雌激素对人子宫内膜样癌Ishikawa细胞中p57~(kip2)、Cyclin D1、CDK4表达及形态变化影响的研究

目的:研究雌激素对人子宫内膜样癌(EC)Ishikawa细胞(高分化)中p57~(kip2)、Cyclin D1、CDK4表达及形态变化的影响。方法:分别采用含3种不同浓度雌二醇(E_2)(10~(-6)、10~(-8)、10~(-10)mol/L)的培养基培养Ishikawa细胞24、48、72h,MTT检测细胞增殖情况,光镜和电镜观察细胞形态变化,Western blot法检测p57~(kip2)、Cyclin D1、CDK4蛋白表达。结果:MTT结果显示,与对照组比较,低、中浓度E_2组Ishikawa细胞增殖明显(P0.05),高浓度E_2组细胞增殖不明显(P0.05)。光镜及电镜结果显示,与对照组比较,低、中浓度E2组Ishikawa细胞密度增加,部分细胞内线粒体、内质网轻微肿胀,随着作用时间延长,其肿胀程度增加;高浓度E_2组Ishikawa细胞密度减少,较多细胞内线粒体明显肿胀,可见细胞凋亡现象,随着作用时间延长,线粒体、内质网弥漫肿胀、空泡化,细胞凋亡增多。Western blot法结果显示,随着E_2作用时间延长及浓度增加,p57~(kip2)、Cyclin D1与CDK4蛋白表达均逐渐增加(P0.05),其中p57~(kip2)、Cyclin D1、CDK4蛋白均在高浓度E_2组表达最高,而p57~(kip2)蛋白在低浓度E_2组表达最低,Cyclin D1与CDK4蛋白在对照组表达最低。Cyclin D1和CDK4蛋白表达呈正相关(P0.05)。结论:E_2浓度较低时可能以上调Cyclin D1与CDK4蛋白表达为主,发挥正向调控细胞周期进程的作用,促进Ishikawa细胞增殖;E_2浓度较高时可能以上调p57~(kip2)蛋白表达为主,从而抑制Ishikawa细胞增殖,还可导致较强细胞损伤。     

阿司匹林作用下子宫内膜腺癌细胞凋亡与Bcl-xl蛋白表达的关系

目的:探讨阿司匹林作用下人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞凋亡率与凋亡抑制蛋白Bcl-xl表达变化的关系。方法:应用流式细胞仪(FCM)检测不同浓度阿司匹林对子宫内膜腺癌Ishikawa细胞周期和凋亡率的影响;Westernblotting法检测阿司匹林对Bcl-xl蛋白表达的影响。结果:①阿司匹林引起细胞阻滞在G1期,细胞凋亡率增加,与药物作用浓度相关(P<0.05);②阿司匹林降低Bcl-xl蛋白的表达,与药物作用浓度相关(P<0.05);③Ishikawa细胞凋亡率与Bcl-xl蛋白的表达水平存在负相关关系(r=-0.873,P<0.05)。结论:Bcl-xl蛋白在阿司匹林促进子宫内膜腺癌细胞凋亡的调控中起到重要的作用。     

GPER抑制剂PTX对雌激素作用下子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨G蛋白偶联雌激素受体(GPER)抑制剂百日咳毒素(PTX)对17β-雌二醇(E2)作用下子宫内膜癌系ER阳性的Ishikawa及ER低表达的HEC-1A的细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,初步探讨阻断GPER介导的信号传导通路治疗子宫内膜癌的可行性。方法:选取对数生长的细胞随机分为空白对照组(不加任何试剂)、阴性对照组(加10-6mol/L E2)和实验组(10-6mol/L E2+PTX)。应用四甲基亚唑蓝(MTT)法、流式细胞术观察PTX对E2作用下的子宫内膜癌的细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果:(1)随着E2浓度的增加和作用时间的延长,子宫内膜癌Ishikawa细胞在490nm处光密度值增大。E2对Ishikawa细胞具有促增殖作用,且呈时间和浓度依赖性(P均<0.001),而对HEC-1A的细胞增殖作用不显著(P=0.393),各浓度之间差异均无统计学意义(P=0.137)。不同浓度E2作用48h后,Ishikawa细胞G0～G1期比例减少(P=0.001),S期比例增多(P=0.002),HEC-1A变化不显著。(2)随着PTX浓度增加及时间延长,两种细胞增殖能力逐渐下降并呈时间和浓度依赖性(P均<0.001);不同浓度PTX作用48h后,两种细胞的凋亡率、G0～G1比例均升高(P<0.001,P<0.05),S期比例在Ishikawa细胞无显著变化,在HEC-1A细胞降低,G2～M期比例在Ishikawa细胞降低,在HEC-1A细胞无显著变化。结论:PTX可以抑制E2对子宫内膜癌细胞的促增殖作用,促使其发生凋亡,抑制细胞周期进展。GPER介导的信号传导通路可能成为治疗子宫内膜癌的新靶点。     

壬基酚对子宫肌瘤作用的实验研究

目的:研究环境雌激素(environmental estrogens,EEs)中壬基酚(NP)对体外培养子宫肌瘤细胞的作用效应及可能机制。方法:对子宫肌瘤细胞进行原代、传代培养及细胞鉴定。CCK-8法分析不同浓度NP在24小时、48小时、72小时对子宫肌瘤细胞活性的作用效应。采用荧光定量RT-PCR法检测各干预组雌激素受体α(ERα)mRNA、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)mRNA、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。采用Western Blot法检测ERα、IGF-1、VEGF蛋白的表达情况。结果:不同浓度的NP作用于子宫肌瘤细胞24小时、48小时、72小时,结果显示NP对子宫肌瘤细胞有促增殖作用,这种作用具有时间和浓度的依赖性。不同浓度的NP促进ERα、IGF-1、VEGF相关基因和蛋白的表达,该作用随着NP作用浓度的增加而增强,差异有统计学意义(P0.05)。结论:NP可促进子宫肌瘤细胞增殖,其作用机制可能与通过ERα介导的IGF-1、VEGF等促肿瘤生长因子的表达增加有关。     

17β-雌二醇对人子宫内膜癌细胞的增殖及P21ras和p-Erk表达的研究

目的:探讨17β-雌二醇(E2)对人子宫内膜腺癌雌激素受体(ER)阳性的Ishikawa和ER阴性的HEC-1A细胞增殖,细胞周期及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白P21ras和p-Erk表达的影响及意义。方法:用MTT法,流式细胞技术检测不同浓度E2作用Ishikawa和HEC-1A细胞不同时间的细胞吸光度值及细胞周期,用免疫细胞化学法检测上述细胞中P21ras和p-Erk的表达。结果:随E2浓度增加,Ishikawa细胞吸光度值上升并呈时间依赖性(P<0.01),G0～G1期比例下降(P<0.01),S期比例升高(P<0.01);HEC-1A细胞吸光度值及细胞周期无明显变化(P>0.05);10-6mol/LE2作用于Ishikawa细胞30min时,P21ras和p-Erk活化表达最强,作用于HEC-1A细胞15min时,P21ras和p-Erk即有明显表达而且达高峰,随着E2浓度增加两种细胞中P21ras和p-Erk表达均逐渐增加,呈浓度依赖性。结论:E2可促进子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖和周期进展,而且可以促进Ishikawa和HEC-1A中P21ras和p-Erk表达增加。     

子宫内膜癌细胞系Ishikawa和HEC-1A细胞雌激素受体表达

目的研究子宫内膜癌细胞系Ishikawa和HEC-1A雌激素受体(ER)的表达情况。方法应用免疫细胞化学和逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)技术,检测Ishikawa和HEC-1A细胞中ERα、ERβ蛋白和mRNA表达水平。结果Ishikawa细胞中,ERα、ERβ蛋白均呈阳性表达,而在HEC-1A细胞中ERα呈弱阳性表达,ERβ阴性表达;Ishikawa细胞中ERα、ERβmRNA表达水平均显著高于HEC-1A细胞;(P<0.01)。结论Ishikawa细胞是ER阳性子宫内膜癌细胞系,而HEC-1A细胞则为ER低表达细胞系。     

CXCR7及其配体在子宫内膜癌中的表达与意义

目的:检测趋化因子受体CXCR7(chemokine receptor 7)及其配体在子宫内膜癌组织和子宫内膜癌细胞中的表达,并研究雌激素对该受体的调控作用。方法:首先通过RT-PCR分析20种趋化因子受体在子宫内膜癌细胞株Ishikawa(ERα阳性)和AN3CA(ERα阴性)的转录水平,筛选出子宫内膜癌细胞株高表达的趋化因子受体,以免疫细胞化学染色法测定该受体及其相应配体在子宫内膜癌组织和细胞中的表达,并用蛋白质印迹法观察雌激素对该受体蛋白水平表达的影响。结果:(1)CXCR7 mRNA在子宫内膜癌细胞株Ishikawa、AN3CA均呈高表达,免疫细胞化学示子宫内膜癌组织和Ishikawa、AN3CA细胞表达CXCR7及其配体SDF-1,不表达I-TAC;(2)在Ishikawa中,雌激素在一定浓度范围内上调细胞中CXCR7蛋白水平的表达,而在AN3CA中,雌激素对CXCR7蛋白并无明显的调节作用。结论:CXCR7/SDF-1高表达于子宫内膜癌组织和子宫内膜癌细胞中,且雌激素上调CXCR7的表达,表明CXCR7/SDF-1可能在子宫内膜癌中发挥调控作用。     

沉默PI3K基因对E2刺激后子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沉默PI3K基因对雌激素刺激下的子宫内膜癌细胞增殖、迁移、凋亡的影响。方法:培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,构建LV-PI3K-RNAi慢病毒载体转染Ishikawa细胞。实验分组Control组未经任何处理的Ishikawa细胞;Ishikawa组经E₂刺激的Ishikawa细胞;NC组经E₂刺激并转染阴性对照慢病毒的Ishikawa细胞;PI3Ki组经E₂刺激并转染LV-PI3K-RNAi慢病毒的Ishikawa细胞。Real-time PCR、Western blot法检测各组VEGF、bFGF、PI3K mRNA及蛋白表达水平,MTT法、流式细胞仪分别检测细胞增殖能力及凋亡的情况。结果:与Ishikawa组、NC组比较,PI3Ki组的VEGF、bFGF、PI3K mRNA及蛋白表达水平明显降低,细胞增殖能力显著降低,凋亡率增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:PI3K基因低表达可干扰E₂在基因、蛋白水平激活Ishikawa细胞产生VEGF、bFGF,从而下调E₂对子宫内膜癌细胞增殖和抑制凋亡的影响。     

瘦素对人子宫内膜癌细胞雌激素原位合成的影响

目的探讨瘦素对子宫内膜癌(EC)细胞中芳香化酶表达和原位雌激素合成的影响,以及瘦素在子宫内膜癌发病机制中的作用。方法 2009年4月至2010年6月在辽宁医学院附属第一医院采用EC间质细胞与Ishikawa细胞共培养模式;MTT法检测瘦素对EC细胞增殖的影响;RT-PCR法及免疫印迹法分别检测间质细胞和Ishikawa细胞中芳香化酶mRNA及蛋白的表达,并观察瘦素对共培养细胞中芳香化酶表达的影响;放免法检测瘦素对共培养细胞生成雌二醇的影响。结果瘦素明显促进共培养的子宫内膜癌间质细胞和Ishikawa细胞的增殖,在0～100μg/L范围内呈剂量依赖性,100μg/L时增殖效应最大,自(121.14±5.50)%至(274.24±6.03)%;芳香化酶在间质细胞中的表达水平高于Ishikawa细胞,瘦素增加EC细胞芳香化酶的表达及雌激素的合成,当100μg/L瘦素时,E2(1.35±0.17)pmol/L,当加入100μg/L瘦素+1μmol/L来曲唑时E2(0.47±0.18)pmol/L,来曲唑可抑制此作用。结论瘦素可能通过促进EC细胞芳香化酶的表达,增加原位雌激素合成进而刺激EC细胞增殖。     

ERRα过度表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞内分泌治疗的影响

目的探讨孤儿受体-雌激素受体相关受体α（ERRα）在子宫内膜癌Ishikawa细胞中过度表达对内分泌治疗的影响。方法重组并构建含有绿色荧光蛋白（GFP）和G418耐药筛选标记的真核表达质粒pEGFP-N1-3FLAG-ERRα,瞬时转染子宫内膜癌细胞株Ishikawa后采用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测ERRαmRNA和蛋白的表达情况。使用不同浓度的ICI182780处理子宫内膜癌Ishikawa细胞、Ishikawa-空载体细胞（Ishikawa-空）和ERRα过度表达的（Ishikawa-ERRα）细胞,流式细胞技术检测分析10-6mol/LICI182780对细胞诱导的凋亡情况。结果瞬时转染pEGFP-N1-ERRα质粒后,Ishikawa在mRNA和蛋白水平均能检测到ERRα的表达增加。流式细胞仪细胞凋亡分析表明,ERRα过度表达导致子宫内膜癌细胞Ishikawa耐受ICI182780的诱导凋亡作用（P〈0.05）。结论 ERRα过度表达为激素依赖性的子宫内膜癌细胞株Ishikawa提供了一种耐受内分泌治疗的机制。     

雌激素受体相关受体α过度表达对雌激素受体阴性的子宫内膜癌细胞增殖的影响

目的探讨雌激素受体相关受体α（ERRα）在雌激素受体（ER）阴性及阳性的子宫内膜癌细胞中的作用。方法 将真核表达质粒pSG—ERRα（0．5、1．0、1．5、2．5μg）瞬时转染子宫内膜癌细胞株HEC-1A（ER阴性）、HEC-1B（ER阴性）、Ishikawa（ER阳性）,采用定量RT-PCR技术和蛋白印迹法（westernblot）检测ERRα mRNA和蛋白的表达情况;采用流式细胞仪分析细胞周期,并计数细胞的增殖情况。结果 转染pSG—ERRα质粒后,HEC-1A、HEC-1B、Ishikawa细胞在mRNA和蛋白水平均能检测到ERRet的表达增加。HEC-1B、HEC-1A、Ishikawa细胞未转染时ERRα mRNA的表达水平分别为2104．2、2870．6、1476．8copies／ng,转染后3者ERRα mRNA的表达水平分别为9835．3、9644．4、8008．6copies／ng,分别与各自未转染的细胞比较,差异均有统计学意义（P值分别为0．004、0．002、0．002）。HEC-1A、HEC-1B、Ishikawa细胞未转染时ERRα蛋白的表达水平分别为0．823、0．192、0．673,转染后3者ERRα蛋白的表达水平分别为1．128、1．104、1．008,分别与各自未转染的细胞比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。随着转染pSG—ERRα质粒质量的增加,HEC-1A、HEC-1B细胞的S期和G2／M期细胞比例明显上升（P〈0．01）。HEC-1B、HEC-1A细胞转染0．5、1．0μg pSG-ERRα质粒后,细胞在转染后24—96h间生长速度显著加快（P〈0．05）。结论ERRα过度表达是ER阴性的子宫内膜癌细胞株HEC-1A、HEC-1B的一种细胞增殖机制。     

EGFR过表达降低人子宫内膜癌细胞孕激素敏感性的研究

目的:检测表皮生长因子受体(EGFR)基因在子宫内膜癌孕激素敏感细胞株Ishikawa及孕激素不敏感细胞株KLE的表达,探讨EGFR基因过表达对人子宫内膜癌细胞孕激素敏感性的影响。方法:实时定量PCR法和蛋白印迹法检测Ishikawa和KLE细胞中EGFR及PR-BmRNA和蛋白的表达。将EGFR全长cDNA真核表达质粒在脂质体介导下转染至Ishikawa细胞,同时以转染空载体和未转染的Ishikawa细胞为对照,分别应用实时定量PCR检测各组细胞EGFR、PR-BmRNA表达的变化,应用蛋白印迹法检测各组细胞EGFR、PR-B蛋白表达的变化;CCK-8法观察转染EGFR基因后Ishikawa细胞对孕激素敏感性的变化。结果:(1)Ishikawa细胞中,EGFRmRNA和蛋白的表达明显低于KLE细胞(P<0.001),而PR-BmRNA和蛋白的表达则显著高于KLE细胞(P<0.001);(2)稳定转染EGFR基因后,Ishikawa细胞中EGFRmRNA和蛋白的表达水平明显高于转染空载体和未转染的Ishikawa细胞(P<0.001),而PR-BmRNA和蛋白的表达水平则显著降低;(3)10-8、10-7、10-6、10-5mol/L的MPA对未转染和转染空载体的Ishikawa细胞的抑制作用显著(P<0.05),但对稳定过表达EGFR的Ishikawa细胞无明显抑制作用(P>0.05)。结论:转染EGFR基因能有效提高Ishikawa细胞内EGFR基因的表达,但可下调PR-B基因的表达使Ishikawa细胞对MPA不敏感。     

子宫内膜癌细胞雌激素受体亚型的调控和功能的初步研究

目的初步建立子宫内膜癌雌激素受体（ER）亚型α或β弱表达的细胞模型,研究雌激素及他莫昔芬（TAM）与ER亚型的关系。方法分别设计针对ERα和ERβ的反义寡脱氧核苷酸（ODN）、正义ODN、错义ODN,并转染子宫内膜癌细胞株Ishikawa,将Ishikawa细胞分为4组,即未转染组、反义ODN组、正义ODN组及错义ODN组。蛋白印迹法测定转染后细胞ERα和ERβ蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测转染ODN后,17β雌二醇和TAM对Ishikawa细胞生长的影响。结果（1）分别针对ERα及ERβ的反义ODN可以选择性下调转染的Ishikawa细胞中ERα及ERβ蛋白的表达（分别下调45％和54％）。（2）17β雌二醇及TAM可以促进未转染组Ishikawa细胞的生长。转染ERα反义ODN后,可抑制17β雌二醇及TAM对Ishikawa细胞的促生长作用,以转染后的24、48及72h为著,反义ODN组各时间点分别与未转染、正义ODN、错义ODN组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。（3）转染ERβ反义ODN后,17β雌二醇对Ishikawa细胞的促生长作用的改变不明显。转染ERβ反义ODN可抑制TAM对Ishikawa细胞的促生长作用,以转染后72h为著,反义ODN组分别与未转染、正义ODN、错义ODN组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论（1）反义核酸技术能够特异性地有效下调Ishikawa细胞中ERα和ERβ蛋白的表达,其可作为子宫内膜癌细胞中ER调控的一种有效的实验手段。（2）17β雌二醇促进子宫内膜癌细胞生长的作用主要通过ERβ介导;ERβ和ERβ均参与TAM促进子宫内膜癌细胞生长的作用。     

子宫内膜癌中Maspin的表达及其与雌激素受体表达的相关性研究

目的:检测Maspin蛋白在正常子宫内膜、不典型增生及内膜癌组织中的表达,及其与雌激素受体(ER)表达的关系,探讨Maspin在子宫内膜癌发生中的作用及其作用机制。方法:免疫组化SP法检测40例子宫内膜腺癌、18例不典型增生及10例正常子宫内膜(对照组)中Maspin蛋白的表达及其与子宫内膜癌患者临床病理特征和ER蛋白表达的关系。结果:Maspin阳性表达在正常子宫内膜组最高(9/10,90%),高于内膜不典型增生组(10/18,55.6%)和内膜癌组(17/40,42.5%),差异有统计学意义(P<0.05),在内膜癌中FIGOⅠ期的表达(13/20,65.0%)明显高于Ⅱ~Ⅲ期(4/20,20.0%;P<0.05),无淋巴结转移者(17/34,50.0%)明显高于有淋巴结转移者(0/6;P=0.030),但与组织学分级及肌层浸润程度无关(P>0.05)。ER在正常子宫内膜、内膜不典型增生及内膜癌组织的阳性表达率分别为(10/10,100.0%)、(13/18,72.2%)和(20/40,50.0%),各组间差异有统计学意义(P<0.05);内膜癌组织中FIGOⅠ期的表达(14/20,70.0%)明显高于Ⅱ~Ⅲ期(6/20,30.0%;P<0.05);内膜癌高、中、低分化组中ER表达率分别为(11/15,73.3%)、(8/18,44.4%)、(1/7,14.3%),组间差异有统计学意义(P<0.05);无淋巴结转移者(20/34,58.8%)明显高于有淋巴结转移者(0/6;P=0.020),肌层浸润≤1/2者(16/24,66.7%)明显高于肌层浸润>1/2者(4/16,25.0%;P<0.05)。子宫内膜癌中,Maspin的表达与ER的表达存在正相关关系(r=0.394,P<0.05)。结论:从正常子宫内膜、内膜不典型增生到内膜癌,Maspin蛋白表达逐渐降低,且其低表达与子宫内膜癌临床分期晚、淋巴结转移有关,并与ER蛋白表达呈一致性,提示Maspin蛋白的表达可能受雌激素调控,参与了子宫内膜癌发生发展和转移过程。     

雌、孕激素对人子宫内膜Pbx2蛋白表达的影响

目的:探讨人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞中雌、孕激素对Pbx2蛋白表达的影响。方法:采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)连接法检测人增生期、分泌中期和蜕膜期子宫内膜中Pbx2的表达和分布;体外培养人子宫内膜基质细胞和高分化子宫内膜癌细胞Ishikawa,分别加入雌激素、孕激素、雌、孕激素联合刺激48 h,并以不加雌、孕激素的基质细胞核和Ishikawa细胞为对照组,采用免疫组织化学、免疫印迹法测定各种条件下Ishikawa细胞中Pbx2蛋白的表达。结果:①在人各期子宫内膜组织中,Pbx2表达于腺上皮细胞和基质细胞的细胞核中;Pbx2在分泌中期和蜕膜期基质细胞中的表达显著高于增生期,但在腺上皮细胞中增生期组织的表达高于分泌中期和蜕膜期,差异均具有统计学意义(P<0.05)。②Western blotting结果显示,在孕激素和雌、孕激素联合处理Ishikawa细胞组中,Pbx2的表达显著低于对照组(P<0.05),雌激素处理后Pbx2的表达与其他各组间的表达无显著性差异(P>0.05),在人子宫内膜基质细胞(ESC)中,Pbx2的表达在雌、孕激素处理各组间比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:在人子宫内膜腺上皮Ishikawa细胞中孕激素对Pbx2的表达具有下调作用,在人子宫内膜基质细胞中,Pbx2的调控可能是非雌、孕激素依赖性的。     

子宫内膜癌细胞中细胞膜雌激素受体表达的初步研究

目的探讨子宫内膜癌细胞中细胞膜雌激素受体的表达情况。方法对子宫内膜癌高分化细胞系Ishikawa和中分化细胞系HEC-1A的细胞膜和整个细胞(包括细胞膜、细胞质和细胞核)雌激素受体(ER)α、β表达情况进行研究。用来检测细胞膜雌激素受体的细胞经固定处理,用来检测整个细胞ER的细胞经渗透处理,分别对固定与渗透处理的Ishikawa和HEC-1A细胞进行间接免疫荧光染色,并在荧光显微镜下观察ER的分布。另对Ishikawa和HEC-1A活细胞(用来检测细胞膜雌激素受体)、渗透处理的Ishikawa和HEC-1A细胞(用来检测整个细胞ER)进行间接免疫荧光染色,并用流式细胞仪检测ER的相对荧光强度来表示ER的表达强度。以上实验均以未用一抗的细胞为阴性对照。结果荧光显微镜下观察显示,固定处理的Ishikawa和HEC-1A细胞膜均可见ERα和ERβ标记的荧光,渗透处理的Ishikawa和HEC-1A细胞,除细胞膜外,在细胞内部也可见ERα和ERβ标记的荧光。流式细胞仪检测显示,Ishikawa活细胞ERα及ERβ相对荧光强度分别为1．09±0．21和1．27±0．33,高于阴性对照(均为1．00),但两者分别与阴性对照比较,差异均无统计学意义(P＞0．05);渗透处理的Ishikawa细胞ERα及ERβ相对荧光强度分别为4．21±0．34和4．69±1．96,均高于活细胞,两者分别与活细胞比较,差异均有统计学意义(P＜0．05)。HEC-1A活细胞ERα及ERβ相对荧光强度分别为1．58±0．13和1．49±0．04,高于阴性对照(均为1．00),与阴性对照分别比较,差异均有统计学意义(P＜0．05);渗透处理的HEC-1A细胞ERα及ERβ相对荧光强度分别为2．34±0．33和2．52±0．15,均高于活细胞,两者分别与活细胞比较,差异均有统计学意义(P＜0．05)。结论子宫内膜癌细胞系Ishikawa和HEC-1A细胞中均存在细胞膜雌激素受体。     

雌激素和紫杉醇对子宫内膜癌Ishikawa细胞中Bub1 mRNA表达的影响

目的 探讨雌激素和紫杉醇对子宫内膜癌Ishikawa细胞中Bub1 mRNA表达的影响.方法 (1)Ishikawa细胞中加入10 nmol/L的17β雌二醇(17β-E2)作用24、48和72 h,采用活细胞计数(CCK-8)法检测其增殖活力[以吸光度(A)值表示],以17β-E2浓度0 nmol/L者为空白对照.(2)按如下方法处理Ishikawa细胞:①加入不同浓度(0.1、10、1000 nmol/L)的17β-E2作用不同时间(5、15、30 min及1、2、4、8、12、16、24、30 h);②经同步化处理(即先期予无血清培养基培养),然后加入不同浓度(10、100 nmol/L)的紫杉醇作用不同时间(8、24 h);③未经同步化处理,直接加入100 nmol/L的紫杉醇作用4、8、16、24、48 h;均以作用时间0 h者为空白对照.采用实时定量PCR技术检测经上述方法处理后的细胞中Bub1 mRNA的表达水平(设空白对照为1,以倍数表示Bub1 mRNA的表达水平).结果 (1)17β-E2作用后Ishikawa细胞的增殖活力随着作用时间(24、48和72 h)的延长逐渐增加,其A值分别为0.86±0.10、1.66 ±0.10、2.32±0.24,呈时间依赖性(P＜0.01).(2)不同浓度(0.1、10、1000 nmol/L)的17β-E2作用不同时间(5、15、30 min及1、2、4、8、12、16、24、30 h)后,Ishikawa细胞中Bub1 mRNA的表达水平(与空白对照比较)随着17β-E2浓度的升高呈下降趋势,而随着作用时间的延长无明显变化.当17β-E2浓度为10 nmol/L时,细胞中Bub1 mRNA的表达水平最低,与空白对照比较,差异则有统计学意义(P=0.020);而当浓度为0.1、1000 nmol/L时,与空白对照比较,差异则无统计学意义(P=0.746,P=0.197).经同步化处理的Ishikawa细胞,予10 nmol/L的紫杉醇作用8、24 h后,Ishikawa细胞中Bub1 mRNA的表达水平下降,分别为(0.403±0.008)、(0.775±0.144)倍,两者比较,差异无统计学意义(P=0.251);紫杉醇作用8 h时与空白对照比较,差异有统计学意义(P=0.009);而紫杉醇作用24 h时与空白对照比较,差异则无统计学意义(P=0.396).100nmol/L的紫杉醇作用8、24 h后,Ishikawa细胞中Bub1 mRNA的表达水平下降,分别为(0.697±0.017)、(0.850±0.004)倍,两者比较,差异无统计学意义(P=0.061);而分别与空白对照比较,差异则均有统计学意义(P=0.038,P=0.019).未经同步化处理的Ishikawa细胞,予100 nmol/L紫杉醇作用4、8、16、24、48 h后,细胞中Bub1 mRNA的表达水平呈上升趋势,分别为(1.127±0.105)、(1.614±0.154)、(2.092±0.179)、(1.381±0.061)、(1.519±0.182)倍,各时间点间比较,差异有统计学意义(P＜0.01),其中作用16 h时表达最强.结论 雌激素可降调Ishikawa细胞中Bub1 mRNA的表达;紫杉醇对先期无血清培养的Ishikawa细胞可下调其Bub1 mRNA的表达,而对正常培养的细胞则上调其Bub1 mRNA的表达,提示紫杉醇在不同条件下杀伤子宫内膜癌细胞的效力与Bub1mRNA的表达失调有关.     

Overexpression of estrogen receptor-alpha in the endometrial carcinoma cell line Ishikawa: inhibition of growth and angiogenic factors

BACKGROUND: A high level of estrogen receptor-alpha (ER-alpha) is believed to be favorable in the prognosis and treatment of endometrial, ovarian, and breast cancer. High levels of ER-alpha have been shown to inhibit the growth and invasive, metastatic potential of breast cancer cell lines. To bring about these inhibitory effects, ER-alpha probably acts through other cellular factors involved in the regulation of cell growth. OBJECTIVE: To investigate the role of high levels ER-alpha in growth inhibition of endometrial cancer cells. METHODS: A human ER-alpha cDNA was stably overexpressed in an endometrial cancer cell line, namely, Ishikawa. ER-alpha-overexpressing, parent, and control Ishikawa cells were grown in vitro and their growth rates were compared by cell count. ER-alpha-overexpressing and parent Ishikawa cells were also grown in vitro as tumors in a chicken chorioallantoic membrane (CAM) model, and tumor growth and angiogenesis was measured. Finally, levels of angiogenesis-modulating factors, nitric oxide synthase (NOS), and vascular endothelial growth factor (VEGF) were examined in relation to ER overexpression. RESULTS: The growth of Ishikawa cells was found inhibited in culture as well as in the CAM model. Angiogenesis of CAM tumors was also found inhibited in ER-overexpressing cells. Angiogenic factor VEGF was inhibited whereas the activity of NOS was found elevated following ER overexpression. CONCLUSION: Our work on the Ishikawa cell line indicates that high levels of ER-alpha in endometrial cancer may inhibit cancer growth by modulating angiogenic factors, thereby limiting the blood supply to the growing tumor. Our results support the earlier data from other groups that have shown a positive correlation between high ER content and better prognosis of endometrial cancers.