RNA干扰作用--治疗HIV的新途径

RNA干扰作用(RNAi)是生物界一种古老且进化上高度保守的现象，是基因转录后沉默作用(PTGS)的重要机制之一，RNA干扰作为抑制基因表达的有利工具．首次在无脊椎动物和植物中对付外目的基因，主要通过短的干扰RNA(siRNA，大约21个核苷酸的RNA的复合物)有效地抑制同源性基因的表达。最近的研究表明，用siRNA抑制HIV-1的复制，即通过它抑制病毒或者细胞内的基因，取得了重要的成效。RNAi开辟了新的基因治疗药物研究途径，本文就RNAi用于抑制HIV作一综述。     

RNA干扰技术及其在胰腺癌研究中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指一些小的双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)通过特异性降解与其同源的RNA而高效地阻断体内特定基因表达的现象.到目前为止,RNAi现象已经被发现广泛存在于植物、线虫、果蝇、哺乳动物等多种生物体细胞中,使这些生物能够抵御病毒的感染、阻断转座子的作用等.     

RNA干扰技术在肥胖研究中的应用

在多种生物细胞中，外源或内源性双链RNA（doublestranded RNA，dsRNA）可触发细胞内同源mRNA的特异性降解，从而使该基因表达沉默，这种现象称为RNA干扰（RNA interference，RNAi）。RNAi现象在生物中普遍存在。首先在线虫中发现了RNAi现象，随后证实在果蝇、涡虫、水螅、锥虫、小鼠胚胎细胞及哺乳动物成体细胞中均存在dsRNA介导的RNAi现象。由于RNAi在动植物抵抗外源病毒、生长发育调控方面起着重要作用。而且在功能基因组研究、基因治疗方面有着广泛的应用前景，所以对其研究较多。现在RNAi已用于在体研究，并在抗病毒、肿瘤、免疫、药理、遗传等方面得到广泛地应用。基因有限公司和宝生物公司等已开发出RNAi试剂盒。目前RNAi数据库与表型blast也已建立。本就RNAi干扰技术在肥胖研究中的应用作一综述。     

RNA干扰技术及其在胰腺癌研究中的应用

RNA干扰（RNA interference，RNAi）是指一些小的双链RNA（double stranded RNA，dsRNA）通过特异性降解与其同源的RNA而高效地阻断体内特定基因表达的现象。到目前为止，RNAi现象已经被发现广泛存在于植物、线虫、果蝇、哺乳动物等多种生物体细胞中，使这些生物能够抵御病毒的感染、阻断转座子的作用等。由于RNAi能特异性地抑制某一基因的表达，目前已经广泛应用于抗肿瘤、抗病毒等的治疗研究以及一些基础研究领域。现主要就近年来RNAi技术在胰腺癌研究中的应用进行综述。     

小干扰RNA治疗丙型肝炎的研究进展

丙型肝炎是由HCV感染引起的严重危害人类健康的传染性疾病,至今尚无特效的防治方法.小干扰RNA(siRNA)作为一种新型基因治疗分子,在RNA干扰(RNAi)抗病毒的研究背景下,也逐渐应用于抑制HCV感染.目前,在研究siRNA对病毒自身基因组的抑制、对宿主相关基因的沉默、病毒逃逸的应对及与固有免疫的关系等方面,取得了...     

Rad51蛋白表达对骨肉瘤细胞γ-射线敏感性的影响

目的利用RNAi抑制Rad51蛋白表达来研究Rad51在骨肉瘤治疗中的作用。方法western blot和RT-PCR观察Rad51在骨肉瘤细胞中蛋白和RNA水平的变化。采用RNA干扰技术,构建shRNA-Rad51载体。用western blot和RT-PCR方法证实RNA干扰的有效性和可行性。用MTT和克隆形成实验研究RNAi抑制Rad51表达对γ-射线的敏感性。流式分析法观察RNAi抑制Rad51表达对细胞凋亡的影响。结果成功构建了shRNA-Rad51载体。RNAi抑制Rad51表达增强骨肉瘤细胞对γ-射线的敏感性。RNAi抑制Rad51表达促进骨肉瘤细胞的凋亡。结论RNAi抑制Rad51表达在骨肉瘤治疗中有作用,有望成为骨肉瘤治疗的新靶点。     

RNA干扰在肝病治疗中的研究进展

RNA干扰(RNAi)是双链RNA(dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应序列及基因的表达使其沉默的过程[1].RNAi最主要的功能特色在于它可调节和关闭基因的表达,促使mRNA降解或阻止蛋白产物合成,进而调控细胞的各种高级生命活动,其抑制基因表达作用具有高效性和特异性[2].RNAi作为一种快捷方便的工具广泛用于高通量的研究基因功能、基因敲除、基因治疗和基因表达调控领域的研究.现对RNAi在肝病治疗中的最新进展作一综述.     

RNA干扰的基础研究和临床应用前景

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是在mRNA水平关闭相应序列基因表达或使其沉默的过程.在哺乳动物中发现的21-23核苷酸的双链RNA(小干扰RNA)开启了siRNA的治疗应用可能.目前RNA干扰对于病毒感染、癌症和基因病等表现出广阔的应用前景.就RNA干扰的作用机制、临床应用及应用中存在的障碍等方面综述该领域的研究进展.     

RNA干扰抗艾滋病病毒感染研究进展

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是一种古老而保守的生物现象,它由21～23个核苷酸的双链RNA通过碱基互补靶向识别并降解mRNA,导致序列特异的基因沉默。体外证明小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)能对抗HIV-1感染。它主要作用于宿主细胞受体,如CD4或CCR5等相应的mRNA及HIV-1的mRNA,抑制病毒表达,阻抑病毒感染。RNAi有可能成为一种新的防治HIV-1感染的基因治疗方法。     

Of lives and livers: emerging responses to the hepatitis C virus

Hepatitis C is an infectious disease affecting the liver, caused by the hepatitis C virus (HCV). HCV is an etiological agent of acute and chronic liver disease that exists throughout the world. The high genetic variability of the HCV genome is reflected by six genotypes (1 to 6). Each genotype has a characteristic geographical distribution, which is important epidemiologically. HCV is a blood-borne virus that generally circulates in low titers in the serum of infected individuals. Epidemiologic studies show that the most efficient transmission of HCV is through the transfusion of blood or blood products, the transplantation of organs from infected donors, and the sharing of contaminated needles among injection-drug users. However, fewer than half of patients with acute hepatitis C report a history of such exposure. A small number of epidemiologic studies demonstrate that perinatal, sexual, household, and occupational transmission occurs, but our understanding of the risks of transmission in these settings has been limited. The therapy for chronic hepatitis C has evolved steadily since alpha interferon was first approved for use. At present, the optimal regimen appears to be a 24- or 48-week course of a combined pegylated alpha interferon and ribavirin regimen. Currently, the combination of RNAi (LV-shIRES) with IFN-α has been proposed to prevent therapeutic resistance, and to promote enhanced antiviral activity against HCV. However, any RNAi based therapy may be years away due to off-target effects.     

RNAi-基因敲除技术在妇科领域中的应用

RNAi是存在于真核生物体内的一种阻断外源基因表达的自我防御体系。它是由双链RNA介导的使与其互补的具有同源序列的单链RNA进行特异性的降解。随着这几年RNAi研究的不断深入,RNAi的干涉机制逐渐被阐明。该文介绍了RNAi的干涉机制和在妇科肿瘤领域中的应用进展。RNAi技术必将成为妇科肿瘤领域基因功能研究、细胞信号传导以及基因治疗的一种强大的新型工具。     

Targeting Marek's disease virus by RNA interference delivered from a herpesvirus vaccine

Live attenuated herpesvirus vaccines such as herpesvirus of turkey (HVT) have been used since 1970 for the control of Marek's disease (MD), a highly infectious lymphoproliferative disease of poultry. Despite the success of these vaccines in reducing losses from the disease, Marek's disease virus (MDV) strains have shown a continuing increase in virulence, presumably due to the inability of the current vaccines in preventing MDV replication. The highly specific and effective nature of RNA interference (RNAi) makes this technology particularly attractive for new antiviral strategies. In order to exploit the power of RNAi-mediated suppression of MDV replication in vivo delivered through existing vaccines, we engineered recombinant HVT expressing short hairpin RNA (shRNA) against MDV genes gB and UL29. The levels of protection induced by the RNAi-expressing HVT against virulent virus challenge were similar to the parent pHVT3 virus. However, chickens vaccinated with recombinant HVT expressing shRNA showed moderate reduction of challenge virus replication in blood and feather samples. Delivery of RNAi-based gene silencing through live attenuated vaccines for reducing replication of pathogenic viruses is a novel approach for the control of infectious diseases.     

RNAi敲低小鼠睾丸雄激素结合蛋白SHBG对生精功能影响的研究

目的通过干扰小鼠睾丸雄激素结合蛋白(Sex hormone-binding globulin,SHBG)的表达,研究Shbg基因对雄性小鼠生精功能的影响。方法构建有效的Shbg基因干扰质粒,以Western Blot检测干扰效果,通过RNAi干扰小鼠睾丸Shbg基因的表达,研究干扰Shbg基因的表达对小鼠体内胎仔数和精子数量、精子活力、睾丸重量和体外受精率的影响。结果 RNAi干扰Shbg-mRNA的表达能使小鼠睾丸SHBG蛋白表达明显下调,SHBG蛋白表达下调使雄性小鼠自然交配后胎仔数降低,附睾精子的数量和体外受精率也明显下降。结论SHBG蛋白与雄性小鼠的生育力密切相关。     

RNA干扰技术在德国小蠊功能基因研究中的应用

德国小蠊是我国蜚蠊的优势种,在医学与经济方面的重要性和危害性,以及作为多种科学问题的重要研究模型决定了其在生物科学研究领域的重要地位,而在后基因组时代对功能基因的研究成为生物学研究的基础。RNA干扰是外源性或内源性双链RNA诱发的在mRNA水平上进行的基因沉默现象,从而阻止某一基因功能在细胞或整体水平上的表达,具有高效性和特异性等优势。鉴于蜚蠊重要研究价值与RNA干扰表现出的技术优势,该文简要介绍RNA干扰技术分子机制,重点对德国小蠊功能基因的最新研究结果进行综述。     

SiRNA technology, the gene therapy of the future?

A new era in genetics started 17 years ago, when co-suppression in petunia was discovered. Later, co-suppression was identified as RNA interference (RNAi) in many plant and lower eukaryote animals. Although an ancient antiviral host defense mechanism in plants, the physiologic role of RNAi in mammals is still not completely understood. RNAi is directed by short interfering RNAs (siRNAs), one subtype of short double stranded RNAs. In this review we summarize the history and mechanisms of RNAi. We also aim to highlight the correlation between structure and efficacy of siRNAs. Delivery is the most important obstacle for siRNA based gene therapy. Viral and nonviral deliveries are discussed. In vivo delivery is the next obstacle to clinical trials with siRNAs. Although hydrodynamic treatment is effective in animals, it cannot be used in human therapy. One possibility is organ selective catheterization. The known side effects of synthesized siRNAs are also discussed. Although there are many problems to face in this new field of gene therapy, successful in vitro and in vivo experiments raise hope for treating human disease with siRNA.     

EGFR RNA干扰抑制博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化

目的探讨降低表皮生长因子受体（EGFR）在肺内的表达对博莱霉素致小鼠肺纤维化的影响。方法将40只4-6周龄C57BLB／c雄性小鼠按简单随机法分为正常对照组（气管滴入PBS）、纤维化组（气管滴入博莱霉素3mg／kg）、RNAi组（气管滴入博莱霉素3mg／kg＋气管滴入siR-NA20μl）和RNAi阴性对照组（气管滴入博莱霉素3mg／kg＋气管滴人siRNA阴性对照20μl）。实验第10天处死小鼠,收获肺组织,检测羟脯氨酸含量。肺组织切片行HE染色观察肺组织病理改变,采用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）法检测EGFR的表达。Westernblot检测EGFR、磷酸化EGFR表达。结果RNAi组与纤维化组比较,肺组织EGFRmRNA表达（0．31±0．05 vs 0．75±0．08,P〈0．01）和EGFR蛋白表达（1．53±O．47vs2．56±0．37,P〈0．01）均显著下降;肺病理损伤较纤维化组减轻,肺羟脯氨酸含量显著减少（543．00±25．89vs900．73±31．77,P〈0．01）;磷酸化EGFR蛋白表达亦较纤维化组明显减少（1．78±0．35 vs 2．84±0．51,P〈0．01）。结论EGFRRNAi抑制了EGFR活化,减轻了博莱霉素诱导的肺纤维化改变。     

70%顽固性乳腺癌与特殊基因有关

美国马萨诸塞州怀特黑德生物医学研究所的研究成果发表于2011-07-14《自然》杂志(Possemato R,Marks KM,Shaul YD,et al.Functional genomics reveal that the serine synthesis pathwayis essential in breast cancer.Nature Year Published,2011     

亲代谢型谷氨酸受体5在Homer 1a RNA干扰大鼠学习记忆障碍中的作用

目的 Homer 1a RNA干扰(RNA interference,RNAi)后的Sprague Dawley (SD)大鼠在Morris水迷宫中表现学习记忆能力障碍,本研究旨在通过检测Homer 1a RNAi后大鼠不同脑区亲代谢型谷氨酸受体5(metabotropic glutamate receptor 5,mGluR 5)的表达情况,来初步探讨Homer 1a RNAi致大鼠学习记忆障碍的分子机制。方法 将24只SD大鼠随机分为两组: Homer 1a RNAi组(RNAi组,n=12)和对照组(Nc组,n=12),运用侧脑室注射技术,分别向两组大鼠的侧脑室注射针对Homer 1a 的RNAi慢病毒和无义病毒,等待病毒起效时间7 d,完成相应的行为学检测(Morris水迷宫)后,利用荧光定量PCR 和Western blot 技术检测不同脑组织(前额叶、纹状体、海马)mGluR5 mRNA 和蛋白表达情况。 结果 RNAi组大鼠纹状体和海马mGluR5 mRNA和蛋白表达均较对照组显著降低(纹状体:mRNA t=6.67,蛋白t=3.10;海马:mRNA t=3.08;蛋白t=2.89,P值均<0.05或<0.01),前额叶mGluR5 mRNA和蛋白表达较对照组差异无统计学意义(mRNA t=1.58,蛋白t=1.66,P值均>0.05)。 结论 Homer 1a RNAi后大鼠脑组织Homer 1a相关基因mGluR5表达下调,提示mGluR5可能作为Homer 1a的下游基因,参与Homer 1a RNAi后大鼠学习记忆的损伤过程。