Survivin在儿童急性白血病骨髓及外周血单个核细胞中的表达及意义

目的研究survivin在急性白血病(AL)儿童骨髓及外周血单个核细胞(MNC)的表达情况及意义.方法应用RT-PCR的方法检测21例AL患儿骨髓及外周血MNC中survivin mRNA的表达.结果 12例初诊AL患儿骨髓MNC中survivin阳性表达6例(50%);11例外周血MNC中survivin阳性表达4例(36.37%),均明显高于对照组(P<0.05).初诊组急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性髓细胞白血病(AML)患儿survivin表达无显著差异(P>0.05).完全缓解组患儿中1 例骨髓survivin阳性表达(11.11%),明显低于初诊组(P<0.05),该例患儿7周后复发.AL初诊组4例外周血MNC survivin阳性表达者与7例阴性表达者外周血原始和/或幼稚细胞平均值分别为(76.43±43.28)×109/L和(5.86±13.85)×109/L,有显著性差异(P<0.05 ).结论① Survivin在AL初诊患儿骨髓及外周血MNC中高表达,提示survivin可能参与了儿童AL的发生发展;②完全缓解患儿骨髓survivin阳性表达可能可作为AL复发的早期指标.     

凋亡抑制因子c-IAP1和促凋亡因子Smac在儿童急性白血病患者骨髓中的表达及临床意义

目的探讨凋亡抑制蛋白c-IAP1和促凋亡蛋白Smac在儿童急性白血病(AL)患者中的表达情况,分析二者之间的关系及临床意义。方法 AL患儿72例,其中初诊组32例,缓解组30例,复发组10例;另取同期12例非恶性血液病患儿作为对照组。应用免疫组织化学过氧化物酶标记链霉卵白素染色法分别检测患儿骨髓中c-IAP1、Smac蛋白表达情况;对其中45例患儿采用半定量反转录聚合酶链反应检测其骨髓单个核细胞中c-IAP1、Smac mRNA表达水平。结果 c-IAP1、Smac蛋白在初诊组AL患儿骨髓中表达水平均高于缓解组和对照组(H=19.345、16.621,P<0.008);复发组AL患儿c-IAP1、Smac蛋白表达水平高于对照组(H=8.324、8.324,P<0.008)。c-IAP1、Smac mRNA在初诊组AL患儿骨髓中表达水平均高于缓解组和对照组(H=7.973、5.942,P<0.017)。初诊组AL患儿骨髓中c-IAP1、Smac蛋白和mRNA水平在急性淋巴细胞白血病和急性髓细胞白血病间比较差异无统计学意义(t=-0.482、0.818,P>0.05)。初诊组AL患儿骨髓中c-IAP1、Smac蛋白及mRNA水平呈正相关(r=0.541、0.668,P<0.01)。结论c-IAP1、Smac蛋白参与了儿童AL的发生和发展,并且二者相互影响,但在初诊患儿中二者表达水平与白血病临床类型可能无关。     

WT1、PRAME和ERG基因在儿童急性白血病中的表达

目的 研究肾母细胞瘤基因(WT1)、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)和ETS相关基因(ERG)在儿童急性白血病(AL)中的表达特点,并分析其在白血病微小残留病灶(MRD)监测中的意义.方法 收集92份AL标本(84例患儿),其中初发标本28份,包括急性淋巴细胞白血病(ALL)标本18份,急性髓系白血病(AML)标本10份;AL完全缓解标本63份,包括ALL标本45份,AML标本18份;AL复发标本1份.采用Real-time PCR法检测AL患者骨髓中WTI、PRAME和ERG mRNA的相对表达量,并以同期住院的10例非恶性血液病患儿为对照.结果 AL初发组患儿的WT1、PRAME和ERG mRNA相对表达量均显著高于缓解组和对照组(P＜0.05),但缓解组和对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);AML初发组的PRAME mRNA相对表达量显著高于ALL初发组(P＜0.05).28例初发组WT1、PRAME和ERG mRNA的阳性表达率分别为82.4％、92.9％和64.3％,三者间比较差异有统计学意义(P＜0.05);三种基因联合检测的阳性率为100％.跟踪15例AL初发患者,诱导化疗缓解后三种基因的相对表达量均显著低于诱导化疗前(P＜0.05).1例复发患者初发时三种基因均呈阳性表达,缓解后转为阴性,复发时又变为阳性.结论 与非白血病患者相比,WTI、PRAME和ERG mRNA在AL初发患者的骨髓中高度表达,三种基因联合检测可提高阳性率.AL患者的WT1、PRAME、ERG mRNA表达水平与疾病状态相关,适用于MRD的监测.     

Survivin基因在急性白血病患者中的表达及其临床意义

目的:检测凋亡抑制基因Survivin在急性白血病(AL)患者骨髓细胞中的表达变化,探讨其与AL的发生、发展及预后的关系。方法:选取40例初发急性白血病患者为实验组和8例正常的骨髓细胞作对照组,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测两组骨髓细胞SurvivinmRNA的表达情况以及采用免疫组化SP法检测Survivin蛋白的表达情况,分析急性白血病阳性表达和阴性表达间完全缓解率(CR)的差别,采用卡方检验进行统计学分析。结果:40例AL病人骨髓细胞SurvivinmRNA阳性表达率为67.5%,显著高于正常对照组12.5%(P<0.05);Survivin蛋白在急性白血病骨髓细胞中的阳性表达率65.0%(26/40)明显高于正常对照组12.5%(1/8)(P<0.05),骨髓细胞Survivin表达阴性者化疗后骨髓完全缓解率(CR)为70.0%,明显高于阳性表达者的CR为30.0%(P<0.05)。结论:(1)Survivin的过度表达与急性白血病的发生发展有关,其阳性表达可能显示急性白血病的预后不良;(2)Survivin基因表达在白血病细胞的增殖分化和(或)抗凋亡过程中发挥了重要作用,可能是导致AL细胞对化疗药物不敏感的原因之一,Survivin基因可作为靶向白血病治疗的一个潜在靶点。     

成人急性白血病患者mdr—1基因表达的临床意义

为探讨多药耐药基因(mdt-1)与急性白血病(AL)的临床特征、免疫分型以及预后关系,用间接免疫荧光法和逆转录—多聚酶链式反应检测63例成人AL细胞mdr-l(即P-170和mRNA)表达。结果显示,复发和难治患者mdr-l表达阳性率明显高于初治患者,分别为50.0％、50.0％和21.3％(P<0.05)。在M_1、M_5和慢性粒细胞白血病急变患者mdr-l基因表达率较高,为50.0％、47.1％和85.7％(P尸<0.01)。Mdr-1基因表达与细胞CD_14表达有关(P<0.01)。Mdr-l表达增高患者,获得完全缓解的机会较少,且完全缓解期、生存期短。1年生存率mRNA表达阳性患者11.0％,mRNA表达阴性患者58.0％。提示mdr-1基因表达水平影响AL的预后,可做为评价AL的预后参数。     

bcl-2,MDR1基因及编码蛋白在儿童急性白血病骨髓单个核细胞中表达的研究

目的:探讨bcl-2,MDR1基因及编码蛋白p26,p170表达与多药耐药的关系.方法:RT-PCR技术、S-P免疫组化方法检测36例白血病患儿及10例血小板减少性紫癜患儿骨髓单个核细胞bcl-2,MDR1基因及蛋白表达.结果:bcl-2基因的表达初治组、完全缓解组低于复发组(P<0.05);MDR1基因的表达复发组高于对照组(P<0.05),p26,p170阳性率初治组、完全缓解组、对照组低于复发组(P<0.05).p170阳性率初治组高于对照组(P<0.05).化疗后p170阳性率明显高于化疗前(P<0.01).bcl-2,MDR1基因的表达与临床生物学特征无相关性.bcl-2与MDR1基因之间、p170和p26蛋白之间均无相关性.结论:bcl-2和MDR1基因、蛋白通过不同的机制与白血病的耐药有关.     

急性白血病患者JAK家族基因的表达及临床意义

目的 探讨不同时期急性白血病(AL)细胞中JAKs基因的表达情况及其临床意义.方法 将入选患者分为初治组、复发组、完全缓解组(CR组)和正常对照组(NC组),RT-PCR方法检测AL患者和正常对照者骨髓MNC中JAKI～3和TYK2mRNA的表达.结果 (1)AL患者JAK2、JAK3、TYK2 mRNA平均表达水平较CR组和NC组差异有统计学意义(P＜0.05).初治AL患者JAK1mRNA表达水平较NC组略增高,但差异无统计学(P＞0.05),复发AL患者JAK1 mRNA表达水平较NC组差异有统计学意义(P＜0.05);(2)TYK2阳性组的AL患者缓解率较TYK2阴性患者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 JAK家族基因在白血病患者的高表达可能在白血病的发生发展中起重要作用.急性髓性白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)在激活JAK/STAT信号传导通路的方式有所不同.     

儿童急性白血病生存素和细胞周期素B1基因表达

目的:探讨基因生存素,细胞周期素B1的表达与儿童急性白血病(AL)的关系. 方法:采用RT-PCR对初治或复发AL患儿42例和完全缓解AL(AL-CR)患儿13例及非恶性疾病患儿15例骨髓单个核细胞进行基因生存素,细胞周期素B1表达的检测. 结果:初治和复发AL组生存素 mRNA表达水平分别为0.472和0.810,细胞周期素B1 mRNA为0.609和0.739,均高于AL-CR组(0)和对照组(0)(P＜0.01);复发AL组生存素 mRNA表达水平高于初治组,有统计学差异(P=0.025). 生存素基因的表达与白细胞总数及临床分型有关,与性别、年龄、免疫分型无明显相关性. 细胞周期素B1表达与性别、年龄、免疫分型、白细胞总数及临床分型无明显相关关系. 儿童AL中生存素与细胞周期素B1的表达呈正相关. 生存素 mRNA表达水平高者缓解率低. 结论:儿童AL中存在生存素,细胞周期素B1异常表达,两者表达存在相关性. 生存素是AL复发的高危因素;AL 生存素高表达者可以降低AL的化疗敏感性,生存素水平对AL有判断疗效和预后的价值.     

儿童急性白血病survivin基因表达及临床意义

目的探讨儿童急性白血病（AL）survivin基因的表达及其临床意义。方法用逆转录多聚酶链式反应技术（RT—PCR），对42例AL患儿和13例完全缓解AL（AL—CR）患儿及15例非恶性疾病患儿骨髓进行survivin基因表达的检测。结果Survivin基因的表达在AL组明显高于对照组和完全缓解组（P〈0．01），复发组高于初发组（P〈0.01）；survivin基因在AL的高危组和标危组中的表达有显著性差异（P〈0．01）；化疗后达完全缓解的患者survivin表达水平与治疗前及治疗后均明显低于未能缓解者（P均〈0．05）。结论儿童AL的发生发展可能与survivin基因的过度表达密切相关，可作为化疗疗效的观察指标；survivin高表达者易复发，可作为估计预后的指标之一。     

急性白血病病人白血病细胞Survivin基因的表达及其临床意义

目的观察Survivin基因在急性白血病（AL）病人白血病细胞中的表达,并分析其与预后关系。方法应用RT-PCR方法检测62例不同时期AL病人白血病细胞Survivin mRNA的表达情况,以10例健康人作为对照。结果62例AL病人白血病细胞Survivin mRNA阳性表达率为72．58％。ALL细胞Survivin mRNA阳性表达率（76．5％）与ANLL细胞（71．1％）比较差异无显著性,二者均高于正常对照组（x^2=6．01、7．02,P〈0．05）。初治和复发AL病人白血病细胞Survivin mRNA阳性表达率分别为78．95％、85．71％,明显高于对照组（x^2=．77、9．77,P〈0.05）。白血病细胞Survivin mRNA表达阴性者接受1个疗程化疗后骨髓缓解率（BMR）为77．78％,明显高于阳性表达者的31．03％（x^2=9,P〈0.05）。结论Survivin基因表达在白血病细胞的增殖分化和（或）抗凋亡过程中发挥了重要作用,可能是导致AL细胞对化疗药物不敏感的原因之一,Survivin基因可作为靶向白血病治疗的一个潜在靶点。     

PTEN基因对慢性粒细胞白血病Survivin、Xiap、Smac调控的研究

目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN对人慢性粒细胞白血病(CML)中生存素(Survivin)、X连锁凋亡抑制蛋白(Xiap)、线粒体促凋亡蛋白(Smac)调控的作用.方法(1)将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及对照载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测转染效率、细胞周期及凋亡率;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN、Survivin、Xiap、Smac mRNA水平变化,Western印迹检测PTEN蛋白表达水平的变化.(2)研究10例慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)、10例慢性粒细胞白血病急变期(CML-BC)及10名健康人(NC)骨髓单个核细胞内PTEN、Survivin、Xiap、Smac mRNA表达水平变化.结果 以感染复数(MOI)=200转染K562细胞后,Ad-PTEN-GFP组K562细胞最大增殖抑制率为38.6％,转染3d后Ad-PTEN-GFP组K562细胞内Survivin、Xiap、Smac mRNA表达水平(0.0700±0.0059、0.0089±0.0006、0.0600±0.0039)均明显低于Ad-GPF组(0.4370±0.0790、0.0661±0.0072、0.1580±0.0078)和未转染组(0.4530±0.0810、0.0700±0.0079、0.1770±0.0085),转染Ad-PTEN-GFP组与转染Ad-GFP相比Survivin mRNA表达水平降低6.14倍、Xiap降低7.44倍,而Smac mRNA降低2.95倍(均P＜0.01).CML-BC患者中PTEN mRNA表达水平低于CML-CP及健康对照组,而Survivin、Xiap、Smac mRNA在CML-BC患者中均高于CML-CP及健康对照组(均P＜0.01).结论 Survivin、Xiap、Smac基因可能在PTEN介导的慢性粒细胞白血病细胞凋亡通路中参与抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用.     

Survivin与Smac在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其相关性研究

目的探讨凋亡抑制因子Survivin及凋亡促进因子Smac在卵巢上皮性肿瘤中的表达及临床意义,并分析二者的相关性。方法 RT-PCR法检测20例上皮性卵巢癌及20例良性卵巢上皮性肿瘤组织中Survivin及Smac基因的表达情况;免疫组化S-P法检测60例上皮性卵巢癌及60例良性卵巢上皮性肿瘤组织中Survivin及Smac蛋白的表达情况,分析其与上皮性卵巢癌患者各临床病理指标的关系及两者表达的相关性。结果上皮性卵巢癌组织中Survivin基因表达水平（70.0%）明显高于良性卵巢上皮性肿瘤组织（5%）,Survivin蛋白在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率为61.7%,而在良性卵巢上皮性肿瘤组织表达率6.7%,免疫组化结果与RT-PCR结果一致;Survivin蛋白在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率与浸润深度、分化程度及淋巴结转移均相关（P〈0.05）。RT-PCR结果显示,Smac基因在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率为40%（8/20）,明显低于良性卵巢上皮性肿瘤组织90%（18/20）,此结果得到免疫组化的证实,Smac蛋白在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率为41.7%,明显低于良性卵巢上皮性肿瘤组织93.3%,而且Smac蛋白在上皮性卵巢癌中的阳性表达率与组织分化程度、浸润深度及淋巴结转移密切相关（P〈0.05）。Survivin蛋白与Smac在上皮性卵巢癌癌组织中的表达呈明显负相关（P〈0.05）。结论抗凋亡蛋白Survivin和促凋亡蛋白Smac之间存在着相互拮抗,相互调节的关系,在卵巢上皮性肿瘤的发生发展中共同发挥作用。     

Survivin反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株中survivin和SMAC/DIABLO基因表达的影响

目的 观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3中survivin、Smac/DIABLO表达的影响,探讨survivin、Smac/DIABLO在ASODN诱导卵巢癌细胞凋亡和细胞周期改变中的作用和分子机制.方法 用脂质体(LipofectamineTM 2000)介导survivin ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT比色法检测细胞生长活性,流式细胞学技术检测细胞凋亡指数、细胞周期分布及survivin、Smac蛋白表达改变,逆转录酶链反应检测survivin、Smac/DIABLO基因表达改变.结果 同对照组比较,不同浓度ASODN作用后细胞生长明显减慢,转染后48 h IC50在600 nmol/1左右.用600 nmol/LASODN转染48h后,细胞凋亡指数(AI)明显增加,(t=6.3671,P＜0.05);更多的细胞停留在G0/G1期(t=10.3832,P＜0.01).Survivin mRNA和蛋白表达明显下调(t=3.5031,P＜0.05,t=7.8146,P＜0.01),SmacmRNA和蛋白表达上调(t=2.8011,P＜0.05,t=11.3917,P＜0.01).结论 ASODN诱导细胞凋亡,使更多的细胞停留在G0/G1期,减少进入有丝分裂细胞数的作用,是通过下调survivin基因,上调Smac基因表达来共同完成的,survivin、Smac/DIABLO基因在调节SKOV3细胞周期、凋亡的功能上密切相关,二者的相互作用是卵巢癌发生、发展的重要分子机制之一.     

急性白血病患者骨髓组织survivin表达的研究

目的 探讨急性白血病(AL)患者骨髓组织survivin基因表达及其与疗效的关系.方法 采用RT-PCR检测57例急性白血病患者治疗前后骨髓中survivin基因表达水平,并与正常对照组进行比较.结果 初发白血病患者survivin的表达高于正常对照(P＜0.05),survivin高表达的急性非淋巴细胞白血病缓解率低,急性淋巴细胞白血病的缓解率与survivin表达无关.结论 survivin在白血病中均高表达,survivin可作为判断急性白血病的疗效和预后指标.     

AML病人MN1和PTEN基因表达及临床意义

目的探讨脑膜瘤1(MN1)基因和PTEN基因表达与急性髓系白血病(AML)病情发展及预后的关系。方法采用RT-PCR技术检测38例AML病人(初治组16例,缓解组12例,复发组10例)骨髓单个核细胞中MN1和PTEN mRNA的表达水平,另取非恶性血液病病人及正常人骨髓共13例作正常对照组。结果 MN1和PTEN mRNA在AML病人骨髓单个核细胞中阳性表达率分别为76.3%和60.5%。初治组MN1 mRNA表达水平较正常对照组显著升高,PTEN mRNA表达水平较正常对照组显著下降(F=2.385、2.054,q=2.305、2.867,P<0.01);缓解组MN1 mRNA表达水平下降,PTEN mRNA表达水平上升,与初治组比较差异均有统计学意义(q=2.121、2.756,P<0.05);在复发组中MN1 mRNA的表达水平复又升高,PTEN mRNA的表达水平复又下降,与正常对照组比较,差异均有统计学意义(q=2.361、2.723,P<0.05)。MN1和PTEN基因在AML中的表达水平呈负相关(r=-0.321,P<0.05)。结论 MN1和PTEN基因的表达与AML发病及预后密切相关,可作为AML发病、复发及预后判断的有意义指标。     

凋亡相关基因及蛋白的表达与人卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的探讨COC1/DDP和COC1中凋亡相关基因及凋亡相关蛋白的表达与人卵巢癌顺铂耐药的关系。方法采用流式细胞仪检测不同浓度顺铂作用于COC1及COC1/DDP细胞48h后细胞凋亡率;RT-PCR及Western blot法检测凋亡相关基因及蛋白Bcl-2、Caspase-3、Smac和Survivin在COC1和COC1/DDP中的表达。结果DDP作用于COC1和COC1/DDP细胞48h后细胞随着DDP浓度的升高,凋亡率也相应增高。COC1/DDP中抗凋亡基因及蛋白Bcl-2、Survivin的表达明显高于COC1。COC1/DDP中促进凋亡的基因及蛋白Smac、Caspase-3的表达明显低于COC1。结论在COC1/DDP中抗凋亡基因及蛋白Bcl-2、Survivin的高表达以及促进凋亡的基因及蛋白Smac和Caspase-3的低表达可能参与COC1/DDP对DDP耐药的发生机制。     

急性白血病细胞生存素、bcl—2和P-糖蛋白表达及临床意义

目的 :探讨生存素、P-糖蛋白及 bcl-2在急性白血病细胞中的表达及其与耐药的关系。方法 :应用间接免疫荧光染色检测急性白血病 43例 P-糖蛋白、bcl-2蛋白的表达 ,逆转录 -聚合酶链反应检测生存素的表达。结果 :急性白血病患者细胞中 P-糖蛋白、bcl-2及生存素的阳性率均高于正常对照组 (P<0 .0 5 ) ;3者的表达在急性髓细胞性白血病与急性淋巴细胞性白血病中无明显差异 (P>0 .0 5 ) ;P-糖蛋白、bcl-2、生存素阳性的患者耐药率均明显高于阴性者 (P<0 .0 5 ) ;3因素中生存素与 bcl-2的表达呈轻度正相关 ;生存素和 P-糖蛋白及生存素和 bcl-2双阳性患者的耐药性明显高于双阴性的患者 ;生存素、P-糖蛋白和 bcl-2 3者都阳性患者的耐药性明显高于双阳性、单阳性或 3阴性的患者 (P<0 .0 5 )。结论 :急性白血病中存在着生存素、bcl-2和 P-糖蛋白的高表达 ,其中生存素与 bcl-2的表达有相关性 ,3指标中 2项或 2项以上阳性的患者耐药性明显增高。     

Survivin和Smac在甲状腺肿瘤中的表达及意义

目的：观察Survivin和Smac在甲状腺肿瘤中的表达及探讨其意义。方法：采用免疫组织化学Envision法检测80例甲状腺肿瘤组织中的Survivin和Smac表达,按照阳性细胞数5%、25%、50%划分,是否出现表达,分析Survivin表达与临床病理因素和Smac的关系。结果：Survivin在甲状腺腺瘤、甲状腺癌和伴有淋巴结转移的阳性表达率分别为20.0%（3/15）,61.5%（40/65）,80.0%（16/20）,良性肿瘤和恶性肿瘤、良性肿瘤和恶性肿瘤伴有淋巴结转移两组间两两比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）。Smac在甲状腺腺瘤和甲状腺癌和伴有淋巴结转移的阳性表达率分别为86.7%（13/15）、38.5%（25/65）、40.0%（8/20）,良性肿瘤和恶性肿瘤、良性肿瘤和恶性肿瘤伴有淋巴结转移两组间两两比较差异有统计学意义（P〈0.05）。Survivin和Smac之间呈负相关（P〈0.05）。Survivin的表达与甲状腺癌患者的性别、肿瘤大小和肿瘤病理类型无关（R2=0.770 2,R2=0.632 5,R2=0.750 0）,与年龄、TNM分期和淋巴结转移明显相关,差异有统计学意义（R2=0.986 5,R2=0.931 1,R2=0.964 3）。Smac表达与年龄及淋巴结转移明显相关（R2=0.993 3,R2=0.925 9）,而与性别、肿瘤大小、病理类型、TNM分期无关（R2=0.714 7,R2=0.793 7,R2=0.831 2,R2=0.816 3）。结论：Survivin随着甲状腺肿瘤的恶性程度增加表达上调,而Smac表达下调,提示Survivin和Smac在甲状腺肿瘤诊断和鉴别诊断中具有一定的价值。