核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件信号通路在H_(2)O_(2)致MC3T3-E1细胞成骨分化损伤中的研究北大核心CSCD

目的研究核因子E2相关因子2(NRF2)/抗氧化应答元件(ARE)信号通路在过氧化氢(H_(2)O_(2))致小鼠胚胎成骨前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化损伤中的变化及作用。方法(1)将细胞随机分为对照组和低、高剂量实验组(0、200和400μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理细胞24 h)。用蛋白质印迹法检测1型胶原(COL1)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、NRF2和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白的表达水平。①将细胞随机分为对照组(0μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理细胞24 h)、高剂量实验组(400μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理细胞24 h)、抑制剂组(5μmol·L^(-1)ML385预处理细胞12 h)和联合组(5μmol·L^(-1)ML385预处理细胞12 h后,用400μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理24 h)。同法检测蛋白的表达水平,用流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平。结果(1)低、高剂量实验组和对照组的COL1蛋白相对表达水平分别为0.79±0.09、0.52±0.10和1.32±0.07,RUNX2蛋白相对表达水平分别为0.69±0.04、0.46±0.11和1.16±0.10,核NRF2蛋白相对表达水平分别为1.12±0.14、1.48±0.07和0.65±0.10,HO-1蛋白相对表达水平分别为0.59±0.03、0.77±0.08和0.40±0.07。低、高剂量实验组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。②联合组、高剂量实验组、抑制剂组和对照组的核NRF2蛋白相对表达水平分别为0.97±0.06、1.46±0.09、0.73±0.08和0.71±0.06,HO-1蛋白相对表达水平分别为0.34±0.04、0.83±0.10、0.48±0.06和0.46±0.04,COL1蛋白相对表达水平分别为0.24±0.04、0.57±0.08、1.35±0.08和1.33±0.10,RUNX2蛋白相对表达水平分别为0.25±0.05、0.48±0.09、1.17±0.23和1.12±0.16,ROS平均荧光强度分别为641.00±12.00、402.00±13.00、290.00±28.00和281.00±18.00。联合组的上述指标与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论NRF2-ARE信号通路在H_(2)O_(2)致成骨细胞分化损伤时激活,其可能通过抑制ROS水平升高在氧化应激致成骨分化损伤中发挥一定程度的代偿性保护作用。     

吴茱萸碱介导线粒体凋亡途径保护H_(2)O_(2)所致L-O2肝细胞损伤北大核心CSCD

目的探究吴茱萸碱对过氧化氢(H_(2)O_(2))所致L-O2肝细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法将L-O2肝细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组;对照组细胞为正常培养的L-O2细胞,H_(2)O_(2)组细胞用120μmol·L^(-1)的H_(2)O_(2)处理细胞6 h,低、中、高剂量实验组细胞分别用4、8和16μmol·L^(-1)的吴茱萸碱处理细胞24 h后,再用120μmol·L^(-1)的H_(2)O_(2)继续处理细胞6 h。用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞存活率,用流式细胞术法检测各组细胞凋亡情况,用JC-1染色法检测各组细胞线粒体膜电位,用化学发光仪检测三磷酸腺苷(ATP)水平,用蛋白质印迹法检测各组细胞相关蛋白表达水平。结果对照组、H_(2)O_(2)组、高剂量实验组细胞存活率分别为(100.00±3.92)%、(64.09±2.69)%和(94.89±5.78)%,细胞凋亡率分别为(3.05±0.27)%、(19.75±1.47)%和(5.58±0.34)%,JC-1红/绿荧光比值分别为2.55±0.37、0.55±0.03和2.11±0.11,裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cl Caspase-3)蛋白表达水平分别为0.34±0.02、1.07±0.05和0.40±0.04,细胞色素(Cyt C)蛋白表达水平分别为0.30±0.02、0.91±0.09和0.35±0.03,磷酸化C-Jun氨基端激酶(p-JNK)蛋白表达水平分别为0.32±0.03、1.04±0.04和0.52±0.05,线粒体裂变因子(Mff)蛋白表达水平分别为0.31±0.04、0.94±0.15和0.45±0.05。以上指标,H_(2)O_(2)组与对照组比较,高剂量实验组与H_(2)O_(2)组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论吴茱萸碱预处理可通过改变线粒体膜电位介导线粒体凋亡途径,抑制细胞凋亡,从而减轻H_(2)O_(2)所致的L-O2肝细胞损伤,这可能与JNK/Mff通路有关。     

防己诺林碱对宫颈癌HeLa细胞的作用及其机制研究北大核心CSCD

目的探索防己诺林碱(FAN)对宫颈癌He La细胞的作用及分子机制。方法人宫颈癌He La细胞随机分为空白组(0μmol·L^(-1)FAN)和低、高剂量实验组(7.5,15μmol·L^(-1)FAN)。通过CCK-8法、细胞划痕和Transwell检测FAN对宫颈癌He La细胞增殖、迁移和侵袭的影响,采用流式细胞术检测FAN对细胞周期和凋亡的作用。用Western Blot法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1),P27,P53,B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl2),细胞外调节蛋白激酶(ERK)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)的表达。结果FAN对宫颈癌He La细胞有明显抑制作用,呈现浓度和时间依赖关系(P<0.05)。给药48 h后,空白组、低、高剂量实验组划痕愈合率分别为(48.10±5.19)%,(22.68±3.36)%,(12.31±2.79)%;侵袭细胞数量分别为(248.60±33.34),(186.60±24.58),(53.00±13.04)个。给药24 h后,空白组、低、高剂量实验组G0/G1期细胞比例分别为(68.67±2.32)%,(77.43±3.51)%,(85.90±1.31)%;细胞凋亡率分别为(4.07±0.40)%,(5.48±1.36)%,(10.25±1.88)%;Cyclin D1蛋白相对表达量分别为0.75±0.07,0.45±0.07,0.20±0.03;P27蛋白相对表达量分别为0.01±0.00,0.17±0.02,0.55±0.04;P53蛋白相对表达量分别为0.08±0.01,0.12±0.03,0.34±0.08;Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.40±0.03,0.17±0.02,0.06±0.01;p-ERK蛋白相对表达量分别为0.61±0.03,0.34±0.03,0.15±0.04;低、高剂量实验组的上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论FAN能抑制宫颈癌He La细胞的增殖、迁移及侵袭能力,同时阻滞细胞周期并促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制ERK信号通路有关。     

川芎嗪对子宫内膜异位症细胞侵袭和凋亡的影响北大核心CSCD

目的 探讨川芎嗪调控长链非编码RNA(lncRNA)UBOX5-AS1对子宫内膜异位症细胞侵袭、凋亡和基质金属蛋白酶9(MMP-9)/基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP-3)信号通路的影响。方法 分离人子宫内膜异位症细胞,分成对照组、实验低剂量组(12μmol·L^(-1)川芎嗪处理)、实验中剂量组(24μmol·L^(-1)川芎嗪处理)、实验高剂量组(48μmol·L^(-1)川芎嗪处理)、实验高剂量+NC组(48μmol·L^(-1)川芎嗪、阴性对照载体处理)、实验高剂量+UBOX5-AS1组(48μmol·L^(-1)川芎嗪、UBOX5-AS1过表达载体处理)。以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测UBOX5-AS1表达,以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖情况,以流式细胞术测定细胞凋亡情况,以蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、MMP-9、TIMP-3蛋白表达,以Transwell小室检测细胞侵袭。结果 对照组、实验低剂量组、实验中剂量组、实验高剂量组、实验高剂量+NC组、实验高剂量+UBOX5-AS1组子宫内膜异位症细胞中UBOX5-AS1表达水平分别为1.00±0.07,0.84±0.14,0.67±0.05,0.45±0.06,0.44±0.06和0.92±0.09;细胞存活率分别为(100.00±4.38)%,(83.87±5.45)%,(68.86±2.85)%,(52.17±4.64)%,(51.15±3.54)%和(79.92±5.99)%;凋亡率分别为(2.41±0.27)%,(9.60±0.93)%,(14.89±1.15)%,(17.54±0.96)%,(17.27±1.71)%和(9.75±1.28)%;Bax蛋白表达水平分别为0.26±0.04,0.33±0.03,0.40±0.02,0.53±0.03,0.54±0.04和0.34±0.03;细胞侵袭数目分别为105.32±5.66,79.05±7.80,64.59±4.09,51.50±3.28,50.61±5.13和72.08±9.37;上述指标之间比较,实验低、中、高剂量组和对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验高剂量+UBOX5-AS1组与实验高剂量+NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 川芎嗪下调UBOX5-AS1抑制子宫内膜异位症细胞侵袭,诱导细胞凋亡,抑制MMP-9/TIMP-3信号激活。     

硼替佐米联合5-杂氮胞苷抑制JAK/STAT信号通路对T细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的研究硼替佐米联合5-杂氮胞苷对T细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡及机制。方法对照组Jurkat细胞以3μmol·L^(-1)5-杂氮胞苷处理,低、中、高剂量实验组以10,30,50 nmol·L-1的硼替佐米+3μmol·L^(-1)5-杂氮胞苷处理,空白组加等量生理盐水。用噻唑蓝(MTT)法及流式细胞术检测细胞增殖、凋亡,用蛋白免疫印迹法检测细胞JAK/STAT信号通路蛋白表达。结果干预72h后,对照组和低、中、高剂量实验组细胞增殖抑制率分别为(39.05±2.63)%,(31.26±2.43)%,(60.12±3.05)%,(72.16±3.64)%。干预24,48,72 h后,中、高剂量实验组细胞增殖抑制率均高于对照组,且随硼替佐米浓度增大及作用时间延长逐渐升高(P<0.05)。干预48 h后,对照组和低、中、高剂量实验组细胞凋亡率均显著高于空白组。对照组和低、中、高剂量实验组细胞增殖指数低于空白组,凋亡率高于空白组(均P<0.05);且实验组增殖指数均低于对照组,细胞凋亡率均高于对照组(均P<0.05)。空白组、对照组和低、中、高剂量实验组Janus激酶1(JAK1)蛋白相对表达量为2.68±0.22,2.15±0.31,1.82±0.25,1.53±0.15,0.89±0.14,TYK2蛋白相对表达量为3.84±0.56,2.25±0.46,2.37±0.39,2.26±0.33,1.28±0.26;对照组和低、中、高剂量实验组Janus激酶1(JAK1)、TYK2蛋白相对表达量均低于空白组(均P<0.05),低、中、高剂量实验组JAK1蛋白及高剂量实验组TYK2蛋白相对表达量低于对照组(均P<0.05)。结论硼替佐米可协同增强5-杂氮胞苷抑制T细胞淋巴瘤细胞的增殖,并促其凋亡,其作用机制与显著抑制JAK/STAT信号通路中蛋白表达有关。     

新型精胺氧化酶抑制药对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡和自噬的影响北大核心CSCD

目的研究新型精胺氧化酶抑制药SI-4650对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法将SGC-7901细胞分为空白组(正常培养)、低、高剂量实验组(40、80μmol·L^(-1)SI-4650)、自噬抑制药3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(2.5 mmol·L^(-1)3-MA)、3-MA+低、高剂量实验组(2.5 mmol·L^(-1)3-MA+40、80μmol·L^(-1)SI-4650),均处理48 h。用化学发光法检测细胞中精胺氧化酶(SMO)活性,用细胞计数8(CCK8)法和流式细胞术检测细胞增殖和周期,用碘化丙啶(PI)/异硫氰酸荧光素(FITC)-Annexin V双染法检测凋亡细胞情况,用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白微管结合蛋白轻链-3Ⅰ/Ⅱ(LC3-Ⅰ/Ⅱ)表达水平。结果空白组与低、高剂量实验组中人胃癌SGC-7901细胞中相对SMO酶活性分别为(7293±195)、(4506±195)、(989±115)RLU·(mg·s)^(-1),S期细胞比例分别为(28.83±1.17)%、(32.23±1.21)%、(36.50±0.73)%,低、高剂量实验组与空白组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。空白组与低、高剂量实验组以及3-MA组与3-MA+低剂量实验组、3-MA+高剂量实验组中可见,细胞生长抑制率分别为(0.00±2.09)%、(43.61±2.29)%、(52.16±2.49)%、(1.81±4.43)%、(27.50±1.88)%、(34.22±1.07)%,细胞凋亡率分别为(7.01±2.09)%、(13.16±1.59)%、(25.35±2.32)%、(7.13±2.09)%、(8.61±1.59)%、(11.35±2.32)%,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值分别为0.01±0.03、0.58±0.04、2.73±0.03、0.03±0.01、0.06±0.02、0.23±0.03。低、高剂量实验组与空白组相比,低、高剂量实验组与对应浓度3-MA+低、高剂量实验组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论SI-4650能高效抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,机制可能与干扰多胺代谢、阻滞细胞周期S期和诱导细胞自噬、凋亡相关。     

单酰基甘油脂肪酶抑制药通过磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶信号通路对胃癌细胞生物学活性的影响北大核心CSCD

目的 探究单酰基甘油脂肪酶(MAGL)抑制药对胃癌细胞侵袭、迁移及磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路的影响。方法 体外培养人胃癌细胞系MKN-45,分为空白组和低、中、高剂量实验组。空白组给予正常DMEM培养基培养,不作任何处理;低、中、高剂量实验组分别用含1,10和20μmol·L^(-1) MAGL抑制药的DMEM培养基进行培养。用噻唑蓝法、划痕实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移、侵袭能力,用蛋白质印迹法检测PI3K/AKT信号通路蛋白的表达情况。结果 中、高剂量实验组和空白组的细胞抑制率分别为(9.12±0.48)%,(23.78±0.65)%和0.00%,侵袭细胞数分别为(221.64±28.66),(118.58±18.75)和(308.21±36.36)个,划痕愈合率分别为(18.36±2.88)%,(11.03±1.72)%和(27.05±4.10)%,PI3K蛋白相对表达水平分别为0.64±0.05,0.48±0.07和1.18±0.08,p-AKT蛋白相对表达水平分别为0.74±0.06,0.45±0.09和0.97±0.07。中、高剂量实验组的上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 MAGL抑制药可能通过调控PI3K/AKT信号通路,抑制胃癌MKN-45细胞增殖、侵袭及转移。     

Apelin-13对高糖诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用北大核心CSCD

目的探讨Apelin-13对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护机制是否与沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)相关。方法实验分组分为4部分。实验Ⅰ,将HUVECs分为6组,分别为空白组(5.5 mmol·L^(-1)糖)、模型组(33 mmol·L^(-1)高糖)、各实验组(分别用1×10^(-9),1×10^(-8),1×10^(-7)和1×10^(-6)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)。实验Ⅱ,将HUVECs分为4组,分别为空白组(5.5 mmol·L^(-1)糖)、模型组(33 mmol·L^(-1)高糖)、对照组(1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin)、实验组(用1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)糖)。实验Ⅲ,将HUVECs分为2组,分别为空载质粒组(1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)和APJ低表达组(1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)。以上3个实验均用Western blot法检测高糖环境下SIRT1蛋白的表达水平。实验Ⅳ,将HUVECs分为5组,分别为空白组(5.5 mmol·L^(-1))、模型组(33 mmol·L^(-1)高糖)、实验组(用1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)、抑制剂组(33 mmol·L^(-1)高糖+1×10^(-5)mol·L^(-1)EX527)、干预组(用1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖+1×10^(-5)mol·L^(-1)EX527)。用流式细胞术检测HUVECs的凋亡率。结果实验Ⅰ,空白组、模型组和1×10^(-9),1×10^(-8),1×10^(-7)和1×10^(-6)mol·L^(-1)Apelin实验组的SIRT1蛋白相对表达量分别为0.51±0.06,0.30±0.05,1.02±0.07,1.12±0.10,1.14±0.10和1.05±0.10,模型组的SIRT1蛋白相对表达量与4个实验组和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。实验Ⅱ,空白组、模型组、对照组和实验组的SIRT1蛋白相对表达量分别为0.82±0.09,0.59±0.05,0.77±0.05和0.72±0.06;模型组的SIRT1蛋白相对表达量与实验组和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。实验Ⅲ,空载质粒组和APJ低表达组的SIRT1蛋白表达水平分别为0.94±0.13和0.71±0.17,差异有统计学意义(P<0.05)。实验Ⅳ,空白组、模型组、实验组、抑制剂组和干预组的细胞凋亡率分别为(13.60±0.92)%,(24.63±1.25)%,(12.73±1.00)%,(25.68±1.42)%和(10.25±2.30)%。模型组的细胞凋亡率与空白组和实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);抑制剂组的细胞凋亡率与干预组相比,差异有统计学意义(P<0.05);干预组的细胞凋亡率与实验组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Apelin-13减轻高糖诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的机制与SIRT1信号通路无关。     

三七皂苷R1对CD34^+人急性髓系白血病细胞的增殖抑制作用及对线粒体相关通路的影响北大核心CSCD

目的研究三七皂苷R1对CD34^+人急性髓系白血病(AML)细胞的增殖抑制作用及对线粒体相关通路的影响。方法将CD34^+AML细胞Kasu-mi-1分为对照组和低、中、高剂量实验组。低、中、高剂量实验组分别用10,20,40μmol·L^(-1)三七皂苷R1处理,对照组加等量生理盐水处理。分别用溴化四唑蓝(MTT)法、JC-1染色法检测细胞增殖及细胞线粒体膜电位,用蛋白免疫印迹法测定细胞中线粒体通路相关蛋白表达。结果培养12,24,36,48 h后,实验组细胞存活率明显低于对照组(P<0.05),且随三七皂苷R1浓度的升高细胞存活率逐渐降低(P<0.05)。低、中、高剂量实验组细胞线粒体膜电位较对照组降低(均P<0.05);中、高剂量实验组细胞线粒体膜电位较低剂量实验组降低(均P<0.05)。对照组和低、中、高剂量实验组Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.96±0.15,0.67±0.22,0.41±0.12,0.22±0.09,Bcl-2相关X蛋白(Bax)相对表达量分别为0.72±0.26,1.33±0.35,1.71±0.39,2.09±0.53,低、中、高剂量实验组细胞Bcl-2蛋白相对表达量低于对照组,Bax蛋白相对表达量均高于对照组(均P<0.05),实验组随三七皂苷R1浓度的升高Bcl-2蛋白相对表达量逐渐降低,Bax蛋白相对表达量逐渐升高(P<0.05)。结论三七皂苷R1可抑制CD34^+人AML细胞增殖,可能是通过激活线粒体通路促进细胞凋亡而发挥作用的。     

JQ-1联合小豆蔻明对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨JQ-1与小豆蔻明(CAR)联用对乳腺癌细胞MCF-7增殖和细胞凋亡的影响。方法将MCF-7细胞实验分为空白组(不给药)、对照组(10.00μmol·L^(-1)CAR)、实验组(25.00μmol·L^(-1)JQ-1)及联合组(10.00μmol·L^(-1)CAR+25.00μmol·L^(-1)JQ-1)。4组细胞均培养48 h。用CCK-8法检测细胞的增殖能力,用Annexin-V FITC/PI双染法检测细胞的凋亡情况,用蛋白质印迹法检测磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和活化后胱天蛋白酶7(Cleaved Caspase7)的表达水平。结果联合组、实验组、对照组和空白组的增殖率分别为(47.79±11.27)%、(66.75±26.56)%、(74.57±13.59)%和(100.00±0)%,细胞晚期凋亡率分别为(24.17±1.27)%、(7.07±0.80)%、(14.70±3.12)%和(4.98±2.98)%,p-PI3K蛋白相对表达水平分别为0.87±0.02、1.11±0.06、1.09±0.03和1.00±0.00,p-AKT蛋白相对表达水平分别为0.31±0.05、0.96±0.06、0.96±0.16和1.00±0.00,Cleaved Caspase7蛋白相对表达水平分别为2.70±0.04、1.51±0.03、1.28±0.01和1.00±0.00。联合组的上述指标与空白组、对照组、实验组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论JQ-1与CAR联用对乳腺癌细胞MCF-7具有增强抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,其作用机制可能与调控PI3K/AKT通路相关。     

鸦胆子苦醇通过Toll样受体4介导对尖锐湿疣角质形成细胞免疫调节的研究北大核心CSCD

目的探究鸦胆子苦醇(BRU)对尖锐湿疣(CA)角质形成细胞免疫调节的机制。方法收集本院尖锐湿疣组织,并分离CA角质形成细胞。用0、5.0、10.0和20.0 nmol·L^(-1)的BRU处理CA角质形成细胞,分别标记为空白组和低、中、高剂量实验组。将本院分离的CA角质形成细胞分为对照组(正常培养的CA角质形成细胞)、高剂量实验组(用20.0 nmol·L^(-1)的BRU处理细胞)、BRU+pcDNA-NC组(转染pcDNA-NC+20.0 nmol·L^(-1)的BRU)、BRU+pcDNA-TLR4组(转染pcDNA-TLR4+20.0 nmol·L^(-1)的BRU)。用CCK-8法和EdU法检测细胞的增殖情况,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测Toll样受体4(TLR4)mRNA表达量,用蛋白质印迹法检测各组细胞TLR4和细胞核相关抗原Ki67(Ki67)的表达水平,用酶联免疫吸附试验法检测各组细胞γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-8(IL-8)含量。结果高剂量实验组和空白组的TLR4 mRNA表达量分别为0.32±0.03和1.00±0.08,TLR4蛋白相对表达水平分别为0.36±0.04和1.07±0.11,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组、高剂量实验组、BRU+pcDNA-NC组和BRU+pcDNA-TLR4组的EdU阳性细胞率分别为(42.36±3.92)%、(21.70±2.42)%、(20.89±1.85)%和(40.43±4.07)%,TLR4蛋白相对表达水平分别为1.02±0.09、0.34±0.03、0.38±0.04和0.79±0.09,Ki67蛋白相对表达水平分别为0.99±0.11、0.44±0.05、0.46±0.04和0.88±0.06,IFN-γ分别为(98.79±7.68)、(165.53±11.57)、(168.01±12.73)和(119.93±8.03)pg·mL^(-1),IL-8分别为(116.41±11.89)、(243.72±19.60)、(248.42±28.17)和(128.11±13.19)pg·mL^(-1)。对照组的上述指标与高剂量实验组比较,BRU+pcDNA-NC组的上述指标与BRU+pcDNA-TLR4组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论BRU可通过调控TLR4的表达,进而抑制CA角质形成细胞增殖,从而参与调控CA的进展。     

白花丹素通过下调微小RNA-21的表达诱导自噬促进子宫肌瘤细胞凋亡的研究北大核心CSCD

目的观察白花丹素对子宫肌瘤细胞自噬和细胞凋亡的影响,并探讨其调控机制。方法子宫肌瘤细胞分为4组:空白对照组(常规培养)、PB组(5μmol·L^(-1)白花丹素处理)、PB+miR-NC mimic组(5μmol·L^(-1)白花丹素处理+miR-NC mimic处理)、PB+miR-21 mimic(5μmol·L^(-1)白花丹素处理+miR-21 mimic处理);四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测细胞活力变化;蛋白质印迹法(Western blot)检测LC3-磷脂酰乙醇胺缀合物(LC3Ⅱ)、自噬体吞噬蛋白Beclin-1、p62以及裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved-Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平的变化情况;流式细胞术检测子宫肌瘤细胞凋亡率的变化情况;实时荧光定量聚合酶链反应法检测微小RNA-21(miR-21)的表达情况。结果空白对照组、PB组、PB+miR-NC mimic组、PB+miR-21 mimic组的miR-21表达水平分别为1.00±0.14、0.43±0.06、0.39±0.05、0.68±0.09;细胞活力分别为(100.00±8.76)%、(49.67±5.98)%,(50.39±7.06)%、(72.39±9.01)%;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平分别为0.33±0.05、0.88±0.12、0.83±0.09、0.51±0.08;Beclin-1蛋白表达水平分别为0.25±0.04、0.75±0.09、0.71±0.10、0.42±0.06;p62蛋白水平分别为0.91±0.14、0.46±0.06、0.41±0.08、0.79±0.09;凋亡率分别为(6.21±0.69)%、(20.71±3.11)%、(23.06±3.04)%、(10.42±2.11)%;Cleaved-caspase-3蛋白表达水平分别为0.31±0.04、0.76±0.09、0.80±0.12、0.52±0.07;Bax蛋白表达水平分别为0.35±0.05、0.83±0.13、0.79±0.09、0.42±0.07;空白对照组的上述指标与PB组比较,PB+miR-NC mimic组的上述指标与PB+miR-21 mimic组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论白花丹素可通过下调miR-21的表达促进子宫肌瘤细胞自噬并诱导凋亡。     

柴胡皂苷D通过NOB1影响血管瘤内皮细胞凋亡北大核心CSCD

目的研究柴胡皂苷D对血管瘤内皮细胞凋亡的影响和机制。方法将人血管瘤内皮细胞分成对照组、实验组、pcDNA-NC组、pcDNA-NOB1组、实验组+pcDNA-NC组、实验组+pcDNA-NOB1组。对照组细胞正常培养;实验组在0 h时给予80μmol·L^(-1)的柴胡皂苷D处理;pcDNA-NC组、pcDNA-NOB1组在实验前24 h分别转染pcDNA-NC、pcDNA-NOB1;实验组+pcDNA-NC组、实验组+pcDNA-NOB1组转染后在0 h时用80μmol·L^(-1)的柴胡皂苷D处理。以MTT实验检测细胞增殖,以流式细胞术检测凋亡,以蛋白质印迹法(Western blot)检测NOB1、细胞色素C(Cyt C)蛋白表达。结果对照组、实验组血管瘤内皮细胞中NOB1蛋白表达量分别为0.78±0.10和0.40±0.05,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、实验组、实验组+pcDNA-NC组、实验组+pcDNA-NOB1组血管瘤内皮细胞增殖活力(OD值)分别为0.53±0.06,0.26±0.04,0.27±0.03和0.34±0.02;这4组的凋亡率为(6.35±0.58)%,(20.34±2.62)%,(19.87±1.94)%和(8.61±1.05)%;这4组的胞浆中Cyt C蛋白表达量分别为0.22±0.03,0.45±0.05,0.42±0.05和0.30±0.03。上述指标,实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);实验组+pcDNA-NOB1组与实验组+pcDNA-NC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论柴胡皂苷D通过下调NOB1激活线粒体凋亡途径诱导血管瘤内皮细胞凋亡。     

人参皂苷Rg3抑制肺癌细胞增殖和侵袭的作用及机制

目的 探讨人参皂苷Rg3通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制肺癌细胞增殖与侵袭的机制。方法 体外培养人肺癌细胞(A549),分为对照组(正常培养),低剂量实验组(30μmol·L^-1人参皂苷Rg3),高剂量实验组(60μmol·L^-1人参皂苷Rg3)。用细胞计数试剂盒8(CCK-8)评估人参皂苷Rg3对肺癌细胞存活率的影响,用流式细胞术检测肺癌细胞经处理之后的凋亡率,用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测重要凋亡基因的表达,用Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力,同时检测细胞内的氧化应激状况,用蛋白质印迹法检测PI3K和Akt磷酸化的水平。结果 对照组和低、高剂量实验组细胞活力分别为(98.67±0.88)%、(82.67±2.40)%和(74.77±3.09)%,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)mRNA相对表达水平分别为0.96±0.04、0.87±0.02和0.71±0.01,caspase-3 mRNA相对表达水平分别为0.96±0.04、1.22±0.07和1.36±0.04,活性氧(...     

冬凌草甲素对肝内胆管癌HuCCT1细胞增殖和凋亡的作用研究北大核心CSCD

目的探究冬凌草甲素对肝内胆管癌细胞HuCCT1增殖和凋亡的影响。方法选取HuCCT1细胞随机分为对照组和低、中、高剂量实验组。对照组细胞正常培养,不做任何处理,低、中和高剂量实验组分别以3.75、7.50和15.00μmol·L-1冬凌草甲素处理24 h。用细胞计数实验(CCK-8)检测细胞增殖活性;用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;用蛋白质印迹法检测增殖和凋亡蛋白水平。结果对照组和低、中、高剂量实验组G2期细胞数量百分比分别为(9.54±0.64)%、(25.39±1.29)%、(30.97±1.03)%和(35.06±4.06)%,凋亡率分别为(15.94±0.21)%、(16.96±0.88)%、(18.57±0.65)%和(30.61±0.98)%,磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)表达水平分别为0.60±0.02、0.41±0.04、0.30±0.05和0.26±0.02,磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达水平分别为0.28±0.01、0.26±0.01、0.13±0.02和0.12±0.01,磷酸化S6核糖体蛋白(p-RPS6)分别为0.32±0.02、0.28±0.01、0.17±0.01和0.10±0.01。低、中和高剂量实验组上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论冬凌草甲素具有抑制HuCCT1细胞增殖并诱导其凋亡的作用,其机制可能与冬凌草甲素调控AKT/mTOR信号通路有关。     

三七皂苷(血塞通)对脂多糖诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用北大核心CSCD

目的研究血塞通对脂多糖(LPS)诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法将H9c2细胞分为对照组、模型组和低、高剂量实验组。对照组细胞正常培养不做任何处理;模型组用10μg·mL^(-1)LPS处理12 h;低、高剂量实验组分别用0.20,0.40 mg·mL^(-1)血塞通预处理细胞12 h,再用10μg·mL^(-1)LPS处理12 h。以细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测各组细胞存活率;以流式细胞术测定细胞凋亡水平;以荧光探针DCFH-DA检测活性氧(ROS)水平;以酶联免疫吸附法检测细胞炎症因子水平;以蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞凋亡核因子抑制蛋白(IκBα)、磷酸化p65(p-p65)、p65蛋白表达水平。结果对照组、模型组和低、高剂量实验组的细胞存活率分别为(100.00±2.15)%,(33.93±5.17)%,(47.02±6.41)%和(52.49±7.17)%,凋亡率分别为(2.76±0.40)%,(74.40±6.54)%,(54.22±6.74)%和(47.39±6.55)%;模型组与对照组和低、高剂量实验组比较,高、低剂量实验组组间,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组、模型组和低、高剂量实验组的细胞炎性因子NF-кB分别为(0.72±0.07),(1.27±0.15),(1.05±0.12),(0.88±0.09)μmol·L-1,IL-6分别为(0.17±0.03),(0.38±0.05),(0.29±0.05),(0.24±0.04)μmol·L-1,与模型组比较,低、高剂量实验组NF-кB和IL-6水平显著降低(P<0.05)。经过血塞通处理后,ROS浓度降低。蛋白质印迹表明,LPS刺激显著抑制了IκBα表达,上调p-p65表达水平,而血塞通可以显著上调被LPS刺激细胞的IκBα表达,降低p-p65的表达水平(均P<0.05)。结论血塞通能够阻止由LPS引起的心肌细胞炎症反应的发生,降低心肌细胞损伤。     

紫草素对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移的影响北大核心CSCD

目的研究紫草素对非小细胞肺癌NCI-H358细胞增殖和迁移的抑制作用。方法将NCI-H358细胞随机分为对照组和低、中、高剂量实验组。对照组细胞给予常规培养,低、中、高剂量实验组分别以5,10,20μmol·L^(-1)紫草素处理24 h。以细胞计数(CCK-8)法检测NCI-H358细胞活力;以划痕愈合实验评估细胞的迁移能力;以蛋白质印迹法检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路相关蛋白表达水平。结果对照组和低、中、高剂量实验组细胞的存活率分别为(98.72±1.33)%,(90.68±3.52)%,(76.41±5.64)%,(52.85±3.76)%;迁移率分别为(98.54±2.85)%,(67.94±5.31)%,(42.46±2.23)%,(23.26±4.79)%;p-Akt的表达水平分别为0.42±0.05,0.28±0.03,0.16±0.04,0.17±0.02;p-PI3K的表达水平分别为0.26±0.03,0.15±0.03,0.14±0.02,0.11±0.02;p-mTOR的表达水平分别为0.69±0.08,0.51±0.05,0.33±0.05,0.25±0.04。低、中、高剂量实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论紫草素通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制非小细胞肺癌NCI-H358细胞的增殖和迁移。     

甘露糖抑制宫颈癌HeLa细胞增殖和诱导凋亡的影响

目的 研究甘露糖抑制宫颈癌HeLa细胞增殖和诱导凋亡及其对Wnt/β-catenin通路的影响。方法 体外培养宫颈癌HeLa细胞,分为对照组(未经任何处理)和低、中、高剂量实验组(用甘露糖浓度为5、10、25 mmol·L^-1处理细胞)。以细胞计数试剂盒8(CCK-8)和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况,以蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达。结果 对照组和低、中、高剂量实验组的细胞抑制率分别为(0.00±0.13)%、(11.25±3.42)%、(23.78±3.41)%和(35.98±4.52)%,凋亡率分别为(4.59±0.35)%、(11.45±1.32)%、(18.47±2.01)%和(25.69±2.43)%, p21蛋白相对表达水平分别为0.21±0.03、 0.34±0.04、 0.51±0.06和0.69±0.05, Bcl-2蛋白相对表达水平分别为0.89±0.06、 0.67±0.04、 0.52±0.05和0.35±0.06, Bax蛋白相对表达...     

牡荆素通过调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路抑制人骨肉瘤细胞生长的研究

目的 研究牡荆素如何影响骨肉瘤细胞的生长以及所涉及的机制。方法 将143B细胞分为空白组(不给予任何处理，正常培养细胞)、对照组(0.1%二甲基亚砜)和低、中、高剂量实验组(20,40和60μmol·L^-1牡荆素)。用噻唑蓝法检测细胞的增殖情况，用蛋白质印迹法检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达水平。结果 干预24 h后，中、高剂量实验组和对照组、空白组的细胞增殖率分别为(51.34±4.69)%、(33.16±3.67)%、(99.32±2.66)%和(100.00±3.26)%,p-PI3K蛋白相对表达水平分别为0.34±0.03、0.27±0.03、0.87±0.05和0.87±0.03,p-Akt(ser473)蛋白相对表达水平分别为0.35±0.03、0.22±0.04、1.02±0.07和0.97±0.06,p-Akt(thr308)蛋白相对表达水平分别为0.33±0.02、0.31±0.03、0.93±0.04和0.93±0.02。中、高剂量实验组的上述指标与对照组和空白组比较，差异均有统计学意义(均...     

艾塞那肽通过抑制内质网应激减少脂肪酸诱导肝细胞凋亡的作用北大核心CSCD

目的研究艾塞那肽(EXE)是否通过抑制内质网应激来减少棕榈酸诱导的肝细胞凋亡。方法将人肝细胞株L-02分为对照组、模型组(棕榈酸500μmol·L^(-1)处理24 h)、3个剂量实验组(以棕榈酸500μmol·L^(-1)和EXE 25,50,100 nmol·L^(-1)分别处理24 h)和联合组(以棕榈酸500μmol·L^(-1)、EXE 100nmol·L^(-1)和衣霉素2μg·L^(-1)处理24 h)。用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞活力;以脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色及半胱天冬酶(Caspase)-3活性检测观察细胞凋亡;以实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测内质网应激标志物C/EBP同源蛋白(CHOP)表达及Caspase-12活性以观察细胞内质网应激水平。结果与模型组比较,EXE能剂量依赖性增加棕榈酸处理后L-02细胞的活力,减少凋亡细胞数,降低Caspase-3和Caspase-12活性,并下调CHOP表达(均P<0.05)。与高剂量实验组比较,联合组的CHOP表达、细胞凋亡数及Caspase-12活性均显著升高,细胞活力显著下降[(78.58±1.78)%vs(87.78±3.66)%](均P<0.05)。结论 EXE可能通过抑制内质网应激减少脂肪酸诱导肝细胞凋亡。