T-细胞急性淋巴细胞白血病的κ轻链基因重排

免疫球蛋白(Ig)和T-细胞受体(TCR)基因重排是检测淋巴系统增殖性疾病克隆性的灵敏方法。已经证明了Ig重链TCRβ和γ基因探针对急性白血病缺乏谱系特异性,而传统认为Ig轻链基因重排是B—细胞谱系的一项很特异的指标。本文报道了1例T-细胞急性淋巴细胞白血病(ALL)患者,其TCRβ链基因发生重排,意外的是Igκ轻链基因也发生重排,未发现Ig重链基因重排。其中T-细胞ALL的κ轻链基因重排尚属首例报道。     

非何杰金淋巴瘤吸取骨髓的免疫遗传分析

作者用免疫遗传分析法(IGA)研究15例非何杰金淋巴瘤(NHL)病员的骨髓,所用的探针为,对Ig重链的是6.5kbBAM HI/HindⅢDNA片段,对k链探针是2.5kb Eco RI DNA片段,TCRβ(T细胞受体β链基因重组)探针为0.7kb Bg1/Pst DNA片段。     

急性和慢性白血病的免疫球蛋白和T细胞受体基因重排

作者通过Southern印迹杂交技术,检测了87例急性、慢性白血病和骨髓增生异常综合征(MDS)病人的免疫球蛋白(Ig)和T细胞受体(TCR)基因排列方式,并结合形态学和免疫表型加以分析。87例病人中,急性淋巴细胞白血病(ALL)26例,慢性淋巴细胞白血病(CLL)10例,急性髓细胞白血病(AML)22例,MDS10例,慢粒(CML,均为Ph′+)急变19例。治疗前根据外周血和骨髓涂片检查确诊,形态学按FAB标准分类。并作细胞化学和免疫表型检查。利用Southern印迹杂交技术,对外周血和骨髓标本进行DNA检测。所用探针:Ig重链结合区(JH)、Igκ轻链恒区(Cκ)、Igλ轻链恒区(C_λ)和TCRβ链恒区。     

慢性B淋巴细胞白血病患者免疫球蛋白Fab段基因克隆及其可变区序列分析

目的：分析慢性B淋巴细胞白血病患者外周血单个核细胞免疫球蛋白Fab段基因。方法：提取慢性B淋巴细胞白血病患者外周血单个核细胞RNA,选用与Ig FR1 5′和CH1Cμ3′或CL区（Cκ／Cλ）3′互补的多对引物,通过RT－PCR扩增Ig Fab段基因,进行克隆和序列测定,并通过DNAtools和计算机网络对其可变区基因同源性进行分析和基因家族归类。结果：7例患者中4例外周血单个核细胞扩增出轻链基因,3例扩增出重链基因。所扩增的4条轻链基因均属于κ轻链,3条重链均为μ链基因。利用DNAtools分析软件,对轻链和重链分别进行同源性比较,3条重 链可变区基因差异较大,轻链可变区基因具有一定的同源性。对所扩增的Ig基因进行归类,结果4例患者的轻链均属于VκⅠ亚组;3例患者的重链中2例属VH3家族,1例为VH5家族。结论：慢性Ｂ淋巴细胞白血病患者存在独特的决定簇和相似决定簇。     

Dsg3特异性的CD4~+ T细胞能够辅助B细胞产生天疱疮抗体

目的探讨CD4+T细胞在天疱疮致病性抗体产生中的作用。方法实验方面采用真核表达系统表达重组的天疱疮抗原桥粒芯糖蛋白3(Dsg3)胞外段功能区,联合不同佐剂(CFA或Alum)免疫C57BL/6小鼠,用免疫磁珠细胞分选(MACS)法分选出免疫后小鼠的CD4+T细胞,过继转移到T细胞受体β链(T cell receptor beta chain,TCRβ)缺陷小鼠,于转移后1、2、3、4周检测TCRβ缺陷小鼠体内CD4+T细胞的恢复,B细胞的增殖、活化,及特异性抗体的产生。结果过继转移后的TCRβ缺陷小鼠外周血中有CD4+T细胞的出现(比例有5%左右);CD4+T细胞进入缺陷小鼠脾脏中的淋巴小结,和B细胞相互作用;同时该小鼠血清中出现了特异性抗Dsg3抗体。结论 CD4+T细胞参与天疱疮致病性抗体的产生,在疾病中发挥极其重要的作用。     

51例淋巴浆细胞淋巴瘤累及骨髓的临床病理分析

目的 探讨淋巴浆细胞淋巴瘤累及骨髓的临床病理特征、免疫表型、诊断及鉴别诊断。方法 回顾性分析51例淋巴浆细胞淋巴瘤患者的骨髓活检、免疫组织化学、流式细胞学、免疫固定电泳及Ig基因重排检查结果并复习相关文献。结果 男31例,女20例。淋巴浆细胞淋巴瘤累及骨髓的异常细胞比例在0.5%～95%不等,肿瘤性淋巴细胞增生模式以结节型为主,其周围及淋巴细胞间常见浆细胞少量增生,肥大细胞较常见,含铁血黄素颗粒多见。62.7%(32/51)为结节性骨髓浸润,29.4%(15/51)为弥漫性骨髓浸润,7.8%(4/51)为间质性骨髓浸润。51例行免疫组织化学,100%(51/51)均表达B细胞相关抗原(CD20、CD19、PAX-5),21%(11/51)表达CD23,浆细胞比例较低,0.5%～10%不等,限制性表达Ig轻链,70.6%(36/51)表达胞浆型单克隆Ig轻链Kappa; 29.4%(15/51)表达胞浆型单克隆Ig轻链Lambda,Ki-67增殖指数在5%～10%。51例行流式细胞学免疫分型,均可见单克隆小B淋巴细胞及少量单克隆浆细胞。其中23例做了免疫固定电泳,17例是IgM-KAP型...     

非放射法测定急性淋巴细胞白血病Ig和TCR基因重排

确定Ig 和TCR 基因重排已成为诊断急性淋巴细胞白血病的一个组成部份。标准的Southern 印迹技术是用对应于IgH 和TCRβ基因J 区的放射性同位素标记的DNA 探针作印迹杂交后,通过放射自显影确定有无该基因的重排。本文总结了用生物素标记的DNA 探针作Southern 印迹分析25例B 前体细     

免疫分型在单株丙球蛋白血症中的应用评估

目的探讨免疫分型、血清免疫球蛋白的定量检测在单株丙球蛋白血症诊断中的价值。方法收集118例单株丙球蛋白血症患者进行血清蛋白电泳(SPE)、免疫固定电泳(IF)、免疫球蛋白(Ig)定量及血清轻链(κ、λ)检测。针对免疫分型阳性、Ig定量阴性患者进行分析。结果免疫分型阳性、Ig定量阴性患者56例,其中游离轻链型6例(κ轻链型2例,λ轻链型4例),未分泌型1例;免疫分型阳性、Ig定量阳性的患者62例。结论 IF技术对单株丙球蛋白血症的诊断及分型具有重要意义,可以结合血清Ig及轻链的定量检测等其他实验室诊断。     

BIOMED-2标准化基因重排检测在非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义

目的:利用BIOMED-2标准化免疫球蛋白(Ig)/T细胞受体(TCR)基因重排检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓Ig或TCR基因重排,探讨Ig/TCR基因重排在非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用意义。方法:从骨髓及石蜡包埋组织(FFPE)标本中提取基因组DNA,采用BIOMED-2系统引物,进行多重PCR扩增并利用PCR片段分析法进行Ig/TCR基因重排的克隆性分析。结果:在235例T细胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)中,TCRγ和TCRx单克隆重排阳性率分别为57.9%和50.2%,TCRγ和TCRβ的联合检出率为71.9%。在583例B细胞非霍奇金淋巴瘤(BNHL)IgH和IgK单克隆重排阳性率分别为70.7%和69.3%,IgH和IgK的联合检出率为81.6%。套细胞淋巴瘤与滤泡淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤IgH(84.8%对34.0%(P0.001);84.8%对9.2%(P=0.025)和IgK(75.8%vs 50.9%,P0.001;75.8%vs 16.1%(P0.001)重排阳性率差异具有统计学意义。Ig基因重排阳性BNHL患者中,65例(13.7%)患者存在TCR重排阳性。TCR重排阳性T-NHL患者中,未见Ig基因重排阳性。30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者FFPE标本有25例(83.3%)检出Ig基因重排,与骨髓标本重排检出率相比较,差异具有统计学意义(P0.001)。结论:利用BIOMED-2标准化Ig/TCR基因重排检测对于淋巴瘤的诊断有辅助性作用,并且利用序列分析法可提高重排检测的敏感性和特异性,对于淋巴瘤的早期诊断有很高的价值。     

米托蒽醌治疗难治性复发性多发性骨髓瘤疗效观察

多发性骨髓瘤 (MM)是浆细胞的恶性肿瘤 ,常见于老年人 ,为减轻心肌损害 ,提高疗效 ,我们以米托蒽醌 (MTZ)、长春新碱(VCR)、氟美松 (DXM)组成的 VMD方案治疗难治性及复发性MM13例 ,疗效满意 ,报道如下。1　临床资料和方法1.1　病例选择　 13例均系本院住院患者 ,男 8例 ,女 5例 ,年龄 45～ 6 8岁 ,中位数 5 9.5岁。初治时均经临床、骨髓细胞学、X线摄片、免疫球蛋白测定检查确诊为 MM。免疫分型 :Ig G8例 ,Ig A3例 ,Ig E、轻链病各 1例。难治性 MM4例 ,复发性 MM9例 ,13例皆符合难治性及复发性 MM的诊断标准[3] 。1.2　治疗观…     

γ型重链病一例

重链病(heavy chain diseases,HCD)是一组临床少见的B淋巴细胞系浆细胞异常增殖导致的疾病,其特征是合成不完全的单克隆免疫球蛋白重链而不伴随有轻链的生成[1],致使血清和尿中出现大量游离的无免疫功能的免疫球蛋白重链.该病根据重链的不同可进行免疫分型,以α型为最多见,其他类型也有报道,而ε重链病尚未见报道.自从1964年首例γ型重链病被Franklin等[2]报道以来,目前世界范围内文献报道约有120例.最近我们发现1例γ型重链病,现报告如下.     

早期轻链沉积性肾病3例临床病理分析

目的探讨早期轻链沉积性肾病(LCDN)的临床病理学特征及诊断,提高对该病的认识。方法回顾性分析3例早期轻链沉积性肾病肾穿组织的临床资料,观察光镜、电镜病理改变及免疫组化染色特点,并复习相关文献。结果老年男性2例,中年女性1例。3例均有大量蛋白尿,其中前2例以水肿为首发症状,例3有多发性骨髓瘤(λ型)病史。例1肾小球呈轻度系膜增生,近曲小管上皮细胞弥漫肿胀;免疫组化标记近曲小管上皮细胞质弥漫性λ链强阳性;电镜下肾小管基底膜内侧见间断线性电子致密物沉积;病理诊断为轻链小管肾病。例2肾小球呈弥漫膜性(Ⅰ~Ⅱ期)病变,免疫组化示局灶节段肾小球系膜区单克隆性λ链块状沉积,提示伴早期轻链沉积性肾病。例3肾小球病变轻微,免疫组化示系膜区和入球动脉壁散在块状Igλ强阳性,蛋白管型呈Igλ强阳性,相同部位Igκ染色强度为弱阳性;病理诊断为轻微病变型轻链沉积性肾病。结论早期轻链沉积性肾病无典型的系膜结节状结构,肾小球及肾小管形态学可病变轻微,极易漏诊,应结合轻链蛋白的免疫组化和电镜检查进一步确诊。     

非霍奇金淋巴瘤抗原受体基因重排检测中双重重排现象的初步研究

目的　检测非霍奇金淋巴瘤 (NHL)抗原受体基因双重重排的发生率及初步探讨其病理意义和可能机制。方法　采用PCR方法 ,联合使用IgHFR3A及FR2A、TCRγ、TCRβ引物 ,检测 12 5例NHL患者IgH基因及TCR基因克隆性重排 ;检测B NHL和T NHL中抗原受体基因双重重排的发生率 ,并对其中的 117例NHL患者采用免疫组织化学EnVision两步法检测Ki6 7蛋白表达并计算增殖指数 ,分析NHL不同重排类型与增殖指数间的关系。结果　联合使用IgHFR3A及FR2A、TCRγ、TCRβ引物 ,96例B NHL患者中有 8例 (8% )检测到发生双重重排 ,2 9例T NHL患者中有 5例 (17% )检测到发生双重重排。B NHL中 6 5例检测到IgH基因克隆性重排 ,8例发生双重重排 ,15例为多克隆重排 ;T NHL中有 15例检测到TCR基因克隆性重排 ,5例发生双重重排 ,9例为多克隆重排。上述病例同时平行检测了Ki6 7,并计算增殖指数 ,经One way检验 ,在B NHL和T NHL中 ,克隆性重排、双重重排及多克隆重排的淋巴瘤增殖指数差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　淋巴瘤抗原受体基因的双重重排在成熟NHL中并非罕见 ;增殖指数与NHL基因双重重排无相关性     

免疫球蛋白游离轻链的检测与临床应用

正尿本周蛋白亦称游离轻链(free light chains,FLC),19世纪中叶其被首次描述并报道。自此以后,尿本周蛋白成为诊断多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的重要标志物。众所周知,免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)单体是由2条重链和2条轻链经二硫键连接而构成,其中轻链分为κ(Kappa)、λ(Lambda)2个型别,人体内两者的正常比例约为2∶1。正常人体每天产生约500 mg轻链,由于轻链的相对分子质量明显小于重链,故其合成速率大     

流式细胞术检测B淋巴细胞表面免疫球蛋白轻链及临床意义

目的 探讨流式细胞术检测外周血B淋巴细胞表面免疫球蛋白(Ig)轻链的实验方法和临床意义.方法 采用流式细胞术,以CD19设门,分析了20例健康对照者和13例淋巴瘤患者B细胞表面Ig kappa与lambda型轻链的表达.结果 对照组kappa型轻链阳性B细胞为(51.4±5.2)%,lambda型轻链阳性B细胞为(39.2±4.3)%,两型轻链B细胞之比值为1.31±0.28;淋巴瘤患者B细胞中kappa型轻链8例(61.5%),lambda型轻链5例(38.5%),两型轻链B细胞的比值或者均小于0.01,或者大于56.78,显著超出健康人比值范围.结论 流式细胞术直接检测B细胞表面kappa轻链与lambda轻链的表达有助于鉴别反应性B淋巴细胞增生和肿瘤性慢性B淋巴细胞增生.     

多发性骨髓瘤免疫表型及胞浆轻链检测的临床意义

目的研究多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）细胞的免疫表型特点及胞浆内轻链的表达。方法采用四色流式细胞仪,用CD45-APC/SSC及CD38/CD56联合设门,对45例MM患者的骨髓标本进行CD38、CD56、CD19、CD138、CD45、轻链（κ链、λ链）及胞浆内轻链（cκ链、cλ链）的检测。结果 45例骨髓瘤患者中分泌型为37例（其中IgG型为27例,IgA型为10例）,轻链型为5例（λ链型4例,κ链型1例）,不分泌型3例,其免疫表型出现的频率为：其中表型为CD38＋CD56＋CD19-CD45-：分泌型为37/37（100%）,轻链型2/5（40%）,不分泌型0/3（0%）,表型为CD38＋CD56-CD19-CD45-：轻链型3/5（60%）,不分泌型3/3（100%）,CD138＋：45/45（100%）,膜表面轻链（κ链、λ链）：0/45（0%）,胞浆轻链（cκ链、cλ链）：45/45（100%）,其中分泌型：cκ链10/37（27%）;cλ链：27/37（73%）;轻链型：cκ链1/5（20%）;cλ链：4/5（80%）;不分泌型：cκ链1/3（33%）;cλ链：2/3（67%）。结论用流式细胞术分析多发性骨髓瘤的细胞免疫表型及胞浆轻链的表达对骨髓瘤的临床诊断有很大的帮助,特别是对不分泌型的骨髓瘤诊断的临床价值更大。     

免疫球蛋白、补体的检测与意义

免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)是抗体的表现形式和物质基础,原称γ球蛋白(丙球)。1972年世界卫生组织规定用Ig代替γ。Ig的基本结构为两条轻链和两条重链。重链有5类,即γ、α、μ、δ和ε。根据重链的不同,将Ig依次分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五类。五类Ig中,IgG含量最多,血清中80％的抗细菌、抗病毒、抗毒素抗体为IgG。其次     

免疫球蛋白基因重排分析在淋巴瘤诊断中的初步应用研究

用免疫球蛋白重链Ｊ区（ＪＨ），Ｋ轻链及λ轻链Ｃ区（ＣＫ，Ｃλ２）基因探针及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交技术，对２２例非何杰金氏淋巴瘤进行分析。结果显示１３例尿Ｂ细胞淋巴瘤均出现重链基因重排，其中１０例有Ｋ或λ轻链基因重排；３例Ｔ细胞淋巴瘤中，１例出现重链，１例出现Ｋ轻链基因重排。１例分类未明淋巴瘤出现重链基因重排。５例未作免疫表型分析的淋巴瘤中有４例出一现重链，３例出现Ｋ轻链，１例出现λ轻链基因重排。     

CD45RO阳性的B细胞性淋巴瘤

目的 研究免疫表型异常淋巴瘤的起源。方法 从48例B细胞淋巴瘤中筛选出3例CD45RO、CD20和CD79a( )，CD3(-)的淋巴瘤。采用免疫组化、PCR和基因扫描技术对其免疫表型，免疫球蛋白重链基因重排(IgH)和T细胞受体基因重排(TCR)进行深入研究。结果 3例淋巴瘤均为结外淋巴瘤。1例为滤泡性淋巴瘤，2例为弥漫性大B细胞性淋巴瘤。PCR和基因扫描显示3例均有IgH克隆性扩增；PCR未显示TCR扩增；高敏感性基因扫描显示低峰值TCR克隆性扩增，提示可能为背景T细胞扩增。结论 CD45RO不是T细胞特异性抗原，CD45RO阳性细胞不能完全等同于T细胞，因此，在研究和临床病理诊断中应选用多种抗体配合使用。     

自身免疫性疾病噬菌体抗体库的构建和初步鉴定

目的构建系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（RA）、强直性脊柱炎、干燥综合症（SS）、原发性胆汁性肝硬化（PBC）等自身免疫性疾病的噬菌体抗体库。方法从多例确诊的高滴度自身免疫病患者外周血淋巴细胞中抽提总RNA,用RT—PCR方法分别扩增免疫球蛋白分子轻链κ、λ基因及重链Fd基因。经SacI和XbaI限制性双酶切后,在T4连接酶的作用下,将轻链基因片段克隆入同样双酶切的pComb3Hss载体中以构建轻链文库,随后将重链Fd段PCR产物经XhoI和SpeI双酶切后载入同样处理的κ/λpComb3Hss载体,然后将重组质粒κ/λ—Fd-pComb3Hss转化大肠杆菌XL1-Blue。用辅助噬菌体M13K07感染XL1-Blue,则可在噬菌体表面表达出随机的重组抗体库。结果提取的淋巴细胞总RNA及合成的cDNA质量好,PCR扩增了长度为660bp的轻链κ、λ基因及重链Fd基因,成功构建了库容为4×10^4的轻链抗体库和库容为6×10^4的Fab片段噬菌体抗体库,酶切及PCR鉴定均正确无误。结论成功构建了自身免疫性疾病的噬菌体抗体库,为进-步筛选出高亲和力抗体打下了基础。