洛伐他汀对胶质瘤干细胞增殖和凋亡的影响

BACKGROUND:Increasing evidence has shown that lovastatin with less toxicity to normal cells has crucial effects on proliferation, apoptosis and differentiation of various cancer cells. However, its roles in glioma stem cells remain unclear. OBJECTIVE:To explore the effect of lovastatin on proliferation and apoptosis of glioma stem cells. METHODS:Flow cytometric sorting was used to separate glioma stem cells from human glioblastoma cell line U87. Effects of lovastatin on the proliferation and apoptosis of glioma stem cells were determined by MTT and flow cytometry, respectively. Furthermore, expression levels of Ki67, Bax and Bcl-2 in glioma stem cells treated with lovastatin were detected using western blot analysis. RESULTS AND CONCLUSION:The CD133-positive glioma stem cells were sorted from human glioblastoma cell line U87 with a positive percentage of 85%. MTT assay showed that lovastatin inhibited the proliferation of glioma stem cells in dose (5, 10, 20 μmol/L)- and time (24, 48, 72, 96 hours)-dependent manners. Flow cytometry analysis showed that 10 μmol/L lovastatin (48 hours) induced apoptosis in glioma stem cells. In addition, the expression level of Ki67 was decreased by lovastatin treatment in a dose-dependent manner, and the Bcl-2 and Bax expression levels were reduced and increased by 10 μmol/L lovastatin treatment, respectively. In conclusion, lovastatin can inhibit cell proliferation and induce apoptosis of glioma stem cells, and lovastatin may be a potential drug for treatment of brain tumors.     

DNA拓扑异构酶-Ⅱα沉默对脑胶质瘤干细胞增殖和凋亡的影响

目的由U87MG细胞分离并鉴定脑胶质瘤干细胞,研究Topo-Ⅱα基因对脑胶质瘤干细胞增殖和凋亡的影响。方法培养脑胶质瘤U87MG细胞,分离和鉴定其中的胶质瘤干细胞。将Topo-Ⅱα基因特异性的siRNA转染胶质瘤干细胞。转染后,Western Blot检测转染后Topo-Ⅱα蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖活力,双标流式法检测细胞凋亡率。结果成功分离出U87MG细胞球细胞,并鉴定其具有肿瘤干细胞特性。转染Topo-Ⅱα基因特异性的siRNA后,胶质瘤干细胞中的Topo-Ⅱα蛋白表达明显降低,同时,细胞增殖能力显著降低,凋亡率明显增加。结论由U87MG细胞系中分离出细胞球细胞具备肿瘤干细胞特性,Topo-Ⅱα基因沉默降低胶质瘤干细胞的增殖能力,促进细胞凋亡。     

转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响

背景:转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞的增殖和成骨向分化能力对比相关研究甚少.目的:探讨相同质量浓度转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞成骨向分化的作用及其初步机制.方法:采用酶解组织块法从新西兰大白兔牙髓组织中分离培养牙髓干细胞;将第3代牙髓干细胞分为空白组、骨形成蛋白2(80μg/L)组和转化生长因...     

隐丹参酮对肾癌干细胞增殖和凋亡的影响

BACKGROUND: Previous studies have found that cryptotanshinone represses multiple tumors, but little is reported on its effect on renal carcinoma. OBJECTIVE: To explore the effect of cryptotanshinone on the proliferation and apoptosis of the renal carcinoma stem cells. METHODS: CD133+ renal carcinoma stem cells were separated from OS-RC-2 cells by immunomagnetic bead separation. Effects of 0, 0.2, 1, 5 mg/L cryptotanshinone on the proliferation and apoptosis of CD133+ renal carcinoma stem cells were detected by MTT and flow cytometry, respectively. Expression levels of Ki67, Bcl-2, Caspase-3 and p-Caspase-3 protein were detected by western blot assay. RESULTS AND CONCLUSION: After magnetic cell sorting, the percentage of CD133+ cells was increased from 6.32% to 82.73%, and there was a significant difference before and after cell sorting (P < 0.001). Cryptotanshinone could repress the proliferation of CD133+ renal carcinoma stem cells and promote cell apoptosis in a dose-dependent manner. The protein expression levels of Ki67 and Bcl-2 in the 5 mg/L cryptotanshinone group were significantly decreased compared with the control group, while the protein expression level of p-Caspase-3 protein was significantly increased. In addition, there was no difference in the protein expression of Caspase-3 between cryptotanshinone and control group. These findings indicate that cryptotanshinone may be a potent anticancer drug for the treatment of renal carcinoma by inhibiting expression of Ki67 and Bcl-2 and promoting protein expression of p-Caspase-3.  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程      

骨形成蛋白4对脊髓损伤后大鼠功能和神经干细胞的影响

目的　观察骨形成蛋白 4对脊髓损伤后大鼠功能和神经干细胞的影响。方法　应用改良Allen脊髓损伤模型 ,将成年SD大鼠 6 0只随机分为BMP 4组、脊髓损伤组。分别于术后 1d、7d、14d、2 1d、2 8d处死动物 ,并且对大鼠进行Tarlov评分和斜板试验检查后肢功能。应用免疫组织化学技术检测巢蛋白 (nestin)的表达 ,观察BMP4对脊髓损伤后nestin表达的影响。结果　第 2 1d时BMP4组大鼠功能改善明显与损伤组比较差异有显著性意义 (P <0 0 5 ) ;脊髓损伤后第 1天 ,在BMP4组和脊髓损伤组的室管膜、室管膜下区、损伤脊髓灰质中都可见到nestin的表达。于损伤后迅速增加 ,第 14天时达到高峰。BMP4组灰质nestin表达为 15 35± 3 83,脊髓损伤组灰质为 8 4 8± 3 5 3,两者差异有显著性 (P <0 0 1)。BMP4组可使损伤的脊髓中nestin持续高表达至术后第 2 8天 ,而脊髓损伤组仅持续表达至术后 2 1d。增加的nestin阳性细胞数与神经功能的改善平行。结论　提示BMP4可减轻神经损伤症状和对脊髓损伤后神经干细胞有促进增殖作用。     

LncRNA LINC00663对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)-LINC00663对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法实时荧光定量PCR检测人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和胶质瘤细胞系A172中LINC00663的表达水平。用siRNA沉默A172细胞中LINC00663的表达,分为siRNA-NC组和siRNA-LINC组,采用CCK-8法和EDU法检测细胞增殖,流式细胞术AnnexinV-FITC/7-AAD双染法检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平,Western blot检测细胞内Wnt3a表达水平。结果 A172细胞中LINC00663的表达水平明显高于HUVEC(P<0.01)。与siRNA-NC组相比,siRNA-LINC组细胞增殖能力降低,凋亡率增加,Wnt3a表达水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 LINC00663可能通过调控Wnt3a表达影响A172细胞的增殖和凋亡。     

人生长激素对人牙周膜干细胞增殖及成骨分化的影响

背景:生长激素已被证明对于非牙源性间充质干细胞的增殖和骨向分化有促进作用,但对于人牙周膜干细胞的生物学效应还不明确.目的:探讨人生长激素对人牙周膜干细胞增殖以及成骨分化的影响.方法:用含0(对照组),10,100,200μg/L人生长激素的α-MEM完全培养基干预第3代人牙周膜干细胞,分别在第1,3,5,7天采用CCK...     

骨形成蛋白-2、4在人脑胶质瘤组织中的表达及意义

目的:研究骨形成蛋白(BMP)-2、4在人脑胶质瘤发生发展中所起的作用及其与临床病理分级的关系.方法:应用RT-PCR技术和免疫组织化学SABC法检测BMP-2、4mRNA和蛋白质在20例正常脑组织和40例不同级别人脑胶质瘤组织中的表达变化,并分析其与患者的年龄、性别、病理分级的相关性.结果:BMP-2和BMP-4在正常脑组织和人脑胶质瘤组织中均有表达,且在胶质瘤中的表达显著高于正常脑组织,即BMP-2、4 mRNA和蛋白质Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤组织中的表达显著高于Ⅰ、Ⅱ级,且其与患者的年龄及性别无关.结论:BMP-2、4在人脑胶质瘤的发生发展过程中起一定作用.     

骨形成蛋白4在大鼠中枢神经系统发育过程中的表达

目的 研究骨形成蛋白4(BMP4)基因在大鼠中枢神经系统(CNS)发育过程中的表达。方法 地高辛标记特异性寡核苷酸探针原位杂交组织化学技术。结果 在E16大鼠，BMP4主要在小脑与嗅球呈强阳性表达。在P1—2大鼠，BMP4 mRNA在延脑的舌下神经核呈强阳性信号，在三叉神经脊束核、脊髓小脑束可见部分BMP4 mRNA阳性细胞。在P1周大鼠，额叶皮层、枕叶皮层与海马的前下托可见较强的阳性信号。生后1个月，海马与皮层BMP4的表达达到生后的峰值。此时BMP4在颞叶皮层与杏仁周皮质呈强阳性表达。生后3个月，BMP4在大鼠CNS有广泛表达，其中在海马、颞叶皮层、杏仁周皮质、丘脑侧核与下丘脑的室旁核均可见强阳性信号，而生后18个月大鼠的皮质、海马、丘脑、下丘脑仍可见一定数目的阳性神经元。结论 提示BMP4对新生期和成年期大鼠CNS的发育起重要作用。     

Effect of bone morphogenetic protein-2 on proliferation and apoptosis of gastric cancer cells

Objective: To investigate the effects of bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) on the proliferation, differentiation and apoptosis of normal human gastric mucosal cells and gastric cancer cells.Methods: Poorly differentiated gastric cancer BGC823 cells, moderately differentiated gastric cancer cells and normal human gastric mucosal epithelial GES-1 cells were independently treated with recombinant human BMP-2 or its inhibitor Noggin. MTT assay was performed to detect the proliferation, flow cytometry done to measure the cell cycle and apoptosis and immunohistochemistry carried out to determine the expression of cyclin-dependent kinase 4 (CDK4).Results: BMP-2 exerted inhibitory effect on the growth of all types of cells and the inhibition become more evident with the increase of BMP-2 dose. After treatment with 200 ng/ml BMP-2, cancer cells arrested in G1 phase and those in S phase reduced. Gastric cancer cells had higher CDK4 expression than GES-1 cells. BMP-2 decreased CDK-4 expression in cancer cells but had no influence in GES-1 cells. Noggin conferred promotive effect on the growth of 3 types of cells. In 2 types of cancer cells, treatment with 2000 ng/ml Noggin significantly increased the proportion of cells in S phase but reduced that in G1 phase. However, Noggin did not affect the cell cycle of GES-1 cells. The CDK4 expression was markedly increased in 2 types of cancer cells but that of GES-1 remained unchanged after treatment with 2000 ng/ml Noggin.Conclusions: BMP-2 may inhibit the proliferation of both normal and malignant gastric epithelial cells, down-regulate CDK4 expression in gastric cancer cells and arrest gastric cancer cells in G1-phase in cell cycle. Through antagonizing BMP-2, Noggin, may accelerate the proliferation of gastric cancer cells. Thus, the abnormality of BMP signaling pathway may play an important role in the pathogenesis of gastric cancer.     

体外骨形态发生蛋白4抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的:研究骨形态发生蛋白4(BMP4)对乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法:将重组慢病毒Lv-BMP4及干扰慢病毒Lv-shBMP4感染MCF-7细胞,构建MCF-7/Lv-BMP4过表达组及MCF-7/Lv-shBMP4干扰实验组,同时设空白组(Blank)、慢病毒空载对照组(Lv-NC)、 过表达...     

骨形态发生蛋白2及碱性成纤维生长因子2对大鼠骨髓间充质干细胞膜片增殖和成骨分化的影响

文题释义：细胞膜片技术：是在体外接种培养高密度的细胞,使其相互融合生长至100%而形成的透明致密膜状物。该技术不需要胰酶消化即可收集细胞,因此保留了大量的胞外基质、细胞间连接以及细胞-基质连接等结构。目前细胞膜片技术已成为组织工程领域的研究热点,已被推广应用于牙周膜、角膜、心脏、软骨、食管等多种组织器官修复。成骨细胞：主要由内外骨膜和间充质始祖细胞分化而来,在复杂的骨形成过程中发挥着主要的功能,承担着骨基质的合成、分泌和矿化。骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,能定向分化为成骨细胞,其成骨分化过程可受多种因素的影响,如细胞因子的调控、遗传因素和激素水平等。背景：现阶段骨形态发生蛋白2和碱性成纤维生长因子2对骨髓间充质干细胞膜片增殖、成骨分化的影响和作用机制还尚未可知,如何将生长因子与组织工程细胞膜片技术相整合,最终将其用于骨缺损修复具有重要意义。目的：探讨单独及联合应用骨形态发生蛋白2和碱性成纤维生长因子2对骨髓间充质干细胞膜片增殖和成骨分化的影响。方法：体外分离培养鉴定SD大鼠骨髓间充质干细胞并构建细胞膜片,选用不同质量浓度的骨形态发生蛋白2和碱性成纤维生长因子2单独及联合诱导骨髓间充质干细胞膜片,CCK-8法结合碱性磷酸酶活性检测确定2种因子促进膜片增殖和成骨分化的最佳有效质量浓度;然后对骨髓间充质干细胞膜片进行成骨诱导,通过大体及显微镜观察、Vonkossa染色、茜素红染色、RT-PCR检测相关成骨标志物来评估诱导效果。结果与结论：单独应用骨形态发生蛋白2可增强骨髓间充质干细胞膜片的碱性磷酸酶活性,最佳质量浓度为100 μg/L(P < 0.001),单独应用碱性成纤维生长因子2能加速骨髓间充质干细胞膜片的增殖,最佳质量浓度为20 μg/L(P < 0.001),而联合应用既可以促进膜片增殖又能提高其碱性磷酸酶活性(P < 0.001);经成骨诱导后,4组膜片在形态学上无明显差异,均能诱导骨髓间充质干细胞膜片的成骨分化,其中联合组钙结节最明显(P < 0.001),可显著促进膜片晚期成骨分化并抑制其早期成骨分化,具有明显的协同促进作用(P < 0.001)。结果表明,骨形态发生蛋白2和碱性成纤维生长因子2联合应用时具有协同作用,既可以促进骨髓间充质干细胞膜片增殖,又能显著增强其成骨诱导能力。ORCID: 0000-0003-1918-579X(何惠宇)中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

骨形态发生蛋白9调控干细胞分化与骨再生

背景:骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)具有很强的促进干细胞成骨分化的潜能.大量研究表明,BMP9可在动物体内促进骨缺损的修复.目的:探究BM P9调控干细胞分化的机制,讨论影响BMP9促进干细胞成骨分化的潜在因素以及BMP9在骨组织工程中的应用前景.方法:在PubM...     

慢病毒介导骨形态发生蛋白7基因转染诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化

文题释义： 骨形态发生蛋白7：骨形态发生蛋白不仅决定着胚胎早期神经与非神经的命运,还与Wnt、Shh等其他信号通路协同作用,在神经干细胞的增殖、分化以及神经系统各亚型细胞的形成中发挥着重要作用。骨形态发生蛋白7是骨形态发生蛋白家族的重要成员之一,通过静脉或脑室注射骨形态发生蛋白7蛋白,可改善脑缺血大鼠的神经功能,而且骨形态发生蛋白7能够促进神经树突生长,说明骨形态发生蛋白7可能在神经系统发生与修复中具有重要的调节作用,起到神经保护作用。 骨髓间充质干细胞：其具有来源广泛、取材容易、免疫排斥反应弱、避免伦理争议等优点,应用于治疗脊髓损伤具有重要的临床意义,为一种理想的组织工程干细胞。但利用骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤存在诸多问题,例如向神经细胞分化效率低、移植进入体内后分化形成的神经细胞能否与内源性神经细胞形成突触联系等。 背景：骨髓间充质干细胞具备向神经元样细胞分化的潜能,已经被列为治疗脊髓损伤的首选干细胞,但其分化效率低,寻找一种具有高效诱导能力的因子尤为重要。基于文献查阅及课题组研究基础,推测骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP-7)基因可能在促进骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化上发挥着重要作用。 目的：探讨骨形态发生蛋白7慢病毒载体转染诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的作用。 方法：采用全骨髓贴壁法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,以感染复数为50,25,10,1进行LV-GFP转染,转染后3 d在荧光倒置显微镜下观察各组GFP表达情况,确定最佳感染复数。取第3代骨髓间充质干细胞,分为空白对照组(常规培养)、LV-GFP组、LV-BMP-7-GFP组,以最佳感染复数转染24,48,72,96,120 h后,采用MTT法检测细胞存活率;转染3 d后,采用免疫细胞化学实验检测神经细胞标记物神经丝蛋白200、突触素1表达。 结果与结论：①LV-GFP转染后3 d,感染复数为1组未见GFP阳性细胞,感染复数为10,25,50组可见GFP阳性细胞,其中感染复数为10组平均荧光强度高于其余组(P < 0.05),为最适感染复数;②空白对照组、LV-GFP组神经丝蛋白200、突触素1表达呈阴性;LV-BMP-7-GFP组神经丝蛋白200、突触素1表达呈阳性,胞体和轴突被染成亮棕黄色;③结果表明,LV-BMP-7转染可促进骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化。 ORCID: 0000-0001-5909-5524(张文) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

骨形态发生蛋白9体外调节乳腺癌细胞与骨髓间充质干细胞的相互作用

 目的 观察骨形态发生蛋白9（BMP9）在共培养条件下对HS-5成骨分化及MDA-MB-231转移相关因子表达的影响。方法 采用Transwell小室间接共培养MDA-MB-231细胞与HS-5细胞,加入BMP9条件培养基,使用化学发光法、细胞化学染色法及茜素红S染色法分别检测HS-5细胞碱性磷酸酶（ALP）活性、ALP表达及细胞钙盐沉积的变化;应用RT-PCR及Western blot观察HS-5细胞骨钙素（OCN）、MDA-MB-231细胞甲状旁腺激素相关蛋白（PTH-rP）及白细胞介素6(IL-6)mRNA和蛋白表达的变化。结果 HS-5的ALP活性升高,并呈时间依赖性,第9天达最高,随后降低;ALP细胞化学染色结果进一步证实这一点;HS-5细胞钙盐沉积增多、OCN mRNA和蛋白的表达升高（P<0.05）;MDA-MB-231转移相关的PTH-rP及IL-6 mRNA和蛋白的表达下降（P<0.05）。结论 BMP9能够调节乳腺癌细胞与骨髓间充质干细胞的相互作用。     

咖啡因对体外培养U251人胶质瘤细胞的影响

目的观察咖啡因对体外培养U251神经胶质瘤细胞存活及凋亡的影响。方法采用MTT和Annexin V/PI流式细胞法观察不同浓度和作用时间的咖啡因对U251神经胶质瘤细胞的影响。结果 (1)咖啡因在体外可以抑制U251人胶质瘤细胞的存活;(2)咖啡因在体外使U251细胞早期凋亡发生的时间较晚,且在1~10 mmol/L浓度范围内,出现浓度依赖性瘤细胞早期凋亡增加,大于10 mmol/L时,瘤细胞迅速出现大量坏死。结论实验初步证明了咖啡因在体外可以抑制U251人胶质瘤细胞的增殖活性并在一定浓度范围内(1~10 mmol/L)可促使其凋亡,为进一步的动物实验及新药开发提供实验依据。     

三七总皂苷对神经胶质瘤细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的:探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对神经胶质瘤U251和U87细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其作用机制。方法:将U251和U87细胞各分为两组:对照(control)组和三七总皂苷(PNS)组。CCK-8检测细胞增殖水平;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Western Blot检测Caspase-3、Bax、Bcl-2、p-AKT、AKT、p-mTOR和mTOR的蛋白表达水平。结果:U251和U87细胞中的检测结果一致。与control组相比,PNS组的细胞增殖能力和迁移能力均显著下降(P0.05);细胞凋亡率显著升高(P0.05);Bcl-2的蛋白表达水平显著下调(P0.05),而Bax和Caspase-3的表达水平显著上调(P0.05);p-Akt和p-mTOR的蛋白表达水平下降,且差异具有显著性(P0.05)。结论:PNS能够抑制U251和U87细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡,这可能与PI3K-Akt-mTOR信号通路的抑制有关。     

骨形态发生蛋白12诱导骨髓间充质干细胞构建组织工程肌腱

背景：以往肌腱损伤的修复方法有端端吻合、自体肌腱移植、同种异体肌腱或人工肌腱移植等,但均有其各自缺点。 目的：探讨以家兔骨髓间充质干细胞为种子细胞,骨形态发生蛋白12诱导,聚羟基乙酸复合材料作为支架材料,预构组织工程化肌腱重建家兔跟腱缺损的可能性。 方法：家兔抽取股骨近端骨髓,分离所得细胞传代至第2代,加入10 μg/L骨形态发生蛋白12诱导分化,并与Ⅰ型胶原溶液按一定比例移植于预张的聚羟基乙酸缝线上预制组织工程化肌腱备用。将家兔制备成跟腱缺损模型,分别采用不同方法修复跟腱缺损：组织工程化肌腱修复,Ⅰ型胶原-聚羟基乙酸缝线修复,丝线行端端修复。修复12周对各组肌腱行形态学、力学及组织病理学观察。 结果与结论：修复12周家兔肌腱组织病理切片：组织工程化肌腱组可见大量梭形纤维母细胞顺应力学方向排列均匀分布于胶原中,纤维细胞明显增多,胶原致密;Ⅰ型胶原-聚羟基乙酸缝线组可见部分纤维组织增生伴少许肉芽组织形成,胶原纤维呈松散网丝状,细胞排列紊乱分布不均;丝线组可见纤维组织旁见大量肉芽组织形成。修复12周家兔肌腱生物力学强度：骨形态发生蛋白12+聚羟基乙酸重建肌腱的力学强度明显优于Ⅰ型胶原-聚羟基乙酸组,与丝线缝合组差异无显著性意义;但骨形态发生蛋白12+聚羟基乙酸重建肌腱的力学强度低于正常肌腱。提示以自体骨髓间充质干细胞作为种子细胞,骨形态发生蛋白12诱导,以聚羟基乙酸为支架,可望构建组织工程化肌腱。构建的组织工程肌腱具有一定的生物力学特性,能用于修复跟腱缺损。