GnRH-I类似物对离体大鼠胃壁细胞三磷酸肌醇含量的影响

目的：探讨促性腺激素释放激素（GnRH）-I类似物阿拉瑞林对离体大鼠胃壁细胞内三磷酸肌醇（IP3）含量的影响。方法：体外分离大鼠胃壁细胞并给予不同浓度的阿拉瑞林孵育,利用标记的[3H]-IP3采用放射免疫分析法检测了壁细胞内IP3的含量。结果：当加入终浓度分别为0．001、0．01、0．1、1μmol／L的阿拉瑞林时,大鼠胃壁细胞内IR的含量逐渐增加,呈剂量依赖性,当阿拉瑞林为1μmol／L时,IB的含量达到高峰;同时随着药物作用时间的延长,IR的含量也会增加,当阿拉瑞林作用5min时,IR的含量达到峰值,随后开始下降;磷酸二脂酶（PLC）抑制剂Compound48／80温育细胞后,再加入阿拉瑞林孵育,可使IB的含量轻度增加,但与PLC抑制剂组相比,无统计学意义（P〉0．05）;IP3受体阻滞剂heparin温育细胞后,再加入阿拉瑞林孵育,壁细胞内IB含量略有上升,与只加入Heparin组相比无统计学意义。结论：在体外GnRH—I类似物可使大鼠胃壁细胞内IR的含量明显增加,说明IR参与了GnRH—I类似物对大鼠胃壁细胞功能调控的信号转导过程。     

大鼠胃壁细胞GnRH受体的定位及GnRH类似物对壁细胞内钙的影响

目的　观察促性腺激素释放激素 (gonadotropin releasinghormone,GnRH)受体在培养的大鼠胃粘膜壁细胞中的定位 ,并探讨GnRH类似物阿拉瑞林 (alarelin)对壁细胞内游离钙动员的机制。　方法　采用免疫组织化学和原位杂交技术 ;应用Ca2 + 指示剂Fluo 3 AM作为细胞内钙离子的荧光探针 ,对负载培养的胃壁细胞 ,应用激光共聚焦显微镜技术检测单个细胞内钙荧光强度的变化。　结果　大鼠胃壁细胞呈GnRH受体免疫反应阳性 ,阳性物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;同样壁细胞内可检测到GnRH受体mRNA杂交信号 ,阳性物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;胞内Ca2 + 浓度变化为 :1 在Hank液中 ,GnRH类似物浓度为 10 - 8、10 - 7、10 - 6 mol L时 ,胃壁细胞内Ca2 + 浓度逐渐升高 ,其峰高 (峰值减去静息值 )分别为 7 1± 1 4、12 1± 1 7、16 8± 2 2。其达峰时间也逐渐增快 ,分别为 34 2± 6 4s、18 9± 1 2s、10 4± 2 3s。相邻两组间其峰高及达峰时间均存在显著性差异 (P <0 0 5 ) ,且呈明显剂量依赖性。 2 在D Hank液 (去除外钙 )中 ,阿拉瑞林可轻度短暂升高胞内Ca2 + ;用内罗啶孵育后再加入阿拉瑞林也可轻度短暂升高胞内Ca2 + ,二者无显著性差异。 3 当用拉西地平孵育后再加入阿拉瑞林 ,可明显抑制胞内Ca2 + 的增加     

GnRH类似物对大鼠胃及十二指肠胃泌素免疫反应阳性细胞的影响

消化管含有大量内分泌细胞,可产生和分泌各种生物活性物质,并对机体的消化功能及其他生理功能产生重要的调节作用。我们先前的研究已经证明,消化道粘膜上皮及腺上皮细胞不仅能自身合成促性腺激素释放素(gonadotropin releasing hormone,GnRH),而且能自身表达GnRH受体。消化道管腔内含有高浓度的GnRH。GnRH对胃酸分泌、胰酶分泌及胰岛内分泌激素的分泌均产生明显的影响,但对胃肠道其他内     

培养的大鼠胃壁细胞促性腺激素释放激素的定位、克隆及序列分析

目的 研究培养的大鼠胃壁细胞GnRH的定位及其基因序列。方法 应用免疫组织化学和腺位杂交的方法进行定位研究；从壁细胞中提取总RNA，应用RT-PCR的方法扩增GnRH基因，并对产物进行纯化回收，连接入pUC19载体中扩增，经PCR和酶切鉴定后进行序列分析。结果 大鼠胃壁细胞呈GnRH免疫反应性阳性物质位于细胞质，细胞核为阴性；壁细胞内亦可检测到GnRH mRNA杂交信号，信号物质位于细胞质，细胞核为阴性；同样从大鼠胃壁细胞中扩增出GnRH基因的特异性条带，经序列分析发现，扩增产物的基因序列与文献报道的大鼠下丘脑的完全一致。结论 大鼠胃粘膜壁细胞能表达GnRH基因，其序列和下丘脑的完全一致，并能自身合成GnRH，说明GnRH可能以自分泌或以旁分泌的方式参与胃壁细胞功能的调节。     

GnRH类似物对培养的大鼠胃平滑肌细胞增殖的影响

目的　观察促性腺激素释放激素 (gonadotropin releasinghormone,GnRH)类似物阿拉瑞林 (alarelin)对培养的大鼠胃平滑肌细胞增殖的影响。　方法　应用离体培养的SD大鼠胃平滑肌细胞 (gastricsmoothmusclecell,GSMC) ,采用四唑盐 (MTT)比色法实验 ,3H 胸腺嘧啶核苷酸 (3H TdR)参入、免疫荧光化学检测增殖细胞核抗原 (pro liferatingcellnuclearantigen ,PCNA)表达的平均荧光值和流式细胞仪技术 ,观察阿拉瑞林对GSMC的增殖、DNA合成和细胞周期的影响。　结果　当加入终浓度为 10 - 9、10 - 7、10 - 5mol L的阿拉瑞林 2 4h后 ,与未用药的对照组相比 ,发现其MTT吸光度 (A值 )逐渐降低 (P <0 0 5 ) ;PCNA表达的平均荧光值逐渐减弱 (P <0 0 5 ) ;GSMC的3H TdR参入量依次减少 (P <0 0 5 ) ,且药物浓度越大 ,此三者下降越明显。在细胞周期中 ,与对照组相比 ,G1 期细胞所占比例明显增加 (P <0 0 5 ) ;S期细胞所占比例明显减少 ,且随药物浓度的增加而逐渐减少 (P <0 0 5 )。　结论　GnRH类似物可明显抑制大鼠GSMC的增殖作用 ,其作用途径可能是通过平滑肌细胞自身GnRH受体的直接介导而实现的     

Nutlins类似物NL-86诱导HeLa细胞凋亡的研究

目的 观察新型Nutlins类似物NL-86在体外诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并初步探讨其作用的分子机制.方法 采用MTT法检测NL-86化合物对HeLa细胞增殖的影响;用 FITC-Annexin V及碘化丙锭(PI)双染法,通过流式细胞仪(FCM)检测NL-86诱导HeLa细胞凋亡情况;用Western 印迹...     

离体大鼠胰腺去细胞生物支架的制备与鉴定

目的 通过离体灌注加浸泡的方法制备大鼠胰腺去细胞生物支架(PDBC),为胰岛和胰腺的组织工程研究提供新型天然生物支架. 方法 健康成年大鼠20只,以物理冻融及灌注洗脱法(脱氧胆酸钠+ DNAase),采用胆管、胰管联合逆向在体灌流法获取胰腺去细胞生物支架.并通过基因组DNA定量定性分析,组织化学染色、免疫荧光组织化学染色、荧光积分吸光度分析、透射电镜观察等进一步测定细胞残留以及观察去细胞支架,如胶原IV、纤维连接蛋白和层黏连蛋白等成分的保留. 结果 DNA定性分析显示,实验组未见明显DNA条带,对照组DNA条带可达100bp,定量检测实验组DNA残留不足对照组的5％;组织化学染色和透射电镜观察均表明,去细胞支架无细胞残留,细胞外支架连续性完好,脉管支架保存完整;免疫荧光结果表明,胶原蛋白、弹性蛋白等细胞外支架成分保留较完整,未见明显细胞核成分残留. 结论 运用冻融加浸泡灌注制备的胰腺去细胞生物支架,细胞去除彻底,细胞外支架保留完好.     

C反应蛋白促进离体SHR大鼠血管平滑肌细胞的增殖

目的： 探讨C反应蛋白（CRP）对SHR大鼠主动脉平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法： SHR大鼠VSMC培养，取3-4代细胞进行药物干预。先加入CRP和CRP受体CD32的抗体，测定NF-κB和抑制蛋白I-κB在VSMC中的表达；再使用NF-κB活化抑制剂PDTC，观察对血管紧张素Ⅱ诱发VSMC增殖的影响。结果： 使用CRP后，SHR大鼠VSMC的NF-κB和抑制蛋白I-κB的表达增强；使用CD32抗体可以抑制这种增强； PDTC可以抑制血管紧张素Ⅱ促进平滑肌细胞的增殖作用。结论： CRP可以通过直接激活SHR大鼠VSMC的 NF-κB，促进其VSMC增殖。     

小檗碱对糖尿病大鼠胃壁神经元及肠系膜和心脏微血管损伤的保护作用

目的:观察小檗碱对早期糖尿病大鼠胃肠神经元、肠系膜和心脏微血管损伤的改善作用。方法:清洁级SD大鼠15只,采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ,65mg/kg)制备糖尿病模型,12只成模大鼠随机分为模型组(n=6)和小檗碱组(n=6)。成模2周后小檗碱组以小檗碱溶液(200mg/kg)灌胃2周,模型组灌胃等量双蒸水。同批次普通饲料喂养的大鼠作为对照组(n=6)。给药2周后观察各组大鼠毛色、体重和血糖,并取各组大鼠胃壁、肠系膜和心脏制备组织病理切片。通过甲苯胺蓝-伊红染色观察其胃体、胃底黏膜下神经元尼氏体数量及肠系膜微血管和心肌微血管的组织病理学变化,比较各组各指标的差异。结果:实验28天后,与对照组大鼠相比,模型组大鼠饮水、排尿量增加,毛色暗哑,尾部变黑,体重较对照组明显降低,血糖水平较对照组明显升高(P均0.01)。小檗碱组较模型组大鼠毛色有光泽,尾部黑色现象有所减退,但体重及血糖水平改善均不明显(P均0.05)。模型组大鼠胃体、胃底黏膜下神元尼氏体数量较对照组减少甚至消失,肠系膜微血管皱缩且瘀血严重,心肌微血管肌层变薄。小檗碱组胃壁神经丛尼氏体数量较模型组增多,肠系膜微血管变形、瘀血及心肌微血管情况均较模型组有所改善。结论:小檗碱对早期糖尿病大鼠胃壁神经及肠系膜和心脏微血管损伤有一定保护作用。     

GnRH类似物对大鼠回肠组织胰高血糖素释放的影响

目的 :研究促性腺激素释放激素 (GnRH)类似物 (阿拉瑞林 )对大鼠回肠L细胞释放胰高血糖素的影响。方法 :应用放射免疫分析法对体内和体外大鼠回肠进行观察。结果 :大鼠回肠灌注GnRH类似物后 ,血中及肠液中胰高血糖素的含量较对照组明显升高 ;体外孵育大鼠回肠组织后 ,在一定浓度范围内 ,孵育液中胰高血糖素含量随GnRH类似物浓度升高而升高 ;当浓度高于一定范围时 ,则随浓度升高而降低。GnRH类似物浓度为 1 .0× 1 0 - 4mol/L时孵育液中胰高血糖素含量是升高的。结论 :GnRH可能对大鼠回肠L细胞分泌胰高血糖素呈现双向调节作用。但是GnRH类似物为 1 .0× 1 0 - 4mol/L ,不论是体内还是体外 ,都可能对肠道分泌胰高血糖素表现促进作用     

负向调节树突状细胞对心脏移植大鼠调节性T细胞的影响

目的:探讨受者树突状细胞(DC)与体外光化学法(PUVA)处理的供者脾淋巴细胞共培养,对心脏移植受者CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)及移植心存活时间的影响。方法:以DA大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,SD大鼠为无关供者,建立大鼠腹部异位心脏移植模型。分离正常的供者脾淋巴细胞(SP),制备经PUVA处理的供者脾淋巴细胞(PU-VA-SP)。在体外将DA大鼠PUVA-SP或SP与受者骨髓来源的DC共同培养,收集经上述处理后受者DC,流式细胞术(FCM)检测其表面分子CD80、CD86以及OX6的表达状况。根据受者术前静脉输注的成分将实验动物随机分为3组:①Control组:单纯输注PBS,n=7;②SPDC组:输注加载供者SP的受者大鼠DC,n=8;③PUVA-SPDC组:输注加载PUVA处理的供者SP的受者大鼠DC,n=8。移植术前7d,经外周静脉给受者输注与PUVA-SP共培养后的DC(PUVA-SPDC组)、正常受者DC(DC组)或只输注PBS(Control组),移植术后观察受者移植物的存活时间,检测受者外周血中CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25highT细胞的比例及其Foxp3表达状况。过继转移PUVA-SPDC组受者大鼠的T细胞后,检测正常LEW大鼠对供者抗原或无关抗原的DTH反应。结果:受者DC与供者未经处理的脾淋巴细胞(SP)混合培养后,其表面分子CD80、CD86以及OX6的表达分别为16.6%±0.72%、36.5%±0.87%及65.6%±1.45%,明显高于未处理DC组(3.53%±0.27%、13.0%±0.57%及27.7%±1.23%)(P0.01);而受者DC与PUVA处理过的供者脾淋巴细胞(PUVA-SP)混合培养后,其表面分子的表达仍保持较低的水平,CD80、CD86以及OX6的表达分别为3.9%±0.12%、13.4%±0.59%及28.0%±1.73%,与未经任何处理的受者DC无统计学差异(P0.05)。移植术后,PUVA-SPDC组受者,外周血CD4+CD25+T、CD4+CD25highT细胞占CD4+T的比例分别是18.97%和3.81%,明显高于输注DC组(4.40%和0.81%)和Control组(3.11%和0.09%)的大鼠(P0.01)。PUVA-SPDC组大鼠外周血CD4+CD25+T细胞中Foxp3表达率为29%±1.73%,CD4+CD25highT细胞中Foxp3阳性率高达95%±1.67%,均明显高于对照组(12%±0.58%和19.3%±2.03%)及DC(16.3%±0.88%和52.0%±1.73%)组(P0.01)。PUVA-SPDC组大鼠移植心存活时间为(27.3±0.98)d,与Control组(6.7±0.29)d及DC组(11.0±0.32)d相比,明显延长(P0.01)。过继转移实验显示,接受PUVA-SPDC组受者T细胞的正常LEW大鼠对DA大鼠抗原的刺激呈特异性免疫低应答状态。结论:PUVA-SPDC能够在移植受者体内诱生CD4+CD25+Foxp3+Treg,同时诱导抗原特异性免疫低反应,进而延长异基因移植物的存活时间。     

人参皂甙对大鼠离体主动脉活动的影响

在一定GS浓度下对大鼠离体主动脉存在双向性作用。正常状态下使其收缩,而在NA收缩的基础上则引起其舒张。 GS对大鼠离体主动脉活动影响的作用途径及其机制目前尚不清楚,其收缩和舒张均与胰岛素的效应相似,由此提示可能是类胰岛素样的作用。GS的舒张效应可能不需动脉壁内膜参与,而GS收缩效应可被阿托品所阻断,可能与平滑肌上胆碱能M受体激活有关。     

大鼠海洛因依赖期间胰岛B细胞形态学和功能变化的研究

目的探讨胰岛B细胞在海洛因依赖期间的可能作用.方法应用免疫组织化学SABC法、图像分析法和放射免疫测定法,观察大鼠海洛因依赖期间胰岛B细胞免疫组织化学反应、光密度及血清胰岛素水平的变化.结果与正常组和盐水组比较,海洛因依赖组大鼠B细胞免疫反应明显增强,染色加深,且以24d时最为显著.图像分析结果表明,海洛因依赖组B细胞的平均光密度较正常和盐水组显著降低（P＜0.05）,以24 d时间组最低.放射免疫测定结果显示,海洛因依赖组大鼠血清胰岛素（Ins）浓度始终高于正常组和盐水组（P＜0.05）.结论胰岛B细胞的变化表明,在海洛因依赖期间,大鼠胰岛B细胞胰岛素的合成增多,分泌增强,参与了机体在海洛因依赖期间的调节过程.     

血栓烷A_2类似物对大鼠肺动脉血管平滑肌细胞钾离子通道表达的影响

目的:观察血栓烷A2(TXA2)类似物U46619对实验大鼠肺动脉血管平滑肌细胞(PASMCs)K+通道Kv1.2、Kv1.5、Kv2.1蛋白质和mRNA表达的影响。方法:采用酶法分离、培养Wistar大鼠PASMCs,通过Western-blot和RT-PCR方法分别从蛋白质水平和mRNA水平分析U46619对Kv1.2、Kv1.5、Kv2.1表达的抑制作用。结果:100nmol/LU46619对Kv1.2表达有明显抑制作用。结论:TXA2类似物U46619可能通过抑制Kv1.2表达而参与大鼠肺动脉血管的收缩。     

骨髓基质细胞对离体Parkinson鼠脑片单胺类神经递质的影响

为探讨骨髓基质细胞对离体Parkinson鼠脑片单胺类神经递质的影响,本研究通过建立新生大鼠离体“Parkinson鼠病”模型,取成年大鼠骨髓,培养、分离、纯化骨髓基质细胞,将骨髓基质细胞(MSCs)与离体脑片联合培养,应用高效液相法观察了脑片和培养液中多巴胺及其代谢产物3,4-二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)含量的变化。结果显示,经MPTP代谢产物mpp+损伤的脑片多巴胺含量与正常组、联合培养组相比明显减少(P<0.01),而mpp+组培养液内DOPAC和HVA含量也减少(P<0.05)。但联合培养组与正常组相比DA,DOPAC和HVA的变化无显著差异。以上结果提示,联合培养的骨髓基质细胞对mpp+毒性损伤的多巴胺能神经元具有保护作用,该模型也为在脑片上测量单胺类神经递质提供了可靠的方法。     

黄体生成素类似物对离体大鼠颌下腺细胞分泌神经生长因子的影响

目的:探讨黄体生成素(LH)类似物对离体大鼠颌下腺细胞分泌神经生长因子(NGF)的影响.方法:体外孵育大鼠颌下腺细胞并给予不同浓度的LH类似物,采用酶联免疫分析(ELISA)方法检测上清液中神经生长因子的含量.结果:当加入终浓度为10-6、10-4、10-2U/L的LH类似物孵育颌下腺细胞时,NGF的分泌量随着浓度的升高而逐渐增高;当LH类似物浓度为10-2、100、102 U/L时,NGF的分泌量随LH类似物浓度的递减而降低;同时随着时间的增加,NGF的分泌量也会增加,孵育8 h时达高峰,随后开始下降.结论:在体外LH类似物可双项调节大鼠颌下腺细胞分泌NGF的功能.     

大黄素对大鼠离体胃平滑肌条收缩性的影响

中草药大黄是中医临床下法方剂大承气汤的代表性药物,广泛用于治疗各种急腹症。整体动物实验研究显示大黄可增强肠道蠕动^[1],其泻下作用的有效成分主要是蒽醌类衍生物,包括番泻甙类和大黄素。有研究证明大黄和番泻总甙对豚鼠结肠带细胞电活动具有促进细胞去极化,显著增加峰电位和发放频率的作用^[2]。但对于离体胃平滑肌条收缩性的研究尚不多见,     

西洛他唑对离体培养大鼠皮层细胞缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究磷酸二酯酶抑制剂西洛他唑对离体培养大鼠皮层细胞缺血再灌注损伤的影响及作用机制。方法:取新生Wistar大鼠皮层细胞进行原代培养,分为5组:正常对照组、西洛他唑组、依达拉奉组、溶剂对照组及缺血再灌注模型组。通过建立糖氧剥离后复糖氧的细胞损伤模型模拟细胞"缺血再灌注损伤",然后进行干预。细胞经4 h糖氧剥离24 h复糖氧培养后,测定培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及一氧化氮(NO)的含量;测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)水平,并通过四唑盐(MTT)比色实验测定细胞活力。结果:西洛他唑和依达拉奉均可减少"缺血再灌注"损伤细胞的LDH和MDA漏出量,提高GSH-Px释放量,降低nNOS、iNOS和NO的水平,升高细胞内cAMP水平,使细胞存活率显著提高;西洛他唑与依达拉奉组相比,LDH、MDA漏出量及GSH-Px的释放量无差别,nNOS、iNOS和NO的水平明显降低,细胞内cAMP水平显著升高,细胞存活率明显提高。结论:西洛他唑对大鼠皮层细胞缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能通过抗氧化、降低nNOS及iNOS的水平,从而降低NO的分泌、升高细胞内cAMP水平来实现的。     

石榴皮水提物对大鼠离体结肠运动的影响及其机制的研究

观察分析石榴皮水提物对大鼠离体结肠段运动的作用及其途径.大鼠实验前禁食24 h,颈椎脱臼法处死,立即取靠近起始部的结肠段1.5 cm,浸在37℃恒温台氏液内.动物因给药不同(0.1,1.0,1.5,2.0,2.5mg/mL的石榴皮水提物,乙酰胆碱(ACh),ACh与1.0 mg/mL石榴皮水提物的混合液)被分成7个组.观察给药前、后10 min大鼠离体结肠段收缩幅度、收缩频率的变化.1.0、1.5、2.0 mg/mL的石榴皮水提物溶液对结肠段收缩频率较给药前均有明显的抑制作用(P＜0.05),且呈一定的量-效正相关关系(P＜0.05);1.0、2.0 mg/mL的石榴皮水提物溶液对结肠段收缩幅度较给药前均有明显的抑制作用(P＜0.05);2.5 mg/mL的石榴皮水提物溶液引起的结肠段收缩频率(1.30±0.03次/min)较给药前(0.86±0.01次/min)有明显的加强作用(P＜0.05),但对幅度的作用不明显(P＜0.05);1.0mg/mL石榴皮水提物与ACh的混合液引起的结肠段收缩幅度与给药前比较,抑制率为71.00%,乙酰胆碱的抑制率为-48.60%,两者比较差异显著(P＜0.05).本实验结果提示1.0～2.0 mg/mL石榴皮水提物对离体大鼠结肠段收缩的幅度、频率均有抑制作用.这种抑制作用可能是通过调节ACh及其活动通路实现的.     

Schwann细胞表达β1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ对神经元轴突生长的影响

为了探讨周围神经Schwann细胞中不同β1,4半乳糖基转移酶-1(β-1,4-GalT-I)表达水平对神经元轴突生长的影响,本实验首先构建了正、反义β-1,4-GalT-I表达质粒,然后将构建的不同浓度的正、反义表达质粒超表达于分离、纯化的大鼠Schwann细胞,最后将转染的Schwann细胞与分离的大鼠背根神经节共培养;根据共培养神经元轴突延伸的数目和面积,分析Schwann细胞中不同β-1,4-GalT-I表达水平对神经元轴突生长的影响。结果发现:转染正义β-1,4-GalT-I的Schwann细胞能促进共培养神经节神经元轴突的长出和延伸。在一定的转染浓度内,这种促神经生长作用随转染浓度增大而增强,而转染反义β-1,4-GalT-I却有相反的作用。提示周围神经Schwann细胞中表达β-1,4-GalT-I可能在维持正常神经的功能和促进损伤神经的修复发挥重要作用。