抑癌基因RASSF1A在胃癌中的表达及意义

目的 研究胃癌组织中抑癌基因RASSF1A的表达并探讨其临床意义.方法 应用免疫组化法分别检测39例胃癌组织标本和18例正常对照胃组织标本RASSF1A蛋白表达; RT-PCR法检测4株胃癌细胞株、正常胃黏膜细胞株GES-1以及阳性对照Hela细胞中RASSF1A mRNA的表达;结合病理学特征进行分析.结果 胃癌组织RASSF1A表达阳性细胞明显少于正常对照胃组织(P＜0.01);不同分化程度、临床分期及浸润深度的胃癌组织,其RASSF1A表达存在显著性差异(P＜0.05).4株胃癌细胞株中仅MKN45细胞有RASSF1A mRNA表达;而正常胃黏膜细胞株GES-1和阳性对照Hela细胞均表达RASSF1A mRNA.结论 胃癌组织中RASSF1A基因表达明显减少,其可作为评估胃癌恶性程度和预后的一项有意义的指标.     

SATB1在胃癌细胞SGC-7901中表达的研究

目的 通过检测胃癌细胞株SGC-7901和胃黏膜上皮细胞GES-1中SATB1 mRNA和蛋白的表达水平,探讨其在胃癌发展和转移中的作用.方法 利用荧光定量PCR、RT-PCR检测胃癌细胞株SGC-7901和胃黏膜上皮细胞GES-1中SATB1 mRNA的转录水平表达,通过免疫荧光染色检测SATB1在两种细胞中的表达差异.结果 SATB1 mRNA在SGC-7901中的表达程度显著高于GES-1细胞,免疫荧光染色显示SATB1在胃癌细胞株的胞浆和胞核内均有分布,呈强阳性染色,而在GES-1细胞中无表达.结论 SATB1在胃癌细胞株SGC-7901中mRNA和蛋白水平均呈现高表达,提示SATB1的表达水平可能与胃癌发生发展密切相关,有望成为判断胃癌预后的一个指标.     

胃癌组织和细胞中P115 、MIF的表达及意义

目的 观察胃癌组织和细胞中高尔基体转运蛋白P115和MIF的表达情况,探讨其在胃癌发生、发展中的意义.方法 用S-P、Western blot和RT-PCR法检测P115及MIF在正常胃黏膜和胃癌组织,3种细胞株(正常胃黏膜上皮GES-1,不同分化程度的胃癌细胞株MKN-28,BGC-823)中的蛋白和mRNA表达情况.结果 P115和MIF在胃癌组织中的阳性表达率分别为73.3%、80%,在正常胃黏膜中的阳性表达率分别为40%、46.7%,胃癌组织中P115和MIF的表达明显高于正常胃黏膜(P＜0.01) ,且P115的表达和MIF的表达呈正相关(r=0.433,P=0.017);胃癌组织中P115、MIF的蛋白和mRNA表达水平明显高于正常胃黏膜组织(P＜0.01).免疫细胞化学,Western blot和RT-PCR结果显示: P115、MIF在胃癌细胞株MKN-28、BGC-823中的蛋白及mRNA表达水平明显高于正常胃黏膜上皮GES-1(P＜0.01);且低分化胃癌细胞株BGC-823中P115和MIF 的表达水平明显高于高分化胃癌细胞株MKN-28(P＜0.05).结论 P115和MIF的过表达,可能在胃癌的发生过程中起协同作用;对P115和MIF相互作用机制的深入探讨有可能使其成为研究胃癌发生、发展的分子机制的新靶点.     

生存素在胃癌细胞中的表达及IL-1β对其表达的影响

目的探讨生存素在人正常胃黏膜细胞株及胃癌细胞株中的表达和白细胞介素（IL）-1β对胃黏膜细胞生存素表达的影响。方法用RT-PCR和Westernblot法检测人正常胃黏膜细胞株（GES-1）及3株胃癌细胞（AGS、SGC-7901、BCG-823）和经IL-1β处理后的GES-1、AGS细胞中生存素的表达。结果 3株胃癌细胞均有生存素表达,正常胃黏膜细胞无生存素表达。IL-1β不刺激正常胃黏膜细胞生存素的表达,可剂量依赖性增加胃癌细胞生存素的表达。结论胃癌细胞均有生存素表达,正常胃黏膜细胞不表达生存素;IL-1β对胃癌细胞生存素的表达有正向作用,表明IL-1β在胃癌的发展过程中有一定作用。     

胰岛素样生长因子结合蛋白7基因在胃癌细胞中的表达及甲基化调控

目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)mRNA在胃癌细胞中的表达及其甲基化调控.方法 分别培养胃癌细胞株高分化MKN-28、中分化SGC-7901和AGS、低分化MKN- 45以及胃黏膜正常上皮细胞(GES-1).提取细胞RNA,采用RT-PCR法检测IGFBP7 mRNA在各细胞株中的表达.提取细胞基因组DNA,甲基化修饰后采用甲基特异性PCR(MSP)分析其CpG岛甲基化状态.采用不同浓度去甲基化药物5'-杂氮-2'-脱氧胞嘧啶(5-aza-dc)处理细胞株后,经Real-time PCR定量药物处理前后各细胞株IGFBP7 mRNA的相对表达量.结果 各肿瘤细胞株中IGFBP7 mRNA表达较GES-1降低或消失.MSP检测IGFBP7 mRNA表达降低和消失的细胞株均有CpG岛不同程度的甲基化.不同浓度5-aza-dc处理细胞后,IGFBP7 mRNA的表达量呈剂量依赖性增高.结论 IGFBP7 mRNA在胃癌细胞株中低表达或不表达,其表达下调与其CpG岛甲基化有关.5-aza-dc可使IGFBP7 mRNA表达降低的胃癌细胞株重新表达IGFBP7 mRNA,提示IGFBP7基因CpG岛甲基化可能是IGFBP7在胃癌细胞系中表达缺失的分子机制.     

去甲基化药物对胃癌细胞中K A I1基因表达水平影响初探

目的 分别检测正常胃黏膜、低分化胃癌细胞株BGC-823及使用去甲基化药物后胃癌细胞株BGC-823中KAI1基因的表达情况,对胃癌细胞中KAI1基因甲基化对KAI1基因mRNA表达水平的影响做一个初步的探讨.方法 首先采用BSP法分别检测了正常胃黏膜与去甲基化药物使用前后胃癌细胞株BGC-823中KAI1基因甲基化的水平.其次,采用RT-PCR法分别检测正常胃黏膜与去甲基化药物使用前后胃癌细胞株BGC-823中KAI1基因mRNA量的变化.结果 BSP法检测结果显示BGC-823细胞中KAI1基因出现明显甲基化,正常胃黏膜组织中KAI1基因则未见甲基化;RT-PCR结果显示正常胃黏膜中KAI1基因mRNA表达量达66.68%,而未使用去甲基化药物的BGC-823细胞中KAI1基因mRNA表达量与使用去甲基化药物的胃癌细胞株BGC-823组比较提高了3倍.结论 KAI1基因在胃癌细胞中表现出明显去甲基化,使用去甲基化药物可使胃癌细胞中KAI1的mRNA表达水平明显提高.     

胰岛素样生长因子结合蛋白7基因在胃癌细胞中的表达及甲基化调控

目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白7（IGFBP7）mRNA在胃癌细胞中的表达及其甲基化调控。方法 分别培养胃癌细胞株高分化MKN-28、中分化SGC-7901和AGS、低分化MKN-45以及胃黏膜正常上皮细胞（GES-1）。提取细胞RNA,采用RT-PCR法检测IGFBP7 mRNA在各细胞株中的表达。提取细胞基因组DNA,甲基化修饰后采用甲基特异性PCR（MSP）分析其CpG岛甲基化状态。采用不同浓度去甲基化药物5'-杂氮-2'-脱氧胞嘧啶（5-aza-dc）处理细胞株后,经Real-time PCR定量药物处理前后各细胞株IGFBP7 mRNA的相对表达量。结果 各肿瘤细胞株中IGFBP7 mRNA表达较GES-1降低或消失。MSP检测IGFBP7 mRNA表达降低和消失的细胞株均有CpG岛不同程度的甲基化。不同浓度5-aza-dc处理细胞后,IGFBP7 mRNA的表达量呈剂量依赖性增高。结论 IGFBP7 mRNA在胃癌细胞株中低表达或不表达,其表达下调与其CpG岛甲基化有关。5-aza-dc可使IGFBP7 mRNA表达降低的胃癌细胞株重新表达IGFBP7 mRNA,提示IGFBP7基因CpG岛甲基化可能是IGFBP7在胃癌细胞系中表达缺失的分子机制。     

ARNT2在胃癌中的表达及临床意义

目的 探讨人胃癌中芳香烃受体核易位蛋白2(ARNT2)的表达及临床意义。 方法 运用qRT-PCR和Western blotting检测ARNT2在正常胃细胞株及多种胃癌细胞株中的表达。通过免疫组织化学检测61例胃癌组织及相应癌旁胃黏膜组织中ARNT2的表达。 结果 ARNT2 mRNA和蛋白在胃癌细胞株中的表达水平显著低于正常胃细胞株。胃癌组织中ARNT2的阳性表达率显著低于癌旁胃黏膜组织(32.79% vs 80.33%,P<0.05),与细胞株的检测结果一致。并且,胃癌中ARNT2的表达水平与肿瘤的分化程度显著相关(P<0.05)。 结论 ARNT2在胃癌细胞及组织中低表达,并且其表达水平与胃癌的分化程度相关,提示其可能参与胃癌的发生与发展。     

胃组织NHE1蛋白检测诊断早期胃癌的可行性分析

目的 探讨胃组织钠氢交换蛋白1(NHE1)检测在早期胃癌诊断中的作用。 方法 选择2007年5月—2015年5月期间于浙江省平阳县人民医院接受手术的胃癌患者、胃镜检查中取得的胃黏膜组织共50例,人胃癌细胞株SGC-7901和人正常黏膜细胞株GES-1,比较NHE1的mRNA表达以及蛋白质表达情况。观察NHE1特异性阻断剂EIPA对SGC-7901胃癌细胞株的影响。 结果 胃癌样本组织及SGC-7901细胞株中NHE1的mRNA表达明显高于胃正常黏膜组织和GES-1胃黏膜细胞(均P＜0.05)。胃正常黏膜组织中NHE1的IOD值与GES-1细胞株中NHE1的IOD值差异无统计学意义(P＞0.05),胃癌组织中NHE1的IOD值与SGC-7901细胞株中NHE1的IOD值差异无统计学意义(P＞0.05),胃癌组织中的NHE1的IOD值高于正常黏膜组织中NHE1的IOD值(P＜0.05),SGH-7901细胞株的NHE1的IOD值高于GES-1细胞株中的NHE1的IOD值(P＜0.05)。采用不同浓度EIPA处理SGC-7901,24 h后测定OD值,随着EIPA浓度增加,SGC-7901的OD值呈现明显下降的趋势,在EIPA浓度不超过30 μm/ml的范围内具有较好的剂量-效应关系。 结论 胃癌患者生存率的提高有赖于早期的诊断和早期正确的治疗,胃组织NHE1蛋白检测用于辅助诊断胃癌或癌前病变有一定的临床意义。      

RASSF1基因在胃癌组织及细胞中的表达

[摘要] 目的 研究RASSF1基因的三种转录本(RASSF1-A, -B, -C)在胃癌组织及细胞中的表达特点。方法 应用生物信息学分析RASSF1基因的3种转录本的结构特点; 同时利用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌组织、癌旁组织及不同胃癌细胞系BGC和SGC细胞中三种转录本的mRNA表达水平。结果 RASSF1基因3种转录本在胃癌不同分化程度的细胞系BGC-823和SGC-7901细胞中均有表达,在60例胃癌组织中RASSF1A,RASSF1B 表达缺失率分别为60.2%(37/60),25%（15/60）,RASSF1C基因在胃癌组织及癌旁组织表达率相近约为86.7%（55/60）。结论 RASSF1三种转录本在胃癌组织中的表达下调, RASSF1B和RASSF1C在胃癌中的表达无差异,其余基因比较有差异。RASSF1B的表达可能与细胞的分化程度有关。     

膀胱移行细胞癌中RASSF1A基因的表达及其临床意义

目的研究RASSF1A基因在膀胱移行细胞癌(TCC)中的表达及其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应检测45例膀胱TCC及其相应癌周正常组织中RASSF1A基因mRNA表达情况,采用免疫组织化学方法检测38例膀胱TCC及18例癌周正常组织中RASSFIA蛋白表达情况。结果与癌周正常组织相比,60.0%(27/45例)的膀胱TCC组织中发现RASSF1A mRNA表达异常下调。RASSF1A蛋白在膀胱TCC组织中的阳性表达率为36.8%,明显低于癌周正常组织中的83.3%(P<0.05)。不同临床分期和病理分级间RASSF1A mRNA表达异常和RASSF1A蛋白阳性表达的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论RASSF1A的失表达可能参与膀胱TCC的发生。     

白介素32在胃癌细胞中的表达及意义

目的观察白介素32(IL-32)在胃癌细胞株中的表达情况,探讨其在胃癌发生、发展中的意义。方法采用逆转录PCR、real-time PCR及Western blot法分别从基因和蛋白水平上检测IL-32在正常胃上皮细胞GES-1以及胃癌细胞株MKN-45、KATO中的表达情况。结果逆转录PCR及real-time PCR结果均显示胃癌细胞IL-32 mRNA表达水平明显高于正常胃上皮细胞,逆转录PCR灰度比值(目的 /内参)为:GES-1(0.34±0.09)、MKN-45(0.79±0.11)、KATO(0.90±0.17),差异有统计学意义(P<0.05)。real-time PCR Ct值显示:MKN-45的IL-32基因表达量是GES-1的(5.34±1.09)倍,KATO是GES-1的(4.07±1.69)倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示IL-32在蛋白表达水平的结果与前一致,灰度比值(目的 /内参)为:GES-1(0.30±0.10)、MKN-45(0.92±0.32)、KATO(0.86±0.15),差异有统计学意义(P<0.05)。结论IL-32在胃癌细胞株中呈高表达,推测其可能在胃癌的发生、发展中起一定作用。     

Abl相互作用蛋白1过表达对胃癌细胞系AGS体外增殖的影响

目的 明确Abl相互作用蛋白1(ABI1)在正常胃黏膜细胞系GES-1和胃癌细胞系AGS中的表达模式,并探讨ABI1过表达对AGS细胞体外增殖的影响.方法 首先用免疫组化、免疫荧光、逆转录(RT)-PCR、实时定量PCR及Western印迹法明确ABI1在GES-1及AGS细胞中的表达模式;其次用脂质体转染方法分别将基因重组表达载体鼠干细胞病毒(MSCV)-绿色荧光蛋白(GFP)-ABI1质粒和对照载体MSCV-GFP质粒导入AGS细胞,用嘌呤霉素筛选稳定表达MSCV-GFP-ABI1和MSCV-GFP的细胞系,用实时定量PCR和Western印迹法鉴定是否成功构建了ABI1过表达的细胞模型;最后用细胞活力检测试剂盒[八肽胆囊收缩素(CCK-8)]检测ABI1过表达对细胞增殖的影响.结果 ABI1在正常胃黏膜细胞系GES-1及胃癌细胞系AGS中均有表达;与GES-1细胞相比,ABI1在AGS细胞中的表达从mRNA水平到蛋白质水平均下调;成功构建稳定表达MSCV-GFP-ABI1的AGS-MSCV-GFP-ABI1细胞模型,AGS-MSCV-GFP-ABI1细胞中ABI1的表达无论mRNA水平还是蛋白质水平均明显高于AGS细胞(均P=0.002);CCK-8法检测显示,AGS-MSCV-GFP-ABI1细胞在24、48、72、96 h 4个时间点增殖率分别为1.46±0.31、4.75±0.12、6.62±0.32、8.96±0.27,均明显低于AGS细胞及AGS-MSCV-GFP细胞(均P<0.01).结论 ABI1在胃癌细胞中表达下调,其过表达可以抑制人胃癌细胞系AGS的增殖,提示ABI1表达下调可能参与了胃癌的发生发展过程,而影响胃癌细胞的增殖可能是其发挥作用的重要途径之一.     

OCT4基因在胃癌细胞系中的表达及其意义

【摘要】 目的 检测八聚体结合蛋白-4（octamer-binding protein-4,OCT4）基因在不同分化程度的胃癌细胞株（MKN-28、SGC-7901、BGC-823）及正常胃黏膜细胞株GES-1中的表达情况,研究OCT4基因表达水平与胃癌细胞分化程度和侵袭力的相关性。方法 RT-PCR确定GES-1、MKN-28、SGC-7901、BGC-823中OCT4基因的表达水平,OCT4 siRNA转染BGC-823细胞,分别通过荧光定量PCR和Western blot检测干扰OCT4基因表达的效果,并利用Transwell小室法研究OCT4在BGC-823细胞侵袭力中的作用。结果 正常人胃黏膜细胞中未检测到OCT4的表达,人胃癌细胞系分化程度越低,OCT4基因表达量越高,低分化人胃癌细胞系BGC-823中OCT4基因表达最高,转染OCT4 siRNA的BGC-823细胞内的OCT4 mRNA和OCT4蛋白表达量明显下降（P＜0．05）。干扰胃癌细胞BG-823中OCT4基因的表达,穿膜细胞数量减少（P＜0．05）,侵袭力下降。结论 OCT4基因表达量与胃癌细胞的分化程度有关,OCT4基因可能在胃癌细胞的分化中起重要作用,影响胃癌细胞的侵袭能力,其表达程度有望成为胃癌患者恶性度预测的参考指标之一。     

食管癌组织RASSF1A的表达及其与基因启动子甲基化的关系

目的探讨RASSF1A表达及其基因启动子甲基化在食管癌发生中的作用。方法取40例食管癌患者肿瘤组织及癌旁组织,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测RASSF1A的mRNA表达,用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测RASSF1A基因启动子的甲基化。结果 RASSF1A mRNA在食管癌组织、癌旁组织表达缺失率分别为77.5%（31/40）、2.5%（1/40）,差异有统计学意义（P〈0.05）。癌旁组织均未发现甲基化,而癌组织中甲基化率为67.5%（27/40）。所有甲基化的食管癌组织RASSF1A mRNA表达缺失。结论食管癌的发生与RASSF1A基因表达缺失有关联,而RASSF1A基因启动子区甲基化是RASSF1A基因表达缺失的原因。     

IEX-1蛋白在胃癌中的表达及其意义

目的揭示即刻早期反应X-1（IEX-1）蛋白在胃癌组织及细胞系中的表达,探讨其对人胃癌细胞凋亡和增殖的影响。方法采用免疫组织化学法检测100 例胃镜活检标本中IEX-1 蛋白的表达,用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot 检测人正常胃黏膜细胞GES-1 和胃癌细胞MKN28 中-1 基因和蛋白的表达,同时转染IEX-1 的过表达质粒pcDNA3-FLAG-IEX-1 和干扰质粒pLL3.7-si-IEX-1,分别采用流式细胞术及四甲基偶氮唑盐比色法检测IEX-1 对细胞周期、凋亡及增殖的影响。结果胃癌组织中IEX-1 蛋白表达水平高于正常胃组织和慢性胃炎组织（p <0.05）,且随着病情进展,IEX-1 表达水平有逐渐升高的趋势。相对于人正常胃黏膜细胞GES-1,胃癌细胞MKN28 中-1 基因和蛋白表达更高（p <0.05）。与对照组相比,IEX-1 蛋白表达增高后S 期细胞比例升高,G2期细胞比例降低,细胞增殖率升高,凋亡减少（p <0.05）,而干扰IEX-1 蛋白表达后,G1期细胞升高,G2期细胞比例下降,细胞增殖率下降,细胞凋亡增加（p <0.05）。结论IEX-1 蛋白在胃癌组织中呈高表达,在人胃癌细胞中上调IEX-1 蛋白能促进细胞增殖,发挥抗凋亡能力,干扰IEX-1 蛋白表达能阻滞细胞周期进程,并诱导凋亡。