α-干扰素联合脂多糖在体外抑制急性髓系白血病细胞株U937和HL60增殖的效应

目的 探讨α-干扰素联合脂多糖在体外对髓系白血病(AML)细胞系U937、HL60细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 用四甲基偶氮唑蓝法检测α-干扰素和(或)脂多糖对U937、HL60细胞增殖作用的影响;流式细胞仪检测α-干扰素和(或)脂多糖对U937、HL60细胞的凋亡率和细胞周期的影响.结果 (1)单用α-干扰素或脂多糖组较对照组能显著地抑制U937、HL60细胞的增殖、增加细胞的凋亡率和增加G1期细胞(P＜0.05).(2)α-干扰素联合脂多糖组较单用α-干扰素或脂多糖组及对照组均能显著地抑制U937、HL60细胞的增殖、增加细胞的凋亡率和增加G1期细胞(P＜0.05).结论 α-干扰素联合脂多糖对白血病细胞增殖抑制及凋亡促进有协同增强作用.     

亚硒酸钠对U—937细胞增殖,分化及双链RNA含量的影响

采用流式细胞仪检测等方法,初步研究亚硒酸钠对U-937细胞的抑制增殖作用和诱导分化作用及其对U-937细胞双链RNA的影响,结果提示:亚硒酸钠可抑制U-937细胞增殖,其作用随剂量增加和时间延长而增强。可使细胞用期发生改变,表现为G_0/G_1期细胞比例增加,S期细胞减少,G_2/M期细胞减少。可增强细胞非特异性酯酶和酸性磷酸酶活性,同时伴有单核细胞样形态变化,提示亚硒酸钠可能有诱导U-937细胞分化的作用。亚硒酸钠尚可明显降低U-937细胞双链RNA过量百分率。     

α-干扰素联合脂多糖对白血病细胞株U937细胞周期的影响及其机制研究

目的探讨α-干扰素联合脂多糖在体外对髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)细胞U937细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及其机制。方法四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖;Annexin V FITC/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting检测cyclinA2和cyclinD1蛋白质表达。结果α-干扰素和(或)脂多糖组较对照组能显著地抑制U937细胞的增殖、增加细胞的凋亡率和G1期细胞比例(P<0.05);α-干扰素联合脂多糖组较单用α-干扰素、脂多糖组能显著抑制U937细胞增殖、增加细胞凋亡率和G1期细胞比例(P<0.05),能够显著下调CyclinA2蛋白质表达、上调CyclinD1蛋白质表达(P<0.05)。结论α-干扰素与脂多糖对U937细胞的增殖抑制、细胞凋亡和G1期细胞的比例有协同增强作用,其机制可能与细胞周期素Cy-clinA2、CyclinD1蛋白的调节有关。     

rhTNF-α对成骨向分化前后的人脂肪基质细胞分泌血管生成相关生长因子的影响

目的：研究在重组人肿瘤坏死因子（recombinant human tumor necrosis factor alpha,rhTNF-α）刺激下人脂肪基质细胞（human adipose tissue-derived stromal cells, hADSCs）增殖的改变及成骨向分化前后血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor-2,FGF-2）和胰岛素样生长因子1（insulin-like growth factor-1,IGF-1）分泌的变化。方法：采用吸脂术获得的第4代hADSCs,以终浓度为0、1、5、10、50、100 μg/L的rhTNF-α刺激hADSCs,分别在48、72、96 h后行MTT法检测不同浓度rhTNF-α对hADSCs增殖的影响;并以该浓度梯度的rhTNF-α刺激hADSCs,24 h后收集上清,以ELISA法检测VEGF、FGF-2和IGF-1的分泌情况;在成骨向诱导的第1、3、7、14天收集细胞上清,ELISA法检测上述3种生长因子分泌的变化,收集细胞上清前24 h更换培养基,并在相应孔中加入rhTNF-α,使其终浓度为10 μg/L。所有ELISA数据均以相应培养孔的细胞数进行校正。结果：rhTNF-α能促进hADSCs的增殖,其作用表现为一定的浓度和时间依赖。相比于对照组,48 h时,10 μg/L rhTNF-α对增殖的促进作用并不明显,但96 h时则表现为促进作用（P<0.01）,而100 μg/L rhTNF-α在48 h表现为抑制作用（P<0.01）,96 h时则表现为明显的促进作用（P<0.01）。相对于对照组,rhTNF-α可以显著促进hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1（P<0.01）;hADSCs经成骨向诱导后,上述3种生长因子的分泌有增加的趋势;不同成骨向分化阶段的hADSCs用10 μg/L rhTNF-α刺激后,在诱导第1天,rhTNF-α显著促进VEGF的分泌（P<0.01）,但对FGF-2和IGF-1的分泌无显著性影响;在诱导第3天和第7天,rhTNF-α对VEGF（P<0.01）、FGF-2（P<0.05）和IGF-1（P<0.05）的分泌均有促进作用;但在第14天则抑制VEGF（P<0.01）、FGF-2（P<0.05）和IGF（P<0.05）的分泌。结论：一定浓度的rhTNF-α对hADSCs的增殖有促进作用;hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1具有rhTNF-α的浓度依赖;在不同成骨向分化阶段,rhTNF-α对hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1这3种生长因子的作用不同。     

干扰素α对人肺腺癌细胞系A549增殖抑制和诱导分化作用

目的探讨干扰素α(IFN-α)对人肺腺癌细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法用不同质量浓度IFN-α(25μg／L,75μg／L,100μg／L)处理人肺腺癌A549细胞,记录细胞数目,进行甲基绿-派洛宁染色,测定软琼脂集落形成率。结果IFN-α能明显抑制A549细胞的增殖,药物组与对照组之间差异有显著性(P＜0.05),药物组与对照组比较增殖型细胞减少,分化型细胞数增加,双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制,对照组集落普遍比药物组集落大,且单个集落中细胞数目多(P＜0.05)。结论IFN-αt对A549细胞具有增殖抑制和诱导分化作用。     

25-羟维生素D_3-1α-羟化酶质粒转染对角质形成细胞增殖分化和凋亡的影响

目的:研究25-羟维生素D3-1α-羟化酶(1α-羟化酶)质粒转染对角质形成细胞增殖、分化和凋亡的影响.方法:体外培养小鼠角质形成细胞(KC)转染1α-羟化酶后,观察细胞在形态上的变化对分化进行研究;利用Giemsa染色法和Tunel荧光素原位末端标记法对凋亡诱导作用进行观察.利用小鼠阴道上皮有丝分裂模型和小鼠尾部鳞片表皮模型对1α-羟化酶质粒转染对KC增殖和分化的影响进行研究.结果:携带1α-羟化酶的质粒转染KC可以非常显著的促进其分化,剂量与效应呈正相关;10-6mol/L的维生素D3和0.015 μg/μL 1α-羟化酶质粒转染联合应用即可诱导KC细胞凋亡.1α-羟化酶质粒转染可以非常显著的抑制小鼠阴道上皮有丝分裂(P<0.01),显著促进小鼠尾部鳞片表皮模型中颗粒层的形成(P<0.05).结论:1α-羟化酶质粒转染角质形成细胞可以明显抑制其增殖,促进其分化,诱导其凋亡.1α-羟化酶质粒转染为以增殖过渡分化不全为特征的皮肤病比如银屑病以及某些肿瘤的基因治疗提供了新思路.     

丙戊酸钠诱导髓系白血病细胞分化、凋亡作用及其机制研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)诱导髓系白血病细胞体外分化和凋亡作用及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法增殖抑制实验和锥虫蓝拒染法检测VPA对细胞增殖的抑制,流式细胞仪检测细胞表面分化抗原的表达和细胞凋亡,Western印迹法检测组蛋白H3的9位赖氨酸残基(H3-Ac-lys9)的乙酰化水平变化。结果VPA抑制U937和K562髓系白血病细胞增殖,并呈时间-剂量依赖效应。在VPA较低浓度下(0.5～1mmol/L)作用6d后,VPA诱导U937细胞分化,其细胞表面髓系分化抗原CD11b表达明显上调,细胞形态呈终末分化改变。VPA与全反式维甲酸和(或)粒细胞集落刺激因子联合应用,诱导分化作用更为显著。在VPA较高浓度下(2mmol/L),VPA诱导U937细胞磷脂结合蛋白结合力明显上升,细胞呈现凋亡状态。而同样条件下VPA不能诱导K562细胞出现显著的分化和凋亡。U937和K562细胞在H3-Ac-lys9的乙酰化水平存在差异。VPA能够上调U937细胞H3-Ac-Lys9乙酰化,而K562细胞未观察到类似调变作用。结论VPA诱导U937细胞分化和凋亡,其作用与U937细胞的H3-Ac-lys9乙酰化水平及其对VPA处理后的上调有关。     

环核苷酸与白血病细胞诱导分化

白血病细胞的特点是具有无限制增殖的能力,不能分化成为有功能的成熟血细胞,造成大量异常幼稚细胞的堆积。过去认为白血病细胞的恶变是不可逆的,但近年的研究表明,白血病细胞在适宜的条件下具有向正常血细胞“逆转”分化的潜能。分化诱导因子(DIF)可以诱导HL—60细胞及粒系原代白血病细胞向单核——巨噬细胞方向分化成熟,与维甲酸合用可增强对U_(937)细胞的诱导分化作用,机理不明。研究发现,正常机体细胞的增殖分化是由特殊物质调控的,已证实体内存在生长因子(GF)和分化因子(DF),分别诱导细胞的增殖和分化。说明正常及肿瘤细胞的增殖和分化是可被某些生理的或非生理的物质所调控的。本文拟就环核苷酸在细胞增殖分化及白血病细胞分化诱导过程中的作用简要概述。一、环核苷酸在正常细胞增殖和分化过程中的作     

干扰素α对人肺腺癌细胞系A549增殖抑制和诱导分化作用

目的 :探讨干扰素α(IFN α)对人肺腺癌细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法 :用不同质量浓度IFN α(2 5 μg/L ,75 μg/L ,10 0 μg/L)处理人肺腺癌A54 9细胞 ,记录细胞数目 ,进行甲基绿 派洛宁染色 ,测定软琼脂集落形成率。结果 :IFN α能明显抑制A54 9细胞的增殖 ,药物组与对照组之间差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,药物组与对照组比较增殖型细胞减少 ,分化型细胞数增加 ,双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制 ,对照组集落普遍比药物组集落大 ,且单个集落中细胞数目多 (P <0 0 5 )。结论 :IFN α对A54 9细胞具有增殖抑制和诱导分化作用     

重组人TLR4胞外段对诱导分化成熟的U937细胞TNF-α分泌的影响

目的 观察重组人TLR4胞外段对诱导分化成熟的U937细胞TNF-α分泌的影响.方法 通过G418筛选稳定表达TLR4胞外段的HEK293细胞,用培养液上清作用于诱导分化成熟的U937细胞,通过ELISA观察该细胞TNF-α的分泌变化.结果 稳定表达TLR4胞外段的HEK293细胞培养液上清能减少诱导分化成熟的U937细胞TNF-α的分泌量(P＜0.01),并随剂量增加而降低.结论 表达的重组人TLR4胞外段能与诱导分化成熟的U937细胞表面的TLR4胞外段竞争性结合LPS,干扰LPS所引起的炎症信号转导,引起TNF-α分泌量降低.     

青蒿素对人白血病U937细胞凋亡及分化的影响

目的:通过青蒿素对经典人白血病细胞系U937的作用研究,探索青蒿素治疗白血病的可能.方法:采用细胞培养、四唑盐比色试验(MTT)、细胞形态学、DNA电泳及NBT还原试验等方法观察不同浓度青蒿素促进U937细胞凋亡及诱导分化作用.结果:青蒿素在浓度>6 μmol/L时可显著抑制U937细胞的增殖,促进其凋亡,并表现出剂量和时间依赖效应(P<0.01);在诱导分化浓度下,青蒿素可促进U937细胞向成熟粒细胞分化(P<0.01).结论:青蒿素对白血病细胞U937的选择性促凋亡作用以及诱导分化效应表明其可能是一种理想的高效低毒抗白血病药物,有望进入临床应用.     

精氨酸酶对急非淋白血病细胞的诱导分化

本文对在精氨酸酶作用下,单核细胞白血病 U_(937)细胞及 APL 原代细胞的生长和分化进行了一些观察。在精氨酸酶500U/L 浓度下培养4天,U_(937)细胞和 APL 原代细胞活细胞密度分别为起始潘细胞密度的65%和62%,同时观察到 U_(937)细胞向成熟单核细胞分化,APL 原代细胞向分叶核粒细胞方向分化。     

重组人肿瘤坏死因子α对人脂肪基质细胞体外成骨向分化的影响

目的:探讨一定浓度的重组人肿瘤坏死因子α(recombinant human tumor necrosis factor alpha,rhTNF-α)对人脂肪基质细胞(human adipose-derived stromal cells,hASCs)体外成骨向分化的影响。方法:采用第4代hASCs,根据培养基的不同分为4组:(1)基础培养[DMEM+10%FBS(体积分数)+100 U/mL青霉素+100 mg/L链霉素];(2)基础培养+10μg/L rhTNF-α;(3)成骨向诱导培养(基础培养+100 nmol/L地塞米松+50μmol/L维生素C+10 mmol/Lβ-甘油磷酸);(4)成骨向诱导培养+10μg/L rhTNF-α。各组每3天更换相应培养基。在第3、7、14天和第21天进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)定量检测;在第14和21天进行钙结节染色和矿化沉积定量检测;并用反转录PCR检测成骨向诱导组核心结合因子α1(core-binding factorα1,Cbfa1)、Osterix(Osx)和骨钙素(osteocalcin,OC)等成骨相关基因的表达;在成骨向诱导的第3天,用实时定量PCR检测rhTNF-α对hASCs成骨相关基因表达的影响。结果:对碱性磷酸酶定量检测,在成骨向诱导的第14天(3.527±0.415 vs.2.345±0.354,P0.01)和第21天(3.106±0.105 vs.2.442±0.163,P0.01),10μg/L的rhTNF-α可以促进其表达;同样对于矿化沉积检测,在成骨向诱导的第14天(2.896±0.173 vs.0.679±0.173,P0.01)和第21天(2.231±0.233vs.1.729±0.229,P0.01),10μg/L的rhTNF-α也促进其表达;反转录PCR和实时定量PCR也表明rhTNF-α可以促进Cbfa1,Osx和OC的表达。结论:10μg/L的rhTNF-α可以促进成骨向诱导的hASCs体外成骨向分化,并可以促进成骨相关基因Cbfa1、Osx和OC的表达。     

新型氨基甾体对WEHI-3B白血病细胞作用的研究

目的 :观察新型氨基甾体 (KH)对小鼠粒单系白血病细胞系WEHI 3B细胞增殖、分化和凋亡的影响 ,并初步探讨其作用机制。方法 :采用集落培养及细胞毒性实验检测KH对WEHI 3B细胞增殖的影响 ;用NBT还原实验及NSE染色检测KH对WEHI 3B细胞分化的影响 ;用形态学观察和DNA片段凝胶电泳检测KH对WEHI 3B细胞凋亡的影响 ;用RT PCR检测癌基因c mycmRNA在WEHI 3B细胞中表达水平的变化。结果 :KH(10 -8～ 10 -4 mol·L-1)能抑制WEHI 3B细胞增殖 ;其较低浓度 (10 -8～ 10 -6mol·L-1)即可诱导WEHI 3B细胞向单核巨噬样细胞分化 ,较高浓度 (10 -6～ 10 -4 mol·L-1)诱导WEHI 3B细胞的凋亡作用增强 ;KH在抑制WEHI 3B细胞增殖 ,诱导其分化和凋亡过程中癌基因c mycmRNA表达水平明显降低。结论 :KH能抑制WEHI 3B细胞增殖 ,诱导其分化和凋亡。上述作用与癌基因c myc的表达有关。     

两型TNFα杀伤U937细胞的差异表达基因

目的 比较两型TNFα对U937细胞的胞毒效应及二者诱导U937细胞差异表达的基因。方法 采用生物活性检测法测定两型TNFα对U937细胞的胞毒效应；用抑制消减杂交法探索两型TNFα诱导U937细胞差异表达基因。结果 两型TNFα对U937细胞胞毒效应存在差异，分泌型TNFα(sTNFα)的杀伤率为24．3％，且引起靶细胞坏死率大于其诱导的凋亡率；跨膜型TNFα(TM—TNFα)的杀伤率为34．3％，主要引起靶细胞凋亡。以sTNFα诱导基因做消减，得到TM—TNFα诱导的差异表达基因，即25个EST，其中8个EST与已知基因有高度同源性，17个EST为未知序列，已向GenBank登录。结论 两型TNFα杀瘤作用不同可能是由于它们启动了不同的基因转录及信号分子。     

突变型与野生型TNF-α诱导肿瘤细胞的凋亡

目的：比较重组人突变型471rhTNF-αt（mt 471rhTNF-α）与野生型rhTNF-α（wt rhTNF-α）诱导肿瘤细胞发生凋亡的能力．并对mt 471rhTNF—α诱导肿瘤细胞发生凋亡的作用机制进行初步研究．方法：以乳腺癌细胞系ZR75—1细胞为靶细胞,应用基因组DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞技术分析mt 471rhTNF—α与wt rhTNF-α诱导肿瘤细胞凋亡的情况;利用以ELISA为基础的Trans AMTMNF—KBp65试剂盒检测经mt471 rhTNFα或wt rhTNF-α处理的ZR75—1细胞核因子NF—kB的活化情况,以便对其诱导凋亡的机制进行初步的研究．结果：20g/L琼脂糖凝胶电泳显示,mt 471rhTNF—α处理组的ZR75—1细胞基因组DNA呈现明显的ladder状分布,wt rhTNF-α处理组的“ladder”条带明显减弱;流式细胞仪分析显示,mt 471rhTNF-α诱导的细胞凋亡峰面积高于wt rhTNF-α处理组．NF—kB活化检测结果显示,当两型rhTNF-α浓度增高到50μg／L时．wt rhTNF-α处理组的NF-kB的活化量明显高于同浓度的mt 471rhTNF-α处理组（P=0．002）．结论：mt 471rhTNF-α诱导肿瘤细胞凋亡的能力明显优于wt rhTNF-α;肿瘤细胞内NF—kB活化明显受抑是mt 471rhTNF-α诱导凋亡能力增强的主要原因之一．     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导PLZF-RARα阳性U937细胞分化

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)和全反式维甲酸(ATRA)对PLZF-RARα阳性细胞的作用.方法:稳定转染PLZF-RARα基因的U937细胞(U937/PLZF)经TSA, ATRA作用一段时间后,Wright-Giemsa染色观察细胞形态,MTT法检测细胞生长和增殖状态,流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面分化抗原CD11b,CD64,CD14等的表达,荧光免疫细胞化学染色检测融合蛋白表达,细胞化学染色和硝基蓝四氮唑(NBT)还原试验观察细胞功能分化情况.结果:U937/PLZF细胞在去除四环素条件培养后,PLZF-RARα表达明显增加.TSA (30 μg/L)联合ATRA (1 μmol/L)使U937/PLZF细胞核质比缩小,生长增殖受抑,S期细胞减少,CD11b表达增高,PLZF-RARα蛋白表达减弱,分布以胞核弥漫细小颗粒为主,细胞功能上的分化可能尚不成熟.结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA联合ATRA可使U937/PLZF细胞发生部分分化.     

干扰素α抑制NF-κB活化增强TNF-α诱导的Hela细胞凋亡

目的探讨干扰素α(IFN-α)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及TNF-α诱导核转录因子NF-κB活化的影响。方法细胞分为空白对照组(不加TNF-α),实验组(加TNF-α)、实验组终浓度分别为(5,10,15ng/ml),作用不同时间分为6,12,24 h,与干扰素α(终浓度100IU/ml)共培养2 h,再加入终度与上述相同的TNF-α继续培养3 h,应用免疫组化,免疫印迹方法检测NF-κB活性的变化,采用Tunel法检测细胞凋亡。结果TNF-α诱导Hela细胞凋亡与其诱导NF-κB活化明显相关,100 IU/ml的IFN-α能显著增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡和抑制TNF-α诱导的Hela中NF-κB的活化。细胞凋亡增加率为69.2%(P<0.05),NF-κB活化抑制率为48.0%(P<0.05)。结论TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时激活NF-κB;IFN-α可通过抑制NF-κB活化,增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。     

秦艽总苷对人肝癌细胞等几种肿瘤细胞的体外作用

目的研究秦艽总苷对肝癌细胞SMMC-7721、淋巴癌细胞U937、卵巢癌细胞A2780等3种癌细胞的增殖及凋亡的影响。方法MTT法检测秦艽总苷对人肝癌SMMC-7721细胞、淋巴癌细胞U937、卵巢癌细胞A2780增殖的影响,流式细胞仪检测细胞调亡率。结果①秦艽总苷在一定浓度时,SMMC-7721细胞和U937细胞的生长受到不同程度的抑制,且有浓度依赖性;而对A2780细胞无抑制增殖作用。②一定浓度的秦艽总苷可诱导SMMC-7721细胞和U937细胞凋亡;对A2780无诱导凋亡作用。结论①秦艽总苷对人肝癌细胞SMMC-7721和淋巴癌细胞U937有抑制增殖和诱导凋亡的作用;②秦艽总苷对卵巢癌细胞A2780无抑制增殖作用;③秦艽总苷对卵巢癌细胞A2780无诱导细胞凋亡作用。     

rhIL-3、rhIFN-γ、DMSO单用或合用对HL-60细胞的增殖与分化的影响

作者观察rhIL-3、rhIFN-γ和DMSO对HL-60细胞的增殖与分化的影响。结果表明三者单独使用除rhIL-3早期有一定促生长作用外,都有抑制增殖和诱导HL-60细胞向粒系分化的作用,特别是DMSO对HL-60细胞有较强的诱导分化作用,且与剂量有关,rhIL-3作用次之,rhIFN-γ较弱。如分别与DMSO联合,则rhIL-3、rhIFN-γ均能加强DMSO对HL-60细胞的增殖抑制和诱导分化作用。