介素-2(IL-2)、TNF-α和干扰素-γ(IFN-γ)释放的影响,考察其免疫调节活性。结果在LPS诱导的RAW264.7细胞模型中,除白藜芦醇外,其余11种化合物对IL-6都有一定的抑制作用,而落新妇苷还呈现出双向调节作用;落新妇苷、槲皮素、白藜芦醇、原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷及菝葜皂苷元6种化合物对IL-1β具有抑制作用;5种黄酮类单体及白藜芦醇对TNF-α的抑制作用极为显著,而6种皂苷类成分对TNF-α则有促进作用;在脾淋巴细胞模型中,12个单体成分对脾淋巴细胞均有明显的增殖作用,对相应的炎症因子也有明显的抑制作用。结论落新妇苷等12个单体成分均具有抗炎及免疫调节作用,可能是菝葜抗炎有效部位群发挥作用的的主要效应成分。     

RP-HPLC法测定金莲清热颗粒中菝葜皂苷元的含量

目的:测定金莲清热颗粒中菝葜皂苷元的含量。方法:用RP-HPLC法测金莲清热颗粒中菝葜皂苷元的含量,流动相为甲醇,流速为0.8mL/min,检测器为RID-6A。结果:菝葜皂苷元在0.05~1.0mg/mL浓度范围内线性良好(r=0.9997),平均回收率为97.6%,(RSD为0.76%,n=5)。结论:该方法简单准确,可用于金莲清热颗粒的质量控制。     

鞘柄菝葜化学成分研究

研究目的通过成分研究，找出有效成分。研究背景鞘柄菝葜是百合科药用植物，有关其成分分析及药理研究报道较少。研究方法通过冷浸、萃取及柱层折获得单体化合物，并用IR、1HNMR、13CNMR、MS等进行表征，确定其化学结构。结果从其根部获得的7个化合物分别为：木醛酮、薯蓣皂甙元、β－谷甾醇、3，5，4＇－三羟基均二苯乙烯、3，5，3＇，4＇－四羟基均二苯乙烯、胡萝卜甙和正丁基－β－D－果糖甙。结论鞘柄菝葜的活血功用可能与3，5，4＇－三羟基均二苯乙烯及3，5，3＇，4＇－四羟基均二苯乙烯有关。     

黑刺菝葜根脂溶性化学成分研究

目的：研究百合科菝葜属植物黑刺菝葜（Smilax scobinicaulis C.H.Wright）根脂溶性化学成分。方法：采用硅胶柱色谱、HP-20和Sephadex LH-20等分离手段对黑刺菝葜根脂溶性化学成分进行分离纯化,通过波谱数据分析（1H-NMR、13C-NMR）进行结构鉴定。结果：从脂溶性化学成分分离7个化合物。分别鉴定为：（1）β-sitosterol,（2）2,4-dihydroxy-3,6-dimethylbenzoate,（3）1-O-p-coumaroylglycerol,（4）ursolic acid,（5）blumenol A,（6）clemaphenolA,（7）1-O-feruloylglycerol。结论：化合物2~7为首次从该植物中分离得到。     

高效液相色谱法测定菝葜中白藜芦醇的含量

目的建立高效液相色谱法测定菝葜中白藜芦醇含量的方法。方法采用KromasilTMC18(200mm×4.6mm,5μm)色谱柱;流动相:甲醇-水(40∶60);流速:0.8ml/min;检测波长:303nm。结果线性范围为0.0772~1.2352μg,r=0.9998,平均回收率为100.49%,RSD=1.03%。结论该法简便、快速、灵敏、重现性好,适用于菝葜药材的质量控制。     

乙型肝炎病毒前S2蛋白激活人酰基蛋白硫酯酶1启动子

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）前S2蛋白（preS2）对人酰基蛋白硫酯酶1（APT1）启动子的作用。方法生物信息学方法确定人APT1启动子序列。PCR扩增人APT1启动子和HBV preS2基因,分别插入pGL3和pcDNA3．1（－）质粒构建人APT1启动子荧光素酶报告基因质粒 pGL3‐APT1和 HBV preS2真核表达质粒 pcDNA3．1（－）‐preS2。将 pGL3‐APT1和pcDNA3．1（－）‐preS2共转染人肝癌细胞系 HepG2,然后通过检测细胞荧光素酶活性来评价 preS2对人APT1基因启动子的作用。数据用独立样本 t检验分析。结果测序结果证实pcDNA3．1（－）‐preS2与pGL3‐APT1与实验设计相符。pGL3‐APT1的荧光素酶活性是阳性对照质粒pGL3‐Control的荧光素酶活性的1．2倍（P＜0．01）。pcDNA3．1（－）‐preS2与pGL3‐APT1共转染HepG2细胞的荧光素酶活性为无preS2基因质粒pcDNA3．1（－）与pGL3‐APT1共转染 HepG2细胞荧光素酶活性的2．6倍（P＜0．01）。结论本研究克隆的人APT1启动子序列具有高启动子活性;HBV preS2可激活人APT1启动子。     

Effects of chimeric molecule of recombinant Dsg3EC1-2 with toxin PE40 on T and B lymphocytes in Pemphigus Vulgaris

Objective:To observe the effects of the recombinant chimeric toxin Dsg3EC1-2PE40 on T and B lymphocytes isolated from Pemphigus Vulgaris (PV) patients to further study its biological therapeutic function for PV. Methods :Recombinant chimeric toxin Dsg3EC1-2PE40 was first identified, expressed and purified, and then its effects on T and B lymphocytes of PV patients in vitro were detected and quantified by ELISPOT assay and MTT assay. Results :The purity of the expressed protein Dsg3EC1-2PE40 was up to 80%. In ELISPOT assay, with Dsg3EC1-2PE40, the overall number of B cells that produce anti-Dsg3 antibodies among PV patients was only about 60% of the comparable number with Dsg3EC1-2. The proliferation of T cells of PV patients was inhibited markedly by Dsg3EC1-2PE40. There was significant difference between the different groups with Dsg3EC1-2PE40 and Dsg3EC1-2. Conclusion:The recombinant chimeric toxin Dsg3EC1-2PE40 decrease the number of B cells that produce anti-Dsg3 antibodies in PV patients and can inhibit or kill T cells of PV patients in vitro.     

强直性脊柱炎患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因型和单倍型分析

目的 分析杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因型和单倍型在强直性脊柱炎患者中的分布特点.方法 采用序列特异性引物聚合酶链反应方法 ,分析105例强直性脊柱炎患者、62例骨关节炎患者和412名健康对照KIR基因型和单倍型.结果 (1)强直性脊柱炎组KIR基因型3DL3-2DL3-2DL1-2DP1-2DL4-3DL1-2DS4-3DL2阳性率(6.67%)明显低于健康对照组和骨关节炎组(20.15%,17.74%;P=0.001,0.037).(2)强直性脊柱炎组KIR基因型3DL3-2DL3-2DL2-2DL1-2DP1-2DL4-3DL1-2DL5-2DS1-2DS2-2DS3-2DS4-2DS5-3DS1-3DL2阳性率(9.52%)及基因型3DL3-2DL3-2DL2-2DL1-2DP1-2DL4-3DL1-2DL5-2DS1-2DS4-3DL2阳性率(5.71%)明显高于健康对照组(2.18%,0.49%;P=0.001,0.001),骨关节炎组未检出这2种基因型.(3)三组人群KIR单倍型差异无统计学意义.结论 KIR基因型分布异常,可能是强直性脊柱炎的免疫遗传因素,其分子机制有待进一步研究.     

汉坦病毒H8205株G1-人源IL-2融合基因的克隆与表达

目的 构建融合基因pcDNA3．1／His-B-IL-2-G1，为进一步研究汉坦病毒新型裸DNA疫苗奠定基础。方法 采用PCR从含有人源IL-2的质粒中扩增出IL-2片段，将人源IL-2插入真核表达载体pcDNA3．1／His—B中，构建的质粒命名为pcDNA3．1／His-昏IL-2。同样采用PCR扩增汉坦病毒H8205株G1基因片段，将回收的G1片段经双酶切插入到pcDNA3．1／His-B-IL-2，构建成新的质粒pcDNA3．1／His-B-IL-2-G1。采用脂质体介导包裹，转入NIH3T3细胞中进行瞬时表达；采用原位杂交观察细胞内的基因表达，SDS-PAGE法作重组质粒pcDNA3．1／His-B-IL-2-G1瞬时表达产物的鉴定。结果 融合基因可转录并表达-分子量为78kD左右的蛋白，对照组则未见电泳条带出现。结论 成功构建pcDNA3．1／His-B-IL-2-G1融合基因，融合基因能在真核细胞中瞬时表达。     

二亚硝基哌嗪(DNP)对人细胞色素P4502E1体外表达的影响(英文)

目的　建立人细胞色素P4 5 0 2E1(CYP2E1)cDNA体外异源表达模型 ,观察化学致癌物二亚硝基哌嗪 (N ,N’ dinitrosopiperazine ,DNP)对CYPWE1表达的影响。方法　脂质体介导转染法将外源人CYP2E1cDNA导入NIH3T3细胞 ,PCR和Southernblot鉴定外源基因的整合 ,RT PCR检测其表达 ;用不同浓度乙醇和DNP处理转化细胞 ,RT PCR和westernbloting检测CYP2E1表达的改变。结果　获得二个具外源基因CYP2E1cDNA整合及稳定表达的细胞克隆NIH3T3 2E1 A1和NIH3T3 2E1 A8;经乙醇和DNP处理的细胞克隆CYP2E1mRNA和蛋白质水平的表达增强。结论　DNP与乙醇对CYP2E1表达的诱导可能与其mRNA转录增强有关 ,DNP致癌可能与CYP2E1对其原位代谢活化相关     

三氧化二砷对人大肠癌细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的：探讨三氧化二砷（As₂O₃）对人大肠癌细胞株 CCL-187 端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法：CCL-187 细胞分为对照组、1.0 μmol•L^-1As₂O₃ 组和 2.5 μmol•L^-1As₂O₃ 组，共同孵育1～6 d。MTT 法计算细胞生长抑制率，电镜下观察细胞形态学变化，RT-PCR 法检测细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的表达，TRAP-PCR-ELISA 法检测细胞端粒酶活性。结果：1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组细胞分化明显，2.5 μmol•L^-1As₂O₃ 组出现细胞凋亡。同时2组端粒酶 hTERT-mRNA 的表达均下调，端粒酶活性降低，且具有时间依赖性，与对照组比较差异有显著性（P<0.01 或 P<0.05）；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组与 1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组比较差异也有显著性（P<0.01）。细胞生长抑制率与细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的表达呈负相关（1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.803，P<0.01；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.697，P<0.01），与端粒酶活性的下调呈负相关（1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.836，P<0.01；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.792，P<0.01）；细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的表达与细胞端粒酶活性呈正相关（1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=0.956，P<0.01；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=0.988，P<0.01）。结论：As₂O₃ 对 CCL-187 细胞有促进分化及诱导凋亡的作用，其机制可能是下调细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的基因表达，从而抑制端粒酶的活性。     

Effect of N,N’- dinitrosopiperazine on in vitro expression of humancytochro me P450 2E1

目的：建立人细胞色素P450 2E1(CYP2E1)cDNA体外异源表达模型,观察化学致癌物二亚硝基哌嗪（N,N‘-dinitrosopiperzine,DNP）对CYPWE1表达的影响。方法：脂质体介导转染法将外源人CYP2E1cDNA导入NIH3T3细胞,PCR和Southern blot鉴定外源基因的整合,RT-PCR检测其表达;用不同浓度乙醇和DNP处理转化细胞,RT-PCR和western bloting 检测CYP2E1表达的改变。结果：获得二个具外源基因CYP2E1cDNA整合及稳定表达的细胞克隆NIH3T3-2E1-A1和NIH3T3-2E1-A8;经乙醇和DNP处理的细胞克隆CYP2E1mRNA和蛋白质水平的表达增强。结论：DNP与乙醇对CYP2E1表达的诱导可能与其mRNA转录增强有关,DNP致癌可能与CYP2E1对其原位代谢活化相关。     

胰腺癌细胞 TYMS 基因多态性与蛋白表达的关系

[目的]探讨胸苷酸合成酶（thymidylate synthase ,TYMS）基因多态性与胰腺癌细胞 TYMS蛋白表达的关系。[方法]利用 PCR及凝胶电泳分析7株胰腺癌细胞（AsPC-1,BxPC-3,Capan-1,SU86．86,T3M4, PANC-1与COLO357）TYMS基因型,使用Western Blot检测其 TYMS蛋白表达水平。[结果]7株人胰腺癌细胞TYMS基因5＇-UTR串联重复序列基因分型结果显示形成3种基因型,分别是2R/2R（T3M4与BxPC-3）,2R/3R（ASPC-1,Capan-1与 SU86．86）与3R/3R（COLO357与 PANC-1）。不同TYMS基因型蛋白表达OD比值分别为：3R/3R基因型细胞（COLO357与 PANC-1）1．724±0．062,1．063±0．134;2R/2R（T3M4与 BxPC-3）0．558±0．042,0．578±0．021;2R/3R（Capan-1,ASPC-1与 SU86．86）0．530±0．061,0．541±0．0396,0．612±0．036。3R/3R基因型细胞TYMS蛋白表达明显高于2R/2R和2R/3R基因型细胞,两组之间TYMS蛋白表达水平差异有统计学意义（ P ＜0．05）,但2R/2R与2R/3R两组之间TYMS蛋白表达无统计学意义（ P ＞0．05）。[结论]在胰腺癌细胞株中,TYMS不同基因型与其蛋白表达密切相关。     

柯萨奇病毒B3感染对心肌趋化因子表达谱的调控作用

目的　研究柯萨奇病毒 (CV)B3感染对心肌组织 /细胞趋化因子 (ChKs)表达谱的调控作用。方法　以CVB3感染BALB/c小鼠和体外培养的BALB/c乳鼠心脏细胞 ,建立体内、外CVB3感染模型 ;RT PCR定性和实时定量分析不同CVB3感染时间点和不同CVB3载量下 1 1种ChKs的表达。结果　在体内 ,CVB3感染后心肌组织中MIP 2和IP 1 0诱导性表达 ,组成性表达的SDF 1、MCP 1、MCP 2、MCP 3、MCP 5、MDC、FKN和Ltn中MCP 1、MCP 2、MCP 3、MCP 5、MDC和Ltn上调表达 ,分别是未感染对照的 1 8、1 9、3 7、1 7、1 3和 1 2倍 ,均差异有显著性 (P均小于 0 0 1 ) ,SDF 1和FKN与未感染对照相比 ,差异均无显著意义 (P >0 0 5)。Eot在感染和未感染心肌组织均未检出表达。在不同的感染时间点ChKs的表达不同 ,MIP 2在感染第 4天的表达量分别是第 7天和第 1 4天的 1 1和 1 5倍 ,均差异有显著性 (P <0 0 1 ) ;IP 1 0的表达在第 4天和第 7天未表现显著性区别 (P >0 0 5) ,但分别是第 9天的 2 47和 2 54倍 (P <0 0 1 ) ;MCP 1第 1 4天的表达量分别是第4、7和 9天的 1 3、1 2和 1 0倍 ,相差均有显著性意义。MCP 2第 4天的表达量是第 7、9和 1 4天的1 4、1 5和 2 2倍 ,差异有显著意义 (P <0 0 1 ) ,且 1 4d表达量低于基础表     

抗p185erbB2单抗的制备及其生物学活性

目的：制备抗p185^erbB2单克隆抗体，并研究其对表达p185^erbB2肿瘤细胞的结合及生长抑制作用。为后续工作奠定基础。方法：用NIH3T3－erbB2细胞免疫BALB／c小鼠，制备抗p185^erbB2单克隆抗体。经ELISA、免疫沉淀、Western blot及免疫组化检测单抗的结合特异性。并用MTT比色法检测所获抗体对表达p185^erbB2肿瘤细胞的生长抑制作用。结果：经筛选获取1株对表达p185^erbB2细胞反应阳性，不表达p185^erbB2细胞反应阴性的单克隆抗体1H3；免疫沉淀、Western blot均表明1H3可与p185^erbB2分子特异性结合；免疫组化结果显示1H3对c-erbB2阳性的乳癌组织呈特异性着染；MTT比色法检测表明1H3对不同的p185^erbB2阳性肿瘤细胞均有不同程度的生长抑制作用。结论：单克隆抗体1H3能与p185^erbB2特异结合，并可不同程度地抑制NIH3T3－erbB2或SKBR3细胞的生长，除可应用于临床对p185^erbB2的检测外，尚具有肿瘤生物治疗的潜在应用开发价值。