基于PI3K/AKT/mTOR通路研究杜仲总黄酮对多囊卵巢综合征大鼠性激素水平及卵巢组织自噬的影响

目的:探讨杜仲总黄酮基于磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠性激素水平及卵巢组织自噬的影响。方法:55只SD大鼠随机取10只作为正常对照组,其余建立PCOS大鼠模型,40只大鼠建模成功,随机分为模型对照组、PI3K抑制剂BKM120 40 mg/kg组、BKM120 40 mg/kg+杜仲总黄酮200 mg/kg组、杜仲总黄酮200 mg/kg组,各组灌胃生理盐水或相应药物,连续干预3 w。Elisa法检测血清促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、抗苗勒氏管激素(AMH)水平;HE染色观察卵巢病理学变化;流式细胞术检测卵巢组织颗粒细胞自噬率;Western blot检测卵巢组织中PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白及微管相关蛋白1轻链3 II(LC3 II)表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠AMH、LH、T含量显著升高,FSH含量显著降低P<0.01);大鼠卵巢组织颗粒细胞自噬率显著升高(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低,LC3 II/LC3 I比值显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,抑制剂组大鼠AMH、LH、T含量显著升高,FSH含量显著降低(P<0.01),卵巢组织颗粒细胞自噬率显著升高,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低,LC3 II/LC3 I比值显著升高(P<0.01);杜仲总黄酮+抑制剂组、杜仲总黄酮组大鼠AMH、LH、T含量明显降低,FSH含量明显升高(P<0.05或P<0.01),卵巢组织颗粒细胞自噬率显著降低(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著升高,LC3 II/LC3 I比值显著降低(P<0.01)。模型对照组卵巢表面苍白,黄体减少,出现多个囊状扩张卵泡;杜仲总黄酮+抑制剂组、杜仲总黄酮组卵巢体积减小,表面色泽较红,黄体有所增加,囊状扩张卵泡减少;抑制剂组卵巢体积更大、黄体更少,囊状扩张卵泡更多。结论:杜仲总黄酮可能通过激活PI3K/AKT/mTOR通路降低PCOS大鼠卵巢组织自噬水平,改善其性激素水平。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨温肾助阳调周法对肾阳虚证PCOS患者性激素、胰岛素及排卵的影响

目的:探讨肾阳虚证多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜组织中胰岛素的磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路中Akt的表达及其活化程度,并分析温肾助阳调周法对PCOS患者性激素、胰岛素及排卵的影响。方法:选取贵州中医药大学第一附属医院2017年2月至2018年7月收治的60例肾阳虚证PCOS患者,按随机数字表法分为两组,各30例。对照组采取口服炔雌醇环丙孕酮片治疗,观察组在对照组的基础上给予温肾助阳调周法治疗,两组均治疗3个月后随访。测定所有患者的性激素水平、空腹血糖及胰岛素水平,采用稳态模型评估法计算的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),运用蛋白免疫印迹法检测子宫内膜组织中Akt,p-Akt蛋白的表达水平。观察两组治疗前后性激素、胰岛素及排卵的情况。结果:与本组治疗前比较,治疗后两组卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)水平均下降,雌二醇(E2)性激素水平上升(P<0.05),观察组治疗后FSH,LH水平均低于对照组,E2性激素水平高于对照组(P<0.05);与本组治疗前比较,治疗后两组FPG,FINS均明显降低(P<0.05),观察组治疗后FPG,FINS水平明显低于对照组(P<0.05);与本组治疗前比较,治疗后两组患者的HOMA-IR及血清脂联素均有明显下降(P<0.05),观察组治疗后HOMA-IR及血清脂联素明显低于对照组(P<0.05);与本组治疗前比较,治疗后两组卵巢体积、窦卵细胞数目均明显降低,子宫内膜厚度增加(P<0.05),观察组治疗后卵巢体积、窦卵细胞数目明显低于对照组,子宫内膜厚度明显大于对照组(P<0.05);与本组治疗前比较,治疗后观察组与对照组子宫内膜Akt和p-Akt蛋白明显降低,观察组治疗后子宫内膜Akt和p-Akt明显低于对照组(P<0.05)。结论:采用温肾助阳调周法可有效的改善肾阳虚证PCOS患者性激素水平,调控胰岛素,促进卵巢功能恢复,这可能与阻断Akt磷酸化,抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。     

基于PI3K/AKT信号通路探究芍药甘草汤对神经根型颈椎病模型大鼠Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探究芍药甘草汤对神经根型颈椎病(CSR)模型大鼠血清磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氧酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)的调控作用,分析芍药甘草汤对CSR大鼠Bax及Bcl-2的影响。方法:随机将90只SPF级Wistar大鼠分为空白组、模型组、对照组、芍药甘草汤治疗低、中、高剂量组六组,每组15只。除空白组外,其他组以颈部神经根腋下鱼线卡压法构建建立CSR模型大鼠,采用大鼠步态障碍行为学评分进行模型评价。造模后7 d进行干预治疗,空白组和模型组采用生理盐水灌胃,对照组采用3MA干预,芍药甘草汤低、中、高剂量治疗组分别按8、12、16 g/kg剂量进行灌胃,分别干预治疗7 d。末次给药24 h后处死大鼠,取脊髓及神经根组织,酶联免疫吸附法测定各组大鼠丝氨酸残基的底物Bax和Bcl-2的表达水平; HE染色检测各组大鼠脊髓组织病理表现; 蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠脊髓组织中PI3K/AKT通路蛋白的表达情况。结果:造模后14 d,除空白组外,各组大鼠步态积分增高,提示造模成功; 给药14 d后,模型组大鼠血清中Bax表达明显增高,Bcl-2表达下降,神经根组织中PI3K、p-AKT蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,对照组和芍药甘草汤各治疗组CSR大鼠在治疗后神经根积分明显降低,而且组织中Bax表达降低,Bcl-2表达升高(P<0.05); 神经根组织中PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著升高(P<0.05),且芍药甘草汤治疗组大鼠具有剂量依赖性(P<0.01)。结论:芍药甘草汤可有效调控CSR模型大鼠PI3K、p-AKT蛋白表达,其机制可能与芍药甘草汤能够激活CSR大鼠组织中Bax和Bcl-2等生物因子抗细胞凋亡相关。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨归肾育宫汤对早发性卵巢功能不全大鼠卵巢颗粒细胞自噬的影响

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路探讨归肾育宫汤对早发性卵巢功能不全(POI)大鼠调控卵巢颗粒细胞自噬的机制。方法 取清洁级成年健康雌性SD大鼠32只,随机选择8只大鼠作为空白组,其余大鼠给予皮下注射透明带多肽3(pZP3)建立POI模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、戊酸雌二醇组、归肾育宫汤组,每组8只。戊酸雌二醇组给予戊酸雌二醇0.09 mg/kg灌胃,归肾育宫汤组给予归肾育宫汤35 g/kg灌胃,模型组和空白组给予等体积生理盐水灌胃,均1次/d。连续灌胃4周后,腹主动脉取血,ELISA法检测血清促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E₂)水平;取双侧卵巢称重,计算卵巢指数;取卵巢组织,Western blot法检测卵巢组织中PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达情况,免疫组化法观察卵巢颗粒细胞中糖原合酶激酶3 (GSK-3)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)阳性表达情况。结果 与空白组比较,模型组大鼠血清E₂水平、卵巢指数及卵巢组织中Akt、PI3K、3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)蛋白相对表达量和...     

紫仙助孕汤对多囊卵巢综合征不孕症大鼠卵巢超微结构的影响及作用机制探讨

目的：探讨紫仙助孕汤对多囊卵巢综合征(PCOS)不孕症大鼠卵巢超微结构的影响及作用机制。方法：取60只SD大鼠采用随机数字表分为正常对照组(10只)、PCOS造模组(50只),后者通过来曲唑法复制PCOS大鼠模型,并将建模成功大鼠按照随机数字表分为模型组、二甲双胍组及紫仙助孕汤低、中、高剂量组。观察各组大鼠受孕率;ELISA法检测血清E₂、T、LH、FSH水平;HE染色观察大鼠卵巢组织病理学变化;透射电镜下观察大鼠卵巢超微结构改变;RT-qPCR法检测卵巢组织PI3K、AKT、GLUT4、Foxo3a mRNA表达;Western Blot法检测卵巢组织PI3K、AKT、p-AKT、GLUT4、Foxo3a蛋白表达。结果：与正常对照组比较,模型组大鼠卵巢组织各级卵泡、黄体数目及卵泡颗粒细胞层数明显减少,颗粒细胞呈明显凋亡形态,囊状卵泡和闭锁卵泡增加,卵泡膜细胞内脂滴和线粒体明显增多,存在大量的滑面内质网,受孕率、血清E₂水平和卵巢组织PI3K、AKT、GLUT4 mRNA及蛋白表达显著降低,血清T、LH、FSH水平及卵巢组织Foxo3a mR...     

湿润暴露疗法/湿润烧伤膏干预PI3K-Akt-mTOR信号通路促进体表慢性难愈合创面修复的实验研究

目的探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment, MEBT/MEBO)干预磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B (Akt)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路促进体表慢性难愈合创面的修复机制。方法将160只雄性SD大鼠随机分为空白组24只、对照组(急性全层皮肤缺损组)34只和慢性难愈合创面组102只,慢性难愈合创面组(全层皮肤缺损+注射醋酸氢化可的松)造模成功后再随机分为模型组34只、贝复新组34只和MEBT/MEBO组34只。各组分别干预治疗后观察:(1)创面愈合情况,记录统计创面愈合时间;于第3、7、14天固定焦距拍照创面计算愈合率;(2)并同时于第3、7、14天取创面组织,石蜡切片HE常规染色观察第3、14天病理改变;(3)提取第3、7、14天创面组织蛋白,Western Blot法检测PI3K、p-Akt (S473)、p-mTOR (Ser2448)、p-p70 S6K (Thr389)、p-4E BP1 (Thr37/46)蛋白表达水平。结果 (1)与模型组比较,贝复新组及MEBT/MEBO组显著缩短大鼠创面愈合时间和提高创面愈合率(P0.05)。(2)造模及干预治疗14天后,贝复新组及MEBT/MEBO组大鼠创面组织病理学形态学改善明显优于模型组。(3)与模型组比较,造模及干预治疗7天后贝复新组及MEBT/MEBO组大鼠创面组织PI3K和磷酸化Akt蛋白高表达(P0.05),MEBT/MEBO组mTOR及其下游效应分子p70 S6K和4E BP1磷酸化水平显著升高(P0.05)。结论 MEBT/MEBO可促进体表慢性难愈合性创面的愈合,较好改善其组织病理形态学改变,其作用机制可能与激活PI3K-Akt-mTOR信号通路,促进大量与愈合相关的蛋白质合成有关。     

加味升降散对膜性肾病大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路及自噬的影响

目的:探讨加味升降散对膜性肾病(MN)大鼠的干预作用及相关作用机制。方法:采用大鼠尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法建立MN大鼠模型。设正常组、模型组、加味升降散组(27.3 g·kg-1)和贝那普利组(10 mg·kg-1),分别给予相应剂量药物灌胃,每日1次,连续干预4周。给药结束后检测大鼠24 h尿蛋白(UTP)水平,血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),总蛋白(TP),白蛋白(Alb),肌酐(SCr),尿素氮(BUN)水平;马松(Masson)染色、碘酸六胺银(PASM)染色及透射电镜观察大鼠肾脏病理学变化;免疫荧光观察大鼠肾脏免疫球蛋白(Ig)G沉积;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路相关分子及自噬相关指标LC3和Beclin1的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠UTP,血清中TC,TG水平均升高,TP,Alb水平明显降低(P0.05);肾小球增大,基底膜出现不同程度的增厚和空泡变性,嗜复红蛋白沉积,肾小球毛细血管袢IgG弥漫性沉积,上皮下可见大小不等的电子致密物沉积,足细胞足突广泛融合;磷酸化(p)-PI3K,p-Akt和p-mTOR蛋白表达均明显增加(P0.05),自噬标志蛋白LC3和Beclin1蛋白表达量均明显下降(P0.05);与模型组比较,加味升降散组和贝那普利组大鼠UTP,血清中TC,TG水平均有不同程度的下降,TP,Alb水平有不同程度的升高(P0.05);大鼠肾组织病理损伤均有所减轻;p-PI3K,p-Akt和p-mTOR蛋白表达量明显下降(P0.05);自噬标志蛋白LC3和Beclin1蛋白表达量明显升高(P0.05)。结论:加味升降散可通过减少尿蛋白,减轻肾脏病理损伤,延缓疾病进展,其作用与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路和激活肾脏自噬有关。     

熟地黄-山茱萸药对通过PI3K/AKT通路对Aβ25-35诱导的N2a细胞凋亡的影响

目的 研究熟地黄-山茱萸药对通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导小鼠脑神经瘤细胞株(N2a)细胞凋亡的抑制作用。方法 以Aβ25-35(20μmol/L)处理N2a细胞构建阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)细胞模型,给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h。采用CCK8法测定细胞存活率,寻求最佳的Aβ25-35的诱导浓度;Hoechst 33342和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性;Western Blot法检测cleaved Caspase-3、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白表达。结果 与空白对照组比较,经过Aβ25-35处理后的N2a细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达及活性显著升高,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值下降(P<0.05);给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h后,N2a细胞的凋亡率和Caspase-3蛋白表达及活性降低,p-PI3K/...     

咳喘宁口服液对支气管哮喘大鼠PI3K信号转导途径的影响

目的观察咳喘宁口服液对呼吸道合胞病毒诱发支气管哮喘(以下简称“哮喘”)大鼠CD4+、CD8+T细胞内磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)-110α表达的影响,探讨其防治病毒诱发哮喘的机理。方法将SD大鼠随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、模型组、地塞米松＋沙丁胺醇组(阳性药组)和咳喘宁组。建立卵白蛋白哮喘大鼠模型,并以呼吸道合胞病毒激发哮喘。采用磁珠结合法分离CD4+、CD8+T细胞,使用流式细胞仪检测T细胞内PI3K-110α的表达水平。结果模型组大鼠CD4+、CD8+T细胞百分率及CD4+、CD8+T细胞内PI3K-110α的表达水平显著高于PBS对照组、阳性药组及咳喘宁组,差异有统计学意义(均P＜0.01)。经Pearson相关分析,各组大鼠CD4+、CD8+T细胞百分率与CD4+、CD8+T细胞内表达的PI3K-110α的表达水平无明显相关性。结论 CD4+、CD8+T细胞参与了哮喘免疫平衡调节,其表达的PI3K在病毒诱发哮喘模型中明显增高。咳喘宁口服液能抑制CD4+、CD8+T细胞内PI3K的表达,可能是其治疗哮喘的免疫机制之一。     

6-姜烯酚改善老年大鼠肝脏胰岛素抵抗作用的研究

目的:研究6-姜烯酚对老年大鼠肝脏胰岛素抵抗(IR)的作用及其机制。方法:用网络药理学方法查找6-姜烯酚作用靶点和IR相关基因,构建6-姜烯酚——IR基因调控网络并使用分子对接技术进行验证。20月龄SD雄性大鼠随机分为模型对照组、6-姜烯酚0.5 mg/kg组;另取3月龄SD雄性大鼠作为正常对照组。RT-PCR和Western blot法检测肝脏中相关基因和蛋白的表达。结果:6-姜烯酚作用靶点与IR基因密切相关,且主要富集在PI3K/AKT信号通路上;且与正常对照组相比,模型对照组大鼠肝脏磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)、总脂肪酸转位酶(t-CD36)和细胞膜脂肪酸转位酶(m-CD36)的表达显著上调,磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、葡萄糖转运蛋白(GLUT)2和细胞浆脂肪酸转位酶(p-CD36)的表达显著下调,6-姜烯酚0.5 mg/kg可提高模型对照组大鼠肝脏胰岛素受体底物1(IRS1)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)mRNA的表达(P<0.05);6-姜烯酚0.5 mg/kg显著逆转了这些蛋白的表达。结论:6-姜烯酚可改善老年大鼠肝脏IR,其机制可能与抑制IRS1(ser307)的磷酸化、促进AKT(ser 473)的磷酸化、抑制细胞膜CD36的表达和调节其质-膜转位、以及上调GLUT 2的表达有关。     

菩人丹超微粉对T2DM大血管损伤大鼠骨骼肌IRS-1, GLUT-4,PI-3K,NF-κB蛋白表达的影响

目的:观察菩人丹超微粉(Puren dan superfine powder,PRD)对2型糖尿病(T2DM)大鼠骨骼肌组织胰岛素受体底物1(IRS-1)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响,探讨PRD调控糖尿病糖脂代谢紊乱,保护大血管内皮损伤的分子机制.方法:采用灌胃脂肪乳结合1次性尾静脉快速注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ,30 mg· kg-1)法复制T2DM模型.低、中、高剂量PRD(0.885,1.770,3.540 g·kg-1)每日ig给药1次,连续给药4周,罗格列酮(0.36×10-3 g·kg-1)为阳性对照药.Western blot法测定各组大鼠骨骼肌组织中IRS-1,PI3K,GLUT-4,NF-κB蛋白的表达,并用Quantity One图像分析确定杂交带的吸光度积分值.结果:T2DM大血管病变大鼠骨骼肌组织IRS-1,PI3K,GLUT4蛋白表达与正常对照组比较明显降低(P＜0.01),NF-κB蛋白表达显著升高.各组药物治疗后,低、中、高剂量PRD均能显著提高T2DM大鼠骨骼肌组织PI3K的表达,PRD中、高剂量组大鼠骨骼肌IRS-1,GLUT4的蛋白质表达水平明显升高(P＜0.01),NF-κB蛋白质表达水平显著降低(P＜0.05),阳性对照药罗格列酮也有相应作用.结论:PRD通过促进IRS-1,GLUT4和PI3K蛋白表达,抑制NF-κB蛋白表达,恢复胰岛素信号转导通路,抑制糖尿病状态下的炎症因子表达,从而有效改善胰岛素抵抗,降低血糖、血脂,保护大血管内皮损伤.     

补肾通脉方对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗的大鼠磷脂酰肌醇-3激酶表达的影响

目的:观察补肾通脉方对多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的大鼠肝脏、脂肪、肌肉和卵巢组织中磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)p85α亚基的mRNA及蛋白表达的影响。方法:23日龄雌性SD大鼠皮下注射硫酸普拉睾酮钠90 mg.kg-1.d-1,共20 d,联合高脂饮食喂养80 d建立IR的PCOS大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组和治疗组,另设15只正常对照组。治疗组大鼠以补肾通脉方进行干预。光镜下观察大鼠排卵情况;葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FBG);放射免疫法测定空腹血清胰岛素(Fins);RT-PCR检测PI-3K p85α的mRNA表达;免疫组化检测卵巢PI-3K p85α的蛋白表达。结果:与模型组比较,治疗组平均排卵数及排卵率明显增加(P0.01),Fins浓度显著降低(P0.01)。治疗组靶组织PI-3K p85α的mRNA和蛋白表达水平均较模型组明显增加(P0.01或P0.05)。结论:补肾通脉方具有改善IR和排卵障碍的作用,其机制可能与其上调伴IR的PCOS大鼠靶组织PI-3K p85α的mRNA和蛋白表达有关。     

三七总皂苷调控PI3K/Akt/mTOR通路对乳腺增生大鼠乳腺组织细胞凋亡的影响

目的 探究三七总皂苷对乳腺增生大鼠乳腺组织细胞凋亡的影响及调控机制。方法 将60只雌性未孕SD大鼠随机分为正常组、模型组、三七总皂苷低、中、高剂量（10、20、40 mg·kg^-1）组及三苯氧胺组（1.8 mg·kg^-1），每组10只。采用肌肉注射苯甲酸雌二醇和黄体酮构建乳腺增生大鼠模型。按照实验分组剂量进行灌胃给药。每日1次，连续30 d。正常组和模型组大鼠给予每日等量的生理盐水灌胃。给药结束后，游标卡尺测量大鼠第2对乳头直径；留取组织标本，苏木素-伊红（HE）染色观察乳腺组织病理形态变化；免疫组织化学法观察细胞凋亡调控蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、Bcl-2表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠第2对乳头直径明显增大（P<0.05），乳房小叶体积增大，腺泡数量增加，乳腺组织呈现弥散性增生，乳腺组织Bcl-2蛋白表达及磷酸化（p）-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR明显增加（P<0.05），Bax表达明显降低（P<0.05），与模型组比较，三七总皂苷低、中、高剂量组和三苯氧胺组大鼠第2对乳头直径明显减小（P<0.05），乳腺小叶数量、腺泡数、分泌物量均较少，乳腺增生减轻，乳腺组织Bcl-2蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR明显降低（P<0.05），Bax表达明显升高（P<0.05）。结论 三七总皂苷能够改善大鼠乳腺增生，其机制与调控PI3K/Akt/mTOR通路，促进乳腺组织细胞凋亡有关。     

基于PI3K信号通路探讨肺“俞募配穴”艾炷灸对哮喘小鼠RORγt/Foxp3表达的影响

目的:观察肺"俞募配穴"艾炷灸对哮喘小鼠血清及肺泡灌洗液(BALF)中相关炎性因子含量及对肺组织中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、叉头/翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达的影响,并探讨其机制。方法:将60只雄性Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、LY剂组、电针组、艾炷灸组,每组12只。采用卵蛋白(OVA)致敏法复制哮喘小鼠模型。LY剂组予尾静脉注射PI3K抑制剂LY294002;电针组、艾炷灸组分别予电针、艾炷灸"肺俞""中府",1次/d,连续2周。ELISA法检测小鼠血清和BALF中免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)含量,荧光定量PCR法及免疫组织化学法检测肺组织中PI3K、RORγt、Foxp3的mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清和BALF中IgE及IL-4含量、肺组织中PI3K及RORγt mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01),血清和BALF中IFN-γ含量、肺组织中Foxp3 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,LY剂组、电针组及艾...     

高脂诱导糖耐量低减大鼠模型骨骼肌中相关蛋白的表达

目的:研究45%高脂饲料长程喂养复制糖耐量低减(IGT)大鼠骨骼肌中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),蛋白激酶B(PKB),糖原合成酶激酶3(GSK-3β)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)的蛋白表达,探讨该模型产生糖耐量低减的分子机制。方法:20只SD大鼠随机分为2组,分别为正常组和模型组,正常组给予10%热量比对照饲料,模型组给予45%热量比高脂饲料喂养20周建立IGT大鼠模型,分别取骨骼肌采用免疫组化法测定PI3K蛋白含量,Western blot法检测PKB,GSK-3β,GLUT-4蛋白表达,Real Time-PCR法检测IGT大鼠骨骼肌中GLUT-4蛋白相对含量。结果:与正常组比较,IGT组骨骼肌PI3K,PKB,蛋白表达均显著降低(P<0.01),GSK-3β蛋白表达明显升高(P<0.01),IGT模型大鼠骨骼肌中GLUT-4 mRNA的表达降低,但与正常组比较无统计学差异。结论:45%高脂饲料长程喂养建立的IGT模型骨骼肌PI3K,PKB,GSK-3β,GLUT-4蛋白表达发生明显的变化,这可能是该种造模方式导致IGT发生的分子机制之一。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨哈蟆油对卵泡发育作用的影响

目的 探讨哈蟆油对大鼠卵巢卵泡发育、卵巢磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路及怀胎功能的影响,以及哈蟆油雌激素样作用机制。方法 雌性Wistar大鼠70只,随机分为正常组、戊酸雌二醇+黄体酮组（1 mg·kg^-1+40 mg·kg^-1）,克罗米芬（10 mg·kg^-1）组,哈蟆油高、低剂量（400,200 mg·kg^-1）组,连续灌胃8周。灌胃7周时,所有大鼠测定发情周期。灌胃8周时,每组取4只大鼠进行产仔实验,其余大鼠在测定出发情期当天采血,测定血清雌二醇（E₂）,孕酮（P）,睾酮（T）,促卵泡生成素（FSH）,促黄体生成素（LH）含量,摘取子宫、卵巢,称量重量计算器官指数,一侧卵巢制成病理切片,进行不同发育阶段卵泡及黄体计数,另一侧卵巢进行实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Westen blot）检测PI3K/Akt信号通路mRNA及蛋白变化。雌性昆明种小鼠40只,随机分为正常组、哈蟆油14 d组（400 mg·kg^-1）,哈蟆油28 d组（400 mg·kg^-1）,哈蟆油56 d组（400 mg·kg^-1）。哈蟆油各组小鼠分别在灌胃14,28,56 d后与雄性小鼠合笼饲养,18 d后观察两侧子宫内胎鼠数目及发育不良胎数目。结果 8周灌胃哈蟆油后,大鼠子宫指数明显降低（P<0.05）,血清LH明显降低（P<0.05）,卵巢中黄体数明显减少（P<0.01）,初级卵泡数明显减少（P<0.05）,卵泡闭锁率显著上升（P<0.01）,卵巢皮质层中出现短期内较多黄体或间质腺退化为间质的结构,卵巢PI3K和Akt mRNA表达水平显著升高（P<0.01）,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）mRNA和人第10号染色体缺失的磷酸酶（PTEN）mRNA表达水平显著降低（P<0.01）;Akt蛋白磷酸化水平有降低趋势,差异无统计学意义;大鼠产仔数明显减少（P<0.05）。小鼠不同时长灌胃哈蟆油后,受孕率不同程度下降,服用14 d受孕率最低仅30%。灌胃哈蟆油28 d,左右子宫怀胎差值明显增大（P<0.05）。结论 哈蟆油长期灌胃后表现出与长期使用克罗米芬类似的使卵巢过度刺激进而呈现早衰的现象;短期灌胃出现怀孕率下降,一侧卵巢超数排卵,一侧卵巢排卵抑制等现象,对卵泡的影响机制需进一步研究。     

四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 探讨四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎（UC）模型大鼠结肠组织磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路相关基因mRNA和蛋白以及血清中细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-10（IL-10）表达水平的影响。方法 将120只SPF级Wistar大鼠在SPF级实验室适应性喂养7 d后分为空白组和造模组,造模组大鼠采用二硝基苯磺酸盐（DNBS）/乙醇溶液灌肠+皮下注射氢化可的松+番泻叶灌胃法建立脾肾阳虚型UC大鼠模型。将成功建立模型的大鼠随机分为5组,分别为模型组,美沙拉嗪（0.36 g·kg^-1）组,四神丸高、中、低剂量（3.2,1.6,0.8 g·kg^-1）组,灌胃体积均为10 mL·kg^-1,模型组和空白组灌服等体积蒸馏水,1次/d,连续21 d。每日观察大鼠一般情况,并记录小鼠体质量、粪便性状及隐血情况进行疾病活动指数（DAI）评分。取大鼠结肠组织,观察大体形态及结肠损伤情况,进行结肠黏膜损伤指数（CMDI）评分。采用苏木素-伊红（HE）染色观察各组大鼠结肠组织病理改变,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测结肠组织PI3K,Akt,mTOR mRNA的表达水平,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清IL-1β,IL-10的含量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织PI3K,磷酸化（p-）PI3K,Akt,p-Akt,mTOR,p-mTOR蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠一般生存状况相对较差,DAI评分,CMDI评分显著升高（P<0.01）;大鼠病理切片见肠黏膜部分消失,腺体消失,有大量的炎性细胞浸润,聚集于黏膜层和基层;PI3K,Akt,mTOR mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;IL-1β含量显著升高,IL-10含量显著降低（P<0.01）;p-PI3K,p-Akt,p-mTOR蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,四神丸高、中剂量组及美沙拉嗪组大鼠DAI评分明显下降（P<0.05）;四神丸高、中、低剂量组及美沙拉嗪组大鼠CMDI评分显著降低（P<0.01）;大鼠病理切片显示各给药组炎性细胞减少,黏膜层结构不同程度的恢复正常,美沙拉嗪组和四神丸中剂量组效果最好,黏膜结构接近空白组;四神丸高、中剂量组及美沙拉嗪组大鼠PI3K,Akt,mTOR mRNA及四神丸低剂量组Akt mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,四神丸低剂量组PI3K,mTOR mRNA的表达水平虽有降低,但差异无统计学意义;四神丸高、中剂量组及美沙拉嗪组IL-1β含量明显降低,IL-10含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,四神丸低剂量组IL-1β含量降低,IL-10含量升高,但差异无统计学意义;四神丸高、中、低剂量组及美沙拉嗪组p-PI3K,p-Akt,p-mTOR蛋白表达水平均有不同程度下降（P<0.05,P<0.01）。结论 四神丸具有改善脾肾阳虚型UC模型大鼠的一般情况和肠黏膜损伤的作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

滋膵通脉饮对糖尿病大鼠骨骼肌PI3K信号通路的影响

目的?探讨滋膵通脉饮对糖尿病大鼠血糖、胰岛素抵抗和骨骼肌磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）信号通路的影响。方法?45只清洁级SD大鼠，随机数字表法抽取10只作为空白对照组，剩余35只采用高脂高糖饲料喂养及腹腔注射链脲佐菌素的方法构建2型糖尿病大鼠模型，将造模成功的糖尿病大鼠随机分为3组：模型组、滋膵通脉饮组和罗格列酮组，每组10只。于实验第7周开始灌胃，滋膵通脉饮组灌服滋膵通脉饮，生药量为17.6 g/kg；罗格列酮组灌服罗格列酮混悬液0.42 mg/（kg·d）；空白对照组和模型组均灌服同等容积的蒸馏水，每日1次，共用药4周。4周后称取大鼠体重，测大鼠血糖、胰岛素，计算胰岛素抵抗指数，半定量PCR技术检测大鼠骨骼肌PI3K 、GLUT4 mRNA 表达。结果?与空白对照组比较，模型组造模后大鼠体重升高，药物干预后降低（P<0.05）；药物干预后，与模型组比较，滋膵通脉饮组和罗格列酮组体重明显上升（P<0.05）。与空白对照组比较，药物干预前模型组血糖升高（P<0.05）。药物干预后，滋膵通脉饮组和罗格列酮组血糖较模型组降低（P<0.05）。与空白对照组比较，模型组胰岛素和胰岛素抵抗指数升高，PI3K、GLUT4 mRNA 表达降低（P<0.05）；与模型组比较，滋膵通脉饮组和罗格列酮组胰岛素和胰岛素抵抗指数明显降低，PI3K 、GLUT4 mRNA 表达上升（P<0.05）。结论?滋膵通脉饮降低糖尿病大鼠血糖、改善胰岛素抵抗的同时还能激活PI3K介导的信号通路，这可能是其降低血糖、改善胰岛素抵抗的主要机制之一。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨炙甘草汤抗大鼠MIRI致室速和室颤的作用机制

目的:通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨炙甘草汤干预心肌缺血再灌注损伤(MIRI)致心律失常(室速和室颤)的作用及其机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,炙甘草汤低、中、高剂量组(11.43,22.86,45.72 g·kg~(-1)),稳心颗粒组(2.43 g·kg~(-1)),连续给药干预10 d。末次给药2 h,采用结扎冠状动脉左前降支法制备大鼠MIRI模型,记录心电图的变化。造模成功后采集血液及心脏组织,检测血清中肌酸肌酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)及丙氨酸氨基转移酶(AST)的含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌肌钙蛋白(CtnI)的含量;免疫组化法检测心肌PI3K,Akt,mTOR的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC-3),自噬标志物Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达及磷酸化p-PI3K,p-Akt,p-mTOR的水平。结果:模型组大鼠100%发生室速,91.67%发生室颤;与假手术组比较,模型组大鼠血清CK,LDH,AST以及CtnI的含量显著升高(P0.01),心肌组织中PI3K,Akt,mTOR表达显著升高(P0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与Beclin1的相对表达量显著升高(P0.01),p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR显著降低(P0.01);与模型组比较,炙甘草汤高剂量组室速、室颤发生率显著降低(P0.01),较其他给药组持续时间短(P0.01);炙甘草汤高剂量组CK,LDH,AST水平及CtnI含量显著降低(P0.01);炙甘草汤给药组的PI3K,Akt,mTOR的表达随剂量的增加而显著降低(P0.01);LC-3,Beclin1的表达随炙甘草汤各剂量组的增加有不同程度地下降(P0.01),而PI3K/Akt/mTOR相关蛋白表达比值明显升高(P0.05,P0.01)。结论:炙甘草汤预处理能使异常升高的心肌酶CK,LDH,AST,CtnI降低,抑制细胞的过度自噬,上调PI3K,Akt和mTOR的表达,说明炙甘草汤抗MIRI致心律失常的作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

温胆汤对精神分裂症模型大鼠海马组织PI3K，Akt和GSK3β的影响

目的:研究温胆汤对精神分裂症模型鼠海马组织磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)信号通路的影响。方法:将60只大鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、氯氮平组、温胆汤高、中、低剂量组,每组10只。正常组和模型组灌胃生理盐水,氯氮平组灌胃氯氮平原药20 mg·kg~(-1);温胆汤高、中、低剂量组分别灌胃温胆汤生药40,20,10 g·kg~(-1); 1次/d,共21 d。在最后1次给药2 h后,除正常组外,其余各组采用一次性左侧腹腔注射MK8010. 6 mg·kg~(-1),以诱发精神分裂症。观察并记录大鼠的刻板行为,3 d后,处死并取其海马组织待测。依照Sams Dodd和Hoffman标准对大鼠的刻板行为评分;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定海马组织PI3K,Akt和GSK3β蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测海马组织PI3K,Akt,GSK3βmRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠刻板行为评分显著升高(P 0. 01),海马组织PI3K,Akt,GSK3β蛋白和mRNA表达水平显著下降(P 0. 01)。与模型组比较,温胆汤给药组能明显降低大鼠刻板行为评分(P 0. 05),升高海马组织PI3K,Akt,GSK3β蛋白和mRNA表达水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论:温胆汤通过改善精神分裂症模型鼠刻板行为、升高其海马组织PI3K,Akt,GSK3β的表达,调控PI3K/Akt/GSK3信号通路,从而达到治疗精神分裂症的目的。