弓形虫速殖子表膜蛋白的组分和抗原性分析

目的试验分析弓形虫速殖子表膜蛋白的组分及其抗原性。方法用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析弓形虫速殖子表膜蛋白的组分和用弓形虫病人阳性血清及兔抗弓形虫表膜抗原血清识别硝酸纤维膜载体上的速殖子表膜抗原的免疫反应靶位。结果弓形虫速殖子表膜抗原的独特蛋白区带分子为16和17kDa,弓形虫病人特异性抗血清识别的速殖子表膜抗原的免疫反应位点为16kDa,免抗血清识别出64,35,32,26,16kDa等8个位点。结论弓形虫速殖子表膜蛋白存在特异的抗原决定簇和可被特异性抗体识别的受体,证明速殖子表膜蛋白具有较好的抗原性,此对于弓形虫病的免疫学诊断具有重要的意义。     

弓形虫蛋白激酶C受体1蛋白的表达与抗原性分析

目的构建弓形虫蛋白激酶C受体1基因的pET-30a（＋）-RACK1重组质粒,表达、纯化RACK1蛋白。方法PCR扩增RACK1基因的cDNA序列,用SacI、NcoI限制性内切酶对RACK1基因的PCR产物及pET-30a（＋）质粒进行双酶切,连接,转化大肠杆菌BL21,构建重组质粒。IPTG诱导表达,亲和层析柱纯化表达产物,SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行分析鉴定。结果PCR扩增出 966 bp的RACK1完整基因序列,成功构建RACK1基因的pET-30a（＋）-RACK1重组质粒,表达出约36kDa的RACK1蛋白,蛋白具有抗原性。结论成功构建弓形虫RACK1基因的pET-30a（＋）-RACK1重组质粒,纯化出RACK1蛋白,为进一步进行RACK1蛋白在弓形虫入侵分子机制中的作用研究奠定基础。     

刚地弓形虫蛋白质组研究进展

随着基因组学的发展和完善,在基因组学的基础上,蛋白质组学作为一门新兴的前沿科学已经显示出了其巨大的发展前景.将蛋白质组学技术应用于弓形虫研究,在蛋白质水平上全面认识弓形虫的生理、病理等过程是目前弓形虫研究领域的热点之一.该文就弓形虫蛋白质组的研究进展进行综述,以期从蛋白质组学研究的角度为弓形虫研究提供新的思路.     

Cellular and humoral immune responses to recombinant antigens in sheep infected with Toxoplasma gondii

Immune responses to recombinant fragments of the Toxoplasma gondii antigens ROP2 and GRA2 were investigated in sheep naturally and experimentally infected with T. gondii oocysts. Specific serum antibodies to C-terminal fragments were detected by ELISA. Cell-mediated responses in peripheral blood mononuclear cells were demonstrated by proliferation and interferon-gamma production following in vitro stimulation with the ROP2 fragment. This data indicates the presence of epitopes for sheep B cells in the recombinant GRA2 fragment and for both B and T cells in the ROP2 fragment.     

弓形虫研究的过去、现在与未来

弓形虫为顶复动物门寄生原虫,呈世界性广泛分布,可感染所有温血动物,并在宿主免疫功能低下或受抑制时导致严重的疾患,其极高的流行性和致病的机会性已越来越引起人们的关注。本文回顾了弓形虫研究的历史,综述了目前弓形虫研究的热点并提出了在今后研究中需要解决的问题。     

弓形虫基因分型研究进展

弓形虫感染可引起严重的弓形虫病, 而不同宿主感染的弓形虫株基因型差异较大, 不同基因型弓形虫株的致病力及药物敏感性亦存在较大差异。目前, 对弓形虫基因型的分析多选用限制性片段长度多态性PCR（PCR?RFLP）、 高度重复序列PCR、 多重PCR和巢氏PCR等技术, 扩增位点多选择B1、 SAG2、 HSP70、 GRA6等遗传标记。传统的弓形虫基因型主要有3个, 随着研究的不断深入, 越来越多的基因型被发现。本文就弓形虫基因分型研究进展进行综述。     

云南西部HIV阳性者弓形虫感染初步调查

目的 了解云南西部HIV阳性者弓形虫感染情况,为预防和治疗提供科学依据.方法 收集人类免疫缺陷病毒(human immuno-deficiencyvirus,HIV)阳性者和正常人血清,采用弓形虫IgG抗体试剂盒进行测定,检测结果采用x2检验进行统计学分析.结果 543份HIV阳性血清中弓形虫抗体阳性197例,阳性率为36.82％,91份健康人群血清中弓形虫抗体阳性19例,阳性率为20.88％.HIV阳性者弓形虫感染率高于健康人群,不同民族、区域HIV阳性者间弓形虫感染率差异有统计学意义,而女性HIV阳性者与男性HIV阳性者的弓形虫感染率无统计学意义差异.结论 云南西部地区HIV阳性者弓形虫感染率高于健康人群人群,应对HIV阳性者进行常规弓形虫检测,并积极防治.     

弓形虫表面抗原研究进展

刚地弓形虫是一种广泛分布于人和哺乳动物组织细胞内的机会性致病原虫,可引起严重的人兽共患病.弓形虫抗原的研究对开发诊断制剂、疫苗以及从分子水平探讨弓形虫与宿主之间的相互关系具有重要意义,该文对近年来有关弓形虫抗原的研究进展作一综述.     

弓形虫感染与精子膜功能完整性的研究

目的　探讨弓形虫感染对精子膜功能的影响。方法　将 1 79例弓形虫检测的不育男性分为抗弓形虫抗体(ATAb)阳性组 (53例 )和阴性组 (1 2 6例 ) ,对其精液做低渗膨胀试验 ,进行对照分析。结果　ATAb阳性组的精子总膨胀率(44 50± 8 69)明显低于ATAb阴性组 (58 2 5± 9 48,P <0 0 1 ) ;ATAb阳性组 g型精子总膨胀率 (1 0 75± 3 2 2 )明显低于ATAb阴性组 (1 6 0 2± 6 2 8,P <0 0 1 )。结论　弓形虫感染对精子膜功能有明显影响 ,是弓形虫引起男性不育的原因之一     

云南省边境地区人群弓形虫感染血清流行病学调查

目的 了解云南省3个边境地区不同性别、年龄和民族的人群弓形虫感染状况,为该地区弓形虫病防控提供实验依据。方法 2015?11–2016?05在云南省中老、中越、中缅3个边境地区采集人群血样561份（中越边境222份、中老边境170份、中缅边境169份）,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中抗弓形虫IgG抗体。结果 云南省边境地区人群抗弓形虫IgG抗体总阳性率为7.84%(44/561) ,其中中越、中老、中缅边境地区人群抗弓形虫IgG抗体阳性率分别为8.56%（19/222）、8.82%（15/170）和5.92%（10/169）。汉族、哈尼族、傣族、苗族、拉祜族、基诺族、瑶族、彝族居民血清抗弓形虫抗体阳性率分别为5.63%（16/284）、10.96%（8/73）、13.70%（10/73）、4.17%（2/48）、11.11%（1/9）、7.69%（1/13）、12.00%（3/25）和11.11%（3/27）;少数民族居民血清抗弓形虫抗体总阳性率（10.11%,28/277）显著高于汉族（[χ2] = 3.884,P < 0.05）,傣族居民血清抗弓形虫抗体阳性率显著高于汉族（[χ2] = 5.594,P < 0.05）。11 ~ 20岁年龄组人群血清抗弓形虫IgG抗体阳性率最高,为23.53%（4/17）,显著高于0 ~ 10岁年龄组[4.23%（3/71）]（[χ2] = 4.593,P < 0.05）和31 ~ 40岁年龄组[4.00%（3/75）]（[χ2] = 4.997,P < 0.05）。结论 云南省边境地区人群存在不同程度弓形虫感染,少数民族居民感染率明显高于汉族,有必要加强对少数民族居民的弓形虫病防控健康宣教。     

抗弓形虫单克隆抗体免疫筛选弓形虫速殖子cDNA文库

目的　探讨自制的抗弓形虫单克隆抗体 (McAb)相应抗原的分子结构机制 ,为弓形虫疫苗的研制寻找有效抗原提供依据。方法　用自制的抗弓形虫速殖子的McAb免疫筛选弓形虫速殖子cDNA文库 ,对阳性克隆cDNA插入片段进行PCR鉴定并测序分析。结果　 2个McAb第一轮分别获得 6个和 3个阳性克隆。分别进行第 2轮筛选 ,选取其中持续阳性最强的2个进行体外剪切 ,提取质粒DNA并进行PCR扩增和序列测定 ,经核苷酸同源性比较 ,可能为 2个新基因 ,其中 7C3-C3筛选的基因命名为WX2 (GenBank登录号为 :AY2 38892 ) ,2B9-G1筛选的基因命名为WX(GenBank登录号为 :AY2 0 8994 ) ,并用蛋白质分析软件对新基因编码的蛋白质结构和功能进行预测。结论　自制的具有一定保护性效果的McAb免疫筛选获得的阳性克隆插入基因片断的表达产物 ,可能具有抵抗弓形虫感染的作用 ,值得进一步深入研究。     

刚地弓形虫菱形体蛋白的研究进展

菱形体蛋白（rhomboid）为一类跨膜丝氨酸蛋白酶，在胞膜的脂质双分子层内发挥酶解作用。刚地弓形虫的菱形体蛋白可识别微线体蛋白的跨膜区，并对其进行蛋白水解，使微线体蛋白的N端片段释放人介质中。微线体蛋白的蛋白水解过程对于刚地弓形虫入侵宿主细胞非常重要。深入研究刚地弓形虫菱形体蛋白，将有助于理解生物体菱形体蛋白的功能及研制新的药物以防治弓形虫感染。     

肾功能不全透析患者的弓形虫血清学调查

选择肾功能不全的透析患者作为病例组,健康体检人员作为对照组,对其弓形虫特异性IgG抗体进行检测。共检测透析患者205例,弓形虫IgG阳性率为27.3%;对照组360人,IgG阳性率为3.6%,两者差异有统计学意义（P〈0.05）。透析患者中有输血史者阳性率为31.2%,无输血史者阳性率为19.2%,两者差异有统计学意义（P〈0.05）。肾功能不全透析患者的弓形虫感染率明显高于普通人群,是弓形虫感染的潜在危险因素。     

白细胞介素家族在弓形虫感染中的作用

白细胞介素（IL）在清除宿主机体细胞内寄生原虫弓形虫的过程中发挥着重要作用，如破坏染虫细胞，构成免疫网络、调节免疫平衡等。现对其中重要的几类IL进行综述，旨在为弓形虫感染的治疗提供科学依据。     

弓形虫滋养体的二维结构图像分析

目的建立并分析弓形虫滋养体的形态学数据和参数,为其构建三维结构奠定基础。方法用图象分析仪测量弓形虫滋养体及其细胞核的长径、短径、等效直径、圆度和长宽比计算其体积等参数。结果弓形虫滋养体长径为3.66±0.57μm,短径为1.79±0.30μm,等效直径为2.29±0.37μm,周长为9.35±0.88μm,圆度为0.62±0.16,长宽比为0.51±0.16。细胞核的长径为2.18±0.60μm,短径为1.23±0.31μm,等效直径为1.48±0.38μm,周长为5.61±0.93μm,圆度为0.74±0.17,长宽比为0.60±0.16,虫体的表面积为4.37±0.97μm2,体积为7.09±1.75μm3;虫体细胞核的表面积为1.89±0.85μm2,体积为2.21±1.34μm3。结论本研究对虫体形态学数据和参数的建立,为量化和评价虫体的形态特征奠定了基础。     

Identification and characterization of a Fc Receptor activity on the Toxoplasma gondii tachyzoite

The Immunoglobulin (Ig) binding capacity of Toxoplasma gondii tachyzoites was investigated using fluorescence flow-cytometry analysis. Polyclonal mouse, human and rat immunoglobulins without specific anti- Toxoplasma activity bound to parasites in a concentration-dependent manner, saturating them at circulating serum concentrations. The immunoglobulin class and subclass specificity of binding was investigated using irrelevant monoclonal antibodies. IgM, IgA and IgG reacted with the parasite membrane. The attachment of mouse IgM to the parasite surface was hampered by mouse IgG1, IgG2a, IgG2b and IgG3. The binding of mouse IgG was proportionally reduced with increasing concentrations of mouse monoclonal IgM. The binding of murine immunoglobulin was diminished when in presence of human IgG. Purified Fc- but not Fab portions of immunoglobulins, fixed to parasites. Using labelled calibrated beads, the Ig binding capacity of parasites was estimated to be 6900 ± 500 sites per tachyzoite. The Kd of the T. gondii Fc Receptor (FcR) activity was determined at 1.4 ± 0.1 μM (mean ± SEM). Such FcR activity was reduced by phospholipase C, trypsin and pronase treatment of the parasites. These data show a low affinity FcR activity on T. gondii tachyzoites which recognizes Ig of different species and isotypes and is likely supported by a glycosyl-phosphatidylinositol (GPI)-anchored surface protein of the parasite .     

重庆宠物饲养者弓形体感染及影响因素调查

目的 了解宠物饲养者弓形体感染的情况及相关影响因素。方法 随机选择两个社区和某中、小学共194人进行抽样调查，采用酶联免疫吸附试验检测弓形体抗体IgG、IgM。结果 总感染率为18．56％，宠物饲养者、一般居民的感染率分别为23．89％、11．11％。宠物饲养者感染率与一般居民差异有统计学意义，弓形体感染与动物喂食方式有关。结论 该区宠物饲养者的弓形体感染率高于一般人群，加大宣传教育和防治力度具有重要意义。     

刚地弓形虫基因型与毒力关系的研究进展

弓形虫是一种专性有核细胞内的寄生原虫,可以感染包括人类在内的几乎所有温血动物。弓形虫不同虫株基因组之间存在微小差异,这可能是导致不同虫株对小鼠急性毒力差异的原因。近年来,对弓形虫基因组的研究主要集中在一些编码毒力相关的重要的抗原基因。各分离株基因组之间只有1％。2％的差异,这种差异在各不同虫株间较稳定。弓形虫株大多数属于Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型中的一种,只有Ⅰ型是公认的小鼠强毒株,其余两型属弱毒株。目前的观察认为弓形虫基因组的变异度要比表型的变异度小。该文综述了与虫株毒力表型密切相关的基因,如SAG1,SAG2和SAG5等。越来越多的研究表明,造成弓形虫表型差异的因素并非单一的,而是若干基因共同作用的结果。     

弓形虫转基因学研究进展

转基因技术在弓形虫的运用加速了对弓形虫功能基因组学的研究。本文对转基因弓形虫载体的构建、转基因方法和转基因弓形虫技术在弓形虫研究中的应用进展加以综述。     

刚地弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的免疫应答

目的 观察刚地弓形虫排泄-分泌抗原（ESA）鼻内免疫小鼠后对不同黏膜部位和系统的免疫效应。方法 用Vero细胞培养刚地弓形虫,提取ESA抗原;将5—6周龄BALB／c小鼠随机分为6组,每组10只,实验组分别用培养5、7、9、11和14d提取的ESA20μg/只鼻内免疫小鼠2次,间隔为2周;对照组用无攻虫的细胞培养上清液滴鼻。观察小鼠健康和死亡情况,记录体重。在末次免疫后第3周处死小鼠,分别分离派伊尔结（PP）、脾淋巴细胞、肠上皮内淋巴细胞（IEL）、肠系膜淋巴结淋巴细胞（MLNL）,并加以计数。收集粪便和眶血样本,ELISA检测粪内sIgA水平及血清IgG特异抗体。结果 实验期间小鼠健康状况良好,对照组和实验组小鼠体重均不同程度增加;末次免疫后第3周,实验组粪便sIgA、血清IgG、PP细胞、脾淋巴细胞、MLNL、IEL的数量均高于对照组,14d组（P〈0．01）的抗体滴度和各淋巴细胞计数最高。结论 用刚地弓形虫速殖子与Vero细胞共培养5—14d提取的ESA鼻内免疫小鼠均可诱导黏膜及系统特异性的免疫应答,共培养第14天提取的ESA免疫效果优于其他时间组。